CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO

1. Generalidades

2. Fuentes metabólicas del acetil-CoA

3. Reacciones y Enzimas del ciclo de Krebs

4. Regulación del ciclo de Krebs

5. Naturaleza anfibólica del ciclo de Krebs

Angélica María García T.

1. Generalidades Ciclo del á. cítrico,
Ciclo del á.
tricarboxílicos
Ciclo de Krebs
“eje, centro de
actividad del
Vía común de DEGRADACIÓN
metabolismo”
OXIDATIVA (PROCARIOTAS,
EUCARIOTAS)
Principal responsable de la oxidación
de CARBOHIDRATOS, ÁCIDOS
GRASOS Y AMINOÁCIDOS. También
es responsable de la generación de
muchos precursores biosintéticos
Anfibólico: opera tanto en el
ANABOLISMO como en el
CATABOLISMO
• En general, se oxida el
grupo acetilo del acetil-
CoA formando 2CO2 y
conservando además la
energía libre producida
(3NADHs, 1FADH2 y
1GTP) para la formación
de ATP

• El ciclo consta de 8
reacciones enzimáticas
 2. Fuentes metabólicas del acetil-CoA

✓ Los grupos acetilo entran al C.

Krebs como acetil-CoA, producto
común de la degradación de CH,
á.grasos y a.a.
✓ -CoA(coenzima A o CoASH) es un
grupo β-mercaptoetilamina
unido por medio de un enlace
amida a la vitamina ácido
pantotenico (B5), la cual está
unida a la 3-fosfoadenosina vía
puente pirofosfato. El grupo
acetilo de acetil-CoA esta unido
por un enlace tioester a la porción
sulfhidrilo del grupo β-
mercaptoetilamina .
✓ CoA funciona como transportador
de grupos acetilo y acilo (A:
CoA: acetilación)

✓ Acetil-CoA es un compuesto
altamente energético (ΔG´°:
-31,5KJ/mol para la hidrólisis
del grupo tioester)

✓ Su precursor desde la
glicólisis es el piruvato,
molécula que sufrirá una
descarboxilación oxidativa.
 La conexión entre la glucólisis
(anaerobio) con el ciclo de
Krebs (aerobio) ocurre gracias a
la descarboxilación oxidativa
del piruvato a Acetil-CoA (paso
previo al inicio del ciclo de
Krebs).

✓ Esta reacción es un punto

crítico del metabolismo,
particularmente en el hígado,
puesto que disminuye la
posibilidad de que el piruvato
se reconvierta en glucosa o en
lactato.
Esta transformación (piruvato a acetil-coA), es catalizada por un
complejo multienzimático llamado Piruvato Deshidrogenasa.
 Complejo
multienzimático

• Grupo de enzimas asociadas no

covalentemente que catalizan
2 o más pasos secuenciales en
una vía metabólica

• Son un paso en la evolución de

la eficiencia catalítica. Mayor
coordinación, aumenta el
número de choques efectivos
para la formación del complejo
E-S, etc.
 La piruvato deshidrogenasa
es un sistema multienzimático
organizado en 3 unidades
enzimáticas funcionales (c/u
requiere de cofactores
específicos)

1. Piruvato deshidrogenasa {Tiamina Pirofosfato (B1)}

2. Dihidrolipoil Transacetilasa {Lipoil-CoA}
3. Dihidrolipoil Deshidrogenasa {FAD y NAD+}
 Complejo Multienzimático

Consulta: Cuál es la relación química entre

la toxicidad de compuestos del arsenico y la
piruvato deshidrogenasa y/o con la α-
cetoglutarato deshidrogenasa ?, cuál es su
efecto en el ciclo de krebs? (incluir
reacciones)
(?)
 PIRUVATO DESHIDROGENASA
localización

• En las células eucariotas, ésta enzima se encuentra en la

mitocondria. Por lo tanto, el piruvato (glucolisis) debe ser
transportado a través de la membrana mitocondrial
utilizando proteínas transportadoras específicas.

• En procariotas amitocondriales, esta descarboxilación se

realiza en el citosol, o no se realiza.
REGULACIÓN DE LA PIRUVATO DESHIDROGENASA

1. I. COMPETITIVA:

2. FOSFORILACIÓN Y
DESFOSFORILACION DE LA
ENZIMA:

3. ACT. ENDOCRINA:
1. I. COMPETITIVA:

Tanto la acetil-CoA como el NADH son inhibidores competitivos

(además presentan inhibición por producto o retroalimentación)
2. FOSFORILACIÓN Y DESFOSFORILACION DE LA ENZIMA:
Existen dos formas interconvertibles de la enzima: una fosforilada
(inactiva) y la otra desfosforilada, la (activa).

