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Artigo

A Identificação Direta Pelos Meios


Cromogênicos é Confiável a Ponto de Dispensar
as Provas Bioquímicas?
Bernardo Gabriel de Oliveira1, Carlos Augusto Albini2, Gislene M. Diógenes Botão3, Helena Homem de Mello de Souza4

1 - Curso de especialização em Microbiologia PUC - PR


2 - Professor e Mestre Universidade Federal do Paraná
3 - Hospital de Clínicas, Curitiba - PR
4 - Hospital de Clínicas, Curitiba - PR

Resumo Summary
A urocultura é a análise mais realizada em laboratórios de Urocultures are the most commonly analyses performed
Bacteriologia Clínica, uma vez que as infecções do trato uriná- in clinical bacteriological laboratories as infections of the
rio estão entre as patologias mais comuns em humanos. A meto- urinal tract are among the most frequent pathologies of
dologia tradicional empregada para o cultivo de amostras de humans. The traditional method employed for urine
urina permite identificar o patógeno em pelo menos 48 horas, specimen cultures enables the identification of the pathogen
sendo que em alguns casos quando se necessita de provas adi- within 48 hours but when additional identification
cionais de identificação, o processo pode demorar por vários examinations are required the process may take several
dias. Um sistema que simplifique o processo e utilize menor quan- days. A system that simplifies the process and utilizes a
tidade de meios de identificação, além de reduzir o tempo para smaller amount of identification mediums, as well as reduces
a liberação final do exame teria grande valor prático. A introdu- the time to complete the examination would have a great
ção de meios cromogênicos para o plantio primário de amos- practical value. The introduction of chromogenic mediums
tras de urina permite a identificação dos principais uropatóge- for the first seeding of the urine samples allows the
nos através da verificação da morfologia colonial após 18 a 24 identification of the main uropathogens through the
horas de incubação. Foram realizadas 1.409 uroculturas utili- verification of the clonal morphology after 18 to 24 hours
zando-se meio cromogênico (CPS ID 3 Biomerieux) no período of incubation. A total of 1409 urocultures utilizing
entre 21 de fevereiro e 29 de março de 2005, em um laborató- chromogenic mediums (COS ID 3 Biomerieux) were
rio privado de Curitiba, PR, sendo que 220 amostras foram po- performed in the period from 21 February to 29 March
sitivas (15,6%). Os isolados identificados presuntivamente pelo 2005 in a private laboratory in Curitiba, Brazil. Two
aspecto macroscópico das colônias foram confirmados através hundred and twenty specimens were positive (15.6%). The
de um método convencional de identificação bacteriana. Deze- isolates presumptively identified by the macroscopic
nove diferentes espécies de uropatógenos foram identificadas, appearance of the colonies were later confirmed by
sendo que a espécie prevalente foi Escherichia coli, isolada em conventional identification techniques, with Escherichia coli
138 das 220 amostras positivas (62,7%). Das E. coli isoladas, being the most prevalent, identified in 138 of the 220
9,4% (13/138) foram β glucoronidase negativas e, portanto, positive samples (62.7%). Of the E. coli, 9.4% (13/138)
não puderam ser identificadas diretamente pelo meio cromogê- were negative and therefore could not be directly identified
nico. A identificação direta pelo meio cromogênico foi confir- by the chromogenic medium. The direct identification using
mada bioquimicamente em 99,3% das amostras analisadas, com- the chromogenic medium was biochemically confirmed in
provando a sua eficácia e possibilitando ganho de tempo em 99.3% of the analyzed samples, proving its efficiency and
69,1% das culturas positivas. saving time in 69.1% of the positive cultures.

