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Rastreabilidade simples
Uma etiqueta opcional de identificação pré
- programada permite rastrear as proprieda-
des e os parâmetros de uso da coluna em
seu Agilent InfinityLab série LC.
2
Índice
3
Quais
Quais são
são osos diferenciaisdas
diferenciais das
colunas
colunas InfinityLab
InfinityLab Poroshell120?
Poroshell 120?
Etapa 1: Preparar o núcleo sólido Etapa 2: Aplicar o revestimento Etapa 3: Aplicar a fase ligada
Os núcleos da Infini- poroso Um amplo leque de fases
tyLab Poroshell 120 Na Agilent, aplicamos ligadas possibilitam a
têm uma superfície o revestimento poro- análise de vários analitos
muito regular e um ta- so em uma só etapa. em diversos modos de LC
manho de partícula uni- Esse processo ex- para resolver até mesmos
forme, o que contribui clusivo oferece mais seus mais difíceis desafios
com uma melhor distribuição geral do ta- reprodutibilidade por de separação.
manho das partículas, melhorando o de- coluna do que outros fornecedores são
sempenho e a reprodutibilidade analítica. capazes de oferecer.
4
O desempenho reproduzível, lote a lote e ano a ano, reduz interrupções no fluxo de trabalho
mAU
100 B10015
50
Quanto mais simples o processo 0
1 2 3 4 min
de fabricação, mais consistente
mAU
é a coluna 100 B10018
50
Um processo de revestimento de etapa 0
única cria uma coluna altamente re- min
2,5 anos
1 2 3 4
mAU
produtível, como pode ser visto nesta 150
100 B11041
comparação de cinco lotes de colunas 50
0
InfinityLab Poroshell 120. 1 2 3 4 min
mAU
150
100 B11256
50
0
1 2 3 4 min
mAU
150 B12041
100
50
0
1 2 3 4 min
InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 100 mm, 2,7 µm (p/n 695975-902) de cinco lotes diferentes
5
Qual coluna InfinityLab Poroshell
120 devo escolher?
As colunas InfinityLab Poroshell 120 estão disponíveis em três tamanhos de partículas para adequar-se a
todas as necessidades de separação
InfinityLab Poroshell 4 µm
HPLC 400 -600 Agilent 1220 Infinity II
InfinityLab Poroshell 2,7 µm
Com 18 fases estacionárias (químicas) diferentes, as colunas Poroshell 120 oferecem uma ampla
variedade de seletividades que agiliza e facilita o desenvolvimento de métodos.
Melhor Melhor para fases Melhor para fases Melhor para compostos Melhor para Melhor para
em tudo móveis com pH baixo móveis com pH alto polares (HILIC) seletividade alternativa separações quirais
SB-Aq Quiral-CF
2,7 µm 2,7 µm
EC-CN
2,7 µm
6
Tamanho da
Partícula
Nota: HILIC-OH5 e
Para mais informações e ferramentas úteis e aplicativo com mais de 200 notas de aplicações visite: www.agilent.com/chem/poroshell-120-chiral
7
Desenvolva métodos de modo
rápido e fácil com as seletividades
corretas
Melhor em tudo: InfinityLab InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 3,0 x 50 mm, 2,7 µm
Melhor para fases móveis com pH baixo: InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 e SB-C8
A SB-C18 e a SB-C8 são feitas com silanos volumosos que protegem estericamente a ligação de siloxano. Reagentes
ácidos instáveis encapados não são usados. O resultado é uma vida útil muito mais longa e uma estabilidade química
e temperatura extraordinárias da coluna com pH de 1 a 6. A falta de capeamento também oferece uma seletividade
diferente ao EC-C18 e ao EC-C8 encapados.
InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 2,1 x 100 mm x 2,7 µm
8
Melhor para fases móveis com pH alto: InfinityLab Poroshell HPH-C18 e HPH-C8
A HPH-C18 e a HPH-C8 incorporam a tecnologia de partículas híbridas InfinityLab Poroshell que oferece estabilidade em
pH alto. A tecnologia de partículas híbridas melhora a resistência geral de partículas com pH ampliado, possibilitando vida
útil mais longa e menos alterações na coluna. A seletividade das fases estacionárias (químicas) HPH é muito semelhante à
EC-C18 e à EC-C8, simplificando a transferência de métodos.
1 2 4 7
3 6 Injeção 1
5
Condições: InfinityLab Poroshell HPH-C18, 2,1 x 50 mm, 2,7 µm
Instrumento: LC 1260 Infinity II binária 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 min
Fase móvel: A: b icarbonato de amônio
Injeção 500
10 mM ajustado a pH
10,0 em água
B: Acetonitrila
Vazão: 0,4 mL/min 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 min
Gradiente: Tempo % B
Injeção 1,000
0 5
5 95
5,1 5
Amostra: 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 min
1. Metil salicilato
Injeção 2,000
2. 4 Ácido clorocinâmico
3. Acetofenona
4. Quinina
5. Nortriptilina 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 min
6. Heptanofenona
7. Amitriptilina
Após 2.000 injeções em pH 10, as colunas InfinityLab Poroshell 120 HPH-C18 não apresentaram
alteração no desempenho.
