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LABORATORIO II DE AGROINDUSTRIA ANIMAL

Prof(as). Jacovelin Morales y Patricia Rojas UNELLEZ

PRÁCTICA 1: ANÁLISIS DE PLATAFORMA

 OBJETIVOS.

 Analizar la importancia del control de la calidad de la leche cruda como


materia prima de la Industria láctea.

 Reconocer las pruebas que determinan la aceptación o rechazo de la


leche cruda en la industria láctea.

 Aplicar las pruebas utilizadas para determinar indirectamente la calidad


sanitaria de la leche cruda.

 Interpretar los resultados del análisis aplicado en la recepción de leche


cruda a nivel de planta.

 FUNDAMENTOS TEÓRICOS.

LECHE CRUDA.

Según la Norma COVENIN 903-93 es “el producto integro normal y fresco


obtenido del ordeño higiénico e ininterrumpido de vacas sanas”.
La leche cruda deberá estar limpia, libre de calostro y materias o sustancias
ajenas a su naturaleza tales como conservadores y colorantes no deberán contener
contaminantes en cantidades superiores a las permitidas por las autoridades
sanitarias.

Auxiliar: Lic. Frank Contreras

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En cuanto a las características sensoriales debe presentar olor, sabor, y aspectos

normales del producto.

 REQUISITOS FÍSICO QUÍMICOS.

Acidez Titulable:

La acidez titulable incluye la acidez natural e inicial de la leche y la acidez que


se ha ido desarrollando desde el momento del ordeño hasta el momento del
análisis. La Norma COVENIN 903-03 reporta los valores normales entre 15 y 19
mL de NaOH 0.1 N /100 mL de leche. La acidez desarrollada en exceso es el
resultado de la conversión de la lactosa en acido láctico como resultado de la
fermentación:
C12H22O11 + H2O + bactérias formadoras de acido láctico ........4C 3H6O3

lactosa água acido láctico

Las bacterias que mayormente actúan en la formación del acido láctico son de
género Streptococcuss, Lactobacillus y Escherichia – Aerobacter. Otro factor que
debe tomarse en cuenta cuando la acidez se detecta en exceso es que se está en
presencia de la leche calostral o mastitica, las cuales presentan un pH inferior a 6.6
y pueden arrojar valores de acidez de hasta 0.5 % (expresado en porcentajes de
acido láctico).

DENSIDAD O PRUEBA LACTOMÉTRICA

La densidad relativa de la leche cruda depende de las proporciones de sus


componentes, ya que cada uno de ellos posee una densidad diferente. Cualquier
factor que afecta la composición de la leche afectara por lo tanto su densidad
relativa.

Auxiliar: Lic. Frank Contreras

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La temperatura tiene influencia directa sobre la densidad relativa y por lo tanto


debe tomarse en cuenta cuando se efectúa el análisis, pues de no realizarse a 15 ºC
como indican las normas deberá llevarse a cabo una corrección de densidad.

La determinación de densidad relativa conjuntamente con la determinación del


punto crioscopico de la leche cruda permite detectar si el producto se le
adicionado agua, o se le ha removido crema. La adición de agua disminuye la
densidad relativa y la sustracción de crema aumenta la misma la Norma COVENIN
367-82 describe el procedimiento para determinar la densidad relativa de la leche
cruda.
La densidad relativa de la leche cruda debe expresarse en g/mL a 15 + 1 ºC y
debe estar entre 1.028 y 1.033 g / mL.

DETERMINACIÓN DE GRASA

La grasa de la leche es una compleja combinación de glicerol y ácidos grasos en


proporción 1:3 (Triglicéridos). El contenido de grasa de la leche es bastante variable
y depende de la raza, clima, época de verano, invierno y tiempo comprendido
después del parto. La grasa de la leche está considerada como un factor muy
importante no solo desde el punto de vista nutricional (Aporta aprox. 9 kilocalorías /
gramos) si no desde el punto de vista económicos, ya que en Venezuela resulta ser
un índice de calidad comercial para cuando se trata de pago de leche cruda entera.
El valor mínimo para este parámetro contemplado en la Norma Covenin 903-93 es
3,2%.

DETERMINACIÓN DE CLORUROS

La determinación de cloruro es importante ya que su presencia en la leche es más o


menos constante y su variación puede indicar adición de otras sustancias. Los
valores normales están entre 0.07 y 0.11% ( p/v).

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Método volumétrico
Consiste en determinar el contenido del cloruro mediante la reacción producida por
la adición en exceso de nitrato de plata. El nitrato de plata se combina con el
cloruro presente en la muestra produciendo un precipitado blanco de cloruro de
plata que en presencia del cromato de potasio tiende a un color naranja.

