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DE BIOLOGIA
2016
Alumno(a):....................................................................................................
Grupo:.................................................
En este curso el alumno basándose en la curiosidad innata del ser humano, adentrará en el
conocimiento profundo de las Biomoléculas, estructura celular y molecular y su aplicación en el
campo Odontológico, el cual se relaciona con la salud Bucal.
El objetivo de esta guía es afianzar conocimientos de los alumnos, bajo la dirección del Docente,
desde lo más simple a lo complejo; la guía consta de una parte introductoria, con indicaciones
generales a tomar en cuenta en todas las prácticas, y las indicaciones específicas por tema a
desarrollar.
1. FUEGO EN EL LABORATORIO
- Evacuar el laboratorio.
- Avisar a los compañeros y al profesor o al técnico de laboratorio a fin de que lo apague utilizando
un extintor adecuado.
- Retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del fuego.
- En caso de fuego en la ropa pedir ayuda, estirarlo en el suelo y rodar para apagar las llamas.
2. QUEMADURAS
- Las pequeñas quemaduras producidas por material caliente, por el uso de la autoclave o
reactivos, tratarlas lavando la zona afectada con agua fría durante 10-15 minutos.
- Las quemaduras más graves requieren atención médica inmediata.
3. CORTES
- Los cortes producidos por roturas de material de vidrio son un riesgo común en el laboratorio.
- Estos cortes se tienen que lavar bien, con abundante agua y jabón, durante 10 minutos como
mínimo.
PICTOGRAMAS DE BIOSEGURIDAD
I. FUNDAMENTO TEORICO
Es muy importante que los materiales y equipos de uso común en el laboratorio se
identifiquen por su nombre correcto y uso específico que tiene cada uno, pero más
importante es saber manejarlo correctamente en el momento oportuno, teniendo en cuenta
los cuidados y normas especiales para el uso de aquellos que así lo requieran. Los
instrumentos y materiales de laboratorio están constituidos de materiales diversos y se
clasifican de la siguiente manera:
1. MATERIAL DE VIDRIO
El instrumental de vidrio usado para realizar investigaciones o reacciones químicas debe
ser fabricado con materiales resistentes a la acción de los agentes químicos.
El vidrio corriente no sirve para la fabricación de instrumentos de laboratorio por ser muy
frágil y vulnerable a los agentes químicos y físicos. Por tal razón se construyen de cristal de
vidrio, pudiendo ser este de vidrio grueso o delgado.
Los instrumentos construidos con vidrio grueso solo son apropiados para contener y
trasvasar (ver tabla Nº 2) o medir (ver tabla Nº 3) si se intenta calentarlos se puede
romper con mucha facilidad. Ej: embudos, cilindros graduados, medidas cónicas y
agitadores. Los instrumentos construidos con vidrio delgado son muy resistentes al calor,
pero solo cuando son calentados gradualmente y enfriados de la misma manera; por eso
se recomienda interponer una rejilla metálica entre el fondo del recipiente y el mechero
cuando va a realizarse un calentamiento del instrumento (entre estos están el Pyrex,
vycor, kimble etc). Ej: Balones, matraces, vasos de precipitado, tubos de ensayo, etc.
2. MATERIAL DE PORCELANA
También se fabrican instrumentos de porcelana por ser más resistentes que el vidrio y se
usan por lo general, cuando se van a someter sustancias a elevadas temperaturas, cuando
es necesario triturarlas o evaporarlas completamente. En la tabla Nº 5 se describen los
diferentes materiales de porcelana de uso frecuente en el laboratorio
2. Óptico: comprende un conjunto de lentes dispuestos de tal manera que produce el aumento de
las imágenes que se observan a través de ellas, se incluye también a las partes que reflejan,
transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del
microscopio.
a. OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
b. OBJETIVO: Lente situado cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
c. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
d. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
e. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
EJEMPLO: Si el objetivo aumenta la imagen de un objeto 100 veces, ésta al pasar por la lente
ocular será nuevamente aumentada. Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificación total en este
caso será:
10X x 100X = 1000X
Este resultado permite saber cuántas veces más grande estamos viendo la imagen de un objeto.
Poder de Resolución. Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos entre sí.
Cuanto mayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos puntos a la cual
pueden distinguirse como tales. La distancia límite en la cual dos puntos pueden ser todavía
distinguibles se denomina Límite de Resolución. El poder de resolución de un microscopio
compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numérica
(propiedad óptica de la lente)
OBJETIVOS
- Reconocer las partes del microscopio y su uso adecuado.
- Adiestrarse en el uso del microscopio ubicando estructuras como un pedazo de lana, letra
de papel periódico
MATERIALES
- Microscopio compuesto.
- 2 láminas portaobjetos.
- 2 láminas cubreobjetos.
- Un pedazo de lana.
- Un retazo de papel periódico
PARTE EXPERIMENTAL
REACTIVOS
• Reactivo de Fehling A y B • Fructosa
• Reactivo De Lugol • Lactosa
• Reactivo de Seliwanoff • Almidón
• Reactivo de Bial • Galactosa, xilosa, ribosa, maltosa.
