IDENTIFICACION CUALITATIVA DE MONOSACARIDOS Y DISACARIDOS

Ana C De La Ossa, Steffy M. González, Harold Y. Pérez

Laboratorio de bioquímica
Facultad de ingeniería
Programa de ingeniería agroindustrial
Universidad de Sucre
11-septiembre-2018

RESUMEN
En la práctica de laboratorio de Bioquímica No. 2, se realizó la práctica sobre el
reconocimiento de los monosacáridos y disacáridos con el mango en diferentes
pruebas y reacciones; luego así se procedió a realizar las diferentes identificaciones
para las pruebas cualitativas como: Prueba de Molish; con distintos carbohidratos
como el extracto de jugo, la sacarosa, la glucosa, la fructosa y el agua en el que
resulto prueba positiva para todos excepto el del agua, Prueba de Fehling;
identificando así azucares reductores y no reductores, teniendo como resultado final
positivo para todos los carbohidratos usados en excepción el agua, Prueba de
Seliwanoff; el cual fue la identificación entre aldosas y cetosas, obteniendo como
prueba negativa la de la fructosa y el agua, para la Prueba de Tollens; fue la
distinción de aldosas se logró identificar en el extracto de jugo y la glucosa teniendo
la presencia de espejo plata y; en la Prueba de Bial; se identificó pentosa (5
carbonos) por medio de una coloración verde claro.

PALABRAS CLAVES: monosacáridos, disacáridos, glucosa. Fructosa, sacarosa,

carbohidratos.

INTRUDUCCION energía de forma inmediata, sobre

Los carbohidratos son unas
biomoléculas que también toman los
nombres de hidratos de carbono,
glúcidos, azúcares o sacáridos; Estas
moléculas están formadas por tres
elementos fundamentales: el carbono,
el hidrógeno y el oxígeno, este último
en una proporción algo más baja. Su
principal función en el organismo de
los seres vivos es la de contribuir en el
almacenamiento y en la obtención de
todo al cerebro y al sistema nervioso.
Esto se cumple gracias a una enzima,
la amilasa, que ayuda a descomponer
esta molécula en glucosa o azúcar en
sangre, que hace posible que el
cuerpo utilice la energía para realizar
sus funciones.
Aunque su función principal es la
energética, también hay ciertos
hidratos de carbono cuya función está
relacionada con la estructura de las
células o aparatos del organismo, forma de grupo carbonilo. Este grupo
sobre todo en el caso de los oxidado puede situarse en el extremo
polisacáridos. Estos pueden dar lugar de la cadena (aldehído), o adyacente,
a estructuras esqueléticas muy en posición 2 (cetonas) A partir de esta
resistentes y también pueden formar estructura básica, existen otros
parte de la estructura propia de otras hidratos de carbono con alguna
biomoléculas como proteínas, grasas modificación química.
y ácidos nucleicos. Gracias a su
resistencia, es posible sintetizarlos en
el exterior del cuerpo y utilizarlos para
fabricar diversos tejidos, plásticos y
otros productos artificiales. [1]

Los hidratos de carbono constituyen el [2]

grupo de biomoléculas más
abundante sobre la superficie OBJETIVOS
terrestre, representando
aproximadamente el 75 % de la 1. OBJETIVO GENERAL
materia orgánica existente. En
• Identificar cualitativamente
ocasiones, se denominan también
monosacáridos y disacáridos.
carbohidratos, azúcares, sacáridos o
glúcidos. Todos son términos que
2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
hacen referencia a su sabor dulce, o a
• Aplicar pruebas de
que poseen la composición Co(H2O)
identificación de
n. Aunque dicha nomenclatura
monosacáridos.
subsiste, no todos los glúcidos tienen
• Descripción cualitativa de
sabor dulce ni responden a tal
monosacáridos y disacáridos.
composición. En los animales los
carbohidratos son esenciales desde el • Identificar azucares mediante
punto de vista energético, ya que diferentes reacciones químicas.
muchos órganos y células del cuerpo
humano, como el cerebro y los MATERIALES Y REACTIVOS
glóbulos rojos, obtienen su energía ❖ 5 tubos de ensayo por grupo
principalmente de la glucosa. Pero sus ❖ 1 pinza para tubos de ensayo
funciones no se restringen a ser ❖ 1 beaker de 500ml
únicamente fuente de energía, sino ❖ 1 gradilla para los tubos de
que también pueden desarrollar ensayo
funciones estructurales, de ❖ Solución al 2% de glucosa,
reconocimiento celular y adhesión. fructosa y sacarosa
Estructuralmente, un hidrato de ❖ 1 mango maduro
carbono típico es una cadena ❖ Agua destilada
hidrocarbonada con varios grupos ❖ Reactivo de Molish
alcohol y un carbono más oxidado, en ❖ Reactivo de Fehling A y B
❖ Reactivo de Seliwanoff
 ❖ Reactivo de Tollens
❖ Acido sulfúrico concentrado
❖ Panola para filtrar
❖ Mechero de bunsen
METODOLOGIA
y el agua destilada, cada uno contenía
1ml respectivamente, a estos se le
adiciono 2ml del reactivo de Tollens y
se procedió a calentar en un baño de
maría agitando suavemente durante
5minutos.

