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observación apoya aún más la idea de que los solitones existen en las a 500 rpm durante 30 minutos por encima del Tm. Finalmente, la
neuronas reales. muestra se centrifugó a 10.000 rpm (fuerza G de 1.0621 g) en una
centrífuga Eppendorf 5804R, con un rotor F-45-30-11 durante 10
minutos, y se eliminó el sobrenadante para eliminar el exceso de
disolvente. Para los experimentos sin disolvente, se hidrataron 3 mg
1 Materiales y métodos ml1 de lípidos con agua Milli-Q y se agitaron durante 30 minutos a 50
n-Decano, cloroformo, metanol, n-hexadecano y n-pentano fueron 1C. En todas las muestras, se obtuvieron posteriormente pequeñas
obtenidos de Sigma Aldrich. 1,2-Dimiristoil-sn-glicero-3-fosfocolina vesículas unilamelares (SUV) por extrusión a través de un filtro de
(DMPC) y 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC) se policarbonato con un tamaño de poro de 100 nm. Cada experimento
compraron a Avanti Polar Lipids (Birmingham, AL) y se utilizaron se equilibró durante 600 s a 2 1C. Se realizó un escaneo de
sin purificación adicional. Se prepararon soluciones lipídicas (20 mg calentamiento de 2 a 50 1C y fue seguido por un escaneo de
ml1) en 7:2:1 n-decano/cloroformo/metanol y se agitaron durante 20 enfriamiento. Este ciclo se repitió 3 veces para cada muestra. Como
minutos para conseguir una mezcla homogénea. Para todos los todos los escaneos anteriores no muestran diferencias, sólo se presenta
experimentos se utilizó agua purificada. el tercer escaneado.
La Fig. 1 muestra el sistema de membrana lipídica construido para El sistema de disparo/detección consta de dos partes separadas por
realizar los experimentos. Consiste en un bloque de aluminio una distancia de 10 cm, véase la Fig. 1: una punta cónica calentable y
anodizado que se calienta con agua circulante (6). Un sistema de un espejo óptico donde se desvía un rayo láser. Un cono hueco con
placas acrílicas paralelas (1,3) está incrustado en el bloque y lo divide una punta muy afilada (diámetro 100 micras) se mecaniza en el
en dos cámaras. Cada uno de ellos dispone de una válvula de agua y extremo de un cilindro de aluminio, que se enrolla con un fino hilo de
una conexión de electrodos (4,5). La membrana lipídica lineal se pinta cobre (10). Los extremos de los cables están conectados a una fuente
sobre una ranura realizada sobre una lámina de acetato (2). La de tensión. Cuando la corriente fluye, el cable se calienta y la punta
hendidura tiene 10,0 cm de largo y 200 mm de ancho y se mantiene del cono se calienta hasta alcanzar una temperatura constante medida
en el centro por medio de las placas acrílicas. En cada experimento, se por un termopar. El cono cilíndrico está conectado a un micrómetro
limpió la lámina de acetato y se pintó previamente con un 5% de n- de alta precisión para que la punta toque la membrana con precisión.
hexadecano en n-pentano para reducir la tensión mecánica en los En cada experimento, la punta cónica hace contacto con la membrana
bordes de la abertura. El sándwich (placas de acrílico y lámina de suspendida en uno de sus extremos, ver el panel derecho de la Fig. 1.
