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UNIVERSIDAD SIMÓN BOLÍVAR

COORDINACIÓN DE BIOLOGÍA

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA CELULAR

SEMINARIO

Las Mucinas de Trypanosoma cruzi

Realizado por:

Marielys Laurens
 Resumen
Trypanosoma. cruzi es el agente etiológico de la Enfermedad de Chagas.
Trypanosoma cruzi expresa en su superficie una gran cantidad de glicoproteínas tipo
Mucinas. Las mucinas de T. cruzi (TcMUC), son un grupo de proteínas altamente
glicosiladas ricas en residuos Thr, Ser, y Pro, que se expresan en alto número de copias
en ambos hospedadores (el insecto y los mamíferos) del parásito. Estas moléculas son
codificadas por una familia de multigenes y presentan un único tipo de glicosilación (O-
glicosilación). Al ser altamente variables impiden que el sistema inmune reaccione
fuertemente contra el parásito, logrando que la respuesta no sea única y destruya
definitivamente al parásito. Pero las mucinas no solo protegen al parásito del ataque de
los anticuerpos, sino que le sirven también para relacionarse con otras células sanas del
organismo, permitiendo la invasión. Distintos estudios demuestran que las mucinas
presentan la habilidad para inducir secreción de citocinas pro-inflamatorias y oxido
nítrico en macrófagos activados.

Continúa existiendo un importante desconocimiento de aspectos básicos de la

patogenicidad y virulencia de T. cruzi, principalmente relacionados con la interacción
parásito-hospedador y, en particular, con respecto al desarrollo de la respuesta inmune y
a los eventos que conducen a las diferentes manifestaciones crónicas de la enfermedad.
La idea de esta revisión bibliográfica es investigar el papel de las mucinas de T. cruzi e
intentar dilucidar si ellas intervienen en la inmunogenicidad, y la invasión por T. cruzi y
enfocar posibles blancos de ataque para desarrollo de vacunas o métodos nuevos de
diagnostico en la fase temprana de la enfermedad. El hecho de que estos compuestos
glicosilados estén distribuidos a lo largo de toda la superficie del parásito nos permite
concluir que estos compuestos son una forma de modular la respuesta inmune, y por
ende son de gran importancia para la supervivencia del parasito y el proceso de
invasión.

Por lo tanto se podrían utilizar como blancos para impedir el proceso de

invasión, un posible blanco seria atacar las trans-sialidasas que transfieren el acido
siálico que es necesario para el reconocimiento, bloqueando de ese modo la invasión.
Como ya esta reportado una respuesta antigénica hacia dichos compuesto pueden ser

2
utilizados para el desarrollo de anticuerpos que puedan ser utilizados en el diagnostico
de la enfermedad en etapas tempranas.

Tabla de Contenido

Resumen ............................................................................................2

Tabla de Contenido................................................................................3

1. Introducción ................................................................................4

2. Moléculas de superficie tipo Mucinas de T. cruzi ....................................5

3. Diversidad Genética y expresión de las Mucinas de T. cruzi ........................ 6

4. Papel de la Mucinas en la invasión por T. cruzi .......................................8

5. Inmunogenicidad de las TcMUC de Trypanosoma cruzi ............................. 11

Conclusiones ......................................................................................13

Bibliografía ........................................................................................15

Anexos .............................................................................................19

3
 1. Introducción

El Trypanosoma cruzi es un Kinetoplastida hemoflagelado que causa la enfermedad de

Chagas, una de las más importantes patologías endémicas en América 1, 2, 3 . Es una
enfermedad aguda que puede ser letal, esta enfermedad involucra una fase crónica, en la
que un 25 a 30% de los casos sufren debilidad severa y finalmente la muerte. Existe un
estimado de que al menos 16 a 18 millones de personas están infectadas en América
Central y del Sur, con un aproximado de 21.000 casos de muerte al año4. No se han
podido desarrollar vacunas efectivas contra la enfermedad, y además es crítico el no
tener un método de diagnostico en fase temprana y un tratamiento realmente efectivo.
La estrategia de control involucra la prevención de la transmisión del parásito y
eliminación del insecto vector. T. cruzi es digenético, ya que su ciclo de vida se alterna
entre un invertebrado y un vertebrado5.

