Universidad privada del Valle

Ensayos preliminares para machas de

sangre

Integrantes :
 Ayala Vargas Geraldine
 Blanco Bustillos Jhoseline Gabriela
Materia : Toxicología
Docente : Dra. Machicao Lozada Yolanda
Carrera : Bioquímica y Farmacia
Gestión : 1/2019

La Paz-Bolivia
 Ensayos preliminares para machas de sangre

Los ensayos preliminares son pruebas rápidas basadas en la actividad de

peroxidasa que posee el grupo hemo de la hemoglobina de la sangre y que, en
presencia de agua oxigenada y de ciertos reactivos orgánicos reducidos o
reactivos cromógenos (fenolftaleína, tetrametilbencidina, verde de malaquita,
etc.), dan lugar a la aparición de coloraciones o luminiscencia que orientan sobre
la posible existencia de sangre en las muestras analizadas.

H2O2 + HEMOGLOBINA = H20 + O + REACTIVO = COLOR O LUMINISCENCIA

La peroxidasa descompone el agua oxigenada produciéndose agua y oxigeno.
Es este oxigeno el que actúa sobre el reactivo orgánico reducido,
transformándolo en su forma oxidada, de color característico o luminiscente.
Se requiere continuar con los ensayos para confirmar su presencia.
Los reactivos utilizados son:
Van Deen :
Consiste en bencidina disuelta en ácido acético glacial o en mezclas de alcohol
etílico y ácido acético. Da color azul verdoso en presencia de sangre y agua
oxigenada.
Se recomienda su uso debido a sus propiedades carcinogénicas.

Medenller:
Leucobase del verde de malaquita disuelta en solución de ácido acético, se
conserva color verde en presencia de sangre y agua oxigenada.
Mayor confiabilidad en los resultados ofrecen los reactivos que actúan en medio
alcalino, pues disminuye la posibilidad de falsos positivos.

Fenolftaleína
La alta sensibilidad en medio líquido de la reacción con fenolftaleina reducida,
se pone en manifiesto en la localización de sangre en soluciones muy diluidas,
como son las muestras recogidas en lavabos, cañerías, etc.
Al agregar gotas del reactivo y de agua oxigenada, se desarrolla en presencia
de vestigios de sangre una coloración rosada intensa.

Luminol
La reacción con luminol es sumamente sensible. La luminiscencia de color azul
del Luminol es catalizada por la Hemoglobina de la sangre. Esta reacción es
ampliamente utilizada en la investigación por la Comunidad Científica Forense
como una prueba orientativa para la búsqueda de manchas de sangre. La
emisión de luz es casi instantánea, cuando el Luminol es rociado sobre la sangre.

El Luminol puede ser utilizado para detectar la presencia de sangre en

cantidades tan bajas o diluidas como 1:106. Inclusive las manchas de sangre de
una antigüedad mayor a seis años, pueden ser localizadas. en superficies
lavadas, en ambientes amplios y sobre diferentes soportes.

Bluestar: Es una nueva fórmula a base del luminol y es más sensible que otras
pruebas de campo presuntivas para sangre. Las manchas invisibles reaccionan
inmediatamente con el reactivo para sangre, provocando una luminiscencia
intensa de color azul (longitud de onda de 430 nm) visible al ojo desnudo en la
oscuridad. Su sensibilidad es tal que hace evidente la sangre en cantidades
menores al mínimo requerido para efectuar análisis de ADN.

En el caso de todas las pruebas presuntivas, las muestras serán previamente

colocadas en placas de vidrio, lunas de reloj o placas de toque de porcelana,
luego se empaparan pequeños pedazos de papel filtro o hisopos de algodón
limpio o estéril, previamente humedecidos con suero fisiológico o agua destilada
y una vez empapados, se procederá a realizar pequeños toques lentos con las
muestras o se pondrán sobre estas por un lapso de dos minutos, luego de estos
se retiran el papel o el hisopo, sobre la cual deberá aplicarse una gotas de los
respectivos reactivos, se espera unos segundos, por si hubiera oxidantes
extraños en el medio (reacción falso positiva), de lo contrario se procederá a
agregar una gota de agua oxigenada (30 o 20 volúmenes).

Cuando exista la sospecha de que el material hemático, ha sido difundido por

intento de lavado de la supuesta mancha de sangre, se pueden realizar los
ensayos directamente sobre porciones de las mismas.

O en casos en que la muestra se encuentre sobre madera, metales y baldosas,

se toma la muestra directamente con el papel filtro o hisopo previamente
humedecido con suero fisiológico.
Cuando la reacción del cromógeno produzca quimioluminiscencia la prueba se
efectuará en la oscuridad o penumbra, según corresponda al luminol, Bluestar o
Test de Fenolftaleína.

Las reacciones preliminares que se han visto pueden dar falsos positivos, es
decir resultados positivos producidos por sustancias diferentes de la sangre,
como las que a continuación se detallan:
 Oxidantes químicos: se pone de manifiesto esta interferencia, pues sin
el agregado de agua oxigenada ya se observa cambio de color.
 Sales de cobre y níquel: interfieren solamente en solución concentrada
pero reaccionan en forma diferente a la sangre.
 Otras sustancias (de origen animal): son aquellas que por contener
trazas de sangre dan reacción positiva. Por ejemplo pus, secreción nasal,
etc. La observación microscópica de estas sustancias permite su
reconocimiento.
 Peroxidasas vegetales: son las de mayor incidencia en la producción de
falsos positivos. El color de la mancha debe observarse antes de los
ensayos. Generalmente su color difiere del de las manchas de sangre ya
que el verde y el blanco son los colores asociados con el material
proveniente de las plantas.

Bibliografía
 https://www.google.com/amp/s/docplayer.es/amp/80176265-Taller-
practico-n-1-la-mancha-corresponde-a-sangre-de-origen-humano.html
 http://wwwmercedesreyes.blogspot.com/2010/11/luminol-y-
bluestar.html?m=1
 https://m.monografias.com/trabajos73/determinacion-fluidos-biologicos-
sangre-semen/determinacion-fluidos-biologicos-sangre-semen2.shtml

Cuestionario
1. Que sustancias nos pueden dar falsos positivos para las pruebas
preliminares de manchas de sangre?
Oxidantes químicos, sales de cobre y níquel, otras sustancias de origen
animal, peroxidasas y vegetales.

2. En que consiste la prueba de van deen?

Consiste en bencidina disuelta en ácido acético glacial o en mezclas de alcohol
etílico y ácido acético. Da color azul verdoso en presencia de sangre y agua
oxigenada.
3. Cuál es el reactivo que nos proporciona mayor sensibilidad en
pruebas presuntiva de sangre?
Luminol o Bluestar.

4. Como se tomarán las muestras de sangre cuando se encuentren en

superficies de madera, metales y baldosas?
Se toma la muestra directamente con el papel filtro o hisopo previamente
humedecido con suero fisiológico.

5. En que consiste la prueba de fenolftaleína?

La alta sensibilidad en medio líquido de la reacción con fenolftaleina reducida,
se pone en manifiesto en la localización de sangre en soluciones muy diluidas,
como son las muestras recogidas en lavabos, cañerías, etc