3. ACT. ENDOCRINA:
Tanto la INSULINA (en tejido adiposo), como la ADRENALINA (en
tejido cardiaco), incrementan la forma activa (desfosforilada).
• En general, se oxida el grupo acetilo del acetil-CoA formando
2CO2 y conservando además la energía libre producida (3NADHs,
1FADH2 y 1GTP) para la formación de ATP
• El ciclo consta de 8 reacciones enzimáticas, todas
ESTEREOESPECÍFICAS
 1. CITRATO SINTETASA

Cataliza la condensación de
Acetil-CoA y oxaloacetato
para formar citrato. (ΔG´°:
-31,5KJ/mol )

Oxaloacetato + Acetil-CoA CoASH + Citrato

 2. ACONITASA

Convierte el citrato a su
isómero que es más
fácilmente oxidable (conv. de
un alcohol 3ario a un alcohol
2ario)

El intermediario unido a la
enzima, cis-aconitato es
producido por la
deshidratación del citrato. La
posterior hidratación genera
el isomero oxidable.
 3. ISOCITRATO DESHIDROGENASA

Primera producción tanto

de NADH como de CO2

• Enzima dependiente de NAD+.Oxida el isocitrato a un cetoácido

intermediario (oxalosuccinato) con la reducción acoplada de NAD+.
El oxalosuccinato es descarboxilado formando el α-cetoglutarato.
• En el primer paso el cofactor es NAD+; mientras que en el 2do Mg2+ o
Mn2+.
 4. α-CETOGLUTARATO DESHIDROGENASA
Descarboxilación del
α-cetoglutarato a
succinil-CoA.
La reacción
involucra la
reducción de un 2do
NAD+ y formación de
una 2da molécula de
CO2.
Nuevamente, participa un
complejo multienzimático
(α-cetoglutarato
deshidrogenasa,
dihidrolipoil
transuccinilasa y
dihidrolipoil
deshidrogenasa). Tambien
se genera un tioester
altamente energético
5. SUCCINIL-CoA SINTETASA
(Succinato tioquinasa)
• Convierte succinil-CoA
a succinato. La E libre
del enlace tioester es
conservada para la
formación de GTP
(mamíferos) o de ATP
(plantas y bacterias).

• ATP y GTP son

nucleótidos
interconvertibles

𝐺𝑇𝑃 + 𝐴𝐷𝑃 ⇌ 𝐺𝐷𝑃 + 𝐴𝑇𝑃

Nucleósido
difosfato quinasa
 2CO2 (R. 3 y 4)
Hasta este
punto se han 2NADH (R. 3 y 4)
formado 1GTP (en equilibrio con
ATP) (R. 5)

Faltan: 1NADH y 1FADH2

Para completar el ciclo, el

succinato debe ser convertido
nuevamente a oxaloacetato
 6. SUCCINATO DESHIDROGENASA

Cataliza la oxidación del

enlace central sencillo
formando fumarato. A su vez,
FAD es reducido a FADH2.

FAD es utilizado para la

oxidación de alcanos;
mientras que NAD+ para
alcoholes
 7. FUMARASA

Cataliza la
hidratación del doble
enlace del fumarato
para formar L-malato.
(Aún existen datos
contradictorios frente al
mecanismo de reacción).
8. MALATO DESHIDROGENASA

Se forma el oxaloacetato por

medio de la oxidación del
grupo hidroxilo del malato;
NAD+ es reducido.

ΔG´°: 29,7KJ/mol, lo cual conlleva a

una baja concentración de oxaloacetato.
 R. Endergónica R. Exergónica
29,7KJ/mol -31,5KJ/mol
Sin embargo, la reacción de la citrato sintetasa (R. 1) es muy exergónica
(ΔG´°:-31,5KJ/mol).
Por lo tanto, la formacion de citrato es exergónica incluso a pequeñas
concentraciones de oxaloacetato, conllevando al inicio nuevamente
del ciclo de Krebs
 En general:
3NAD+ + FAD + GDP + Pi + Acetil-CoA
3NADH + FADH2 + GTP + CoA + 2CO2

• NADH y FADH2 son productos vitales en el ciclo. Su

reoxidación por parte del oxígeno a través de la posterior
cadena transportadora de electrones y fosforilación oxidativa,
completa la degradación metabólica que conduce a la síntesis
de ATP.
• Se forma también un compuesto altamente energético (GTP o
ATP).

• Vía fosforilación oxidativa, cada NADH favorece la producción

de 3 ATP (3NADH, 9ATP); por cada FADH2 se producen 2ATP.
• Para c. aerobias, NADH es reoxidado en mitocondria por la
cadena transportadora de electrones (regeneración de NAD+).
 4. REGULACIÓN DEL CICLO DEL Á. CÍTRICO

Isocitrato
Citrato sintetasa (R.1) deshidrogenasa (R.3)
Citrato α-Cetoglutarato

α-Cetoglutarato
deshidrogenasa (R.4)
Succinil-CoA

Determinantes de acuerdo con sus valores de

ΔG´° obtenidos a partir de la concentración de
reactantes y productos
El C. Krebs también es AMPLIAMENTE
REGULADO por:
✓Disponibilidad del sustrato
✓Inhibición por producto
✓Inhibición por la presencia de otros
intermediarios cíclicos