DETERMINACIÓN DE pH.

El pH es una información precisa del estado de frescura de la leche. Una leche


fresca normal es neutra o ligeramente acida.
Si no han actuado las bacterias lácticas una parte de la lactosa de la leche se
degrada a acido láctico, lo que hace que aumente su concentración de iones
hidronio (H3O+) por lo tanto el pH disminuye.

pH=Log 1 / [H3O+]

DETERMINACIÓN DE LA ESTABILIDAD PROTEICA.

Este método se basa en efectuar una reacción entre una cantidad de alcohol y la
misma cantidad de leche, reacción que produce una coagulación o precipitación de
la misma si es que la leche es acida. Este fenómeno se debe al hecho de que el
alcohol afecta a la leche deshidratando y desnaturalizando las proteínas. Si no
ocurre precipitación de la leche, se dice que esta presenta estabilidad proteica.

FERMENTACIÓN LÁCTICA.

La lactosa es el único azúcar fermentable presente en cantidades importante de la


leche este proceso lo llevan a cabo microorganismo adaptados a metabolizarlos en
un proceso que tienen el acido láctico como producto final.
Las bacterias lácticas (lactobacilos y estreptococos) son especialmente para producir
ácidos lácteos a partir de la lactosa. Se han aislado y cultivado a partir de fuentes
naturales diferentes microorganismos lácteos, que son esencialmente de dos tipos:
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Microorganismo que produce una fermentación homogénea (lactobacilos y


estreptococos): Convierten el 90% de la lactosa en acido láctico.

Microorganismo que produce una fermentación heterogénea (sobre todo


leuconostoc): Convierten el 50% de la lactosa en acido láctico y el resto en producto
diversos como dióxido de carbono y etanol.

 REQUISITOS MICROBIOLÓGICOS.

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE REDUCCIÓN DEL AZUL DE METILENO (TRAM).

El método consiste en determinar el tiempo que tarda una mezcla de leche – azul
de metileno en ser colorada de azul a blanco. Esto se basa a la capacidad que
tienen algunos microorganismo de utilizar el oxigeno disuelto en la mezcla,
provocando un descenso del potencial de óxido reducción y en consecuencia la
decoloración del azul de metileno. De acuerdo con la norma 903 las leches se
clasifican en:

Clase I: Leche fría con más de 4 horas de TRAM


Clase II: Leche fría con de 2 a 4 horas de TRAM
Clase III: Leche caliente con 30 min. a 2 horas de TRAM

ACTIVIDAD DE PRE- LABORATORIO.

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1.- Lea atentamente la teoría que sustenta la realización de cada uno de los análisis
de plataforma y la metodología práctica para la realización de los mismos (para ello
se sugiere la revisión de las normas COVENIN correspondientes).

2.- Previo acuerdo con el técnico del laboratorio verifique cómo se preparan los
reactivos que se emplearán en la práctica y la función química que cumple cada
uno de ellos en el análisis en donde se emplea (Anote y guarde para anexar a la
entrega posterior del reporte final).

3.- Investigue el peso miliequivalente del ácido láctico.

4.- Realice y aprenda los flujogramas para la realización de cada análisis.

ACTIVIDAD PRÁCTICA.

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Materia prima e insumos:

Un litro de leche por grupo.

REQUISITOS FÍSICO- QUÍMICOS

DENSIDAD O PRUEBA LACTOMÉTRICA (PESO ESPECÍFICO) COVENIN 367-82.

Materiales y Equipos:

 Lactómetro de Quevenne

Termómetro

 Cilindro graduado (250 mL o 500 mL)

Procedimiento:

1. Enfriar la muestra asignada a una temperatura por debajo de 15 °C o en


su defecto hacer al final la corrección de la lectura tomada según la
temperatura de la muestra y transferirla a un cilindro graduado de 250
mL, evitando la formación de burbujas.

2. Introducir el lactómetro en la muestra dando varios movimientos de


rotación para asegurar que no se adhiera a la superficie de la probeta,
déjelo flotar libremente por 1 minuto, teniendo cuidado de que no se
adhiera a las paredes del recipiente y de que no permanezcan burbujas
en la superficie del líquido. Normalmente el lactodensímetro está provisto
de termómetro, de no ser así, introducir un termómetro en la leche
para medir la temperatura y realizar las correcciones si es necesario.

3. Tomar la lectura lactométrica observando la división de la escala más alta


que alcanza el menisco de la leche.