Estudios realizados utilizando distintas técnicas y marcadores moleculares proveen

evidencias de que T. cruzi se divide en dos subgrupos altamente divergentes, designados
como linajes 1 y 2.42 El linaje 1 es predominante en el ciclo domestico mientras que el
linaje 2 está mayoritariamente representado en el ciclo selvático.

El hospedador vertebrado se infecta con tripomastigotes metacíclicos, provenientes de

las heces del hospedador invertebrado. Estos tripomastigotes penetran activamente
células del sistema inmune y se transforman en amastigotes que se multiplican
repetidamente por fisión binaria originando un gran número de tripomastigotes los
cuales destruyen el quiste formado en la célula hospedadora y quedan en libertad para
invadir el torrente circulatorio, desde donde penetran las células blanco especificas5,6,7
(ver anexos, Fig. 1). El parásito tiene en su superficie una serie de moléculas que le
permiten interactuar, reaccionar y censar las condiciones del medio, es decir, el
organismo del hospedador.

Como ante todo agente extraño, el sistema inmunológico produce una rápida respuesta,
y en un primer momento controla la infección. Se logra un equilibrio por el cual el
parásito vive intracelularmente, generando una respuesta inmunológica que protege al
hospedador. Por otra parte, en la superficie del Trypanosoma cruzi existe una serie de

4
moléculas llamadas mucinas, que se sitúan una al lado de la otra y cubren totalmente el
parásito1,8,9,10,11,12,13. Las mucinas están involucradas en la protección del parásito ante el
ataque de los anticuerpos, y le sirven también para relacionarse con otras células sanas
del organismo. Cuando el Trypanosoma entra en contacto con moléculas de la
superficie de la célula elegida, éstas provocan una reacción que permite la invasión.
Para que la cubierta de mucinas pueda proteger, interaccionar con otras células e
invadir, es necesario otro elemento: el ácido siálico (AS), un azúcar tomado del huésped
a través de la trans-sialidasa (TS) especifica presente en la superficie del parásito,
6,14,15,16,17,18.

Como se planteo anteriormente no se han podido desarrollar vacunas efectivas contra la

enfermedad, y no se tiene un método de diagnostico en fase temprana y un tratamiento
realmente efectivo, por lo que dicha revisión nos ayudará a enfocar o visualizar si
dichas mucinas pueden ser tomadas como blanco para vacunas o métodos de
diagnostico.

2. Moléculas de superficie tipo Mucinas de T. cruzi

T. cruzi presenta una amplia gama de familias de moléculas de superficie como TS,
mucinas, MASP y la familia de proteasas gp63, que son codificadas por cien genes del
genoma de T. cruzi 19. Estas moléculas están generalmente ancladas a la capa de fosfo-
lípidos mas externa de la membrana plasmática del parásito por un
glicosilfosfatidilinositol 1,2,21(GPI) debido a una modificación post-traduccional.20

La principal glicoproteína de superficie de T. cruzi son las proteínas tipo mucinas. Las
mucinas representan una gran familia (863 miembros) que puede ser subdividida en dos
sub-familias. Los 19 miembros de la sub-familia TcSMUG son relativamente
homogéneos, y se expresan en los epimastigotes presentes en el insecto vector. La más
grande sub-familia TcMUC es expresada en el mamífero, y contiene 844 miembros19.
Como se observa en los anexos Fig. 1 cada familia de mucina se expresa dependiendo
del hospedador y de la forma del parásito presente, mostrando una alta variabilidad13.
Estas glicoproteínas, normalmente muestran polimorfismo en extensas secuencias y
expresión estado especifico. 23

5
La mucinas se caracterizan por ser unos glicoconjugados que incluyen un alto contenido
de aminoácidos hidrofílicos (treonina, serina, lisina y glicina), glicosilación del tipo O,
y ácido siálico, que son las características que definen las mucinas de mamíferos14. El
centro polipeptidico de estas glicoproteínas es de 50-200 aminoácidos den longitud, y
los residuos de serina y treonina, son sitios aceptores para la adición de oligosacaridos
tipo O. La más relevante característica estructural es que sus glicanos se unen a los
residuos tre/ser en el centro polipeptidico vía N-acetilglucosamina (GlcNAc) parecido a
la N-acetilgalactosamina usualmente encontrada en las mucinas de vertebrado1.

