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Objetivos:
El proceso de reproducción celular conocido con el nombre de mitosis puede ser estudiado
eligiendo un material constituido por células que se hallen en continua división. Esta condición la
reúnen los meristemos terminales o primarios, tales como los que se encuentran en el ápice de las
raíces. Un bulbo de cebolla o ajo cuya base se mantenga en contacto con el agua durante 4 o 5 días,
nos proporciona abundante cantidad de raicillas jóvenes, muy apropiadas para la obtención de
muestras destinadas a observar.
Todos los seres vivos, unicelulares y pluricelulares tienen como misión fundamental la de
reproducirse preservando sus características esenciales a través de las generaciones. Los
fenómenos que tienen lugar durante la reproducción celular corresponden a una de las etapas del
proceso conocido como ciclo celular. Este ciclo resulta de la coordinación de una serie de procesos
que involucran la integración de diferentes señales que conducen a la duplicación de DNA, su
condensación, segregación y posterior descondensación. Dentro de este ciclo, la mitosis es la etapa
durante la cual una célula da origen a dos células hijas con igual dotación de cromosomas. Aunque
la mitosis, de por sí es un proceso continuo, para su estudio se divide en diferentes etapas
consecutivas de acuerdo a los cambios morfológicos que va experimentando la célula y que se
continúan con la citocinesis.
El ciclo celular es el período comprendido entre la formación de una célula, por división de otra
precedente, y el momento en que ella misma se divide para originar dos células hijas. El ciclo celular
se puede dividir en dos grandes períodos: interfase y mitosis, cada uno de los cuales se subdivide
en varias fases o etapas. La interfase se encuentra subdividida en 3 etapas:
a) Período G1. Comienza la síntesis de ARN y proteínas, la cual perdura durante toda la
interfase
b) Período S donde ocurre la duplicación del ADN.
c) Período G2, fase postsintética que va desde el final de S hasta el comienzo de la mitosis.
Por otro lado, en la mitosis ocurren 2 procesos altamente sincronizados: la cariocinesis (división
del núcleo) y la citocinesis (división del citoplasma). En la cariocinesis se reconocen distintas fases:
profase, metafase, anafase y telofase. Algunos autores reconocen a la prometafase como un
estadio entre profase y metafase. La mitosis finaliza con la citocinesis, la cual es diferente en
animales y vegetales. Para estudiar los parámetros del ciclo celular se utilizan tejidos en constante
renovación (tejidos en proliferación), en los que la duración total del ciclo con determinadas
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condiciones es constante. Cuando las células de un meristemo de Allium cepa se encuentran en
equilibrio proliferativo, la duración de cada uno de los períodos del ciclo celular permanece constante.
De esta forma, el número de células que están en una fase determinada es también constante y
proporcional a la duración (en tiempo) de la misma. Teniendo en cuenta esto, se puede calcular la
duración relativa de las diferentes fases del ciclo, es decir de la interfase y de la mitosis, así como
de cada una de las etapas de ésta.
Fases de la mitosis
a) Interfase: La célula está ocupada con la actividad metabólica y realizando sus tareas como
parte de un tejido. El ADN se duplica durante la interfase para prepararse para la mitosis (las
cuatro próximas fases que conducen a e incluyen la división nuclear). Los cromosomas no
están claramente discernidos en el núcleo, sin embargo un punto oscuro llamado nucléolo
puede ser visible.
b) Profase: La cromatina en el núcleo comienza a condensarse y se vuelve visible en el
microscopio óptico como cromosomas. La membrana nuclear se disuelve, marcando el
comienzo de la prometafase. Proteínas se adhieren a los centrómeros creando los
cinetocoros y los cromosomas comienzan a moverse.
c) Metafase: Fibras del huso alinean los cromosomas a lo largo del medio del núcleo celular.
Esta línea es referida como el plato de metafase (plano ecuatorial). Esta organización ayuda
a asegurar que en la próxima fase, cuando los cromosomas se separan, cada nuevo núcleo
recibirá una copia de cada cromosoma.
d) Anafase: Las cromátidas hermanas se separan y comienzan a migrar hacia los polos
opuestos de la célula, esta migración resulta de una combinación de movimiento del
cinetocoro a lo largo de los microtubulos del huso y de interacción física de los microtubulos
polares. Ahora los cromosomas se observan formados por una sola cromátida, con los
centrómeros dispuestos hacia los polos y los telómeros hacia el centro de la célula.
e) Telofase: Nuevas membranas se forman alrededor de los núcleos hijos mientras los
cromosomas se dispersan y ya no son más visibles con el microscopio óptico. La citocinesis
o la partición de la célula puede también comenzar durante este estadio.