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4. En caso de que la lectura se tome a una temperatura diferente a la de


graduación del lactómetro deben hacerse las correcciones
correspondientes empleando tablas especiales (AOAC 1975), o utilizando
el factor de conversión de ± 0,2 °Q, por cada grado que la temperatura
de medición difiera de la temperatura de calibración del lactómetro.

5. Convertir la lectura lactométrica a peso específico y reportar los


resultados obtenidos.

ACIDEZ TITULABLE. COVENIN 658-97.

Materiales y Equipos:

 Erlenmeyers de 125 mL.


 Pipetas de 10 mL.
 Buretas Graduadas de 50 mL.

Reactivos:

 Hidróxido de Sodio (NaOH) 0,1 N

 Solución alcohólica de fenolftaleína al 1%

 Agua libre de CO2 (destilada y hervida)

Procedimiento:

1 COVENIN especifica 10 mL de la muestra preparada a 20°C en fiola de 125 mL.

2. Adicionar 3 a 5 gotas de la solución indicadora fenolftaleína.

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3. Titular con la solución de NaOH 0,1 N, colocada en una bureta, hasta la


aparición de un color rosado persistente por 30 seg (pH: 8,1-8,2).

4. Expresar la acidez de la muestra en términos de mL NaOH 0,1 N / 100 mL, en


porcentaje de ácido láctico y en grados Dornic.

mL NaOH 0,1 N/100 = % ácido láctico/0,009 = °D x 1,1

% de acidez = (Vol. NaOH gastado x N x P. meq. Ácido) x 100


Vol. Muestra.

DETERMINACIÓN DE pH.

Materiales y Equipos:

 Potenciómetro
 Beacker de 250 mL.
 Plancha con agitación magnética.

Reactivos:

 Soluciones buffer para calibración de pH 4 y 7.

Procedimiento:

1. Preparar el potenciómetro de acuerdo con las instrucciones del aparato


haciendo la calibración con la solución buffer de pH conocido (4 y 7).

2. Medir el pH y anotar los resultados

DETERMINACIÓN DE LA ESTABILIDAD PROTEICA. COVENIN 903-93

Materiales y Equipos:

 Tubos de ensayos.
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 Pipetas estériles.

Reactivos:

 Alcohol etílico de 68% p/p ó 72% v/v.

Procedimiento:

1. En un tubo de ensayo colocar 5 mL de la muestra homogénea y 5 mL de etanol


de 68% p/p ó 72% v/v (Según norma COVENIN puede emplearse 2 mL de
muestra y 2 mL de alcohol). Tapar el tubo.

2. Mezclar suavemente los líquidos invirtiendo el tubo 2 ó 3 veces, sin agitación.


Temperatura de trabajo 20ºC aproximadamente.

3. Observar a contraluz e inclinando el tubo en varias direcciones si ha


ocurrido floculación o coagulación de la mezcla. Anotar las observaciones.

4. Realizar el experimento por duplicado.

5. Expresión de resultados:

Positivo: Floculación neta.

Negativo: Ausencia de floculación.

REDUCCIÓN DE AZUL DE METILENO. COVENIN 939-76

Materiales y Equipos:

 Baño María termorregulador con tapa

 Medidor de acero o pipetas de 10 mL (estériles)

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 Pipeta de 1 mL (estériles)

 Tubos de ensayo con tapones de goma (estériles) de 10 mL.

 Gradillas, termómetro.

Reactivos:

 Solución de azul de metileno.

Procedimiento:

1. Identifique los tubos a utilizar.


2. Coloque los tubos de ensayo estériles con sus tapones en la gradilla y adicionar
a cada uno 1 mL de la solución de azul de metileno.
3. Con pipeta o medidor estéril, colocar 10 mL de cada muestra a analizar en cada
uno de los tubos sin mezclar.
4. Invertir los tubos suavemente unas tres veces.
5. Una vez preparados todos los tubos, llevarlos al baño maría regulado a 36 °C
junto con un tubo patrón (leche sin indicador para contrastar el color de las
muestras y colocar el termómetro). Cuando la temperatura de la muestra
alcance 36° ± 1 °C, mezclar el contenido de los tubos por inversión (3 veces)
para obtener perfecta distribución del colorante y de la leche; tapar el baño
María para mantener los tubos al abrigo de la luz.
6. Comenzar a contar el tiempo de reducción (decoloración) en el momento en
que se invierten los tubos y observar su color frecuentemente durante la
primera media hora, sin agitarlos. Una muestra se considera reducida cuando
presenta 4/5 partes decoloradas.