• Sacarosa
MATERIALES
• Tubos de ensayo • Trípode
• Gradilla • Mechero Bunsen o de alcohol
• Pinza para tubo de ensayo • Espátula
• Pipetas de 1mL y 5mL • Agitador de vidrio
• Vaso de precipitado de 50mL • Rejilla con asbesto
• Luna de reloj • Agua destilada
METODOLOGÍA
REACCIÓN DE FEHLING
El reactivo de Fehling está formado por dos soluciones acuosas que son: sulfato de cobre
cristalizado y sal seignette o tartrato mixto de potasio y sodio; es importante tener en
cuenta que ambas se guardan separadas hasta el momento en el que vayan a ser
utilizadas para de esa manera evitar la precipitación del hidróxido de cobre.
Su acción se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos el cual
se oxida a ácido y se reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de cobre, formando
un precipitado color rojo.
El reactivo de Fehling se fundamenta principalmente, en su reacción, la oxidación de
cobre, el poder reductor de los azúcares, sea este en monosacáridos, polisacáridos,
aldehídos, y en ciertas cetonas.
• En tubos de pruebas, colocar 2 mL de cada una de las muestras indicadas Glucosa y Ribosa,
adicionar 4 mL de reactivos de Bial, calentar en baño maría durante 10 a 15 minutos hasta
ebullición.
Sirve para diferenciar cetosas de aldosas. Las cetosas reaccionan con la resorcina más rápidamente
que las aldosas produciendo una coloración rosada.
REACCIÓN DE TOLLENS
Sirve para reconocer la presencia de azúcares reductores que son oxidados por plata amoniacal en
medio básico obteniendo como subproducto plata metálica sólida que forma una superficie
reflejante en el fondo del tubo (espejo de plata).
Sirve para reconocer la presencia de almidón por formación de un complejo azul entre el yoduro y
la amilosa. Este método se usa para identificar polisacáridos. El almidón en contacto con unas
gotas del reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-violeta
característico.
Introducción
Los lípidos son insolubles en el agua y menos densos que ella. Se disuelven bien en disolventes no
polares, tales como el éter sulfúrico, sulfuro de carbono, benceno, cloroformo y en los derivados
líquidos del petróleo. Se encuentran lípidos, tanto en vegetales como en los animales. Muchos
vegetales acumulan considerables cantidades de lípidos en los frutos y semillas. Los animales
tienen grasa en las diferentes partes de su cuerpo, especialmente entre la piel y los músculos, en
la médula de los huesos y alrededor de las vísceras.
Hay lípidos sólidos, denominados grasas, y líquidos denominados aceites. El término grasa se
emplea para aquellas mezclas que son sólidas o semisólidas a temperatura ambiente, en tanto que
el término aceite se aplica a mezclas que son líquidas a temperatura ambiente. Existen diferentes
familias o clases de lípidos, pero las propiedades distintivas de todos ellos derivan de la naturaleza
hidrocarbonada de la porción principal de su estructura.
Los lípidos desempeñan diversas funciones biológicas importantes, actuando:
1) Como componentes estructurales de las membranas.
2) Como formas de transporte y almacenamiento del combustible catabólico.
3) Como cubierta protectora sobre la superficie de muchos organismos
4) Como componentes de la superficie celular relacionados con el reconocimiento de las células, la
especificidad de especie y la inmunidad de los tejidos.
Algunas sustancias clasificadas entre los lípidos poseen una intensa actividad biológica: se
encuentran entre ellas algunas de las vitaminas y hormonas. Aunque los lípidos constituyen una
clase bien definida de biomoléculas, veremos que con frecuencia se encuentran combinados
covalentemente o mediante enlaces débiles, con miembros de otras clases de biomoléculas,
constituyendo moléculas híbridas tales como los glucolípidos, que contienen lípidos y glúcidos, y
las lipoproteínas que contienen lípidos y proteínas. En estas biomoléculas las propiedades
químicas y físicas características de sus componentes están fusionadas para cumplir funciones
biológicas especializadas.
MATERIALES
• Tubos de ensayo • Solución de NaOH al 20%
• Gradilla • Solución de Sudán III
• Varillas de vidrio • Tinta china roja
• Mechero • Eter, cloroformo o acetona
• Vasos de precipitados • Aceite vegetal, Premium y recalentado
• Pipetas
PROCEDIMIENTO
Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
Agitar enérgicamente y colocar el tubo al baño María de 20 a 30 minutos. . Pasado este
tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solución
de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semisólida que es el
jabón formado y una superior lipídica de aceite inalterado.
2. TINCIÓN
FUNDAMENTO
Los lípidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudán III.
3. SOLUBILIDAD
FUNDAMENTO
Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en
pequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues
desaparece en reposo por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor
densidad, se sitúa sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter, cloroformo,
acetona, benceno, etc.
PROCEDIMIENTO
1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.
2. Añadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de éter u otro disolvente orgánico,
3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
4. Observar los resultados: Se verá cómo el aceite se ha disuelto en el éter y, en cambio no lo hace
en el agua y el aceite subirá debido a su menor densidad.
3. Acidez
PROCEDIMIENTO
1. Toma 2 mL de aceite.
2. Disuelve la muestra en 5 mL de éter-etanol neutralizado.
3. Añade 2 gotas de fenolftaleína.
4. Titula con hidróxido potásico de 0,1 M hasta coloración ligeramente rosada.
5. Anota el volumen de KOH.
Introducción
Las proteínas desempeñan una amplia variedad de funciones en plantas y animales. Estas
funciones se pueden agrupar en dos clases: dinámicas y estructurales (estáticas). Entre las
funciones dinámicas de las proteínas se encuentran el transporte de sustancias, el control
metabólico, la contracción, la comunicación y la catálisis de transformaciones químicas. En cuanto
a sus funciones estructurales, las proteínas proporcionan la matriz para los tejidos óseo y
conjuntivo que dan igualmente forma al organismo.