Como se mencionó anteriormente las mucinas de T. cruzi son aceptores de acido siálico
vía una reacción trans-sialidasa22 que puede usar diferentes donadores a2,3-sialylated.
El epimastigotes y tripomastigotes metacíclicos los aceptores de ácido siálico son
mucinas en un rango de tamaño de 35-50 KDa y en el caso de los tripomastigotes
derivados de células el ácido siálico es transferido a glicoproteínas de masa molecular
entre 60 a 200 KDa 6,23.

Otra de las muchas diferencias encontradas en las mucinas en las distintas formas del
parásito esta dada por el fosfatidilinositol (PI) del GPI de anclaje a la membrana. El GPI
presente en epimastigotes contiene 1-O-(C16:0)alcalil-2-O-(C16:0)acilglicerol-3-
fosfo-1-myo-inositol; el GPI de los metacliclicos esta predominantemente formado por
diferentes especies de fosfoceramida-inositol; El PI del GPI de los tripomastigotes
derivados de células están constituidos por cadenas de alcalyacil-glicerol, conteniendo
muchos ácidos grasos insaturados (C18:1 o C18:2) 1,10,24,26(ver anexo, Fig. 2).

3. Diversidad Genética y expresión de las Mucinas de T. cruzi

En T. cruzi son las proteínas tipo mucinas, las proteínas de superficie mas abundantes ya
que ellas representan una gran familia (863 miembros) que se subdivide en dos sub-
familias: TcSMUG y TcMUC. Los 19 miembros de la sub-familia TcSMUG son
relativamente homogéneos, los genes están principalmente arreglados en tándem en el
genoma del parásito, y se expresan en los epimastigotes presentes en el insecto vector.
La más grande sub-familia TcMUC es expresada en el mamífero, y contiene 844
miembros19.

6
La sub-familia TcSMUG está dividida en dos grupos (Small y Large) de acuerdo al
tamaño de su RNAsm codificados25. El producto del gen del grupo S es mayormente
expresado en los epimastigotes presentes en el insecto, y codifican un gran parte de las
mucinas que cubren la superficie del parasito con un tamaño entre 35-50 KDa. La
expresión del grupo L no se está bien demostrado in vivo (ver anexo, tabla 1). La
expresión de los genes de TcSMUG está regulada post-transcripcionalmente por un
motivo rico en AU presente en la región no traducida 3’ (3’UTR) que se encarga de
reclutar proteínas que modulen la estabilidad y traducción eficiente de sus RNAsm
específicos25.

Los miembros de la sub-familia TcMUC presentan un N- y C-terminal conservado

codificado por una señal de importe al retículo endoplasmático y una señal de anclaje
(GPI), respectivamente. Adicionalmente las TcMUC se agrupan según si su dominio
central está compuesto por repeticiones en tándem con una secuencia consenso T8KP2
(TcMUC I) o una secuencia variable sin repeticiones en tándem (TcMUC II)6,12,27(ver
anexo, Tabla 1).

