Ciências Biomédicas

Técnicas Laboratoriais em Biomedicina

Docente: Profª Sandra Rebelo
Microarrays de DNA Amorim S., Baptista J., Costa L.
Ano letivo: 2018/2019

Objetivos Introdução
• Distinguir os diferentes tipos de microarrays de DNA; Microarrays de DNA consistem numa série de segmentos de DNA, as
• Descrever a técnica de microarrays de DNA; sondas, (cDNA ou oligonucleótidos) dispostos regularmente num tipo de
• Identificar as principais aplicações e explicar um exemplo suporte sólido, e a medição da sua expressão envolve a hibridação de
prático desta técnica na Biomedicina; toda a matriz com uma amostra de DNA marcada.
• Identificar as vantagens e desvantagens desta técnica;
O microarray distingue-se ainda pela método de preparação do chip de
DNA, a natureza da sonda, o suporte sólido usado, e o método usado
Tipos de microarrays para direcionamento da sonda.

Método de preparação do microarray DNA

Sondas, previamente sintetizadas, são Descrição da técnica
depositadas em pontos específicos da superfície
1. Preparação do microarray;
“Spotted” do array. Assim, a superfície fica pronta para
microarray receber os cDNA, previamente retirado de base
de dados de sequências genéticas e amplificado
por PCR.
Sondas de oligonucleótidos são diretamente
“In situ”
sintetizadas na superfície do array.
microarray
Número de células em estudo Figura 1 – Construção de um Microarray de DNA;

As sondas destes microarrays são hibridizadas 2. Preparação das amostras;

com cDNA de duas células diferentes. Cada célula 3. Hibridação;
Microarrays de
incorpora um fluoróforo diferente e isto 4. Scanning;
duas cores possibilita a comparação entre quais são os genes 5. Análise de dados;
transcritos em cada célula.
As sondas destes microarrays são hibridizadas
com cDNA de apenas um tipo de célula. Assim, é
Microarrays de possível a visualização das diferenças de
uma cor intensidade de luz entre poços e medir
relativamente a abundância dos genes.

Aplicações em Biomedicina
• Farmacogenómica;
• Análise da expressão génica;
• Diagnóstico de doenças (Ex: Cancro);
O estudo do perfil da expressão genética de cancros representa a
maior área de pesquisa usando microarrays de DNA e parece ser a
abordagem mais apropriada para a caracterização molecular da
doença. Figura 2- Passos que continuem a técnica de Microarray de DNA.

Vantagens e desvantagens
• Muitas sonda estão disponíveis no mercado;
• Impressão automatizada;
• Processo fácil e flexível;
• Grandes fragmentos de DNA hibridizam bem;
• Estudo de vários genes em simultâneo;
• Testes de diagnóstico mais rápidos;
• Custo elevado;
• Dificuldade em detetar pouca abundância de
transcritos;
• Necessidade de utilizar ferramentas
bioinformáticas;
Figura 3 - Aplicação de microarrays de DNA no diagnóstico do cancro. • Possibilidade da obtenção de falsos positivos;

Referências: BUMGARNER, R. Overview of DNA microarrays: types, applications, and their future. Curr Protoc Mol Biol, v. Chapter 22, p. Unit 22 1, Jan 2013. ;
COMPBIO. Gene Expression Microarrays and Experiments, 2001;
GROEN, A. K. The pros and cons of gene expression analysis by microarrays. In: (Ed.). J Hepatol. Netherlands, v.35, 2001. p.295-6.; K
IM, I. J.; KANG, H. C.; PARK, J. G. Microarray applications in cancer research. Cancer Res Treat, v. 36, n. 4, p. 207-13, Aug 2004.
5TORAY INDUSTRIES, I. Types and features of DNA microarrays, 2019.;
VERMEEREN; VERONIQUE. Evolution towards the implementation of point-of-care biosensors, 2011.