Palavras-chave: Urocultura, meio cromogênico, identifi- Keywords: Urocultures, chromogenic medium,


cação bacteriana bacteriological identification

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Introdução nal, embora em muitas situações
o tratamento empírico seja apli-

A urocultura é a análise mais


realizada em laboratórios de
cado imediatamente após a cole-
ta do material (2).
Bacteriologia Clínica, uma vez que Atualmente, existe uma nova
as infecções do trato urinário es- metodologia para a realização da
tão dentre as patologias mais co- urocultura, através de meios cro-
muns em humanos (1). mogênicos. Tais meios permitem
A metodologia empregada na a identificação direta dos princi-
maioria dos laboratórios consiste pais uropatógenos (Escherichia Figura 1. Colônias rosa e marrom
na inoculação da urina em meios coli, Proteus mirabilis e Enterococ- características de Escherichia coli e
cus spp.) em 24 horas após incu- Proteus mirabilis, respectivamente
de cultura já consagrados como o
Ágar CLED (cistina - lactose - ele- bação (3) .
trólito - deficiente), Ágar sangue A identificação presuntiva é
e MacConkey (meio seletivo para baseada nas diferentes colorações
bacilos gram negativos), com pos- das colônias bacterianas, causa-
terior identificação bacteriana ba- da pelas reações enzimáticas es-
seada em provas bioquímicas. pécie ou gênero específico com
O processo demora no mínimo substratos incorporados no meio
48 horas para identificar o pató- de cultura, necessitando apenas
geno e realizar o antibiograma. de poucas provas adicionais con-
Em alguns casos, a identificação firmatórias (2).
Figura 2. As colônias, azul turquesa
requer provas adicionais para con- (esq.) e rosa (dir.) são características de
firmação do uropatógeno, que • Escherichia coli e Proteus Enterococcus spp e Escherichia coli,
poderá adiar o laudo final para até mirabilis (Figura 1) respectivamente
72 horas. No meio cromogênico, a E.coli
Portanto, as informações par- produz uma enzima chamada de tanho oriundas da produção de
ciais possíveis de serem relatadas ß-glucuronidase, além de ser ne- desaminase no meio (Tabela 1).
com a metodologia resumem-se na gativo para ß-glucosidase. A co- Mas apenas a coloração não é su-
morfologia bacteriana, número de loração rosa já é suficiente para a ficiente, sendo necessária a de-
leucócitos e reação do nitrito sua confirmação, sem necessida- tecção do indol que deve ser ne-
(quando solicitado parcial de uri- de de nenhuma prova adicional (3) gativo para sua confirmação (3).
na com bacterioscopia pelo gram). (Tabela 1).
Muitos pacientes com infecção Já o Proteus mirabilis não pro- • Enterococcus spp (Figura 2)
urinária necessitam de tratamen- duz as enzimas ß-glucuronidase e No meio cromogênico, o Ente-
to imediato. Assim, a grande des- ß-glucosidase, a sua identificação rococcus spp produz uma enzima
vantagem da metodologia expos- ocorre devido a formação de co- chamada de ß-glucosidase, sendo
ta acha-se na demora do laudo fi- lônias de coloração marrom/cas- negativo para outra enzima, a ß-

Projeto de pesquisa apresentado à coordenação do curso de Especialização em Microbiologia da Pontifícia Universidade Católica do
Paraná, Turma 2004. Orientador: Prof. e Msc. Carlos Augusto Albini. Co-orientadoras: Especialista Gislene M. Diógenes Botão, Msc.
Helena Homem de Mello de Souza

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leituras positivas e negativas ca-
Tabela 1. Interpretação das culturas no meio cromogênico
racterizam um código que equi-
Bactéria Rosa Azul turquesa Marrom/Castanho
vale ao biotipo e percentual da
β-glucoronidase β-glucosidase Desaminase
bactéria encontrada. Quando o
Escherichia coli + - - biotipo não se aproxima dos
Proteus mirabilis - - + 100%, algumas provas adicionais
Proteus indol + são sugeridas pelo fabricante para

Morganella e - - + confirmação bacteriana.