Las proteínas son polímeros de a-aminoácidos. Es interesante anotar que todos los tipos
diferentes de proteínas se sintetizan inicialmente como polímeros de 20 aminoácidos, conocidos
como aminoácidos comunes. Además de los aminoácidos comunes, en las proteínas se
encuentran aminoácidos derivados, formados a partir de los comunes, normalmente mediante
una reacción catalizada por una enzima.
Los aminoácidos comunes tienen en común un átomo de carbono central, denominado carbono-a,
al que están unidos covalentemente un grupo ácido carboxílico (-COOH), un grupo amino (-NH2) y
un átomo de hidrógeno (-H). Además de esto, al átomo de carbono se le une una cadena lateral,
designada como R, la cual es diferente para cada uno de los aminoácidos comunes. A Ph
fisiológico, tanto el grupo carboxilo como el amino se encuentran ionizados, como se muestra en
la siguiente figura:
Con base en su polaridad, algunos aminoácidos son solubles en agua (aminoácidos hidrofílicos
polares); otros por el contrario son poco solubles en agua y completamente solubles en solventes
orgánicos (aminoácidos hidrofóbicos no polares). Los aminoácidos se unen para formar las
proteínas mediante un enlace covalente llamada enlace peptídico. Una reacción empleada para el
reconocimiento de enlaces peptídicos es la reacción con Biuret. Este reactivo está constituído por
sulfato de cobre (CuSO4) en solución acuosa alcalina, característica debida a la presencia de
hidróxido de sodio o de potasio (NaOH, KOH, respectivamente).El resultado de esta reacción es un
compuesto de color violeta bastante notorio e ideal para una determinación cualitativa. Este
producto obedece a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares
de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos, por lo cual
es de esperarse que el reactivo de Biuret no reaccione con aminoácidos libres.
De otro lado la ninhidrina es un poderoso agente oxidante que reacciona con los alfa aminoácidos
para dar lugar, mediante descarboxilación, a gas carbónico (CO2) y amoniaco (NH3).
REACTIVOS
Ácido clorhídrico concentrado HCL Solución NaOH al 20 %
Alcohol etílico Biuret
Solución de CuSO4 al 1% Ácido Nítrico concentrado HNO3
MATERIALES
Tubos de ensayo Vasos de precipitado
Gradilla Pipetas
Mechero Pinza para tubo de ensayo
Los alumnos por grupo deberán traer 1 huevo de gallina, 20 ml de leche (de tarro, fresca o en
polvo), 20 gr. de harina de soya
PARTE EXPERIMENTAL
1. COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS
Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones coloidales
que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70ºC o
al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los
agentes indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan por destrucción de sus estructuras
secundaria y terciaria.
2. REACCIÓN BIURET
Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su
identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las
proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que
se destruye al liberarse los aminoácidos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II), y el Cu, en un medio fuertemente alcalino, se
coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya
intensidad de color depende de la concentración de proteínas.
1. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solución de ovoalbúmina al 1-2%.
2. Añadir 4-5 gotas de solución de CuSO4 al 1%.
3. Añadir 3ml de solución de NaOH al 20%.
4. Agitar para que se mezcle bien.
5. Observar los resultados.
3. REACCIÓN XANTOPTREÍCA
Se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas
son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas
6. Desnaturalización de Proteínas
- En 4 tubos de ensayo colocar 1mL de clara de huevo.
- El tubo 1 se calienta
- En el tubo 2 se añade 1mL de alcohol.
Cuestionario
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo?
2. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
3. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret?
4. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Las enzimas por su carácter proteico poseen una composición específica de cadenas laterales
determinadas por la secuencia de aminoácidos del polipeptido. La presencia de grupos ionizables
en esta estructura explica el hecho de que las enzimas sean sensibles al pH. Tanto en su
estabilidad como en su capacidad catalítica.
ENZIMAS: son proteínas que intervienen en las reacciones biológicas acelerando la velocidad de
reacción hasta alcanzar su punto de equilibrio.
SUSTRATO: Son sustancias sobre las que actúan las enzimas. En una reacción bioquímica
catalizada por una enzima a medida que progresa la reacción aumenta la concentración de
productos a expensas de la desaparición de los correspondientes sustratos en tanto que la enzima
(E) no se modifica.
[E] + [ S ] ----------------------------- [ E ] + [ P ]
El almidón es un polisacárido homogéneo formado por moléculas de D-Glucosa unidos por enlaces
glucosidicos, constituye la principal forma de almacenamiento de sustancias de reserva de los
vegetales y de algunas bacterias bajo la forma de gránulos.
Estructuralmente el almidón se encuentra bajo dos formas: la α-amilosa (cadena lineal) de 300 a
500 unidades de D-glucosa unidas mediante enlaces α 1,4 y la amilopectina (cadena ramificada)
con enlaces α1,4 en la cadena principal y enlaces α 1.6 en los puntos ramificados. En ellos existen
23 a 30 moléculas de D-glucosa.