Si una muestra se decolora durante un periodo de incubación de 30 minutos,


registrar el resultado "tiempo de reducción 30 minutos". Seguidamente puede
observarse el color de los tubos en intervalos de 1 hora, pero se registran los

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resultados en horas enteras; así por ejemplo: si a las 2 ½ horas se observa


decoloración, el resultado se registra "tiempo de reducción en 2 horas".

PRUEBA DE LACTOFERMENTACIÓN

Materiales y Equipos:

 Tubos de ensayo estéril.

Pipeta graduada de 10 mL.

Procedimiento:

1. Colocar en tubos de ensayo rotulados 10 mL de cada muestra.

2. Tapar los tubos y llevarlos a una estufa de 36° - 37ºC durante 24 horas.

3. Pasado el tiempo de incubación observar las características de la muestra


y anotar las observaciones. Clasificar las muestras de acuerdo con los
tipos señalados (ver anexo 2).

DETERMINACIÓN DE CLORUROS.

Equipo de Ensayo:

 Bureta con divisiones de 0,1 mL.

 Pipeta volumétrica.

 Agitador.

 Matraz de 100 mL.

 Pipeta de Mohr 10 mL (graduada 0,1mL ).

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Reactivos:

 Nitrato de plata 0,1N.

 Solución al 10% de cromato de potasio (Indicador).

 Agua destilada.

Procedimiento:

1. Medir 10 mL de leche con la pipeta y agregar en un matraz.


2. Añadir 2 a 3 gotas del indicador (cromato de potasio).
3. Titular con Nitrato de Plata 0,1 N hasta la aparición de un color
anaranjado pálido.

Expresión de resultados:

Reporte el cálculo de cloruros según la siguiente fórmula:

% de Cloruros= mL de Nitrato de Plata x N de nitrato de plata x 3, 55


Peso de la muestra.

DETERMINACIÓN DE GRASA: (Método Gerber COVENIN 1053-82)

Equipo de Ensayo:

 Butirómetro de Gerber.

 Tapón de goma.

 Centrífuga de Gerber.

 Beaker de 100 mL.

 Pipetas de 1, 10 y 11 mL.
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Reactivos:

 Ácido Sulfúrico (H2SO4 90 -91% p/p) d= 1,810 - 1,825 g/mL.

 Alcohol Isoamílico grado reactivo d= 0,814 – 0,816 g/mL.

O Alcohol Amílico grado reactivo d= 0,808 – 0,818 g/mL

Procedimiento:

1. Se coloca 10 mL de ácido sulfúrico en el butirómetro de Gerber.


2. Se vierte cuidadosamente 11 mL de muestra dejándola deslizar por las
paredes del butirómetro de tal manera que forme una capa de separación
sobre la superficie del ácido.
3. De igual forma se incorpora 1 mL de alcohol amilíco o isoamílico.
4. Cierre el butirómetro con el tapón de goma y agite vigorosamente con
movimiento alterno de arriba abajo, hasta que los flóculos de caseína se
hayan disuelto completamente.
5. Centrifugar de 10 a 15 minutos en la centrífuga de Gerber a una velocidad
de 1000 a 1200 rpm.
6. Se coloca el butirómetro en el baño maría a temperatura de 65±1 °C por 5
minutos la columna de grasa debe quedar sumergida en el agua.
7. Al cabo de 5 a 10 minutos se lee el porcentaje de grasa con la ayuda del
medidor de grasa.

El porcentaje de grasa se reporta como porcentaje (%p/v).

DETERMINACIÓN DE AGENTES NEUTRALIZANTES. COVENIN 1200-81

Equipo de Ensayo:

 Vaso de precipitado de 250 mL.

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 Bureta graduada de 50 mL.

 Potenciómetro para determinación de pH.

Reactivos:

 Ácido Clorhídrico 0,1 N.

Procedimiento:

1. Se coloca 50 mL de la muestra en un vaso de precipitado.


2. Se añaden 45 mL de solución de ácido clorhídrico con agitación
suave en unos 90 seg.
3. Se continúa añadiendo la solución de ácido clorhídrico gota a gota
hasta alcanzar un pH= 2,7 controlado potenciométricamente.

Expresión de resultados:

𝑣∗𝑓
𝐺𝑟𝑎𝑑𝑜 𝑑𝑒 𝐴𝑙𝑐𝑎𝑙𝑖𝑛𝑖𝑑𝑖𝑑𝑎𝑑 =
2
Dónde:
v= volumen de ácido clorhídrico 0,1 N consumidos para 50 mL de leche.
f= factor del ácido.