❖REGULADORES ALOSTÉRICOS

El amplio sistema de todas estas reacciones

entrelazadas, mantienen la REGULACIÓN
COORDINADA DEL C.KREBS.
REGULADORES ALOSTÉRICOS DEL C.KREBS

Piruvato deshidrogenasa
Citrato sintetasa
Isocitrato deshidrogenasa
α-cetoglutarato-
deshidrogenasa

NADH
Acetil-CoA
ATP
Succinil-CoA

Ca2+
ADP

Puntos de Inhibición: octágonos rojos

Intermediarios-inhibidores: flechas rojas
Activadores: círculos verdes
Ca2+
❖Favorece la degradación del glucógeno

❖Desencadena la contracción muscular

❖Mediador de señales hormonales

(mensajero secundario)

❖Activa la piruvato deshidrogenasa para

producir acetil-CoA

❖Activa la isocitrato deshidrogenasa y

la α-cetoglutarato deshidrogenasa
Papel del ciclo en el Papel del ciclo en el
músculo cardiaco y Hígado:
esquelético:

responsable de la síntesis
proveer energía bajo de: glucosa, ácidos grasos,
condiciones aerobias. colesterol, aminoácidos y
porfirinas.
 5. Naturaleza anfibólica del Ciclo de Krebs

Vías que utilizan el C. Krebs, Vías

Anabólicas

Reacciones degradativas que van

a generar intermediarios del C.
Krebs
A. USO EN VÍAS ANABÓLICAS (vías que utilizan el c.krebs):
FLECHAS ROJAS
Gluconeogénesis (citosol),
utiliza el malato que ha sido
transportado desde la
membrana mitocondrial.

Biosíntesis de lípidos,
á.grasos y colesterol (citosol).
Requieren de acetil-CoA.

El acetil-CoA se genera en la
mitocondria y no se transporta. Por lo
tanto, el acetil-CoA citosólico es
generado por la degradación del
citrato, el cual si puede atravesar la
memb. mitocondrial
Biosíntesis de a.a: utiliza
el α-cetoglutarato mediante
una aminación reductiva
catalizada por la glutamato
deshidrogenasa, para la
generación de glutamato:
α-cetoglutarato + NAD(P)H + NH4+ ⇆
𝑔𝑙𝑢𝑡𝑎𝑚𝑎𝑡𝑜 + NAD(P)+ + H2O

A su vez, el α-cetoglutarato
y el oxaloacetato son
utilizados en la síntesis de
glutamato y aspartato por
transaminación:
α-cetoglutarato + alanina ⇆
𝑔𝑙𝑢𝑡𝑎𝑚𝑎𝑡𝑜 + piruvato

𝑜𝑥𝑎𝑙𝑜𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑡𝑜 + alanina ⇆
𝑎𝑠𝑝𝑎𝑟𝑡𝑎𝑡𝑜 + piruvato
Biosíntesis de
porfirinas a partir de
succinil-CoA.

?
Cuál es la función
biológica de las
porfirinas en los
organismos vivos?
 B. Reacciones degradativas que van a generar
intermediarios del C.Krebs (flechas verdes)
La piruvato carboxilasa, que
produce oxaloacetato
(Gluconeogénesis)
𝑝𝑖𝑟𝑢𝑣𝑎𝑡𝑜 + 𝐶𝑂2 ⇆
𝑜𝑥𝑎𝑙𝑜𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑡𝑜 + 𝐴𝐷𝑃 + 𝑃𝑖

Además, ésta enzima detecta

tanto una disminución de
oxaloacetato como un un exceso
de acetil-CoA. Es así como la
enzima (piruvato carboxilasa) se
activa aumentando la velocidad
del ciclo
• Oxidación de á. grasos con #
Impar de átomos de C en su
cadena, así como ile, met y val
conducen a la producción de
succinil-CoA

• Degradación de a.a conduce

a la formación de α-
cetoglutarato y
oxaloacetato.

• Son reacciones reversibles

y que dependen de la
demanda metabólica,
sirviendo para la
eliminación o restitución
de los intermediarios del
ciclo.
• El ciclo de Krebs se encuentra en el centro del
metabolismo.

• Sus productos reducidos NADH y FADH2, son

oxidados nuevamente por la cadena transportadora
de electrones durante la fosforilación oxidativa. La E.
libre producida es acoplada a la biosíntesis de ATP.

• Los intermediarios del ciclo son utilizados en muchos

procesos biosintéticos vitales (naturaleza anfibólica)
 BIBLIOGRAFIA

• Bohinski, R. 1998. Bioquímica. Addison

Wesley Longman. 5ª ed. México.
• Nelson, D & Cox, M. 2005. Lehninger
Principles of Biochemistry. Freeman. 4ª ed.
EE.UU.
• Voet, D & Voet, J. 1995. Biochemistry.
Wiley. 2ª ed. Canada.
• Stryer, L., et al. 2013. Bioquímica. Reverté.
7a ed. España.