1. PRUEBA DE MOLISH 5. ENSAYO DE BIAL

En primer lugar, se extrajeron 20ml de Para esta ultima prueba de Bial, se
extracto de jugo de mango, luego se tomaron 3 tubos de ensayo con 1ml de
marcaron 5 tubos de ensayo: glucosa, muestra glucosa a 2ml de Bial y se
fructosa, sacarosa, agua destilada y procedió a disolver con 1.5g de HCl y
extracto de jugo de mango, trabajando 200ml de agua destilada, luego de
así con ellos durante todas las este, se le adicionaron 7 gotas de
pruebas; para la primera prueba se solución de FeCl3 6H2O y se calentó
adiciono 0.5ml de reactivo de Molish a en baño de maría por 4 minutos.
los 5 diferentes tubos de ensayo
conteniendo cada uno 1ml de cada RESULTADOS
carbohidrato, luego se adiciono
REACTIVOS RESULTADOS
cuidadosamente en cada tubo 1ml de
Glucosa presencia
ácido sulfúrico sin agitar.
de calor- 3 capas
(incolora, morada,
2. PRUEBA DE FEHLING incolora)
En la prueba de Fehling, se adiciono
0.5ml del reactivo a cada uno de los 5 Fructosa presencia
tubos de ensayo conteniendo cada de calor- 4 capas
uno 1ml de los carbohidratos; luego (incolora, café, negro,
cada muestra se calentó en baño de incolora)
maría durante 3minutos.
MOLISH Sacarosa presencia
3. ENSAYO DE SELIWANOFF de calor- 3 capas
Para la prueba de Seliwanoff, el (incolora, azul oscuro,
procedimiento fue igual que el incolora)
anterior, solo que en esta prueba se le
Ext. Jugo mango
adiciono fue 0.5ml del reactivo de
presencia de calor- 3
Seliwanoff y solo se calentaron capas (incolora,
2minutos en el baño de maría. negra, amarilla)
Agua dest. Negativo
4. REACTIVOS DE TOLLENS
Para esta prueba de Tollens, fueron Glucosa coloración
utilizados en nuestro equipo de trabajo naranja (positivo)
4 tubos de ensayo: el de la glucosa, el Fructosa coloración
extracto de jugo de mango, la fructosa naranja (positivo)
 FEHLING Sacarosa no hubo un anillo violeta-rojizo en el sitio de
coloración (negativo) contacto de los dos líquidos, ya que
Ext. Jugo mango los ácidos concentrados originan una
precipitado naranja y deshidratación de los azucares para
amarillo (positivo) rendir furfurato, que son derivados
Agua dest. negativo aldehicos del furfurano,
Glucosa no cambio posteriormente los fusfurales se
de color (negativo) condensan con los fenoles para dar
Fructosa coloración
productos coloreados característicos.
naranja (positivo)
Sacarosa cambio de
SELIWANOFF color debido a que se Entonces se concluye que con este
pasó de tiempo reactivo se puede identificar cualquier
Ext. Jugo mango tipo de carbohidrato, pero de forma
coloración rojizo cualitativa porque no permite saber la
(positivo) cantidad de glúcidos en la solución de
Agua dest. Incolora cada muestra.
(negativo)
Glucosa espejo plata
(positivo)
Fructosa negativa,
TOLLENS color café
Ext. Jugo mango
espejo plata (positivo)
Agua dest. negativo
Glucosa incolora,
incolora (negativo)
Pentosa incolora, 2. PRUEBA DE FEHLING
BIAL luego coloración En presencia de agentes oxidantes,
verde (positivo) iones metálicos como el Cu2 los
Agua dest. Incolora monosacáridos presentan varias
(negativo)
reacciones de oxidación.
Presentándose un cambio de
ANALISIS DE RESULTADOS
coloración a rojo ladrillo indicando la
1. PRUEBA DE MOLISH presencia de un azúcar reductor, Para
el ensayo con la sacarosa al ser esta
Después de haber adicionado 1ml de la unión de los extremos nucleofílica
glucosa, fructosa, sacarosa, agua de la glucosa y la fructosa no posee
destilada y extracto de jugo de mango iones libres para formar la reacción de