La hidrolisis enzimática de la amilosa puede ser realizada por la α-amilasa presente en el jugo
pancreático y en la saliva, que degrada la amilosa a glucosa y maltosa libres.
La amilopectina también es atacada parcialmente por la α y β amilasa que solo destruye los
enlaces α ( 1,4 ): puede ser degradada no obstante a glucosa y maltosa si además es atacada por
α ( 1, 6 ) glucosidasa.
OBJETIVO:
PARTE EXPERIMENTAL:
COLECCIÓN DE LA SALIVA:
El donante de saliva no debe haber ingerido alimento durante 2 horas previas a la toma de
muestra.
Antes de la toma de muestra debe enjuagarse la cavidad oral con agua simple.
Luego mantendrá la boca cerrada entre 5 a 8 minutos evitando hablar y pasar saliva.
La recolección se realizara en frasco de boca ancha dejando caer por gravedad la saliva evitando
así la formación de espuma.
PROCEDIMIENTO
Tubos de digestión 1 2 3
ml. Almidón al 1% 1.0 1.0 1.0
ml. Buffer Fosfato pH 6.8 0.1M 0.5 0.5 --------
ml. HCL 0.5N -------- -------- 1.2
ml. H2O destilada -------- 1.2 0.5
ml. NaCl 0.9 g% 1.2 -------- ---------
Llevar a baño maría a 37°C durante 5 minutos y luego agregar.
Pasado los 10 minutos retirar del baño maría los tubos de digestión y preparar la siguiente batería
de tubos.
A) REACCION DE LUGOL
Tubos 1 2 3
Digerido 1 1.0 --------- --------
Digerido 2 --------- 1.0 --------
Digerido 3 ---------- --------- 1.0
B) REACCION DE BENEDICT
Tubos 1 2 3
Digerido 1 0.5 -------- --------
Digerido 2 -------- 0.5 --------
Digerido 3 -------- ------- 0.5
Reactivo de Benedict 0.5 0.5 0.5
Colocar en baño maría a 100°C durante 5 minutos.
Observe los resultados deje reposar y compare los precipitados.
ADN significa ácido desoxirribonucleico. El ADN es la molécula que lleva la información genética
utilizada por una célula para la creación de proteínas. El ADN contiene las instrucciones genéticas
usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos. La función
principal de las moléculas de ADN es el almacenamiento a largo plazo de la información genética.
El código genético fue un misterio hasta que los biólogos descubrieron la estructura del ADN como
una escalera de caracol o de doble hélice. Las barandillas de la escalera son confeccionadas de
alternar los azúcares y fosfatos,. La información se almacena en el ADN como un código formado
por cuatro bases químicas: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T). Cada peldaño de la
escalera es un par de bases, una A solamente se une a una T y C sólo se une a un ADN G, es una
secuencia química de estas bases en dos hebras que están enlazados para formar una doble
hélice. El orden de estas bases a lo largo de una cadena de ADN que se conoce como la secuencia
de ADN.
Un artículo publicado en la revista Nature por James D. Watson y Francis Crick en 1953, primero
dio a conocer los secretos de la doble hélice del ADN. Maurice Wilkins y Rosalind Franklin también
se acredita con este descubrimiento.
MATERIALES Y REACTIVOS
- Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y
agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más
grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es
centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.
- Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol
isoamílico enfriado a 0ºC. Se tiene que dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del
recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol va a quedar flotando sobre el tampón.
- Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el
alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando
los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa
de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo
de algodón mojado.
Introducción
La teoría celular, establece que todos los seres vivos están constituidos por células y que toda
célula proviene de una preexistente. En efecto, desde los minúsculos microorganismos hasta las
inmensas ballenas azules están formadas por células. Sin embargo, la estructura de las mismas
puede ser muy diferente.
Ahora analizaremos los dos modelos de organización celular que existe en la naturaleza: las células
procariotas y eucariotas. De los 3.800 millones de años que la vida lleva existiendo sobre la Tierra,
la historia completa de la humanidad, desde la vida en las cavernas hasta el moderno
departamento de nuestros días, representa bastante menos del uno por ciento de todo este
tiempo, realmente es un período insignificante. Durante los primeros dos mil millones de años los
únicos habitantes de la Tierra fueron exclusivamente las bacterias.
Las células procariotas estructuralmente son las más simples y pequeñas. Como toda célula, están
delimitadas por una membrana plasmática que contiene pliegues hacia el interior (invaginaciones)
algunos de los cuales son denominados laminillas y otro es denominado mesosoma y está
relacionado con la división de la célula. Por fuera de la membrana está rodeada por una pared
celular que le brinda protección. El interior de la célula se denomina citoplasma. En el centro es
posible hallar una región más densa, llamada nucleoide, donde se encuentra el material genético o
ADN. Es decir que el ADN no está separado del resto del citoplasma y está asociado al mesosoma.
En el citoplasma también hay ribosomas, que son estructuras que tienen la función de fabricar
proteínas. Pueden estar libres o formando conjuntos denominados polirribosomas. Las estructuras
que le permiten la locomoción, como por ejemplo los cilios o flagelos.
MATERIALES
Tubos de ensayo Mechero
Laminas porta objetos Goteros
Lancetas estériles Hisopos de algodón
Algodón
Los alumnos por grupo deberán traer 20 ml de yogurt, agua estancada, planta acuática elodea, 1
cebolla
PARTE EXPERIMENTAL
Identificación de células procariotas. Bacterias
Experiencia 1
1. Tomar una gota de yogurt.
2. Realice un frotis en una lámina portaobjeto limpia.
3. Deje secar, fije la muestra cubriendo la lámina con varias gotas de metanol durante 3
minutos.