Los productos de los genes de las TcMUC I tienen un dominio pequeño de 7-18 aminos
ácidos de longitud, localizados entre el péptido señal y la secuencia repetida, que es
hipervarible (HV) en los diferentes miembros del grupo. Los productos maduros de
TcMUC I son altamente glicosilados en la región que contiene los repetidos en tándem
y la región HV es conservada pudiendo ser reconocida por sueros infectados.18

Las TcMUC II es un grupo heterogéneo de genes que se transcriben en todos los

estadios del desarrollo del parásito. La región variable está compuesta de un dominio
central.18,43

La alta variabilidad presente en los miembros de las mucinas, se restringe a la región

hipervariable en el grupo TcMUC I y al dominio central en las TcMUC II por
mecanismos aun no definidos.18

Al igual que las mucinas otras glicoproteínas son expresadas en la superficie, entre ellas
las TS. En los estadios del parasito que se expresan las TS, las mucinas son sialidadas,
confiriéndole una gran carga negativa a la superficie del parasito15 de hecho se ha

7
propuesto que los genes de las TcMUC y los de las TS están organizados juntos en el
genoma.

Recientes análisis del genoma revelan otra familia de genes ligados a los genes TcMUC
II. Esta familia codifica pequeñas proteínas de superficie unidas a GPI denominadas
MASPs (proteínas de superficie asociadas a mucinas) que presentan similitudes
estructurales a las proteínas TcMUC II19,28, estas proteínas se habían reportado gracias a
las secuencias anotadas en el proyecto genoma de T. cruzi, sin embargo ya se conoce un
miembro de esta familia que se transcribe en T. cruzi tanto en la forma epimastigota
como tripomastigota45 .

La gran diversidad genética encontrada en las mucinas se debe en gran parte a la

presencia de mutaciones puntuales, pequeñas deleciones, e inserciones en la región de
las repeticiones en el caso de las TcMUC I y en el dominio central en el caso de las
TcMUC II.6

4. Papel de la Mucinas en la invasión por T. cruzi

El establecimiento de la infección por T. cruzi, depende de una serie de eventos que

involucran interacciones de diversas moléculas del parásito con componentes del
hospedador,29 y la activación de señales de calcio.30

Como se menciono anteriormente en el insecto vector se presentan dos formas del

parasito, epimastigotes y tripomastigotes metacíclicos, en ambas formas las mucinas
presentan idéntica composición de amino ácidos, composición de carbohidratos y
estructura. La única diferencia entre epimastigotes y tripomastigotes metacíclicos reside
en el GPI.11

La familia TcSMUG parecen tener un papel protectivo contra las proteasa presentes en
el tracto intestinal del insecto, especialmente en la forma epimastigota.31Los residuos de
SA no parecen intervenir en el papel protectivo debido a que en el insecto están presente
sialidasas que remueven los residuos de SA presente en la superficie del parásito.32

8
Yoshida et al (1997) demostraron mediante experimentos de invasión con formas
sialidadas y desialidadas de tripomastigotes metacíclicos, que el SA presente en la
superficie del parásito no es requerido para la invasión de células de mamíferos no
fagocíticas, observándose un aumento en la invasión en aquellas formas desialidadas.

Por su parte las mucinas presentes en los estadios desarrollados en el insecto son
resistentes a proteasas confiriéndole al parasito la habilidad de sobrevivir a bajos pH y a
las enzimas proteolíticas presentes en la secreción gástrica.

Los tripomastigotes metacíclicos, expresan en la superficie una glicoproteína tipo

mucina de 35/50 KDa, que está presente en distintas cepas de T. cruzi de diferentes
regiones31 y se sabe está involucrada en la invasión de células de mamíferos por parte
de los tripomastigotes metacíclicos.

No está bien definido cual es la porción de la gp35/50 que está relacionada con el
reconocimiento de las células blanco, pero se cree que puede ser la parte del enlace de
carbohidratos ya que es reconocido por anticuerpos monoclonales (10D8), el cual está
comprobado inhibe significativamente la entrada de esta forma del parásito.29

Adicionalmente a la gp35/50, en las formas tripomastigotes metacíclicos se han

encontrado otras glicoproteínas, gp90 y gp82, que también intervienen en la invasión
por parte del parasito.33