en 5 tubos de ensayo, al igual que el reducción; Se identificó mediante la
reactivo de Molish y acido sulfúrico en reacción de Fehling los diferentes
las paredes. Se observó que todas las azúcares, dándonos una reacción
muestras reaccionaron positivamente positiva para la glucosa, fructosa y
excepto la de agua destilada, resulta extracto de jugo de mango, reflejado
positivo al presentarse la aparición de en el cambio de color de reacción ion
mediante un precipitado de; mientras
que la sacarosa y el agua destilada
nos dio una reacción negativa, esto
debido a que no se produjo una
oxidación por lo que se mantuvo el
color azul en toda la reacción.
Se compararon las características
obtenidas con la teoría establecida, ya
que si se obtuvo el precipitado en la
glucosa, fructosa y extracto de jugo
porque estos tres son azúcares
reductores y negativo en sacarosa y
agua destilada ya que no es un azúcar
reductor.
3. ENSAYO DE SELIWANOFF
Al introducir las muestras en los tubos
de ensayo con las 5 gotas de
Seliwanoff e introducirlo en el baño de
maría se obtuvo que tanto las aldosas
como las cetosas en presencia de
ácidos minerales y en un medio
caliente sufren procesos de
deshidratación, lo cual como producto
un anillo pentagonal de furfural o
hidroximetilfurfural, según sea el
monosacárido pentosa o hexosa, los
fusfurales condensados dan una
coloración roja, la fructosa al ser una
cetohexosa da un resultado positivo,
también el extracto de jugo y la
sacarosa nos dio positivo porque se
dejo mucho tiempo en el baño de
maría y se produjo una hidrolisis acida
en donde la sacarosa libera fructosa.
La glucosa no reacciono tampoco
porque no pertenece al grupo de las
cetosas sino al de las aldosas como
también el agua.
4. REACTIVOS DE TOLLENS
Se observo que el reactivo se prepara
por adición del hidróxido de amonio a
una solución del hidróxido de plata, la
plata y el hidróxido de amonio forman
un compuesto (AgCuH3)2OH, plata
diamino que reacciona con el
aldehído. El agente oxidante es el ion
Ag, esta reacción provocada sobre la
superficie de un cristal permite la
formación de una placa metálica que
convierte la lamina de cristal en un
espejo, es decir la glucosa y el
extracto de jugo reaccionan con
Tollens debido a que los azucares
contienen grupos hidroxilos en su
molécula, lo cual hace que se forme el
color plata tipo espejo.
5. ENSAYO DE BIAL
Esta reacción detecta la presencia del
furfural producido en medio ácido por
las pentosas. El reactivo de Bial
contiene orcinol disuelto en HCl
concentrado. El ácido provoca la
formación del furfural y el orcinol se
condensa con este último para
producir cromógenos de color verde
claro, el cual se presento en la
sacarosa, mientras que la glucosa y
extracto de agua no presento reacción
porque pertenece al grupo de las
hexosas.
CONCLUSION
En la realización de la práctica No. 2,
de la identificación cualitativa de
monosacáridos y disacáridos, se logró
concluir:
1. La sacarosa no reacciona con
el Fehling porque no tiene
grupos reductores libres.
2. El reactivo de Tollens es un
agente oxidante suave, el cual
tiene la capacidad de oxidar,
pero lentamente; pero esta
clase de reacciones son los que
identifican un monosacárido de
un disacárido como lo es la
sacarosa.
3. Se identificó los carbohidratos
en la prueba de Molisch, dando
una reacción positiva la
glucosa, fructosa, sacarosa y
extracto de jugo de mango.
conociendo las características
de esta reacción, ya que se