4. Coloree de manera directa con violeta de genciana o cristal violeta por 3 minutos.
5. Lavar con abundante agua.
6. Una vez coloreada y seca la muestra, observe al microscopio, primero a bajo aumento,
luego a mediano aumento y posteriormente con aumento de 100X (inmersión).
Experiencia 2
1. Tome una muestra con un hisopo estéril de la mucosa bucal o de los oídos o nariz.
2. Realice un frotis en una lámina portaobjeto limpia.
3. Deje secar, fije la muestra cubriendo la lámina con varias gotas de metanol durante 1
minuto o en un mechero.
Tinción GRAM
1. Fijar la muestra en la lámina portaobjeto con un mechero
2. Cubra el extendido fijado con violeta de genciana o cristal violeta por 1 minuto.
3. Lave abundantemente con agua destilada.
4. Cubra con lugol durante 1 minuto.
5. Lave con alcohol-acetona hasta que no salga más colorante.
6. Cubra la lámina con safranina durante 1 minuto.
7. Lave abundantemente con agua.
8. Deje secar.
9. Observe al microscopio (con poco aumento y luego con el objetivo 100X).
10. Si aparecen bacterias coloreadas de color azul-violetas son Gram positivas y si aparecen de
color rojo-rosado son Gram negativas.
Célula animal:
1. Realice un hisopado de la cara interna de la mejilla.
2. Extienda la muestra en un lámina porta objetos (prepare 03 láminas)
3. Dejar secar a medio ambiente
4. Colorear por 3 minutos con azul de metileno (lámina 1), eosina (lámina 2), giemsa (lámina
3).
5. Observar a 40X
Célula vegetal:
1. Coloque una gota de agua destilada en una lámina porta objeto y coloque una hoja de
Elodea cubriéndola con una laminilla cubre objeto.
2. Observe al microscopio con el ocular de 10X y 40X.
I. OBJETIVO:
II. FUNDAMENTO:
Todas las células tienen una orden estructural que organiza las funciones intracelulares
(almacenaje de moléculas, síntesis de proteínas en general) mediante una compleja
organización. En el interior de las células se encuentran las organelas las cuales son
estructuras especializadas que tienen formas características y realizan
funciones específicas en el crecimiento, mantenimiento y reproducción de las
células. Muchas reacciones químicas ocurren en una célula simultáneamente,
sin embargo hay poca interferencia entre los distintos tipos de reacciones
porque ocurren en diferentes organelas. Cada tipo de éstos tiene un conjunto
de enzimas características propias que desempeñan reacciones específicas, y
cada uno se encuentra en un comportamiento funcional, donde ocurren
procesos fisiológicos particulares. No obstante, las organelas con frecuencia
colaboran entre ellos para mantener la homeostasis.
Es vital para la célula la obtención de fuentes de energía y la conversión en energía útil.
Dicho proceso está a cargo de las mitocondrias y/o de los cloroplastos.
Las mitocondrias se encuentran en mayor número en células animales pero también
pueden presentarse en células vegetales, mientras que los cloroplastos son exclusivos de
células vegetales y algunas bacterias fotosintéticas. Las mitocondrias oxidan moléculas
orgánicas utilizando oxígeno del aire como aceptor de electrones y forman ATP.
Los cloroplastos capturan energía de la luz y la transforman en ATP mediante el proceso
denominado fotosíntesis. También podemos encontrar dentro de las vacuolas inclusiones
citoplasmáticas como los cristales de oxalato de calcio como las Drusas (cristales
estrellados) y los Rafidios (alargados en forma de agujas); que tienen la función de
eliminar el exceso de calcio.
III. MATERIALES
IV. PROEDIMIENTO
Cloroplastos de Elodea
INTRODUCCIÓN
El transporte de sustancias a través de la membrana plasmática es vital para la célula. Ciertas
sustancias deben moverse hacia su interior para participar en las reacciones metabólicas. Otras
que se producen dentro de la célula para su exportación o como productos metabólicos deben ser
transportadas fuera de ella.
Las sustancias suelen desplazarse a través de la membrana celular mediante procesos que pueden
clasificarse como activos o pasivos, según requieran o no energía celular. En los procesos
pasivos una sustancia se mueve siguiendo su gradiente de concentración o su gradiente eléctrico y
atraviesa la membrana utilizando solo su propia energía cinética. La célula no transporta energía.
En los procesos activos, la energía celular se utiliza para impulsar a la sustancia "cuesta arriba", es
decir, en contra de su gradiente de concentración o de su gradiente eléctrico. La energía celular se
emplea habitualmente en forma de ATP.
Algunas sustancias simplemente atraviesan la bicapa lipídica o los canales de membrana usando su
propia energía cinética (energía de movimiento). La energía cinética es intrínseca de las partículas
en movimiento. Algunos procesos que dependen de la energía cinética son la difusión y la ósmosis.