Um processo robusto de desenvolvimento de métodos é essencial para fazer com que o método seja duradouro, estável
e confiável. Como a retenção e a seletividade de compostos ionizáveis podem sofrer grandes alterações de acordo com a
variação de pH, o uso de análises em pH baixo, médio e alto está se tornando uma prática padrão durante o desenvolvimento
de métodos.
Aqui, um método que utiliza pH alto, médio e baixo separa a mesma mistura de compostos ácidos,
básicos e neutros. Foi obtida a resolução mais alta para todos os compostos em condições com
pH mais alto, portanto o pH alto seria a melhor opção para prosseguir.
9
Melhor para seletividade alternativa: InfinityLab Poroshell 120 Bonus-RP, PFP e fenil-hexil
As seletividades alternativas permitem que você explore várias condições para encontrar a separação ideal de seus
analitos de interesse. A fase de fenil-hexil oferece seletividade alternativa para as fases C18, particularmente para os
analitos que contêm grupos aromáticos. A Bonus-RP oferece seletividade única em pH intermediário com uma ligação
amida incorporada na cadeia de alquila.
10
PFP é um ligante de pentafluorofenil que oferece um mecanismo de separação ortogonal com fases estacionárias
(químicas) C18. As fases de PFP podem separar analitos de acordo com pequenas diferenças em estrutura, substituição
e acesso estérico a componentes polares. A seletividade resultante para isômeros posicionais, compostos halogenados e
analitos polares é especialmente útil ao analisar misturas complexas.
11
Seletividade alternativa para compostos polares: InfinityLab Poroshell 120 SB-Aq
SB-Aq é uma fase estacionária de fase reversa de alquila desenvolvida para reter compostos hidrofílicos e de outra natu-
reza ao usar fases móveis altamente aquosas, inclusive com 100% de água.
Padrões Condições:
mAU 1 5 Eluente: tampão de fosfato de potássio
2 3 4
100 mM, pH 2,5
1,693
1,024
10
1,317
1,146
1,087
5 Volume de injeção: 5 µL
0 Vazão: 0,5 mL/min
Temperatura: 50°C
0,25 0,5 0,75 1 1,25 1,5 1,75 min
mAU Detector: DAD, a 226 nm
30
Coquetel de amora
0,996
Amostra:
1,204
20
1. Ácido tartárico
1,315
1,285
1,087
1,145
1,560
10
0 2. Ácido quínico
3. Ácido málico
0,25 0,5 0,75 1 1,25 1,5 1,75 min
mAU 4. Ácido cítrico
30 Suco de toranja 5. Ácido fumárico
0,996
1,204
20
1,316
10
0
0,25 0,5 0,75 1 1,25 1,5 1,75 min
mAU
30 Suco de laranja
0,996
1,205
20
1,317
1,531
1,146
1,099
10
0
0,25 0,5 0,75 1 1,25 1,5 1,75 min
A Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-CN oferece uma seletividade bastante diferente, em comparação com a C18 para
misturas de compostos polares, semi-polares e apolares. A fase EC-CN também pode ser usada no modo de fase normal
para retenção de compostos polares.
12
Analise compostos polares
difíceis com confiança
1
2
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
4
0,2
1 3
0,1
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 min
Contagens (%) x Tempo de aquisição (min)
A HILIC InfinityLab Poroshell 120 elimina a necessidade de reagentes de pareamento iônico, como
o ácido hexanossulfônico, que geralmente é usado em fases móveis para separar vitaminas B. Ela
também aumenta a compatibilidade e a retenção por LC/MS.
Condições:
Fase móvel: Acetonitrila: 100 mM NH4HC02,
pH 3,2 (9:1)
Vazão: 0,7 mL/min
Temperatura: 25°C
Pressão: 240 bar
Sistema: LC 1290 Infinity II e LC/MS
6410 Triple Quadrupole
Amostra:
1. 4 Ácido aminobenzoico
2. Nicotinamida
3. Riboflavina
4. Ácido nicotínico
13
Retenha os compostos altamente carregados, inclusive os sais inorgânicos:
Novo InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z
Esta inovação em coluna Agilent conta com uma fase estacionária zwiteriônica original ligada a partículas da Poroshell 120.
As vantagens incluem:
–– Alta capacidade de pico e ampla faixa de polaridade;
–– Uma opção de coluna revertida com peek para proporcionar um excelente formato de pico e recuperação de
compostos difíceis;
–– Desempenho robusto;
–– Alta estabilidade do pH: Até pH 12 a 35ºC; estabilidade da temperatura a 80ºC com pH 7;
–– Tolera amostras com alto teor de sal ou de solução tampão;
–– Pode ser usada com soluções tampão compatíveis com MS (<10 mM de teor de sal); poucas perdas de MS.
