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UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER


FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE
PLAN DE ESTUDIOS DE INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL


DOCENTE: PAOLA ANDREA ROMÁN HERNÁNDEZ

GUÍA No 3: MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO A TRAVÉS DE DENSIDAD ÓPTICA

1. INTRODUCCIÓN

La célula bacteriana es esencialmente una maquinaria de síntesis capaz de duplicarse a sí misma.


El proceso de síntesis para el crecimiento bacteriano involucra unas 2000 reacciones químicas de
una amplia variedad. Una vez sintetizados los polímeros, el crecimiento continúa con el
ensamblaje y formación de nuevas estructuras celulares que finalizan con la división de células
hijas. En un medio apropiado físico y nutricionalmente, un cultivo se reproduce continuamente
como células vegetativas, los nutrientes absorbidos y metabolizados permiten crecer al
microorganismo.

2. OBJETIVOS

 Desarrollar la habilidad de realizar una curva de crecimiento microbiano empleando la técnica


de turbidimetría.

 Determinar el tiempo de duplicación de la bacteria, teniendo en cuenta los datos obtenidos en


el espectrofotómetro.

3. FUNDAMENTO

a) Crecimiento
Es definido como un incremento ordenado de todos los constituyentes y estructura celular. En
muchos microorganismos, este incremento continúa hasta que la célula se divide en dos nuevas
células: Fisión binaria. El crecimiento microbiano conlleva usualmente a un incremento en el
número de células. Es importante distinguir entre el crecimiento individual de células y el
crecimiento de poblaciones de células:
Crecimiento individual
Es el incremento en el tamaño y peso y es usualmente un preludio a la división celular
Crecimiento poblacional
Es el incremento en el número de células como una consecuencia del crecimiento y división celular
b) Tasa de crecimiento
Es el cambio del número de células o masa por unidad de tiempo
c) Generación
Intervalo para la formación de dos células provenientes de una.
d) Tiempo de generación
Tiempo que tarda una población en duplicarse. Se puede definir también como la cantidad de
tiempo requerida para completar un ciclo de división.
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FACTORES QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO

Factores externos
Condiciones ambientales o culturales: pH, T°, Aw, O 2, CO2
Condiciones nutricionales: Tasa C/N 10:1, 12:1
Factores internos
Capacidad metabólica

Dispersión de la Luz

Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partícula en suspensión, parte de la luz es
reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. La nefelometría mide la
luz dispersada por una solución de partículas. La turbidimetría mide la luz dispersada como un
decrecimiento de la luz transmitida a través de la solución. Con relación a la longitud de onda y al
tamaño de la partícula pueden existir tres tipos de dispersión.

Los cultivos bacterianos actúan como suspensiones coloidales absorbiendo y reflejando la luz que
incide sobre ellos, por ello, una suspensión bacteriana aparece turbia a simple vista. Dentro de un
rango, la luz absorbida o dispersada por una suspensión bacteriana es directamente proporcional
a la concentración de células en el cultivo. Por ello, un procedimiento rápido, fácil y preciso de
estimar el número de bacterias en un cultivo es la medida de turbidez. El espectrofotómetro es el
aparato que se utiliza para medir la turbidez. Este aparato proporciona luz monocromática por
medio de un filtro que permite sólo el paso de la longitud de onda elegida (normalmente las
longitudes de onda usadas para medir la turbidez bacteriana están en el rango 540 – 660 nm).

DENSIDAD ÓPTICA

La cantidad de luz incidente absorbida por una suspensión bacteriana es medida por una célula
fotoeléctrica y se expresa como absorbancia o densidad óptica. Así la absorbancia se define como
la proporción de luz incidente absorbida por una suspensión y se puede calcular como: la luz
absorbida / luz incidente.

TURBIDIMETRIA

La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de una suspensión


y cuantifica la luz residual transmitida.

Estudios teóricos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de
bacterias, independientemente del tamaño celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad
de concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es
directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamaño celular del
microorganismo.

Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC (Unidad
Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas son diferentes. Por esta
razón, para estimar el número de microorganismos totales o el número de microorganismos
viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una "curva de calibración" con cada tipo de
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microorganismo, sólo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Óptica) con el
número de microorganismos totales o con UFC.

Mediciones de absorbancia

Si medimos la absorbancia de un cultivo a distintos intervalos de tiempo, la curva relaciona los


parámetros que representa una curva de crecimiento de población bacteriana con sus distintas
fases. La primera fase se denomina fase de latencia, en la que la bacteria se adapta a las
condiciones de cultivo y el número de células no aumenta. Tras este período las bacterias
comienzan una fase de crecimiento exponencial en la que la velocidad de crecimiento es máxima y
el tiempo de duplicación constante, por lo que las bacterias en esta fase son las más indicadas
para estudios enzimáticos, estructurales, etc . Esta fase de crecimiento disminuye por algún factor
limitante. Entonces, la velocidad de crecimiento disminuye y la población comienza un período de
equilibrio que se denomina fase estacionaria, en cual se producen fenómenos tan peculiares como
la esporogésis o la producción de antibióticos. Por último, si se mantiene el cultivo durante más
tiempo en esta situación comenzará un proceso de muerte en el que número de células viables
disminuye: fase de muerte.

4. MATERIALES
 Cepa de Escherichia coli
 Caldo Nutritivo
 Espectrofotómetro
 Pipetas
 Celda para lecturas en el espectrofotómetro

5. PROCEDIMIENTO
a. A partir del agar nutritivo que tiene E coli tomar una colonia y sembrar en 200 ml de caldo
nutritivo, luego mezclar.
b. Cada media hora tomar 2 microlitros de caldo nutritivo sin sembrar y este será mi control,
luego tomar 2 microlitros de medio que contiene E coli.
c. Medir la OD a 660 nm de la muestra y registrar datos en la tabla anexa.
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PROCEDIMIENTO


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T Hora Tiempo DO Relacion N° cell Log n cells


N°cell
T0 8:30
T1 9:00
T2 9:30
T3 10:00
T4 10:30
T5 11:00
T6 11:30
T7 12:00
T8 12:30
T9 13:00
T10 13:30
T11 14:00
T12 14:30
T13 15:00
T14 15:30
T15 16:00
T16 16:30
T17 17:00
T18 17:30
T19 18:00
T20 18:30
T21 19:00
T22 19:30
T23 20:00
T24 20:30
T25 21:00
T26 21:30
T27 22:00
T28 22:30
T29 23:00
T30 23:30
T31 0:00:00
T32 0:30
T33 1:00
T34 1:30
T35 2:00
T36 2:30

Fórmula de Interpolación

Yx= y0+ . (y1-y0)


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ANÁLISIS DE RESULTADOS

De acuerdo a los datos obtenidos establecer la curva de crecimiento identificando las fases,
realizar las gráficas respectivas, y determinar el tiempo de generación o duplicación del
microorganismo.

Gráficas:
a. Tiempo vs Do
b. Tiempo vs Log n cell
c. Tiempo vs N° cell
d. Do Vs t Vs logn
e. DO Vs t Vs logn
f. logn Vs t Vs n

T de generación=

BIBLIOGRAFÍA

Cálculo de los parámetros que define el crecimiento microbiano. Disponible en


https://ocw.ehu.eus/file.php/48/Tema_4._calculo_de_los_parametros_que_definen_el_creci
miento_bacteriano.pdf
Crecimiento microbiano. Disponible en http://roberto-raul.tripod.com/crecimiento.html
Curvas de crecimiento microbiano. Disponible en https://es.scribd.com/doc/136718114/Informe-
de-Crecimiento-Microbiano-Alimentos
Gráfica absorbancia en función del tiempo. Disponible en
https://www.youtube.com/watch?v=7ZQEpj3oE-8

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