Otras sustancias deben unirse a una proteína transportadora específica para atravesar la
membrana celular, como en la difusión facilitada y el transporte activo. Aún más, otras sustancias
pasan a través de la membrana celular dentro de sacos esféricos denominados vesículas que se
forman a partir de una membrana preexistente. Algunos ejemplos son la endocitosis, en la cual las
vesículas se desprenden de la membrana plasmática a medida que transportan sustancias hacia
adentro de la célula, y la exocitosis, que es la unión de las vesículas con la membrana plasmática
para liberar materiales fuera de la célula. Por lo tanto, las sustancias pueden transponer las
membranas plasmáticas utilizando la energía cinética, proteínas de transporte o vesículas.
Ósmosis
La ósmosis es el paso de un solvente a través de una membrana con permeabilidad selectiva. Al
igual que la difusión, es un proceso pasivo. En los sistemas vivientes, el solvente es el agua, que se
desplaza por ósmosis a través de las membranas plasmáticas desde una zona de mayor
concentración de agua hacia otra de menor concentración. Otra forma de expresar esta idea es
considerar la concentración del soluto: en la ósmosis, el agua pasa a través de una membrana
selectivamente permeable desde un área de menor concentración de soluto hacia una región de
mayor concentración de soluto. Durante la ósmosis, las moléculas de agua atraviesan la
membrana plasmática de dos maneras:
1. Moviéndose a través de la bicapa lipídica.
2. Moviéndose a través de acuaporinas, proteínas integrales de membrana que funcionan
como canales de agua.
Difusión facilitada
Los solutos que son denominados polares o demasiado cargados para poder difundir a través de la
bicapa lipídica y son demasiado grandes para difundir a través de los canales de membrana,
pueden atravesar la membrana plasmática por medio de la difusión facilitada. En este proceso, un
Transporte activo
Algunos solutos polares o cargados que deben ingresar o salir de las células del organismo, no
pueden cruzar la membrana plasmática a través de ninguno de los mecanismos de transporte
pasivos citados, ya que necesitan moverse "cuesta arriba", es decir, en "contra" de sus gradientes
de concentración. Estos solutos pueden transponer la membrana mediante el proceso
llamado transporte activo. Éste se considera un proceso activo porque se requiere energía para
que las proteínas transportadoras puedan mover los solutos a través de la membrana y en contra
de sus gradientes de concentración.
Existen dos fuentes de energía celular que se utilizan para realizar el transporte activo: 1) en
el transporte activo primario la energía se obtiene por hidrólisis del ATP; 2) la energía que
permanece almacenada en gradientes de concentración iónicos es la fuente de energía en los
procesos de transporte activo secundario. Como en la difusión facilitada, los procesos de
transporte activo tienen un transporte máximo y muestran saturación. Entre los solutos que
atraviesan la membrana plasmática por transporte activo se hallan diferentes iones, como Na+,
K+, H+, Ca++, I- (ion yoduro) y Cl-, y algunos aminoácidos y monosacáridos (debe destacarse que
algunas sustancias también atraviesan la membrana por canales o por difusión facilitada cuando
está presente la proteína de canal o transportadora adecuada.
MATERIALES
Láminas portaobjeto Agua destilada
Laminillas cubre objetos Alcohol corriente
Tubos de prueba Algodón estéril
Lancetas hematológicas Pipetas de 1 ml.
Solución de NaCl al 0.4% Varillas de vidrio macizo
Solución de NaCl al 0.9% Gradillas
Solución de NaCl al 2.0% Microscopios
Los alumnos por grupo deberán traer hojas de elodea, catafilos de cebolla.
MITOSIS
I. OBJETIVOS:
Reconocer las distintas fases del ciclo celular en células somáticas de raíz de cebolla.
II. FUNDAMENTO:
La vida de una célula comprende un periodo de tiempo conocido como el ciclo celular
Este consiste en la replicación de material genético y formación de células hijas.
Compromete dos etapas: La primera llamada Interfase, donde no ocurre división
celular propiamente dicha y la segunda de división celular. Esto sucede en células
somáticas a diferencia de la meiosis que se realiza en células germinales.
La mitosis implica cuatro etapas: Profase, Metafase, Anafase y Telofase. En las dos
primeras ocurre la condensación y ordenamiento de los cromosomas y en las dos
últimas se lleva a cabo la distribución de los cromosomas. El resultado final son dos
células hijas diploides (2n).
III. MATERIALES
- Placa Petri - Pinzas
- Orceína acética - Portaobjetos
- Pinza de madera - Cubreobjetos
- Microscopio - Bisturí
- Mechero de alcohol
IV. PROCEDIMIENTO
Introducción
La meiosis es un proceso que consta de dos divisiones celulares consecutivas sin que haya
replicación del ADN entre ellas. Su función es diferente a la de la mitosis ya que al final del proceso
lo que se consigue es reducir el número cromosómico a la mitad, obteniendo gametos haploides
en los organismos con reproducción sexual. La forma para conseguir esa reducción es que los
cromosomas con el mismo tipo de información genética u homólogos se apareen primero para
después segregar a distintos polos celulares. Durante el apareamiento cromosómico y la sinapsis
ambos homólogos pueden recombinar, es decir, intercambiar segmentos cromosómicos,
generando nuevas combinaciones alélicas en los cromosomas resultantes. Las diferentes
combinaciones posibles de cromosomas paternos y maternos que puedan quedar incluidas en un
gameto, como consecuencia de la segregación de homólogos, es otra fuente adicional de
variabilidad genética.
