Universidad Nacional Mayor de San Marcos

(Universidad del Perú, Decana de América)

Escuela de Ingeniería Industrial

CROMATOGRAFÍA DE COMPUESTOS
ORGÁNICOS
Práctica N° 5
Curso: Laboratorio de Química Orgánica
Horario: 2:00 pm – 4:00 pm
Profesor: Q.F. Walter Rivas Altez
Fecha de Realización: 24 de abril del 2019
Fecha de Entrega del informe: 7 de abril del 2019
Integrantes:
 García Lechuga, Ricardo Alonso
 Jara Dextre, Flavio Jesús Santiago
 Leon Crespin, Jeferson Josue
 Perez Barrios, Jamilet Nicoln
 INDICE

Introducción…………………………………………………………….3

Marco Teórico…………………………………………………………..4

Competencias…………………………………………………………...7

Materiales……………………………………………………………….7

Parte Experimental y resultados………………………………………...9

Conclusiones…………………………………………………………….12

Cuestionario……………………………………………………………..12

Referencia Bibliográfica…………………………………………………14

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 INTRODUCCIÓN

La cromatografía es un método muy utilizado en todas las ramas de la ciencia y los métodos
más modernos y sofisticados que existen utilizada para separar sustancias puras de mezclas
complejas. Esta técnica depende del principio de adsorción selectiva (no confundir con
absorción), cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes, y así verificar especialmente
su pureza. Ningún otro método de separación es tan potente y de aplicación tan general como
la cromatografía.

En la presente práctica experimental, se tiene como objetivo realizar la cromatografía de la

muestra de la práctica de purificación, para luego hallar la relación de flujo que es
característico para cada compuesto.

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MARCO TEÓRICO

CROMATOGRAFÍA DE COMPUESTOS ORGÁNICOS

Es un método físico-químico que consiste en separar los componentes o sustancias integrantes de una
mezcla en movimiento por medio de reparto o adsorción sobre una superficie estacionaria o inmóvil.
Existe una sustancia que proporciona una superficie elevada y que interacciona físicamente con el
compuesto a analizar. Si las moléculas son adsorbidas por la superficie, el fenómeno se llama
cromatografía de adsorción, y si se disuelven en una delgada superficie líquida, cromatografía de
reparto.

TIPOS DE CROMATOGRAFÍA:

 Cromatografía de gases: En esta prueba generalmente se utiliza un gas inerte como el helio o
el nitrógeno. El gas ayuda a transportar las moléculas de la muestra y ello depende de la
fuerza de adsorción, que a su vez depende del tipo de molécula. Se utiliza un detector para
controlar la corriente de salida y, por lo tanto, se puede determinar la cantidad de ese
componente.
 Cromatografía en papel: Se procede a dejar caer una pequeña gota de la solución que contiene
la muestra a una tira de papel especial para esta táctica la cual se adsorbe. Es muy útil y fácil
ya que la muestra se puede poner en contacto con el papel, sin embargo, hay sustancias que
reaccionan al papel y no pueden someterse a esta técnica.
 Cromatografía en capa fina: Esta técnica se compone de un material absorbente de capa
delgada que se encuentra sobre una superficie generalmente una placa de vidrio. El
absorbente el cual puede ser un gel de sílice o también extracto de sulfato de calcio se unta
sobre la superficie del vidrio y se somete a altas temperaturas.
 Cromatografía líquida de alta performance (HPLC): Es uno de los métodos más eficaces,
pero más complejos ya que se requiere de un detector y de un cromatógrafo. Este método
identifica y cuantifica los componentes que se encuentran disueltos dentro de un solvente
líquido. Se puede utilizar gases como helio o nitrógeno. Básicamente se bombea una mezcla
de la muestra en un disolvente a alta presión a través de una columna que tiene material de
empaque especial cromatográfico. Con ello, la muestra es transportada por una corriente de
gas.

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PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRÁFICO

1. Fase móvil: Lo constituyen los solventes, que son sustancias fluidas de diferente polaridad,
ejemplo: metanol, cloroformo, etanol, etc. Los
solventes deben tener elevado grado de pureza.
2. Fase estacionaria: Lo constituyen las sustancias
adsorbentes que generalmente se depositan sobre
la placa de vidrio o columna de vidrio. Debe ser
insoluble en el disolvente que se va a utilizar para
la separación y no debe reaccionar con las
sustancias que se van a separar.
3. Cámara de saturación: es un recipiente con una
tapa que cierra herméticamente donde se realiza
Fig. 1 método de cromatografía
el cromatograma.
4. Reveladores: Si todos los compuestos son coloreados, bastará la inspección ocular para
distinguir las manchas, pero en la mayoría de los casos, los compuestos son incoloros y por
ello invisibles en el cromatograma, siendo necesario utilizar métodos físicos (Luz UV) o
químicos, como los vapores de Iodo, u otros reactivos especia les que permitan hacer visible.
5. Aplicaciones: son micro pipetas utilizadas en la aplicación o “sembrado” de las sustancias o
cromatografiar.
6. Muestras: Son las sustancias a cromatografiar y pueden ser: la sustancia patrón o estándar y
la sustancia problema o muestra problema.

