TIEMPO DE REDUCCIÓN DE AZUL DE METILENO

1. OBJETIVOS

 Determinar de forma directa el grado de desarrollo microbiano en leche fresca, o

envasada.
 Conocer los pasos y operaciones necesarias para llevar a cabo este análisis.

2. PRINCIPIO.

El método está basado en propiedad que tienen ciertas enzimas producidas por bacterias capaces
de transferir hidrogeno de un sustrato a un aceptor biológico (azul de metileno que es un reactivo
coloreado) reduciéndolo.

La prueba consiste en medir el tiempo que tarda la leche en decolorar el azul de metileno por
reducción, siendo el tiempo de reducción inversamente proporcional al número de
microorganismos contenidos en la leche al realizar la incubación.

3. MATERIALES / EQUIPOS

 Pipeta aforada de 10 ml.

 Pipeta aforada de 1 ml.
 Tubos de ensayo de 10 ml provistos de tapones previamente esterilizados.
 Baño termostático con regulador de temperatura.
 Gradillas porta tubos.
 Material usual de laboratorio.

4. MUESTRA / REACTIVOS

 Reactivo azul de metileno.

 Agua destilada.

5. PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS

 Con una pipeta transfiera 1 ml de solución de azul de metileno en un tubo de 10 ml

previamente esterilizada cuidando de no exponerlo mucho tiempo a la luz.
 Adicionar 10 ml de leche previamente homogeneizada tapando los tubos inmediatamente
se mezclan ambos líquidos volteándolo con suavidad.
 Una vez que el estante completo incubar en un baño termoregulado a la temperatura de
37 0C registrar el tiempo de incubación.
 Observar continuamente si las muestras comienzan a decolorar en caso de hacerlo anotar
el tiempo de decoloración.
6. ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO:

Leche homogenizada añadir 10 ml. De leche añadir 1 ml. De azul de .

. metileno

Incubar a 37 ºC registrar tiempo de observar si las muestras comienzan

Incubación a decolorar
7. EXPRESIÓN DE RESULTADOS

Muestra Tiempo (horas)

Leche purita 4
Leche purita contaminada 2

INTERPRETACIÓN DEL TRAM

8. OBSERVACIONES:

Por la falta de tiempo sólo se esperó un periodo de tiempo corto, pero aún así pudimos notar que
la muestra hasta el momento en que se detuvo el análisis presentó signos de decoloración por ese
motivo los tiempos tomados son aproximados a los que se tienen en la tabla de resultados.

9. CONCLUSIONES:

Determinamos de forma directa el grado de desarrollo microbiano en las muestras de leche fresca,
además que pudimos conocer los pasos y operaciones necesarias para llevar a cabo el análisis de
TRAM.