1,1 1
1
Condições:
0,9
Fase móvel: A: 20 mM de formiato de
0,8
Treonina
0,7
B: 90:10 ACN/H20 com
0,6 20 mM de formiato de
Ácido glutâmico
Ácido aspártico
Isoleucina
Metionina
0,4
Histidina
Alanina
Prolina
Cistina
Glicina
Serina
Lisina
Excelente retenção, formato de pico e sensibilidade para aminoácidos subderivatizados pela LC/MS.
14
Separe compostos polares com seletividade alternativa:
Novo InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5
mAU
250
200 B10
150 B3
100 B2 B1 B9
mAU B6 C B12
50
250
0
200 B10
150 B3
0,5 1B2 1,5 2 B1 2,5 3 3,5 B9 min
100 C B12
50 B6
mAU
0
250 B1,B3
mAU
200 B10
250
150
0,5 1 1,5 2B3 2,5 3 3,5 min
InfinityLab
200 Poroshell 120 HILIC-ZB2 2,1B10
x 100 mm, 2,7 μm B1 B9
100
150 C B12
50 B6 B2 B1,B3 B9
100
mAU B6 C B12
0
50
250
0
200 0,5 1 B10 1,5 2 2,5 3 3,5 min
150 0,5 1B2 1,5 2 2,5C 3 3,5
B9 min
100 B6 B12
B1,B3
50
mAU
0
250 B10
mAU B10
200
250
150
0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 min
200 B2 B9
100 B6 C B12
150 B2 B3 B9
50 B1
100
mAU B10
0 B6 B12
50
250 C
0
200 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 min
InfinityLab
150 Poroshell 120 HILIC 2,1 x 100 mm, B3 2,7 μm B9
0,5 B2 1 1,5 2 2,5 3 3,5
B1 min
100
B10 B6 B12
50
mAU C
0
250
200
150
0,5 1 1,5
B3 2 2,5 B9 3 3,5 min
B2 B1
100
B6 B12
50 C
0
0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 min
As colunas InfinityLab HILIC-Z e HILIC-OH5 oferecem uma grande variedade de seletividade alternativa para separações de analitos polares. Esta
separação de vitaminas solúveis em água demonstra diferenças de seletividade nas fases de HILIC com o uso das mesmas condições de método.
As separações podem ser otimizadas em cada coluna alterando as condições de método.
Condições: Amostras:
Fase móvel: A: 100 mM acetato de amônio + 0,5% tiamina (B1) ácido 4-aminobenzoico/PABA
ácido acético (pH ~4,6) em H2O, riboflavina (B2) (B10)
B: CH3CN niacina/ácido nicotínico(B3) cianocobalamina (B12)
0,5 mL/min, 87% B para 1 min, 87-50% B ácido ascórbico (C)
pirodixina/piridoxol (B6)
em reequilíbrio de 4 min, 3 min
folato/ácido fólico (B9)
Vazão: Injeção de 1 μL, 40°C
Temperatura: 40ºC
Detector: detecção de UV a 260 nm, 80 Hz
15
Faça separações quirais rápidas
e de alta resolução
Amostra:
1. D-(+)-anfetamina
2. L-(-)-anfetamina
3. D-(+)-metanfetamina
0 0 55 10
10 1515 min
min
4. L-(-)-metanfetamina
11 Condições:
2233 Separação de anfetaminas Eluente: 100/0.1/0.02, MeOH/HOAc/NH4OH
Vazão: 1,0 mL/min
em menos de 5 minutos
44 Detector: UV a 220 nm
Amostra:
1. D-(+)-anfetamina
2. L-(-)-anfetamina
3. D-(+)-metanfetamina
0 5 10 15 min 4. L-(-)-metanfetamina
0 5 10 15 min
16
Separe praticamente todos os compostos quirais: Quatro fases estacionárias (químicas) em quatro
modos diferentes de LC oferecem uma ampla variedade de seletividade
Fase estacionária (química) da coluna Seletor quiral (fase estacionária ligada) Modo típico de LC Aplicações típicas
InfinityLab Poroshell 120 quiral-V Vancomicina (antibiótico macrolídeo) Fase reversa (RP) Aminas, profenos
InfinityLab Poroshell 120 quiral-T Teicoplanina (antibiótico macrolídeo) Fase reversa (RP) Aminoácidos, ácidos hidroxil, profenos
NH2
* F N
* N N
OH
1-(1-naftil)etilamina flutriafol
0 1 2 3 4 5 min 0 1 2 3 4 5 min
Coluna: 4,6 x 100 mm, 2,7 µm Coluna: 4,6 x 150 mm, 2,7 µm
Fase móvel: 60/40/0.3/0.2: Acetonitrila/Metanol/Ácido acético/TEA Fase móvel: 30/70: Acetonitrila/50 mM de formiato de amônio (pH 3,6)
Vazão: 1,0 mL/min Vazão: 1,0 mL/min
Detecção: UV 280 nm Detecção: UV 230 nm
* * OH
N O
H NH2
OH Cl
propanolol p-clorofenilalanina
0 1 2 3 4 5 6 min 0 1 2 3 4 5 6 min
Coluna: 4,6 x 100 mm, 2,7 µm Coluna: 4,6 x 100 mm, 2,7 µm
Fase móvel: 100/0.2/0.05: Metanol/Ácido acético/ Fase móvel: 30/70: Acetonitrila/50 mM de formiato de amônio (pH 3,6)
Hidróxido de amônio Vazão: 0,5 mL/min
Vazão: 1,0 mL/min Detecção: UV 220 nm
Detecção: UV 230 nm
17
Faça todos os seus LCs
trabalharem mais
220 1,1 20
200 100000 2,5 20
180
160 80000 Amostra:
140 Plasma precipitado: 2 partes de plasma, 7 par-
120 60000 tes de água 20:80: MeCN com 1,0% ácido fórmi-
100
co com 1 parte de diflunisal em água 50:50: MeCN
80 40000
10 µg/mL (concentração final de diflunisal 1 µg/
60
mL) agitado e deixado descansar por 10 minutos.
