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1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. FUNDAMENTO
a) Crecimiento
Es definido como un incremento ordenado de todos los constituyentes y estructura celular. En
muchos microorganismos, este incremento continúa hasta que la célula se divide en dos nuevas
células: Fisión binaria. El crecimiento microbiano conlleva usualmente a un incremento en el
número de células. Es importante distinguir entre el crecimiento individual de células y el
crecimiento de poblaciones de células:
Crecimiento individual
Es el incremento en el tamaño y peso y es usualmente un preludio a la división celular
Crecimiento poblacional
Es el incremento en el número de células como una consecuencia del crecimiento y división celular
b) Tasa de crecimiento
Es el cambio del número de células o masa por unidad de tiempo
c) Generación
Intervalo para la formación de dos células provenientes de una.
d) Tiempo de generación
Tiempo que tarda una población en duplicarse. Se puede definir también como la cantidad de
tiempo requerida para completar un ciclo de división.
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Factores externos
Condiciones ambientales o culturales: pH, T°, Aw, O 2, CO2
Condiciones nutricionales: Tasa C/N 10:1, 12:1
Factores internos
Capacidad metabólica
Dispersión de la Luz
Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partícula en suspensión, parte de la luz es
reflejada, parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. La nefelometría mide la
luz dispersada por una solución de partículas. La turbidimetría mide la luz dispersada como un
decrecimiento de la luz transmitida a través de la solución. Con relación a la longitud de onda y al
tamaño de la partícula pueden existir tres tipos de dispersión.
Los cultivos bacterianos actúan como suspensiones coloidales absorbiendo y reflejando la luz que
incide sobre ellos, por ello, una suspensión bacteriana aparece turbia a simple vista. Dentro de un
rango, la luz absorbida o dispersada por una suspensión bacteriana es directamente proporcional
a la concentración de células en el cultivo. Por ello, un procedimiento rápido, fácil y preciso de
estimar el número de bacterias en un cultivo es la medida de turbidez. El espectrofotómetro es el
aparato que se utiliza para medir la turbidez. Este aparato proporciona luz monocromática por
medio de un filtro que permite sólo el paso de la longitud de onda elegida (normalmente las
longitudes de onda usadas para medir la turbidez bacteriana están en el rango 540 – 660 nm).
DENSIDAD ÓPTICA
La cantidad de luz incidente absorbida por una suspensión bacteriana es medida por una célula
fotoeléctrica y se expresa como absorbancia o densidad óptica. Así la absorbancia se define como
la proporción de luz incidente absorbida por una suspensión y se puede calcular como: la luz
absorbida / luz incidente.
TURBIDIMETRIA
Estudios teóricos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de
bacterias, independientemente del tamaño celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad
de concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es
directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamaño celular del
microorganismo.
Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC (Unidad
Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas son diferentes. Por esta
razón, para estimar el número de microorganismos totales o el número de microorganismos
viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una "curva de calibración" con cada tipo de
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microorganismo, sólo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Óptica) con el
número de microorganismos totales o con UFC.
Mediciones de absorbancia
4. MATERIALES
Cepa de Escherichia coli
Caldo Nutritivo
Espectrofotómetro
Pipetas
Celda para lecturas en el espectrofotómetro
5. PROCEDIMIENTO
a. A partir del agar nutritivo que tiene E coli tomar una colonia y sembrar en 200 ml de caldo
nutritivo, luego mezclar.
b. Cada media hora tomar 2 microlitros de caldo nutritivo sin sembrar y este será mi control,
luego tomar 2 microlitros de medio que contiene E coli.
c. Medir la OD a 660 nm de la muestra y registrar datos en la tabla anexa.
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PROCEDIMIENTO
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Fórmula de Interpolación
ANÁLISIS DE RESULTADOS
De acuerdo a los datos obtenidos establecer la curva de crecimiento identificando las fases,
realizar las gráficas respectivas, y determinar el tiempo de generación o duplicación del
microorganismo.
Gráficas:
a. Tiempo vs Do
b. Tiempo vs Log n cell
c. Tiempo vs N° cell
d. Do Vs t Vs logn
e. DO Vs t Vs logn
f. logn Vs t Vs n
T de generación=
BIBLIOGRAFÍA