acetato) fue cuidadosamente bajado dentro del bloque. Las cámaras A continuación, para medir un posible cambio en el espesor de la
estaban llenas de agua purificada. Una vez que se alcanza la bicapa lipídica en el punto de inspección, lejos de la punta caliente, se
temperatura elegida y el sistema está en equilibrio, se depositan 20 mg utiliza un detector óptico. Después de que se forma la bicapa en la
ml1 de solución lipídica en 7:2:1 n-decano/cloroformo/metanol a lo hendidura, se coloca cuidadosamente sobre la membrana (8) un
largo de la hendidura utilizando una micropipeta. Los electrodos de objetivo muy pequeño de tereftalato de polietileno (Mylar reflectante),
Ag/AgCl se colocaban previamente en cada compartimento y luego se que pesa aproximadamente 5 mg. Un rayo láser (longitud de onda
conectaban a un electrómetro (6517b, Keithley Instruments, Inc). La 632,8 nm) (7) se refleja en dicho espejo. Un fotodiodo de dos
formación de las membranas fue controlada visualmente y mediante segmentos (9) detecta el haz reflejado y esta señal luminosa produce
mediciones eléctricas con un pulso triangular de entrada de tensión de una tensión que se amplifica mediante un amplificador de bloqueo
100 mV con el fin de verificar el correcto sellado de las membranas y (HF2LI Lock-in Amplifier, Zurich Instruments AG) para mejorar la
el momento de su rotura. relación señal/ruido. Cualquier perturbación de la membrana provoca
Dado que el objetivo de este trabajo era propagar una perturbación un cambio en la posición del objetivo, ya que el espejo puede moverse
mecánica a lo largo de las membranas lipídicas debido a una transición libremente. Si la perturbación mecánica es lo suficientemente grande,
de fase, primero necesitamos conocer sus temperaturas de fusión aleja el Mylar de su posición, produciendo una tensión de señal que
(Tm). DPPC y DMPC tienen los siguientes Tms: 41 y 24 1C. Sin no puede ser recuperada.
embargo, las mezclas depositadas contienen disolventes que cambian
estas temperaturas. Para conocer sus nuevos valores, debemos realizar
un análisis calorimétrico. Los perfiles de capacidad de calor se
registraron a una velocidad de exploración constante de 1 1C min1 y 2 Resultados y discusión
una presión constante de 3 atm. La concentración de lípidos también La Fig. 2 muestra cómo la presencia de solventes (en nuestro caso n-
fue de 20 mg ml1 disueltos en 7:2:1 n-decano/cloroformo/metanol. Se decano, cloroformo y metanol, necesarios para proporcionar
conectó un calorímetro (Microcalorímetro, NanoDSC, TA estabilidad en capas tan grandes) induce cambios en la transición de
Instrument) a un PC y se analizaron los datos utilizando el software fusión de las membranas. De hecho, en comparación con los Tms de
suministrado con el instrumento. Luego, la solución se disolvió en los SUVs de lípidos puros, los cambios son muy grandes. Para DPPC,
agua (para inducir la formación de vesículas). La suspensión se agitó los SUVs libres de solventes muestran un pico principal de 41 1C. La
agua), en función del tiempo, viene dada por la curva magenta (cuadrados). Considerando la membrana en fase gel y de acuerdo con los
Observamos que toma un poco más de dos minutos para que el serpentín aumente parámetros (p y q) encontrados por nosotros, la densidad lateral
la temperatura del baño a 33 1C. La línea azul (círculos) corresponde a la línea
máxima es de 0,174 (17%). Este cambio corresponde al E71% del
temperatura a la que se posiciona el objetivo de Mylar. b) Trazas de tensión
representativas producidas por el fotodiodo en función del tiempo para una bicapa cambio de área total en la transición de la DPPC, que es E25%. 21 En
DPPC. DV es la diferencia entre la salida de tensión y su valor inicial V0. El cambio este trabajo, no es posible calcular la velocidad lateral del sonido en
en la señal de tensión se produce durante la transición de fase. función de la densidad del área de la membrana porque los datos
experimentales son insuficientes. Aunque hemos medido el perfil de
Fig. 5 Combinando las figuras a y b de la Fig. 4, obtenemos el voltaje en función de capacidad térmica, ignoramos los valores de densidad lateral de
la temperatura en la punta. Se presentan los datos de tres experimentos para la nuestras membranas lipídicas.
DPPC. La línea negra corresponde a la transición de fase observada en la Fig. 2. Los
datos de tres experimentos para DMPC se muestran en el recuadro. Véase la
explicación en el texto principal.