40 20000
20
1,0% de ácido fórmico ajuda no processo de precipitação.
0 0 Não centrifugado nem filtrado
1 501 1001 1501 2001 2501
Injeções
As robustas colunas InfinityLab Poroshell 120 de 1,9 µm duram até cinco vezes mais que outras colunas com partículas
superficialmente porosas (SPP). A vida útil mais longa das colunas reduz os custos operacionais evitando interrupção
onerosa e retrabalho devido as falhas na coluna.
Outros
Colunas
SPP
[4 horas]
$150
Colunas
InfinityLab
Poroshell 120
de 1,9 µm
00:00horas minutos
1.000
Colunas Agilent
InfinityLab
Outros Poroshell 120
Colunas SPP de 1,9 µm
18
Obtenha mais de cada sistema LC de seu laboratório
InfinityLab Poroshell 4 µm
HPLC 400 -600 Agilent 1220 Infinity II
InfinityLab Poroshell 2,7 µm
mAU Condições:
Instrumento: Sistema LC 1290 Infinity II
350 Pressão 1150 bar Fase móvel: A: 0,2% de ácido fórmico em água
Fase móvel B: Acetonitrila
300 Tempo de execução 0,35 min
Gradiente: 8-26% B em 0,3 min
250
Vazão: 2,2 mL/min
Temperatura: 60ºC
200 Detecção: 280 nm a 160 Hz
Amostra: μL de 0,01 mg/ml de ácido
5
150 protocatecuico, DOPAC, PABA,
ácido vanílico, ácido siríngico,
100 ácido salicílico
50
Uma separação UHPLC ultra rápida com resolução de linha de base de 6 ácidos
aromáticos com o uso de uma coluna InfinityLab Poroshell de 1,9 µm e alta vazão.
19
Desempenho de UHPLC em pressões de HPLC InfinityLab Poroshell 120 2,7 µm
Obtenha até 90% ou mais da eficiência esperada de uma coluna com partícula totalmente porosa sub-2 μm, mas sob
pressões de HPLC. Isso possibilita que você maximize o desempenho de separação e a produtividade de análise de seus
sistemas de HPLC. Você também pode usar colunas mais curtas com vazões mais altas para obter separações rápidas
0,826
1,518
40% água
0,826
4,132
6,273
9,753
Vazão: 0,58 mL/min
2,223
Volume de injeção: 4 µL
1,148
1,518
Ref = 360,100 nm
2,016
4,132
9,753
5188-6529) com adição de
50 μL de tiureia a 2 mg/ml em
água: acetonitrila (65:35)
2,5 5 7,5 10 min
2,705
1,756
2,418
3,494
5,281
13,041
8,218
0,865
1,275
2,705
Use uma coluna Poroshell de partículas de 2,7 µm para obter mais de 90% da eficiência com a metade
1,756
2,418
5,281
13,041
8,218
As colunas InfinityLab
2,5
Poroshell
5
120 de7,54 μm oferecem
10
praticamente
12,5
o dobro
min
da eficiência das partículas totalmente
porosas de 5 μm. Isso significa que você pode aumentar o desempenho das separações simplesmente substituindo a
coluna totalmente porosa de 5 µm de seus métodos antigos sem alterar as dimensões da coluna nem necessitar de um
desenvolvimento significativo de método. E ainda mais: o alinhamento entre as fases estacionárias ZORBAX e Poroshell
faz com que essa seja uma transição fácil para a melhoria imediata em sua análise.
mAU
InfinityLab Poroshell 120 EC-C18,2 4,6 x 150 mm, 4 µm Condições:
80 Fase móvel: A: Água
mAU 4
2 W 1/2= 0,16 B: Acetonitrila
60
80
Pressão inicial 4 Gradiente para colunas de 4,6 x 150 mm:
40
60 135 bar W 1/2= 0,16 Tempo (min) %A
Pressão inicial Rs = 2,31 0 81
20 1
40 135 bar 3 12 81
Rs = 2,31 60 64
0
20 1
3
10 20 30 40 50 min 61 10
0 65 10
10 20 30 40 50 min 66 81
70 81
ZORBAX Eclipse Plus C18, 4,6 x 150 mm, 5 µm Temperatura: 30°C
mAU Vazão: 1,0 mL/min
80
Volume de injeção: 10 µL
mAU 2 Detecção: UV, 203 nm
60
80 4
Pressão inicial 2 Amostra:
40 W 1/2= 0,22
60 90 bar 4 1. Notoginsenoside R1
Rs Rs=1,51
Pressão inicial 2. Ginsenoside Rg1
20
40 1 W 1/2= 0,22
90 bar 3
Rs Rs=1,51 3. Ginsenoside Re
0
20 1 4. Ginsenoside Rb1
10 20 3 30 40 50 min
0
10 sem alterar20
Resultados melhores as condições do30 método, com40 50
exceção da coluna utilizada.min
Neste exemplo, a substituição direta por uma coluna
InfinityLab Poroshell 120 de 4 μm diminuiu a largura do pico em 50% e aumentou a resolução em relação à coluna totalmente porosa de 5 μm.