Para a prova da lactose, neces-
Providencia
sária para complementar a iden-
Enterococcus spp. - + -
tificação bacteriana, foi utilizado
o meio Mac Conkey e o teste em
glucoronidase. Esta bactéria desen- das. As colônias com colorações tubo lactose, ambos desenvolvi-
volve colônias no meio com colora- características para as espécies dos pela Newprov.
ção azul turquesa (Tabela 1), ne- identificadas presuntivamente fo- As etapas de inoculação, incu-
cessitando apenas da realização do ram separadas para confirmação bação e leitura das provas foram
Gram da colônia. Se na microsco- e realização dos antibiogramas. realizadas conforme orientações
pia, a morfologia da bactéria for Quando a identificação presun- de Pilonetto (4). Os procedimen-
CGP, já é suficiente para confirmar tiva não era possível, a amostra tos sobre o uso do tubo lactose
sua identificação (3). era submetida à identificação bi- foram seguidos, conforme orien-
Será que a identificação dos oquímica e antibiograma. tações do fabricante.
meios cromogênicos é realmente Durante o período do trabalho, Para confirmação bioquímica
confiável em nossa realidade, a registrou-se todas as culturas po- do Enterococcus spp., utilizou-se
ponto de dispensarem as provas sitivas em planilhas contendo in- os seguintes materiais: água oxi-
bioquímicas? formações como: iniciais dos no- genada a 10 volumes (prova da
Quais as vantagens em relação mes, idade, sexo, a bactéria iso- catalase), meio de tolerância ao
a custo-benefício na sua utilização lada, biotipo, percentual, provas sal (MTS) em tubo e a prova da
em laboratórios de microbiologia? adicionais, etc. As culturas mis- bile esculina em tubo, todos de-
tas e/ou contaminadas foram con- senvolvidos pela Newprov.
Materiais e métodos sideradas negativas. A catalase sendo negativa, com
As amostras confirmadas dire- positividade para o MTS e bile es-
O estudo foi realizado no labora- tamente foram separadas e nu- culina, é suficiente para sua con-
tório Cendilab, localizado na cidade meradas para posterior confirma- firmação (4).
de Curitiba, que realiza as culturas ção bioquímica. As etapas de inoculação, incu-
de urina em meios cromogênicos. Utilizou-se para confirmação da bação e leitura das provas, também
As urinas foram inoculadas no Escherichia coli e Proteus mirabi- foram realizadas conforme orienta-
meio cromogênico CPS ID3 (Bio- lis um kit contendo cinco tubos ções de Pilonetto (4). As bactérias
mérieux) e incubadas a 37ºC por desenvolvidos pela Newprov para analisadas bioquimicamente foram
18-24 horas. As identificações fo- identificação das enterobactérias. repicadas e armazenadas em meio
ram realizadas primeiramente pelo Cada tubo propicia a leitura de gelose de conservação.
aspecto das colônias desenvolvi- algumas provas e o somatório das Informações como o total de

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culturas realizadas, o percentual de bactérias isoladas

positividade, as concordâncias en-


outras; 26
tre as identificações presuntiva e
K. pneumoniae; 4
bioquímica, juntamente com o per- E.coli
S.agalactiae; 13 P.mirabilis
centual de culturas favorecidas pela Enterococcus
identificação presuntiva e o custo ENPC; 12 ENPC
S.agalactiae
dos meios, serão utilizados para a K. pneumoniae
outras
Enterococcus; 16
conclusão da eficácia e viabilidade
E.coli; 138
no uso dos meios cromogênicos.
P.mirabilis; 11

Resultados
ENPC: Estafilococos não produtor de coagulase

No período entre 21/02/2005 Gráfico 1. Principais bactérias identificadas durante o estudo


e 29/03/2005, foram realizadas
1.409 culturas de urina no labo- bactérias cromogênicas

ratório Cendilab, sendo que 220


foram positivas (15,6%), contra Enterococcus sp. 16

1.189 (84,6%) de culturas consi-


deradas negativas.
A grande maioria dos pacien- P.mirabilis 11

tes é ambulatorial, de ambos os


138
sexos, e idade variando de recém-
E.coli
nascidos a idosos.
Das culturas positivas, foram
identificadas 19 diferentes espé- 0 20 40 60 80 100 120 140

cies de uropatógenos, sendo que E.coli P.mirabilis Enterococcus sp.

bactérias cromogênicas 138 11 16


a bactéria mais isolada entre elas
foi a Escherichia coli, identificada
Gráfico 2. Identificações do grupo das bactérias cromogênicas
em 138 / 220 ou 62,7% dos ca-
sos (Gráfico 1). E. coli isoladas