ETAPAS DE LA MITOSIS
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ACTIVIDAD PRÁCTICA
Materiales:
Raicillas de cebolla, cebollín o ajo
Vidrio reloj
Bisturí
Orceína A
Orceína B
Mechero
Pinzas finas
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aguja enmangada
Papel filtro
Microscopio
Aceite de inmersión
Procedimiento
1) Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla (Allium cepa) sujeto
con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de
4 a 5 días aparecerán numerosas raicillas en crecimiento.
2) Cortar unos 2-3 mm del extremo de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que
se han vertido 3 mL de orceína A.
3) Calentar suavemente el vidrio a la llama del mechero durante unos 8 minutos, evitando la
ebullición, hasta la emisión de vapores tenues.
4) Con las pinzas tomar uno de los extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos,
añadir una gota de orceína B y dejar actuar durante 1 minuto.
5) Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Con el mango de una aguja
enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raíz quede
extendida.
6) Sobre la preparación colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre
el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presión, evitando que el
cubre resbale. Si la preparación está bien asentada no hay peligro de rotura por mucha
presión que se realice. Luego observar al microscopio
7) Calcular el índice mitótico (Im) del tejido de Allium cepa a partir de la observación de 50
células barriendo el campo, de acuerdo con la siguiente fórmula:
8) Calcular la duración relativa de cada etapa de la mitosis (índice de fases). Use la fórmula:
Debe observar 50 células de Allium cepa en división y anotar la etapa en que se encuentran. Luego
calcule el If de cada una de las etapas. ¿Cómo interpreta los valores de Im e If?
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LABORATORIO N° 12: MEIOSIS
Objetivos:
En algunas especies de protozoarios, algas y hongos existe un único tipo de división celular:
la MITOSIS. Pero en muchos otros organismos simples y en casi todos los complejos, existe además
otro proceso de división celular: la MEIOSIS. Este tipo de división genera células esencialmente
diferentes de las progenitoras en cuanto a las combinaciones posibles de su material hereditario, su
número cromosómico y su cantidad de DNA.
En resumen se puede visualizar la Meiosis como una sola duplicación del material genético
y dos divisiones celulares, originando como producto 4 células hijas haploides que pueden ser
genéticamente diferentes. Este proceso de división está asociado a las células germinales.
Al igual que en la Mitosis, está precedida de una fase S, durante la cual ocurre la mayor parte
de la síntesis del DNA (También ocurre algo de síntesis de DNA durante la primera fase meiótica).
Las dos divisiones celulares sucesivas de la Meiosis se denominan Meiosis I y Meiosis II. Cada
división meiótica está formalmente dividida en: Profase, Metafase, Anafase y Telofase. De estas la
de mayor complejidad y lentitud es la Profase I, la cual está dividida en Leptoteno, Zigoteno,
Paquiteno, Diploteno y Diacinesis.
La división especial que se produce en las células que originarán los gametos, llamada
División Meiótica, es el eje del proceso de diferenciación celular que culmina en las células que
podrán formar un nuevo individuo de la especie, pues es durante esta doble división, con una sola
duplicación del material genético, que se produce la reducción del número cromosómico (de diploide
a haploide), y el reordenamiento del material genético procedente de cada uno de los progenitores.
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EL CROMOSOMA MEIÓTICO
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RECOMBINACION
En la segunda división, se separan las dos cromátidas que constituyen cada cromosoma
(elementos duplicados que constituyen cada cromosoma). Como consecuencia de esa doble división
se producen 4 células que contienen la mitad del número cromosómico característico de la especie
(células haploides).
La División Meiótica, se produce en las células de las llamadas líneas germinales, en los
órganos genitales o reproductivos, en los que se produce ese proceso de diferenciación celular
profunda, que genera en los machos los gametos masculinos o espermatozoides y en los individuos
hembra, los ovocitos.
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Durante la espermatogénesis, proceso de formación de los gametos masculinos, que se
desarrolla en los testículos, (órganos sexuales primarios de los individuos machos), se superponen
dos “programas” de diferenciación: el primero es el de la División Meiótica, en la que se reduce el
número cromosómico y se reordena (recombina) el material genético, mientras que en el segundo
“programa”, o “Espermiogénesis”, se producen los cambios estructurales muy profundos,
compactación de la cromatina, aparición del Acrosoma (aparato destinado a la penetración del
espermatozoide en el óvulo), y el desarrollo del flagelo, estructura destinada a dotar de movilidad al
gameto maduro.
ACTIVIDAD PRÁCTICA