20
Agilent InfinityLab
A série Agilent InfinityLab foi desenvolvida para oferecer a mais alta eficiência em seus fluxos de trabalho de
cromatografia líquida, independentemente da área de aplicação. InfinityLab é um portfólio otimizado de instrumentos,
detectores de massa seletivos, colunas e consumíveis para LC, desenvolvidos para trabalhar juntos e em perfeita
harmonia.
Junto com o software Agilent OpenLAB e os serviços Agilent CrossLab, a Agilent disponibiliza soluções e suporte
completos para tornar o dia a dia mais produtivo.
Veja mais em: www.agilent.com/chem/infinitylab
Série LC InfinityLab
Da análise de rotina à pesquisa de ponta, a série LC Agilent InfinityLab
fornece o mais amplo portfólio de sistemas e soluções de LC para
qualquer aplicação e orçamento para alcançar a mais alta eficiência.
Eficiência acessível
O Agilent 1220 Inifinity II é um sistema integrado de LC acessível e de alta
qualidade que faz com que você obtenha o máximo de eficiência.
Eficiência todo o dia, de todas as formas
O sistema de LC Agilent 1260 Infinity II é uma plataforma confiável com
a mais ampla escolha de opções de instrumentos, elevando seu padrão
Agilent 1220 Agilent 1260 Agilent 1290 de eficiência.
Infinity II LC Infinity II LC Infinity II LC
O ponto de referência em eficiência
O sistema de LC Agilent 1290 Infinity II incorpora a última geração de
instrumentação de LC, oferecendo desempenho altíssimo para obter a
máxima eficiência.
Consumíveis InfinityLab
Economize tempo e reduza os problemas
Conexões InfinityLab Quick Connect
Agora você pode ter certeza de que está obtendo a conexão de coluna
perfeita, independente de qualquer usuário, em todos os momentos, com
conexões simples de usar e que podem ser apertadas manualmente. As
conexões infinityLab Quick Connect são reutilizáveis com até mais de
200 novas conexões e estáveis até 1300 bar.
Conexões InfinityLab Quick Turn
Para as conexões de instrumentos que estão em espaços confinados,
você pode contar com as conexões InfinityLab Quick Turn acionadas por
mola para obter uma conexão perfeita, em todos os momentos.
21
O método flexível que vai de UHPLC…
até as tradicionais… e LC/MS
Flexibilidade para escolher colunas mais longas para obter resolução mais alta
À medida que a coluna fica mais longa, a resolução aumenta e a pressão diminui, Maximize a resolução utilizando colunas InfinityLab
Poroshell 120 mais longas, em um sistema de UHPLC Agilent InfinityLab série 1260 ou 1290, com capacidade nominal de 600, 1000
ou 1300 bar.
mAU
25
20 P = 358 bar
15
10
5
0
-5
-10
2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
22
Transferência simples dos métodos antigos
Transfira com facilidade os métodos antigos para o InfinityLab Poroshell 120 a fim de ganhar os benefícios da separação
e da produtividade de partículas superficialmente porosa. O alinhamento entre as fases estacionárias ZORBAX e Poroshell
simplifica essa transição. No exemplo abaixo, são usadas fases estacionárias comparáveis e todas as condições de
métodos foram mantidas iguais, exceto o tempo de gradiente, que foi ajustado para a coluna mais curta.
11,596
mAU
ZORBAX
100 Eclipse Plus C18, 4,6 x 250 mm, 5 µm 12,674
Vazão: 1 mL/min Condições:
16,435
16,151
Fase móvel:
29,290
Tempo %B
15,248
80
11,116
11,596
0 8
20,687
60
mAU B: 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila
23,076
33 33
100 110 bar
12,674
40 35 33
16,435
Amostra:
16,151
29,290
15,248
80
11,116
20 1. Sulfadiazina
9,712
20,687
60 2. Sulfatiazol
23,076
0
110 bar 3. Sulfapiridina
40 5 10 15 20 25 30 min
4. Sulfamerazina
20
5. Sulfametazina
0 6. Sulfametazol
5 10 15 20 25 30 min 7. Sulfametoxipiridazina
8. Sulfaclorpiridazina
9. Sulfametoxazol
InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 4,6 x 100 mm, 2,7 µm Vazão: 1 mL/min 10. Sulfadimetoxina
Tempo %B
7,037
mAU
2,311
250
0 8
325 bar 12 33
2,606
200 13,2 33
5,450
1,719
4,558
2,189
4,437
5,920
7,037
mAU
150
2,311
3,867
250
100 325 bar Aumento de mais de
2,606
4,558
50
2,189
4,437
5,920
150
0
3,867
100 1 2 3 4 5 5 7 8 min
50
Neste exemplo, um método antigo foi transferido de uma coluna ZORBAX Eclipse Plus C18 para uma
0
fase equivalente Poroshell EC-C18. A resolução equivalente é obtida em um tempo de execução muito
mais curto na 1coluna InfinityLab
2 3 Poroshell,
4 aumentando
5 a 5produtividade
7 8 min em quatro vezes.