REPORTE FINAL: Nombre y Apellido: ____________________________


Apunte los resultados obtenidos en un cuadro y compárelos con los valores
establecidos en las Normas COVENIN (ver anexo 1) y/o según lo estudiado en la
teoría.

CARACTERÍSTICAS UNIDAD VALOR OBTENIDO


Acidez titulable mL de NaOH 0,1 N
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Densidad relativa g/mL


A 15ºC
A 20ºC
Grasa %(p/v)
Cloruros %(p/v)
pH --
TRAM min - horas
Estabilidad proteica (+/-)

En base a los valores obtenidos en el laboratorio determine si la leche analizada


podrá ser sometida a procesamiento, o si por el contrario sufrió alguna alteración o
adulteración. Comente respecto a la calidad de la misma.
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Entregue esta parte del reporte al final de la práctica y a la entrada de la próxima el
resultado y su análisis de la prueba de lactofermentación.

(Recuerde dejar un borrador de este reporte para usted)

ANEXO 1.

REQUISITOS FÍSICO - QUÍMICOS DE LA LECHE

CARACTERISRICAS UNIDAD MIN MAX METODO


DE ENSAYO

Acidez titulable mL de NaOH 15 19 COVENIN


0.1 N
Auxiliar: Lic. Frank Contreras 658

Densidad relativa g / mL 161,028 1,0330 COVENIN


A 15 ºC 1,026 1,0310 367
A 20 ºC
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ANEXO 2

Fermentación láctica:

Cuando una muestra de leche se incuba a la temperatura de 36 °C sufre un proceso


de fermentación ocasionado por la flora presente en dicha muestra. Las
características organolépticas del producto obtenido permiten hasta cierto punto

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establecer la calidad de leche original y clasificarla dentro de ciertas categorías


como son:

Liquida: se mantiene en estado líquido, homogénea después de 24 horas.


Corresponde a leche pobre en microorganismos, especialmente en gérmenes
lactofermentadores. o más probable que haya sido adulterada con la adición
de algún agente conservante.

Gelatinosa: presenta un aspecto de coágulo gelatinoso; corresponde a leche


rica en gérmenes lactofermentadores con predominio de los Lactococcus spp.
que producen la coagulación. El coágulo puede ser homogéneo y sin gas, o
bien puede contener apenas pequeñas burbujas de gas. Se considera de
calidad aceptable.

Gaseosa con suero separado: corresponde a una leche que ha sido coagulada
pero luego se ha producido gas por gérmenes probablemente del grupo
coliformes. Se considera pobre en calidad.

Grumosa con gas: corresponde a leche de mala calidad, en la cual ha ocurrido


un proceso de coagulación por gérmenes lactofermentadores, con actividad
considerable de gérmenes gasógenos del grupo coliformes y además enzimas,
tipo cuajo.

Cuajada tipo queso: se caracteriza por la formación de una cuajada bien


definida, con separación completa del suero. Es ocasionada por la presencia de
gran número de gérmenes que producen gran cantidad de enzimas tipo cuajo.

Esta prueba puede realizarse aprovechando las muestras utilizadas para las pruebas
de reducción del azul de metileno, continuando la incubación de estas por 24 horas
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a 36 °C. Es conveniente tener en cuenta que la prueba de lactofermentación es solo


una indicación de la posible calidad de leche, pero carece de valor concluyente, a
no ser que se acompañe del recuento total de microorganismos y si es posible de
una observación microscópica.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.

NASANOVSKY, M. GARIJO, R. KIMMICH, R. LECHERÍA. DISPONIBLE EN:


http://www.hipotesis.com.ar/hipotesis/Agosto2001/Catedras/Lecheria.htm

NORMA VENEZOLANA. COVENIN 903-93. LECHE CRUDA.

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NORMA VENEZOLANA. COVENIN 367–82. LECHE FLUIDA DETERMINACIÓN DE LA


DENSIDAD RELATIVA (1era REVISIÓN).

NORMA VENEZOLANA. COVENIN 1053-82. LECHE FLUÍDA DETERMINACIÓN DE


GRASA MÉTODO DE GERBER (1era REVISIÓN).

NORMA VENEZOLANA. COVENIN 939-76. LECHE Y PRODUCTOS DERIVADOS.


MÉTODO DE ENSAYO. REDUCCIÓN DEL AZUL DE METILENO.

NORMA VENEZOLANA. COVENIN 658-1997. LECHE Y SUS DERIVADOS.


DETERMINACIÓN DE LA ACIDEZ TITULABLE (3era REVISIÓN).

Auxiliar: Lic. Frank Contreras

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