PRÁCTICA No. 6.

AISLAMIENTO Y PROPIEDADES QUÍMICAS DE LA HEMOGLOBINA

Oscar Arreola1 (201604244), Sandra López1 (201516825), Daniel García1 (201500352), Andrea
Jimenez1 (201317665)
1
Departamento de Bioquímica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Universidad de San Carlos
de Guatemala, Carrera de Química Biológica.

INTRODUCCIÓN

La hemoglobina es una proteína globular encargada del transporte e intercambio gaseoso. Es una
proteína cuaternaria que consta de cuatro cadenas polipeptídicas, cada una de ellas unidas a un
grupo Hemo (Voet, 2007). El grupo Hemo, es un grupo prostético, es decir que, no es una proteína
pero que está en relación con ella; está constituido por un anillo de porfirina y un átomo de hierro. El
átomo de hierro forma de 6 enlaces covalentes coordinados, en los cuales cuatro se unen a las
cadenas polipeptídicas, otro forma un enlace con el nitrógeno del imidazol de una histidina y por
último puede formar enlace con el O2 (oxihemoglobina). Sin embargo, puede formar enlace con el
NO (nitrosilhemoglobina), o con agua (metahemoglobina) (Wilmore, 2007). Es importante conocer
las propiedades químicas de la hemoglobina para poder aislarla y conocer su reactividad con otras
sustancias para así obtener derivados de la misma. En esta práctica se aisló la hemoglobina para
preparar derivados de la misma, así como también se determinó cualitativamente sus características
por medio de reacciones definidas obteniendo un cambio de color, además, mediante espectros de
absorción se determinó la presencia del derivado o formación del mismo.

METODOLOGÍA RESULTADOS

En la práctica se utilizó técnicas de Tabla 1. Examen cualitativo de la

aislamiento y las propiedades químicas de la hemoglobina y sus derivados
hemoglobina. Esto mezclando la
hemoglobina con diferentes compuestos
utilizando la afinidad que la hemoglobina
tiene por ellos, esto permite la presencia de
los diferentes derivados de la hemoglobina
conocidas. Se determinó la absorbancia con
compuestos denominados tóxicos en la
sangre por tener una mayor afinidad con el
grupo hemo que el O2. (Freifelder 1981). Se Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el
estableció que la molécula de hemoglobina Laboratorio de Bioquímica, edificio T-12, USAC.
experimentalmente logró la formación de
moléculas que están asociadas con los En la tabla no.1 se observa las características que
diferentes compuestos no solo O2. presentó cada uno de los derivados de la
hemoglobina. Como se puede observar en la tabla,
cada hemoglobina presentó un cambio de color
característico.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La hemoglobina es una proteína que
en su estructura cuenta con un grupo Hemo
con un átomo de Fe, este al cambiar su estado
de oxidación, Fe+2, cuenta con la capacidad
de transportar oxígeno, adquiriendo el
nombre de oxihemoglobina. Esta proteína
presenta un color rojo vivo e intenso (ver
Tabla 1.) (Silva. M. y García. M., 2004)
Uno de los derivados de la
hemoglobina es la deoxihemoglobina que
para su formación se empleó el reactivo de
Stokes el cual está compuesto por ácido
tartárico, sulfato ferroso y al agregarle el
hidróxido de amonio, este forma un complejo
entre el Fe+2 y el ión del ácido. La formación
de este complejo proporcionó el cambio de
color de un rojo brillante a un color café,
como se muestra en la Tabla 1. (Silva. M. y
García. M., 2004)
Para la formación de la
metahemoglobina se le agregó ferricianuro de
potasio lo que hace pasar de Fe+2 a Fe+3.
Este debió presentar un color rojo o marrón y
su intensidad depende de la concentración de
la hemoglobina, por lo tanto, al observar la
Tabla 1 se muestra que el cambio de color no
fue el esperado por lo que se asume que la
concentración de la hemoglobina fue baja o
que la muestra interactuó con otras moléculas
ajenas a la prueba. (Jover. A. y García. M.,
2004)
Al agregarle a la oxihemoglobina, ácido
ascórbico y un buffer que da un medio de
reacción ácido para que el oxígeno presente
en el ambiente se una a los iones hidronios
que aporta el medio ácido, con una
concentración baja, el óxido nítrico puede,
combinarse con desoxihemoglobina para
formar nitrosilhemoglobina. La reacción
positiva de la nitrosilhemoglobina da por
resultado la formación final de
metahemoglobina (Stotz, 1962). Como se
observa en la tabla no.1 la reacción fue
negativa dando una coloración rojo
anaranjado.
El espectro de absorción de la
oxihemoglobina muestra dos bandas de
absorción características en la región verde-
amarilla del espectro con sus máximos a 577
nm y 541 nm esto debido a ser un
compuesto ferroso con enlaces diamagnéticos
covalentes (ver anexos, figura No. 1).
La deoxihemoglobina absorbe en la región
espectral de longitud de onda larga, en la
región verde amarillo una banda de absorción
única ancha con un máximo a 555 nm.
(Thews,1983)
CONCLUSIONES
Se determinó la formación de
deoxihemoglobina, puesto que el cambio de
color fue evidente de un rojo brillante a un
café claro, lo que evidencia la presencia del
ión ácido unido al Fe, reduciéndolo.
La metahemoglobina concentrada fue
la única que presentó burbujas por la
liberación de oxígeno.
Se confirmó la presencia de la
oxihemoglobina al presentar dos picos de
maxima absorción caracteristica de la oxi-Hb.
Se confirmó la presencia de la
metahemoglobina al presentar una gráfica
descendente caracteristica de la meta-Hb.
REFERENCIAS
Freifelder, D. (1981). Técnicas de bioquímica y
biología molecular. Barcelona:
Reverté.
Jover. A. y García. M. (2004). Manual Auxiliar
de Farmacia. Sevilla, España: Editorial
MAD S.L.
Miale. J. (1985). Hematología: medicina de
laboratorio. España. Reverte.
Silva. M. y García. M. (2004). Manual del
Técnico Superior de Laboratorio de
 Análisis Clínico. Sevilla, España: Editorial
MAD S.L.
Stotz.E y Florkin. M. (1962). Bioquímica
integral, métodos de estudio de las
moléculas. Amsterdan: Elsiever.
Thews.G. (1983).Anatomía, fisiología y
patofisiología del hombre. España.
Reverte.
Wilmore, J. H. (2007). Fisiología del esfuerzo y
Figura No 3. Espectro de absorción de la
del deporte. Barcelona: Paidotribo.
metahemoglobina
Fuente: Datos experimentales, obtenidos en
ANEXOS
el Laboratorio de Bioquímica, edificio T-12,
USAC.
Se observa la región de absorción de la
metahemoglobina

Figura No. 1. Espectro de absorción de la

oxihemoglobina
Fuente: Datos experimentales, obtenidos en
el Laboratorio de Bioquímica, edificio T-12,
USAC
Se observa curva de absorción de la oxi-Hb,
cual presenta dos picos de máxima
absorbancia.
Figura No. 4. Gráfica oxihemoglobina y
7deoxihemoglobina
Fuente: Wilmore, J. H. (2007). Fisiología del
esfuerzo y del deporte. Barcelona:
Paidotribo.

Figura No 2. Espectro de absorción de la

deoxihemoglobina
Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el
Laboratorio de Bioquímica, edificio T-12, USAC.
Se observa la región de absorción de la
deoxihemoglobina