Somando o total de achados 125

entre Escherichia coli (138), Pro-


140

teus mirabilis (11) e Enterococcus


120

sp.(16), obteve-se 165/220


100

(75%) de todas as culturas posi- 80


frequência
tivas no laboratório (Gráfico 2). 60
rosas
As colorações características 40

13
para a identificação direta no meio 20

incolores
cromogênico foram observadas em 0
Gráfico 3. Comparação
1
todas as amostras de Proteus mi- coloração entre as E. coli rosas e
incolores
rabilis e Enterococcus spp. rosas incolores encontradas

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No entanto, 13 colônias de Es- bactérias identificáveis

cherichia coli 13/138 (9,4%) apre- 160 152

sentaram-se incolores, impossibi-


140

litando sua identificação cromogê- 120

nica. Nesse caso, necessitou-se 100

das provas bioquímicas para iden- 80

tificá-las (Gráfico 3). 60

Entre as colônias incolores iden- 40

tificadas bioquimicamente, curio- 20


13
samente, em sete ou 53,8% de- 0
Gráfico 4.
1 Resultados obtidos
las, encontrou-se o mesmo bioti- Coloração característica bactérias
incolores identificáveis das bactérias
po 2961. Foram testadas bioqui- discrepante identificáveis direta-
micamente 153 culturas identifica- Coloração característica incolores discrepante mente no meio
bactérias identificáveis 152 13 1
cromogênico
das diretamente, resultando em
152 confirmações e uma discre-
Resultados finais
Resultados finais
pância (99,3% de concordância). 68

A discrepância ocorreu com 152

uma bactéria que produziu a en-


zima ß-glucoronidase, apresen-
tando coloração semelhante à ca- negativas
racterística para Escherichia coli identificadas diretamente
necessidade de provas bioquimicas
(Figura 3).
Nas provas bioquímicas resultou
no biotipo 2931, com 9,74% de
1189
possibilidade para essa bactéria.
Realizaram-se as provas adicionais: Gráfico 5. Resultados finais dos procedimentos adotados nas amostras de cultura
sorbitol, VP (Voges-Proskauer) e de urina, realizados durante o período do estudo
rafinose. Os resultados foram posi-
tivos em todos os testes, caracte- rizando bioquimicamente a bacté- nose -), confirmaram a bactéria
ria como Enterobacter sp. como Escherichia coli.
A amostra foi encaminhada As provas adicionais foram re-
para o Hospital de Clínicas de Cu- alizadas quando o percentual
ritiba, visando à realização de uma para a bactéria pesquisada ocor-
terceira metodologia para confir- resse abaixo de 50%. Além dos
mação de sua identificação. dois casos citados, foram reali-
O laudo final resultou em En- zados também em outros dois.
terobacter sp., biotipo 2933, con- No primeiro, o biotipo encontra-
firmando a sua discrepância. O do foi o 2661, com compatibili-
mesmo biotipo foi encontrado em dade para E. coli de 46,34%. As

Figura 3. Foto da amostra com outra amostra, porém, as provas provas realizadas foram: t-j e
identificação discrepante adicionais (sorbitol + , VP - e rafi- sorbitol, com resultado positivo