de análise
mAU
InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 3,0 x 100 mm, 2,7 µm Condições:
mAU
300
Fase móvel: A: 65%, ácido fórmico 0,2%
300 1
mAU
200 Vazão = 0,5 mL/min, B: 35% de metanol com
2 eluição isocrática
200
300
100 P = 300 bar
Vazão: consulte os cromatogramas
3
100
200
0 Volume de injeção: 1 µL
5 6
0
100 2 4 6 min
Temperatura: 26ºC
4
Detecção: Sinal = 220, 4 nm, Ref =
mAU0 2 4 6 min
desativada
300
mAU 1
2 4 6 min
300 2
200
mAU
Amostra:
300
200
100 3 1. Sacarina
5 6
Vazão = 0,75 mL/min,
200
100 P = 433 bar 2. Cafeína
0 4 3. ácido p-hidroxibenzoico
100
0 2 4 min 4. Aspartame:
0 1 2 4 min
5. Ácido de-hidroacético
mAU
6. Ácido benzoico
300
mAU 2 2 4 min
300
200
mAU 3
5 6 Vazão = 1,0 mL/min,
300
200
100 P = 559 bar
4
200
100
0
100
0 2 4 min
0 2 4 min
2 4 min
23
Obtenha o melhor desempenho de seus métodos de LC/MS
As colunas InfinityLab Poroshell 120 de alta eficiência são perfeitamente adequadas para melhorar a resolução e a
sensibilidade de seus métodos de LC/MS. Use uma coluna de 2,1 ou 3 mm de diâmetro interno (DI) para obter a melhor
compatibilidade de vazão com seu MS.
5,5 A
5
5 mM de formiato de amônio
InfinityLab4,5
Poroshell HPH-C18, 3,0 x 100 mm, 4 µm
Contagens
3,5 0,1%
4 de ácido fórmico, pH 3,1, MeOH, 30°C
1 mL/min
1
6
3,5 3 1 mL/min 4 3 1 8 2 3 50
3
0,5 5 10 11 Tempo %6 B
2,5 0 7 8 Tempo %10
B 95
2,5 2 5 9 0
21,5 0 1,0 2,0 3,0 7 4,0
9 5,0 6,0 min
0 0,5 1015 8 95
6 8,5 10
1,5 1 6 0,5 15
4 3 2 3 50
9 10
4 3 11
1
0,5 10 11 36 5095
0,5 0 2 10 11
0 0 68 9595
1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 min Amostra:
0
5 5 8 8,5 9510
B 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 min
1. Estricnina
4,5 7 8,5 10
8 9 10
2. Alprazolam
4 10 mM de bicarbonato de amônio
9 9 10
3,5 pH 10,5, MeOH, 30°C 3. MDMA
Amostra:4. Anfetamina
Contagens
5 3 1 mL/min 5
5 B 5 Amostra:
1. Estricnina
4,5 B 2,5 7 5. Trazodona
4,5 4 7 8 1.2.Estricnina
Alprazolam
10 mM2 de bicarbonato de amônio 4 6 8 6. Meperidina
4
3,5 10 mM de MeOH,
bicarbonato 9 2.3.Alprazolam
pH1,5
10,5, 30°C de amônio 3 9
MDMA 7. Verapamil
3,5 3 pH 10,5, 2 3.4.MDMA
1 MeOH, 30°C
Contagens
1 mL/min Anfetamina
8. Metadona
Contagens
3
2,5 1 mL/min 1 10 11 4.5.Anfetamina
Trazodona
0,5 9. Proadifeno
2,5 2 4 5.6.Trazodona
Meperidina
0 6 10. Diazepam
21,5 4 3 6 6.7.Meperidina
Verapamil
11. THC
1,5 1 3 2 7. Verapamil
8. Metadona
0 1,0 2,0 3,0 2 4,0 5,0 6,0 min
1
0,5 1 10 11 8.9.Metadona
Proadifeno
0,5 0 1 10 11 9.10.Proadifeno
Diazepam
0 10.
11.Diazepam
THC
0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 min 11. THC
0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 min
Excelente resolução para uma separação de drogas de abuso com a LC/MS utilizando a coluna InfinityLab Poroshell HPH.
A estabilidade em pH alto da HPH possibilita que o método seja executado em pH 10,5, onde é observado um aumento na retenção e na resposta
de MS para analitos básicos.