pone de manifiesto la presencia
de carbohidratos en las
pruebas.
4. En esta práctica llegamos a
conocer la importancia de cada
una de las pruebas que
realizamos, y así poder conocer
carbohidratos, pentosas,
aldosas, cetosas, acción
reductora de azucares.
5. Es de mucha importancia
conocer sobre el tema de
carbohidratos, son bases
fundamentales para la
estabilidad del organismo y así
diferenciar que sustancias
pueden ingerir ciertos
organismos, cual las pueden
rechazar y como pueden
reaccionar algunas con un
cierto organismo
metabolizándolas.
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el fundamento de
cada uno de los ensayos
utilizados para la identificación
de carbohidratos?
RTA/ Ensayo de Molish: Este ensayo
es un ensayo para reconocimiento
general de carbohidratos en el que los
polisacáridos y disacáridos se
hidrolizan con ácido sulfúrico
concentrado hasta monosacáridos y
se convierten en derivados del furfural
o 5-hidroximetil furfural los cuales
reaccionan con α-naftol formando un
color púrpura violeta.
Ensayo de Benedict: El ensayo de
Benedict permite el reconocimiento de
carbohidratos reductores, al igual que
el reactivo de Fehling, el de Benedict
contiene ion cúprico en medio alcalino
que se reduce hasta óxido cuproso en
presencia de azúcares con el hidroxilo
hemiacetálico libre.
Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo
es específico para cetosas y se basa
en la conversión de las cetosas en 5-
hidro-metil-furfural y su posterior
condensación con resorcinol
formando así complejos coloreados.
Ensayo de Bial: El reactivo de Bial
contiene orcinol en ácido clorhídrico,
el cual forma complejos de coloración
sólo con las pentosas.
De otro lado una propiedad importante
que permite identificar los
carbohidratos, y determinar el grado
de pureza de los mismos,
particularmente monosacáridos es la
rotación óptica ocasionada por la
presencia de centros asimétricos o
quirales en la estructura molecular, los
cuales desvían el plano de luz
polarizada. Esta propiedad no es
exclusiva de los carbohidratos pues la
presentan todas aquellas sustancias
denominadas óptimamente activas,
por tener en su estructura centros
quirales.
Para la medición de la rotación óptica
los factores importantes a tener en
cuenta son: La longitud de onda de luz
polarizada, la cantidad de material
óptimamente activo, y la naturaleza
del solvente cuando se usa. Los
cambios en la temperatura ocasionan
solo pequeñas variaciones en las
medidas de la rotación.
Prueba de Tollens: (Ag (NH3)2+), es
un agente de oxidación suave, su
solución de Nitrato de plata es
transparente e incolora de pH básico.
Para evitar en el Test de diagnóstico la
precipitación de iones de Plata como
Hidróxido de Plata insoluble, se
agregan unas gotas de una solución
de Amoniaco, que con los iones de
plata forma un complejo llamado
Diamina-Plata (I) que es soluble en
agua. Al oxidar un Aldehído con el
reactivo de Tollens, se produce el
correspondiente Ácido Carboxílico y
los iones de Plata se reducen
simultáneamente a Plata metálica.
2. ¿Por qué se considera reductor
un azúcar?
RTA/ Porque poseen la capacidad de
reducir otros compuestos gracias a la
alta reactividad del doble enlace del
oxígeno.
3. Escriba la reacción de cada una
de las pruebas efectuadas en
las prácticas:
RTA/
Prueba de Fehling:
Prueba de Bial:
 C. Sustitución de uno o más –OH por
Prueba de Seliwanoff: otros grupos químicos. H, amino NH2,
fosfoazúcares, sulfoazúcares:

Prueba de Molisch:

[3] [4]
4. Escriba las reacciones
siguientes: 5. Comparación de disacáridos
RTA/ A. Oxidación del grupo carbonilo más importantes: sacarosa,
para producir azúcares ácidos: lactosa, maltosa, trealosa;
teniendo en cuenta todas las
características estudiadas
previamente.
RTA/ SACAROSA: Es un disacárido
de tipo heterogéneo que se encuentra
formado por una glucosa, la cual
aparece en forma de piranosa, es
decir, un anillo con seis miembros, y
una fructosa a modo de furanosa, o
B. Reducción del grupo carbonilo y/o –
anillo de cinco miembros. Dichos
OH para producir azúcares alcoholes:
monosacáridos se encuentran
enlazados por el carbono 1 en el caso
de la glucosa, y por el carbono 2
cuando se trata de la fructosa. En
enlace que los une es de tipo
glucosídico, siendo α para la glucosa y
β para la fructosa. Así, podemos decir
que la sacarosa es una α-D-
glucopiranosa (1 →2) β-D-
fructofuranósido. un azúcar que no es
de tipo reductor, pues tiene el carbono
anomérico de la glucosa enlazado, por
lo que dará negativo en pruebas como
Fehling, la cual realiza una reacción
con el cobre amoniacal, sin que deba
hacer aparición un precipitado rojizo.
moléculas de glucosa donde la unión
glucosídica de tipo α (1-1) involucra
los grupos OH de los dos carbonos
anoméricos. Partiendo de dos
glucosas reductoras dulces se
consigue un disacárido no reductor,
con un bajo poder edulcorante. [6]
ANEXOS
1. PRUEBA DE MOLISH

LACTOSA: Es un disacárido formado

por la unión de una glucosa y una
galactosa. Concretamente intervienen
una β-galactopiranosa y una α-
glucopiranosa unidas por los carbonos
1 y 4respectivamente. Al formarse el Figura 1 (carbohidratos + reactivo de
enlace entre los dos monosacáridos Molish)
se desprende una molécula de agua.
Además este compuesto posee el OH
hemiacetálico por lo que da la reacción
de Benedict.

MALTOSA: La maltosa o azúcar de

malta es un disacárido formado por
dos glucosas unidas por un enlace
glucosidico producido entre el oxigeno Figura 2 (resultado final prueba de
del primer carbón anomerico Molish)
(proveniente de -OH) de una glucosa 2. PRUEBA DE FEHLING
y el oxigeno perteneciente al cuarto
carbón de la otra. Por ello este
compuesto también se llama alfa
glucopiranosil(1-4)alfa glucopiranosa.
Presenta en su estructura el OH
hemiacetálico por lo que es un azúcar
reductor, da la reacción de Maillard y
la reacción de Benedict.
Figura 3 (carbohidrato + 5gotas de
TREALOSA: La trealosa es un azúcar Fehling)
doble (disacárido), formado de dos
 4. REACTIVOS DE TOLLENS

Figura 4 (resultado final prueba de

Fehling)
Figura 8 (carbohidrato + reactivo de
3. ENSAYO DE SELIWANOFF Tollens)

Figura 5 (carbohidrato + reactivo de

Seliwanoff)
Figura 9 (prueba en baño maría)

Figura 6 (prueba en baño maría) Figura 10 (resultado espejo plata)

5. ENSAYO DE BIAL

Figura 7 (resultado final prueba de

Seliwanoff)
Figura 11 (resultado final prueba de
Bial)

BIBLIOGRAFIA
[1] VITAE, REVISTA DE LA
FACULTAD DE QUÍMICA
FARMACÉUTICAISSN 0121-4004,
ISSNe 2145-2660. Volumen 17
número 1, año 2010.Universidad de
Antioquia, Medellín, Colombia. págs.
37-44avalon.utadeo.edu.co
[2]https://es.slideshare.net/SalRiosCa
no/bioqumica-carbohidratos
[3]http://biokimik2011.blogspot.com.c
o/2011/12/determinacion-cualitativa-
de-los.html
[4]https://biologiaupc.files.wordpress.
com/2012/08/lab-de-carbohidratos.pdf

[5]https://www.academia.edu/689151
1/PRACTICA_DE_LABORATORIO_N
o_1_carbohidratos
[6]http://carbohidratosdaniel.blogspot.
com.co/
[7]http://med.se-
todo.com/himiya/7828/index.html