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em ambos os testes, confirman- realizada em 152 amostras, en- ras auxilia o clínico na escolha do
do a bactéria. quanto necessitou-se de provas medicamento. Porém, em labora-
Outra confirmação realizada na bioquímicas em 68 amostras do tórios ambulatoriais, essa vanta-
amostra de biotipo 8631, com total de 1.409 culturas realizadas gem não é relevante, pois os pa-
10,6% para Proteus mirabilis e con- no laboratório durante o período cientes só retornam para retirar o
firmado com as provas arabinose e estudado (Gráfico 5). laudo quando o resultado do anti-
manitol, resultando negativo. biograma, que demora no míni-
Resumidamente, das 166 amos- Discussão mo 48 horas, estiver pronto, ou,
tras encontradas no meio cromogê- quando houver reconsultas que
nico como pertencentes às bactéri- O presente estudo demonstrou geralmente são marcadas em in-
as identificáveis diretamente, 13/ que 220/1.409 (15,6%) do total tervalos de tempo maiores.
166 (7,8%) apresentaram-se inco- de culturas de urina realizadas Então, a grande vantagem des-
lores e 01/166 (0,6%) não foi con- foram positivas. Percentual razo- sa metodologia, nesse caso, está
firmado bioquimicamente (Gráfico ável quando relacionado a um la- no ganho de tempo em bancada
4). A identificação direta ocorreu em boratório de microbiologia que pelo profissional do laboratório.
152/166 (91,5%) dos casos. atende pacientes ambulatoriais na Uma desvantagem encontrada
Comparada com o total de cul- sua grande maioria. na identificação direta é a impos-
turas positivas, a identificação di- Outro dado importante é o nú- sibilidade de dados adicionais
reta foi satisfatória em 152/220 mero de culturas positivas identi- como o biotipo da bactéria, que
(69,1%) das identificações. ficadas diretamente pelo meio cro- em certas ocasiões pode ser im-
As identificações realizadas no mogênico, 152/220 (69,1%). Re- portante, como na pesquisa de
restante das culturas positivas fo- sultados semelhantes foram en- surtos de infecções hospitalares
ram apenas registradas em plani- contrados por Scarparo (68,8%) e ou no diagnóstico de infecções
lhas, pois pertencem às bactérias Chaux (60,3%), sendo o último re- sucessivas no mesmo paciente.
que necessitam das provas bio- alizado com pacientes exclusiva- As colônias identificadas dire-
químicas mesmo utilizando mei- mente hospitalares. tamente foram confirmadas pelas
os cromogênicos. O laboratório necessitou utili- provas bioquímicas em 99,3% ou
Todas as bactérias identifica- zar provas bioquímicas em 30,9% 152/153 dos casos, resultado que
das como ENPC (estafilococos não (68/220) das amostras positivas. comprova a eficácia da identifica-
produtores de coagulase) foram É evidente que um sistema no qual ção do meio.
submetidas ao teste da novobio- houvesse simplificação de técni- O fabricante estima um per-
cina e, curiosamente, nenhuma cas e redução da quantidade de centual de Escherichia coli não
amostra foi compatível a Sta- meios de identificação seria de produtoras de ß-glucoronidase,
phylococcus saprophyticus. inegável valor prático (6). em torno de 5-7% (CPS ID2 -
Assim, a identificação direta foi A identificação direta em 24 ho- Agar, 2002, 01). Porém, o per-

Tabela 2. Valor pago nos meios por cultura, pelo laboratório Cendilab
Meio cromogênico Biplaca cled/cled Kit para enterobactérias Mão-de-obra
(2 testes/placa) por minuto

R$ 2,28 R$ 1,80 R$ 3,51 R$ 0,26


OBS: os valores são referentes às notas emitidas pelos fabricantes. Foram relatados por unidade.

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Tabela 3. Comparação de custos entre as metodologias
Custos Negativas Positivas Positivas Mão-de-obra Total
em Reais (1189) EP* com provas (1393)
(136) (68)

Metodologia R$: 1070,10 R$: 599,76 R$: 61,20 R$ 525,38 R$: 2.256,44
tradicional 47,42% 26,58% 2,72% 23,28%

Metodologia R$: 1355,46 R$: 155,04 R$: 77,52 R$ 416,58 R$: 2.004,60
cromogênica 67,62% 7,74% 3,86% 20,78%
EP*: somente E. coli e P. mirabilis identificados diretamente pela metodologia cromogênica.
Positivos com provas: demais bactérias com necessidade de provas bioquímicas em ambas metodologias. Obs: os valores das provas utilizadas não
foram incluídos, pois são os mesmos. Sendo apenas somados os valores dos meios de cultivo.