24
Transferências simplificadas
dos métodos da USP
Modernize um método da USP para Coluna ZORBAX Eclipse Plus C18, 4,6 x 150 mm, 5 µm, indicada pela USP
a pressões de HPLC 0
mAu
60 0 N=10.639
1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
50
40
Esta separação de naproxeno demonstra 30
20
10
mAu 95 bar
como pode ser fácil converter um método 600
mAu
N=10.639
50600 N =119.054 2 3 4 5 6 7 8 9 min
para as colunas InfinityLab Poroshell 120 40
30
50
InfinityLab
40 Poroshell 120, 4,6 x 150 mm (L1) 4 µm
2030
95 bar
sem alterar a vazão ou a fase móvel. 1020
010 165 bar
mAu00 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
60 0 N = 119.054 2 2 vezes8mais eficiência
O primeiro cromatograma apresenta uma 50
3 4 5 6 7 9 min
40
análise da USP em uma coluna Agilent 30
20
165 bar L/dp = 37.500
10
mAu
ZORBAX Eclipse Plus C18. 600
mAu
50600
N = 19.054
1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
4050 N = 13.186
3040
No 2º e 3º cromatogramas, as colunas Infi- 2030
165 bar
1020
nityLab Poroshell 120 EC-C18 de 4 μm (150 010 98 bar
mAu 00 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
60 0
mm e 100 mm) oferecem mais eficiência e 50
1
N = 13.186
InfinityLab
2
Poroshell 120,
3 4
4,6 x 100 mm (L1), 4 µm
5 6 7 8 9 min
40
velocidade que o método original, com subs- 30
20
mAu10 98 bar
tituições fáceis e pontuais e pressões razoá- 600
50 0 N = 13.186
1 2 3 4
25 vezes mais
6 rápida,
7 mesma8contrapressão
9 min
40
veis para a HPLC. 30
20
98 bar L/dp = 25.000
10
No 4º cromatograma, a coluna InfinityLab 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
Poroshell 120 EC-C18 de 2,7 μm (100 mm)
oferece mais eficiência e resolução a pra-
ticamente 2 vezes a velocidade do método
InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 4,6 x 100 mm (L1), 2,7 µm
original. Uma coluna mais curta InfinityLab
Poroshell 120 EC-C18 (50 mm) ainda aten- mAu
30 N = 21.046 2 vezes mais
de aos requisitos de eficiência e resolução 25
N = 20.676 13,67 µL injeção
20 rápida
15
no 5º cromatograma, mas é 4,5 vezes 10 Rs = 17,0
5
mAu
N = 21.046 L/dp = 37.037
mais rápida do que a coluna de 5 μm. 0
30
25 1 2 3 4N 5 6 7 P = 238 bar
20 = 20.676
15
10
5
0
mAu
1 2 3 4 5 6 7
30 N = 11.281
InfinityLab
25 Poroshell 120 EC-C18, 4,6 x 50 mm (L1), 2,7 µm
20 N = 12.051
15
10
5
mAu
0
30 N = 11.281 4,5 vezes mais
25 1 2 3 4 5 6 7 min
Condições: 20 N = 12.051 rápida 6,7 µL injeção
15
Requisito do método para adequação ao sistema: 10 Rs = 12,6
5
N > 4,000, Rs > 11,5 0 L/dp =18.518
Fase móvel: 50:49:1 MeCN:H2O:ácido acético 1 2 3 4 5 6 7 min P= 133 bar
Vazão: 1,2 mL/min
Amostra:
O alinhamento das fases estacionárias (químicas) InfinityLab Poroshell 120 e ZORBAX
1. Naproxeno
2. Butirofenona significa que as seletividades são muito semelhantes entre as linhas de coluna,
facilitando a transferência de seus métodos antigos.
25
Transferência de métodos da USP
Os métodos da USP são amplamente usados em testes de produtos farmacêuticos e matérias-primas. Esses métodos podem
ser atualizados fazendo ajustes que seguem as recomendações no capítulo <621> da USP (atualizado em agosto de 2014).
Modificações fora desses parâmetros são consideradas alterações do método e normalmente exigem revalidação do método.
USP37-NF32S1
Parâmetros para adequação do sistema
Isocrática
Com base no dp
Vazão
Ajustes adicionais: ±50%, desde que N diminua ≤20%
Volume de injeção Pode ser ajustado desde que seja consistente com os limites de precisão e detecção
Componente menor (≤50%): ±30% relativo, mas não pode ultrapassar ±10% absoluto
Proporção de componentes na fase móvel
Somente é possível ajustar 1 componente menor em misturas ternárias
HPH-C18 HPH-C8
ZORBAX, facilitando a transferência InfinityLab Poroshell 120 Phenyl-Hexyl ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl
de seus métodos de colunas com InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 ZORBAX StableBond SB-C18
partículas totalmente porosas para InfinityLab Poroshell 120 SB-C8 ZORBAX StableBond SB-C8
partículas porosas superficialmente.