Las dos divisiones celulares de la que consta la meiosis se denominan meiosis I (reduccional) y
meiosis II (ecuacional). Como decíamos, la meiosis I separa cromosomas homólogos y combina
información genética y la segunda división reparte equitativamente las cromátidas que se habían
replicado en la interfase premeiótica. En la meiosis también distinguimos cuatro etapas en cada
una de las dos divisiones: profase, metafase, anafase y telofase. Las características de cada etapa
son las siguientes:
MEIOSIS I
Profase I. Es una etapa larga y compleja donde suceden uno de los aspectos más destacados del
proceso meiótico: el sobrecruzamiento y la recombinación. Se divide en cinco subetapas:
leptoteno, cigoteno, paquiteno, diploteno y diacinesis.
Leptoteno. Se caracteriza por el inicio de la condensación de los cromosomas que aparecen como
una maraña dentro del núcleo. En este momento los cromosomas tienen dos cromátidas pero aún
no son visibles al microscopio.
Cigoteno. Esta es la etapa donde ocurre el fenómeno de sinapsis o apareamiento cromosómico en
el que los cromosomas homólogos se asocian a lo largo de toda su longitud, lo que permite que
más tarde puedan intercambiar segmentos cromosómicos (sobrecruzamiento) y recombinar. Cada
pareja de homólogos apareados constituye lo que se llama un bivalente, que consta de cuatro
cromátidas.
Paquiteno. El grado de condensación cromosómica es mayor y los bivalentes aparecen más cortos
y gruesos, permaneciendo los homólogos unidos a lo largo de toda su longitud. En esta etapa
ocurre el sobrecruzamiento y la recombinación.
Diplotene. Sigue aumentando la condensación de los bivalentes. Los cromosomas homólogos
comienzan a separarse a nivel del centrómero, quedando unidos por unos puntos de contacto
denominados quiasmas que son la manifestación citogenética del sobrecruzamiento. Sin embargo,
las cromátidas hermanas de cada homólogo aún permanecen unidas. El número de quiasmas que
se establece varía entre especies, poblaciones, individuos y tipo celular de que se trate. El tamaño
Metafase I. Los bivalentes exhiben su máximo grado de condensación. Los centrómeros de cada
homólogo se unen a las fibras del huso reorganizándose en la placa metafásica. A diferencia de la
metafase mitótica, sobre la placa ecuatorial se disponen parejas de cromosomas apareados o
bivalentes (n bivalentes) en lugar de cromosomas aislados (2n).
Telofase I. Cuando finaliza la segregación anafásica de los homólogos, éstos se agrupan en ambos
polos celulares. Los cromosomas se descondensan y reaparecen los nucleolos y la membrana
nuclear. Finalmente se produce la citocinesis dando lugar a dos células hijas.
MEIOSIS II La segunda división meiótica es muy similar al proceso mitótico pero hay una serie de
diferencias fundamentales. Cuando se inicia la meiosis II, los cromosomas ya están replicados y
muestran dos cromátidas, por lo que en la interfase previa (o intercinesis) no hay replicación del
ADN. Esta segunda división consta igualmente de cuatro etapas: profase II, metafase II, anafase II y
telofase II.
Profase II. Es una etapa de corta duración donde aparecen n cromosomas con ambas cromátidas
divergentes, como si se repelieran y unidas únicamente por su centrómero, lo que les da un
aspecto de aspa.
Metafase II. Los n cromosomas se unen a las fibras del huso y se organizan en la placa metafásica.
Anafase II. Cada centrómero se divide y las cromátidas hermanas segregan hacia polos opuestos.
En cada polo celular observaremos n cromosomas con una sola cromátida.
Telofase II. Finaliza la migración de los n cromosomas con una sola cromátida y empiezan a
descondensarse. Aparecen de nuevo el nucleolo y la membrana nuclear. Se lleva a cabo la
citocinesis.
I. Materiales:
Microscopio Cajas de Petri
Compuesto
Pipetas Pasteur Reactivos:
Navajas de afeitar Ácido acético al 45 %
Porta y cubre objetos Aceto-carmìn al 1 %
Lámpara de alcohol Etanol al 70 %
Agujas y pinzas de disección
1. Si una planta homocigótica de tallo alto (AA) se cruza con una homocigótica de tallo enano
(aa), sabiendo que el tallo alto es dominante sobre el tallo enano, ¿Cómo serán los
genotipos y fenotipos de la F1 y de la F2?
2. Al cruzar dos moscas negras se obtiene una descendencia formada por 216 moscas negras
y 72 blancas. Representando por NN el color negro y por nn el color blanco, razónese el
cruzamiento y cuál será el genotipo de las moscas que se cruzan y de la descendencia
obtenida.
3. Una mariposa de alas grises se cruza con una de alas negras y se obtiene un descendencia
formada por 116 mariposas de alas negras y 115 mariposas de alas grises. Si la mariposa
de alas grises se cruza con una de alas blancas se obtienen 93 mariposas de alas blancas y
94 mariposas de alas grises. Razona ambos cruzamientos indicando cómo son los
genotipos de las mariposas que se cruzan y de la descendencia
4. Se cruzan dos plantas de flores color naranja y se obtiene una descendencia formada por
30 plantas de flores rojas, 60 de flores naranja y 30 de flores amarillas. ¿Qué descendencia
se obtendrá al cruzar las plantas de flores naranjas obtenidas, con las rojas y con las
amarillas también obtenidas? Razona los tres cruzamientos.