centual encontrado 13/138 nesses estudos foi o CPS ID2, en- fica como sugestão o uso do teste
(9,4%) foi superior ao estabele- quanto no presente trabalho foi do indol mesmo no meio CPS ID3.
cido. Resultados semelhantes fo- utilizado o CPS ID3. A diferença Avaliando o custo de ambas
ram encontrados por Scarparo entre eles é que o CPS ID2 re- metodologias utilizadas no labo-
(43/429 ou 10%). comenda confirmação da Esche- ratório em estudo, observa-se
Embora isolados com menor richia coli pelo teste do indol, uma redução de 11,16% dos
freqüência, tanto o Proteus mira- enquanto o CPS ID3 dispensa meios cromogênicos em relação
bilis (11) como Enterococcus spp. esse procedimento, garantindo aos meios tradicionais (CLED/
(16) foram identificados direta- a identificação apenas pela colo- CLED e provas bioquímicas) (Ta-
mente e confirmados bioquimica- ração da bactéria. belas 2 e 3). A mão-de-obra foi
mente em todos os casos. No es- As bactérias citadas produtoras considerada em relação ao piso
tudo realizado por Scarparo, a de ß-glucoronidase, incluindo o En- salarial + encargos do respon-
identificação direta dessas bacté- terobacter sp. encontrado nesse sável técnico
rias também ocorreu em 100% dos estudo, são indol negativos. Os valores para Enterococcus sp.
casos, com 61 amostras de Pro- O teste do indol é importante na não foram calculados devido a sua
teus mirabilis e 213 de Enterococ- distinção entre Proteus mirabilis e baixa ocorrência, não influencian-
cus spp. demais espécies de Proteus e, tam- do no resultado final.
Bactérias como o Enterobacter bém, na distinção entre Escherichia
sp. produtor de ß-glucoronidase, coli e bactérias dos gêneros Klebsi- Conclusão
Conclusão
apresentando colônias rosas no ella e Enterobacter (6).
meio cromogênico, semelhante à Conforme relatado acima, a pro- A identificação direta pelo meio
coloração característica da Escheri- dução da enzima ß-glucoronidase cromogênico foi confirmada bioqui-
chia coli, também foram relatados não ocorre apenas em Escherichia micamente em 99,3% das amos-
em outros estudos: Salmonella spp., coli. Portanto, como apenas a colo- tras analisadas, comprovando a
Citrobacter freundii e Shigella son- ração rosa proveniente da produção sua eficácia e possibilitando gan-
nei (2), Salmonella spp., Citrobac- dessa enzima, embora raramente, ho de tempo em 69,1% das cultu-
ter freundii, Shigella sonnei e Ente- gera riscos na interpretação da bac- ras positivas.
robacter sp. (5) e Enterobacter clo- téria isolada e 96,4% (133/138) das Com isso, possibilita o profis-
acae e Citrobacter sp. (7). Escherichia coli identificadas no es- sional do laboratório a finalizar
O meio cromogênico utilizado tudo (anexo 1) são indol positivas, mais rapidamente as culturas de

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fácil identificação, podendo dedi- à colônias incolores e produção de tivo. Cada laboratório deve fa-
car-se com maior tranqüilidade ß-glucoronidase por diferentes zer um levantamento de sua ro-
em outras atividades. bactérias. tina e dos preços oferecidos pe-
O percentual de Escherichia coli Concluiu-se que a retirada da los meios para concluir a viabili-
com colônias incolores identifica- prova do indol pelo CPS ID3, ape- dade do seu uso.
do, foi próximo ao encontrado em nas potencializa a possibilidade de
outros estudos, onde se utilizou erro na identificação. Porém, no Agradedcimentos
uma versão anterior do mesmo laboratório em estudo, mesmo • Laboratório Cendilab, empre-
meio cromogênico. Ambos os re- com percentual de Escherichia coli sa filiada ao grupo Clinihauer
sultados foram praticamente o do- de colônias incolores alto, o seu • Hospital de Clínicas de Curitiba
bro do estipulado pelo fabricante. uso torna-se viável, pois reduz • Newprov, produtos para la-
As mudanças entre as versões custos e tempo. boratórios
dos meios cromogênicos não fo- Em laboratórios menores, o
ram vantajosas na identificação da custo dos meios cromogênicos Correspondência para:
Escherichia coli, pois observou-se inviabiliza seu uso e o ganho de Bernardo Gabriel de Oliveira
os mesmos achados com relação tempo também não é significa- E-mail: begaoli@hotmail.com

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