RELACIÓN DE FLUJO (Rf): Es la relación que existe entre la distancia alcanzada por la muestra
problema (frente de soluto) y la distancia recorrida por el solvente (frente de solvente).

𝐹𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑅𝑓 =
𝐹𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

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 Frente de soluto: Es la distancia que alcanza o recorre 1 muestra problema en una
cromatografía.
 Frente de solvente: Es la distancia que alcanza o recorre la fase móvil en una cromatografía.

Fig. 2 cálculo del Rf

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COMPETENCIAS

El desarrollo de la práctica tiene como objetivos los siguientes:

 Lograr comprender en qué consiste el método de la cromatografía y cuál es el uso adecuado

de este en la experimentación.
 Examinar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
 Entender la función que cumple el solvente en la separación cromatográfica y lograr
interpretar la revelación que genera el mismo.
 Mediante una comparación por cromatografía, determinar el grado de pureza de una
sustancia (Ácido acetil salicílico) con una muestra cien por ciento pura de la misma.

MATERIALES

 Producto obtenido de la practica anterior (Ácido acetil salicílico)

 Ácido acetil salicílico (muestra pura)
 Lámina porta objeto (2 unidades)
 Tubo de ensayo
 Capilar
 Mechero
 Parrilla eléctrica
 Cámara de reveladora
 Beaker
 Silicagel

Fig. 3 Capilar Fig. 4 Beaker de vidrio

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 Fig. 6 En la imagen se muestra de izquierda a derecha lo
Fig. 5 Parrilla eléctrica de siguiente: sillico gel (sólido) – cámara reveladora – AAS
calentamiento (obtenido por extracción)

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PARTE EXPERIMENTAL Y RESULTADOS

Se procedió a reutilizar el Ácido Acetilsalicílico, el cual había sido conservado durante dos semanas
y se encontraba en una naturaleza pura, en conjunto con 2ml del solvente Diclorometano. Seguido a
esto, se procedió a preparar los capilares de diámetro pequeño, los cuales se debieron calentar en el
centro con un fósforo para que se puedan formar de esta manera dos capilares separados presentando
una punta fina independiente.

Fig. 7 Capilar siendo calentado con un fósforo para poder formar dos con punta fina

Seguido a esto, se procedió a preparar las placas cromatográficas, utilizándose el material

proporcionado que fue el gel de sílice o más conocido como Silica gel, el cual se encontraba en el
interior de un frasco. Se procedió a verter el Silica gel, el cual presentaba una viscosidad notoria
debido a que había sido preparado con anticipación, encima de una laminilla de laboratorio hasta que
quedara completamente cubierta de dicho material, tratando que la cantidad fuera homogénea en toda
la laminilla, lo que produciría un mejor resultado experimental.

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 Fig. 8 Laminilla de laboratorio cubierta completamente por Silica gel

Al finalizar el llenado completo del Silica gel, se procedió a calentar la laminilla de laboratorio en la
cocinilla, a una altura de 10 centímetros y aproximadamente por unos 7 minutos, debido a que en ese
tiempo el Silica gel se volvería completamente sólido y secaría. Pasado el tiempo correspondiente, se
obtuvo la placa cromatográfica que sería de suma importancia para entender el fenómeno de la
cromatografía.

Fig. 9 Placa cromatográfica obtenida luego del calentamiento en la cocinilla

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Al finalizar con la preparación de la placa cromatográfica, se procede a utilizar el Ácido
Acetilsalicílico experimental con el Ácido Acetilsalicílico puro entregado como material de clase.
Teniendo ambas soluciones, se procede a sacar distintas muestras con las puntas de los capilares
obtenidos mediante el calentamiento con fósforo, siendo esta cantidad de 10 por cada solución. Estas
muestras fueron colocadas en la placa cromatográfica, punzando cada una en el mismo lugar, para
que se pueda formar una mayor concentración de ambas soluciones. Se procedió a colocarlas a 1 cm
de la base para que el experimento pueda observarse de mejor manera, así como también una
separación entre la concentración de la solución pura y la solución experimental. Terminado el
llenado de cada solución en la placa, se procede a colocar verticalmente esta dentro de una cuba
cromatográfica de vidrio que contenía un solvente, el cual comenzó a subir por capilaridad (etanol +
diclorometano). Seguido a esto, se procede a revelar el contenido de la placa cromatográfica, en la
cual los puntos realizados por los capilares, se desplazaron desde el lugar original. La nueva muestra
por teoría debería presentar el recorrido de la solución pura con el recorrido de la solución
experimental de una manera igual, ya que comprobaría que la muestra es pura, pero en la parte
experimental, se observó que los recorridos distaban de ser iguales, en parte se debió a que el yodo
que sirvió como revelador se encontraba oxidado y que la solución experimental no era pura en su
totalidad.