InfinityLab Poroshell 120 Bonus-RP ZORBAX Bonus-RP
26
Informações para pedidos
Melhor para fases móveis com pH SB-C18 90°C 1,0 a 8,0 Não 9% 130 m2/g L1
baixo SB-C8 80°C 1,0 a 8,0 Não 5,5% 130 m2/g L7
Melhor para fases móveis com pH HPH-C18 60°C 3,0 a 11,0 Dobro Próprio 95 m2/g L1
alto HPH-C8 60°C 3,0 a 11,0 Dobro Próprio 95 m2/g L7
Melhor para seletividade alternativa Fenil-hexil 60°C 2,0 a 8,0 Dobro 9% 130 m2/g L11
4 µm 600 bar
27
Colunas InfinityLab Poroshell 120 1,9 µm: O mais alto desempenho de UHPLC
Observação: todas as colunas InfinityLab Poroshell 120 1,9 µm são fornecidas com um ID de coluna pré-programado
Colunas de guarda InfinityLab Poroshell 120 para UHPLC de 1,9 µm: prolongue ainda mais a vida da coluna
Colunas quirais InfinityLab Poroshell 120 de 2,7 µm para quiral: Separações em alta resolução de compostos quirais
Observação: qualificados para 400 bar. As colunas quirais InfinityLab Poroshell 120 não estão disponíveis com um ID de coluna pré-programado.
Colunas InfinityLab Poroshell 120 de 2,7 µm para HILIC: Melhor para separações polares
Observação: A InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5 tem um limite máximo de pressão de 400 bar e não está disponível com um ID de coluna pré-programado.
28
Colunas InfinityLab Poroshell 120 de 2,7 µm: Desempenho de UHPLC em pressões mais baixas
Observação: as colunas InfinityLab Poroshell 120 de 2,7 µm têm um limite de pressão de 600 bar/9.000 psi salvo indicação contrária. As colunas
InfinityLab Poroshell 120 de 2,7 µm não são fornecidas com um ID de coluna pré-programado como padrão. Para fazer o pedido com ID de coluna,
acrescente "T" ao final do código do produto (exemplo 693975-902T). *Estas colunas têm um limite máximo de pressão de 1.000 bar
Colunas de guarda InfinityLab Poroshell 120 de 2,7 µm: prolongue ainda mais a vida da coluna
29
Colunas InfinityLab Poroshell 120 de 4 µm: Desempenho melhorado de HPLC
Tamanho de
Tamanho (mm) EC-C18 EC-C8 Fenil-hexil SB-C18 SB-C8 SB-Aq Bonus-RP
partícula (µm)
4,6 x 150 2,7 693975-902K 693975-906K 693975-912K 683975-902K 683975-906K 683975-914K 693968-901K
4,6 x 100 2,7 695975-902K 695975-906K 695975-912K 685975-902K 685975-906K 685975-914K 695968-901K
4,6 x 50 2,7 699975-902K 699975-906K 699975-912K 689975-902K 689975-906K 689975-914K 699968-901K
3,0 x 150 2,7 693975-302K 693975-306K 693975-312K 683975-302K 683975-306K 683975-314K 693968-301K
3,0 x 100 2,7 695975-302K 695975-306K 695975-312K 685975-302K 685975-306K 685975-314K 695968-301K
3,0 x 50 2,7 699975-302K 699975-306K 699975-312K 689975-302K 689975-306K 689975-314K 699968-301K
2,1 x 150 2,7 693775-902K 693775-906K 693775-912K 683775-902K 683775-906K 683775-914K 693768-901K
2,1 x 100 2,7 695775-902K 695775-906K 695775-912K 685775-902K 685775-906K 685775-914K 695768-901K
2,1 x 50 2,7 699775-902K 699775-906K 699775-912K 689775-902K 689775-906K 689775-914K 699768-901K
Tamanho de
Tamanho (mm) EC-C18 EC-C8 Fenil-hexil PFP HILIC
partícula (µm)
4,6 x 250 4 690970-902K 690970-906K 690970-912K 690970-408K 690970-901K
4,6 x 150 4 693970-902K 693970-906K 693970-912K 693970-408K 693970-901K
4,6 x 100 4 695970-902K 695970-906K 695970-912K 695970-408K 695970-901K
4,6 x 50 4 699970-902K 699970-906K 699970-912K 699970-408K 699970-901K
3,0 x 250 4 690970-302K 690970-306K 690970-312K 690970-308K 690970-301K
3,0 x 150 4 693970-302K 693970-306K 693970-312K 693970-308K 693970-301K
3,0 x 100 4 695970-302K 695970-306K 695970-312K 695970-308K 695970-301K
3,0 x 50 4 699970-302K 699970-306K 699970-312K 699970-308K 699970-301K
2,1 x 250 4 650750-902K 650750-906K 650750-912K 650750-408K 650750-901K
2,1 x 150 4 693770-902K 693770-906K 693770-912K 693770-408K 693770-901K
2,1 x 100 4 695770-902K 695770-906K 695770-912K 695770-408K 695770-901K
2,1 x 50 4 699770-902K 699770-906K 699770-912K 699770-408K 699770-901K
30
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