5. Una planta de jardín presenta dos variedades: una de flores rojas y hojas alargadas y otra
de flores blancas y hojas pequeñas. El carácter color de las flores sigue una herencia
intermedia, y el carácter tamaño de la hoja presenta dominancia del carácter alargado. Si
se cruzan ambas variedades, ¿Qué proporciones genotípicas y fenotípicas aparecerán en la
F2? ¿Qué proporción de las flores rojas y hojas alargadas de la F2 serán homocigóticas?
6. ¿Qué proporción genotípica cabe esperar en un matrimonio entre un hombre daltónico y
una mujer portadora? ¿Qué proporción de daltónicos cabe esperar en la familia si tiene
ocho hijos?
7. Al cruzar una gallina normal con un gallo paticorto salieron todos los gallitos normales y
todas las gallinitas paticortas. Posteriormente se realiza la F2 y se obtiene que la mitad de
los gallos y la mitad de las gallinas salen paticortas. Tratar de explicar estos resultados.
8. La siguiente genealogía corresponde a cobayas. El negro corresponde a pelo rizado y el
blanco a pelo liso. El cuadrado significa macho y el círculo significa hembra.
11. La fragilidad de los huesos y la calvicie prematura son dos caracteres de la especie humana
que dependen de genes no ligados. El primer carácter es dominante. El segundo es
dominante en el hombre y recesivo en la mujer. Un hombre de cabello normal y huesos
frágiles cuyo padre tenía huesos normales se casa con una mujer de huesos normales y
portadora del otro carácter. ¿Cuál es la probabilidad que tenga un hijo varón con calvicie
prematura y huesos frágiles?
12. Suponga que un hombre de grupo sanguíneo AB Rh+ (heterocigoto) se casa con una mujer
de grupo A Rh- cuyo padre era grupo 0. ¿Cuál será la proporción de los distintos grupos
sanguíneos y Rh de los hijos de este matrimonio?
13. Una pareja tuvo 4 hijos con los siguientes tipos sanguíneos: A, B, AB y O. Sin embargo el
padre argumenta que el niño con tipo sanguíneo O no es su hijo. ¿Podría tener razón?
Prueba haciendo la cruza correspondiente
14. En una clínica se mezclaron por error cuatro recién nacidos. Los grupos sanguíneos de
estos niños son: O (Julia), A (Tomás), B (Fernando), AB (Alison).
Los grupos sanguinos de las cuatro parejas de padres son:
Pareja uno: ♀AB x O♂
Pareja dos: ♀A x ♂O
Pareja tres: ♀A x ♂AB
Pareja cuatro: ♀O x ♂O
¿Cuál sería el hijo más probable de cada pareja?
INTRODUCCION
A lo largo de la historia de la Citogenética, las técnicas para la obtención de cromosomas han ido
cambiando, pero todas estas variaciones han tenido dos fines fundamentales:
Obtener una alta frecuencia de división celular.
Conseguir una mejor visualización cromosómica.
Para poder obtener cromosomas es necesario cultivar células “in vitro”, sólo así el número de
células en división es lo suficientemente elevado.
Para el cultivo de linfocitos en medula ósea es recomendable utilizar tubos T (de base truncada
para conseguir la inclinación del cultivo y favorecer los resultados) Si no se dispone de tubos T
basta con utilizar tubos de ensayo cilíndricos y una gradilla inclinada 45º.
Muestras
• Sangre periférica
• Medula ósea
• Tumores sólidos
• Líquidos orgánicos
Obtención de la muestra
Sangre Periférica Medula ósea
SiembraSangre periférica
Médula ósea
Medio RPMI 1640 5ml.
Medio MARROW MAX 5ml.
Suero Bovino Fetal 0.5 ml.
Suero Bovino Fetal 0.5 ml.
Fitohemaglutinina 0.2 ml.
18 – 20 gotas muestra
18-20 gotas muestra.
Incubar 24 o 48 hrs. con 5%
Incubar 72 hrs con 5% CO2 a
CO2 a 37ºC
37ºC
Análisis
Se someten a las láminas envejecidas a la acción de la tripsina y coloreadas con Giemsa, para
luego ser analizadas al microscopio óptico, 100X
La dotación cromosómica normal de la especie humana es de 46,XX para las mujeres y de 46, XY
para los varones.
En el cariotipo humano los cromosomas se ordenan de mayor a menor. Hay cromosomas grandes,
medianos y pequeños. Al ordenar los cromosomas se constituyen 7 grupos atendiendo no sólo al
tamaño sino también a la forma de las parejas cromosómicas, dentro del cariotipo humano
podemos encontrar cromosomas metacéntricos (tienen los dos brazos aproximadamente iguales
Cromosomas grandes
Cromosomas medianos
Cromosomas pequeños
Por acuerdo los cromosomas sexuales X e Y se separan de sus grupos correspondientes y se ponen
juntos aparte al final del cariotipo.
Como hemos dicho anteriormente, en una dotación cromosómica normal, el grupo G consta de 4
cromosomas muy pequeños y acrocéntricos y el único cromosoma que también es pequeño y
acrocéntrico es el Y, por lo tanto una primera aproximación al sexo del individuo es contar el
número de cromosomas pequeños y acrocéntricos.
¿Hombre o mujer?.................................................................................