Universidad Nacional de La Rioja

Bioquímica y Farmacia

INTEGRANTES:
MARQUEZ FATIMA

ORTEGA AYELEN

CATEDRA: QUIMICA BIOLOGICA

PROFESOR: RUBEN DANIEL

TRABAJO PRACTICO:

CINETICA ENZIMATICA
 Universidad Nacional de La Rioja
Bioquímica y Farmacia

Actividad N° 4
Al fin de analizar la dependencia de la actividad de la glucosa oxidasa con la [E] se
desarrolló el siguiente experimento. Se incubó a 37°C,1ml de solución 1Mm de Glucosa
con diferentes cantidades de enzima, deteniendo la reacción a distintos tiempos, y midiendo
la aparición de un producto coloreado (ζ=3140, esto representa a K en la ley de Lambert-
Beer, Abs=K.c).
a) Grafique cada experimento y determine Vo

I.
Tiempo 0,5 mg de E
Abs. [P] [Vo]
1 0,044 1,40127E-0,5 1,40127E-0,5
2 0,091 2,89809E-0,5 1,44904E-0,5
3 0,134 4,26752E-0,5 1,42251E-0,5
4 0,178 5,66879E-0,5 1,4172E-0,5
5 0,227 7,2293E-0,5 1,44586E-0,5

0.00008
7.2293E-05

0.00007
5.66879E-05
0.00006

0.00005
4.26752E-05
[P]

0.00004
2.89809E-05
0.00003

0.00002 1.40127E-05

0.00001

0
0 1 2 3 4 5 6
TIEMPO POR MINUTO
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Bioquímica y Farmacia

II.
Tiempo 1 mgde E
Abs. [P] [Vo]
1 0,090 2,86624E-0,5 2,86624E-0,5
2 0,179 5,70064E-0,5 2,85032E-0,5
3 0,271 8,63057E-0,5 287686E-0,5
4 0,310 9,87261E-0,5 2,46815E-0,5
5 0,363 0,000115605 2,3121E-0,5

0.00014

0.000115605
0.00012
9.87261E-05
0.0001
8.63057E-05

0.00008
[P]

5.70064E-05
0.00006

0.00004 2.86624E-05

0.00002

0
0 1 2 3 4 5 6
TIEMPO POR MINUTO

III.

Tiempo 2 mgde E
Abs. [P] [Vo]
1 0,180 5,73248E-0,5 5,73248E-0,5
2 0,374 0,000119108 5,95541E-0,5
3 0,547 0,000174204 5,80679E-0,5
4 0,600 0,000191083 4,77707E-0,5
5 0,684 0,000217834 4,35669E-0,5
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0.00025
0.000217834
0.000191083
0.0002 0.000174204

0.00015
0.000119108
[P]

0.0001
5.73248E-05
0.00005

0
0 1 2 3 4 5 6
TIEMPO POR MINUTO

IV.

Tiempo 5 mgde E
Abs. [P] [Vo]
1 0,395 0,0001258 0,0001258
2 0,788 0,00025096 0,00012548
3 1,030 0,00032803 0,00010934
4 1,250 0,00039809 9,9522E-0,5
5 1,321 0,0004207 8,414E-0,5
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0.00045 0.000420701
0.000398089
0.0004
0.00035 0.000328025

0.0003
0.000250955
0.00025
[P]

0.0002
0.00015 0.000125796

0.0001
0.00005

0
0 1 2 3 4 5 6
TIEMPO POR MINUTO

Se representó la cantidad de productos coloreado que reaccionó en distinto tiempo

Tiempos [P] 0,5mg [P] 1mg [P]2mg [P] 5mg
1 1,40127E-05 2,86624E-05 5,73248E-05 0,0001258
2 2,89809E-05 5,70064E-05 0,000119108 0,00025096
3 4,26752E-05 8,63057E-05 0,000174204 0,00032803
4 5,66879E-05 9,87261E-05 0,000191083 0,00039809
5 7,2293E-05 0,000115605 0,000217834 0,0004207

16 5

14
12
4
10
8
3
6
4 2

2 1
1.40127E-05
2.89809E-05
4.26752E-05
5.66879E-05
7.2293E-05 0.000115605
9.87261E-05
2.86624E-05
5.70064E-05
8.63057E-05 0.000174204
0.000217834
0.000191083
0.000119108
5.73248E-05 0.000250955
0.000328025
0.000398089
0.000420701
0.000125796
0
tiempo [P] 0,5mg [P] 1mg [P]2mg [P] 5mg

Series1 Series2 Series3 Series4 Series5

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b) Grafique Vo vs [E]. ¿La dependencia de Vo con [E] es lineal para todo el rango de
[E]? ¿Con este experimento se puede averiguar Km y Vmax?