Fig. 10 Placa cromatográfica dentro de la cuba cromatográfica, mostrando el distinto recorrido de las
concentraciones de ambas soluciones.

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 CONCLUSIONES
 La técnica cromatográfica en capa fina es un método relativamente fácil y de gran
utilidad ya que ayuda a definir según la distancia recorrida por el compuesto obtenido y
uno puro si el compuesto tiene un alto grado de pureza o si aún cuenta con impurezas.
 La medición de las distancias recorridas en la placa cromatográfica puede resultar
dificultosa y complicada ya que las distancias son muy pequeñas y su cuantificación no
puede ser muy exacta.
 La cromatografía es posible debido a que se tiene acceso a una fase estacionaria (muestra
de AAS) que es de alta polaridad y otra móvil (solvente, en este caso etanol más
diclorometano) de baja polaridad

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es una serie eluotrópica?

-Una serie eluotrópica es una lista donde se hallan varios compuestos ordenados según su poder de
elución( medida de la “energía de absorción” del disolvente tomando como referencia el sistema
pentano-sílice puro al que se asigna el valor “0” ) para un adsorbente dado. Tales series son útiles
para determinar los disolventes adecuados en la cromatografía de una mezcla de compuestos
químicos. Normalmente tales series comienzan con disolventes no-polares, como el n-hexano, y
finalizan en disolventes polares como metanol o agua.

2. Mencione las aplicaciones de la HPLC y la cromatografía de gases (GC).

-La cromatografía líquida de alta performance puede ser aplicada para la creación de fármacos
(antibióticos, analgésicos), productos de alimentación (edulcorantes, antioxidantes), en la industria
química(aromatizantes), contaminantes (pesticidas, herbicidas), y en la medicina clínica (ácidos
biliares, metabolismos de drogas).

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La cromatografía de gases se utiliza para confirmar
de la presencia de un compuesto en una muestra
determinada. En cuanto a sus aplicaciones esta
técnica puede ser utilizada para el análisis de
herbicidas, producción de fragancias y aromas; en la
industria es útil para la formación de alcoholes, ácidos
orgánicos, drogas, fármaco y muchos de los
derivados del petróleo.

3.Diga que es la electroforesis y cuál es su fundamento.

-La electroforesis es una técnica que se utiliza para separar moléculas basándose en la movilidad de
estas moléculas en un campo eléctrico. El proceso se puede realizar sobre una superficie hidratada
(papel) por medio de una matriz porosa (gel) o disolución. Su fundamento se basa en que la mayoría
de las biomoléculas poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio en el que se
encuentran; como resultado, pueden desplazarse hacia el polo de carga opuesta de la molécula cuando
son expuestas a un campo eléctrico. Un ejemplo claro son los ácidos nucleicos que solo poseen carga
negativa, debido a su esqueleto de fosfatos. Por lo tanto, en una electroforesis, los ácidos nucleicos
migrarán hacia el polo positivo; es decir, el ánodo.

4. Diga Usted que métodos cromatográficos se podrían aplicar en su carrera profesional. Explique
cada uno.

En la carrera profesional del Ingeniero industrial se pueden utilizar el método de cromatografía en

capa fina para medir el grado de pureza en los compuestos a utilizar en los procesos productivos y así
evitar utilizar compuestos contaminados por otras sustancias. Del mismo modo la cromatografía en
gases puede resultar muy útil para un ingeniero que trabaja en el rubro de la industria alimentaria para
estudiar la composición de aromas y sabores en los alimentos; en general, la cromatografía de gases
resulta de gran utilidad para el análisis industrial ya que este método es el ideal para la separación de
gases, sólidos y líquidos que pueden pasar fácilmente a vapor.
Finalmente, la cromatografía líquida de alta resolución es útil para el ingeniero cuando se desea
preparar disoluciones patrón; ya que, muchas veces no se conoce las concentraciones de otras
disoluciones y al tener un patrón resulta fácil hallarlo.

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

(1) Yerga, M. (2010). Cromatografía de capa fina. [Internet] Es.slideshare.net. [citado 5 mayo 2019].
Disponible en: https://es.slideshare.net/yerga/cromatografia-de-capa-fina

(2) López de la Mora, D. and Sandoval Rodríguez, A. (n.d.). Electroforesis | Biología molecular.
Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud | Access Medicina | McGraw-Hill Medical.
[Internet] Accessmedicina.mhmedical.com. [citado 5 mayo 2019]. Disponible en:
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=1473&sectionid=102743771

(3) Rodríguez F. Técnicas de Cromatografía - Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico [Internet].

Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico. 2019 [citado 5 mayo 2019]. Disponible en:
https://www.franrzmn.com/tecnicas-de-cromatografia/#Tecnicas_de_Cromatografia

(4) Cromatografía de Compuestos Orgánicos [Internet]. Scribd. 2019 [citado 5 mayo 2019].
Disponible en: https://es.scribd.com/document/220821285/Cromatografia-de-Compuestos-
Organicos

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