3 Conclusión
Como se menciona en la Introducción, la evidencia de cambios
Consideraciones teóricas mecánicos en la membrana relacionados con el potencial de acción
A continuación, nos gustaría mostrar que nuestros resultados están de fue demostrada por Iwasa y Tasaki. 2,3 Los autores también discutieron
acuerdo con el modelo de solitón propuesto por Heimburg y Jackson. la relación entre la propagación de un impulso nervioso y los cambios
12
Este modelo se basa en la ecuación de onda para la propagación del en la temperatura de la membrana. El modelo H-H no explica estos
sonido en una dimensión: fenómenos termodinámicos y por lo tanto han surgido nuevos puntos
de vista para explicar los cambios en la membrana durante el potencial
de acción. 42,43
donde la densidad lateral es una función de la coordenada z y el tiempo
t.
Los parámetros p y q describen las propiedades elásticas no Fig. 6 Velocidad lateral del sonido a baja frecuencia en función de la densidad del
lineales de la membrana y se obtienen ajustando valores área de la membrana. La línea azul muestra los datos con rAfluid = 4.035 103 g m2
experimentales. Para una membrana lipídica en fase fluida, a una a T = 45 1C. 12 círculos magenta muestran los datos que encajan con rAgel en ToTm.
temperatura superior a la de la transición de fusión, DrA = rA rA En los lípidos de las membranas artificiales y biológicas, las
rAfluid 4 0 y esto requiere que p o 0 y q 4 0. La solución analítica de características termodinámicas están estrechamente relacionadas con
los cambios de volumen y de superficie. 11,21 La transición de fase
provoca cambios en el espesor de la membrana y en la presión lateral,
A velocidad mínima b0, el solitón tiene la amplitud máxima. Para
y el aumento de la capacidad calorífica y de la compresibilidad alcanza
el caso DPPC unilaminar a 45 1C, rAfluid = 4.035 103 g m2, c0 = 176.6
su máximo en Tm. Un modelo de solitón propone la propagación de
m s1,12 B1 = 16.6 y
un pulso isoentrópico cerca de la transición de fase12 y su posible
B2 = 79.5.12,41
relación con dislocaciones mecánicas a lo largo de la membrana.
Cuando la membrana está en estado gelatinoso, DrA = rA rAgel o Estos son fácilmente explorados en las monocapas de lípidos en la
0, p y q deben ser 40. Considerando que la velocidad lateral del sonido interfaz aire-agua y la existencia de ondas sonoras adiabáticas ha sido
c2 tiene un mínimo durante la transición, 21,30 podemos ajustar los estudiada por Griesbauer et al. 28,44 Ellos reportaron una velocidad del
nuevos datos en eqn (2) con los valores reportados en T = 45 1C12 y sonido de las ondas superficiales derivadas de ks y rA, así como la
obtener diferentes parámetros para la membrana por debajo de la dependencia de la propagación de los pulsos en el estado de la
temperatura de fusión, ver Fig. 6. monocapa lipídica.
Los nuevos valores para las vesículas DPPC son rAgel = 4,877 103 g Esto también fue estudiado por Shrivastava et al:45: la intensidad
m2
, de fluorescencia de las moléculas de colorantes incrustadas en una
interfaz lipídica es sensible a las transiciones de fase. El mismo grupo
temperatura alrededor de 38 1C. Utilizando los nuevos parámetros en ha mostrado recientemente pulsos elásticos bidimensionales solitarios
eqn (3) y (4) podemos obtener los perfiles de solitón para una en una interfaz aire-agua. 30 En sus experimentos, mostraron pulsos
membrana DPPC en estado gelatinoso, ver Fig. 7. Ambas raíces en la propagándose en el régimen de transición donde la compresibilidad
eqn (4) son negativas, y alcanza un máximo. Variaron el estado monocapa cambiando la
densidad de la superficie de las moléculas de lípidos, pero también
pueden modificarse cambiando otras características físicas del
sistema.
los perfiles son siempre negativos porque DrA o 0. El máximo cambio
de densidad lateral posible en el modelo es:
Conflictos de intereses
No hay conflictos que declarar.
Agradecimientos
Este trabajo ha sido apoyado por CONACYT, México, bajo las
subvenciones CB-220962 y FC-1132. M. I. P. C. reconoce una beca
del CONACYT. Se reconocen las fructíferas conversaciones con
Francisco Sierra, Víctor Romero y Mauricio Castan˜o