 La dependencia no es lineal crece espontáneamente.

 No se puede asegurar con los datos y graficar Km y Vmax, pero se podría
realizar una doble reciproca para determinarlo. Sin embargo, esto no es
posible dado que faltan dato, como la variación de las [S].

E Vo
0,5 1,40127E-05
1 2,86624E-05
2 5,73248E-05
5 0,000125796

0.00014
0.000125796

0.00012

0.0001
VELOCIDAD INICIAL

0.00008
5.73248E-05
0.00006

0.00004 2.86624E-05

1.40127E-05
0.00002

0
0 1 2 3 4 5 6
[ENZIMA]
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Actividad N° 2
Supongamos que la Glucosa puede convertirse en otra sustancia por la acción de cierta
enzima. La siguiente tabla muestra, para este caso hipotético, las diferentes velocidades o
diversas concentraciones de Glucosa.
Concentración Velocidad 1/Concentración 1/V V/[S]
Glucosa (M) (min-1)
1X10¯³ 150 100.000 6.67 x 10¯³ 15 x 105
2x10-5 256 50.000 3.91 x 10-3 12.8 x 106
2x10-5 600 10.000 1.67 x 10-3 6 x 106
2x10-4 770 5.000 1.29 x 10-3 3.85 x106
5x10-4 818 2.000 3.22 x 10-3 1.636 x 106

a) Graficar Vel vs. [S]

Vel vs [Glu]
900 818
770
800
700 600
600
Velocidad

500
400
256 Series1
300
150
200
100
0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006
Concentración

b) Estudiando esta curva uno puede determinar cuál sería la máxima velocidad:
(Marque lo que corresponda)
 Sólo aproximadamente.
 Precisamente.
c) Calcular las inversas de concentración y velocidad, y graficar 1 /V vs. 1/ [S].
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Actividad N°4
a) El primer propósito del grafico de Lineweaver-Burkes chequear cuán bien responde
la reacción a la ecuación, estudiando la linealidad. Esta correspondencia indica que
el sustrato forma un complejo con la enzima, que en el periodo de las observaciones
permanece:
 Relativamente a una concentración constante

 En un estado de equilibrio con respecto al sustrato libre y a la enzima libre.

b) El segundo propósito del grafico L-B, una vez que estamos satisfecho con la
linealidad, es evaluar Vmax y Km. La intersección de la recta en el eje y
𝟏 𝟏
corresponde al valor algebraico de .En este caso Vmax =𝒀
𝑽𝒎𝒂𝒙
1
c) Cuando [s] = 0, la velocidad es:
 Infinita
 Máxima
 Mínima

1
d) Si extrapolamos la recta hasta cortar el eje X, donde 𝑉 = 0,el valor de la
1 𝟏
intersección de la abscisa es igual a − 𝐾𝑚. En este caso, Km= − 𝑿
e) Analizando el mismo gráfico, ¿existe otro modo que nos permita calcular el valor de
Km? El valor de Km no se puede calcular de otra manera en la misma gráfica,
pero si se puede, atravez del despeje de otra ecuación incluya el valor de Km.
𝑉
f) Calcular con los datos anteriores [𝑆], y graficar. Determinar Vmax y Km.
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Lineweaver-Burk

v/[s] 1/V
15000000 0,00666667
12800000 0,00390625
6000000 0,00166667
3850000 0,0012987
1636000 0,00122249

Pendiente 3,81724E-10
Intersección -4,71253E-0,5

Vmax 21220,04617
Km 8,1002E-06

DOBLE RECÍPROCA
0.01

0.008

0.006

0.004
1/V

0.002

0
-10000000 -5000000 0 5000000 10000000 15000000 20000000 25000000

-0.002

-0.004
V/S