Tanto gp90, gp82 y gp35/50 son capaces de unirse a las células blanco de una manera
mediada por receptores e inducir en esas células un incremento en la [Ca2+], un evento

que es requerido para la internalización del parásito.34 Como la respuesta a Ca2+ no es

detectable en epimastigotes, cabe la posibilidad de que la naturaleza de las cadenas de
lípidos del GPI pueda estar influenciando la interacción con los componentes de la
membrana plasmática asociados con las moléculas aguas abajo de la cascada de
señalización, en ambos, parásito y célula hospedadora.1

La invasión de las células en el hospedador vertebrado por los tripomastigotes requiere

el contacto de ligandos del parasito con receptores que median endocitosis en la célula
del hospedador. Esta interacción se ha estudiado por infecciones de cultivos de células,

9
observándose que el reconocimiento esta mediado igualmente por una familia de
glicoproteínas de la superficie del parásito.

La cubierta de mucinas de los tripomastigotes derivados de células (tGPI-mucins) están

compuestas por una mezcla indefinida de moléculas con un rango de 60 a 220 KDa6,23 y
ellas comparten un epítope que contiene acido siálico Ssp-3, que es crucial para la unión
e invasión de células mamíferos. 14

En el caso de las mucinas expresadas en el hospedador vertebrado, se ha comprobado

que necesitan los residuos de AS para mediar el reconocimiento, y que en este
reconocimiento interviene la actividad trans-sialidasa, ya que se conoce está implicada
en facilitar la ruptura de la vacuola parasitofora, derivada del lisosoma, por la liberación
del SA de las proteínas de membrana.36 También se ha demostrado que muchas de estas
glicoproteínas activan señalización dependiente de PI-3quinasa en la célula hospedadora
para promover su invasión y sobrevivencia.

Pereira et al (1996)44 reporta el efecto de la trans-sialidasa en la invasión. Encontraron

que cuando en la superficie de las glicoproteínas hay residuos SA se ve favorecida la
interacción e invasión.

Se sabe que tanto las mucinas como las trans-sialidas intervienen en la interacción con
el hospedador porque el uso de anticuerpos directos contra ambas inhiben la entrada del
parasito en estudios in vivo.17,26

Al igual que en las TcSMUG las TcMUC aparentemente cumplen un papel protectivo en
las formas presentes en el hospedador vertebrado. Ya que se ha comprobado que una
efectiva sialidación le confiere una carga negativa a la superficie del parasito. Se cree
que esta carga negativa puede proteger de la lisis independiente del complemento
inducida por los anticuerpos anti α –galactosil.35

Poco se conoce sobre sobre la estructura O-oligosacaridos de las mucinas, pero se sabe
que las mucinas derivadas de tripomastigotes derivados de células portan un epítope
terminal Gal(α1,3)Gal que es un blanco de respuesta a anticuerpos en pacientes
Chagasicos.35

10
Loa anticuerpos anti-gal chagasicos, se encargan principalmente de desestabilizar la
membrana del parasito y así mediar la lisis del parasito, un fenómeno que puede ser
evitado por la transferencia de residuos de AS a las glicoproteínas de superficie.8

Análisis por espectrometría de masas (MS) del tGPI de las mucinas permiten detallar las
características del GPI, oligosacaridos y regiones peptidicas.9,37 La región de lípidos de
unión es un alcilacilglicerol que, a diferencia de las mucinas presentes en el insecto
contiene muchos ácidos grasos en el enlace de glicerol. Estas diferencias han sido
relacionadas con la capacidad del GPI de las mucinas de tripomastigotes de inducir una
respuesta proinflamatoria.37

5. Inmunogenicidad de las TcMUC de Trypanosoma cruzi

Durante la infección por T. cruzi, la inducción de inmunidad mediada por células (CMI)
específica para el parásito está probablemente comprometida en al menos dos aspectos
de la patofisología de la Enfermedad de Chagas.38 Lo primero es el control de la
replicación del parásito y su propagación en los tejidos del hospedador vertebrado, y lo
segundo es la reacción inflamatoria observada en los tejidos infectados del huésped.

Se conoce muy poco acerca de las moléculas parasitarias que inician la síntesis de
citocinas pro-inflamatorias y oxido nítrico (ON) por los macrófagos.39 Recientes
estudios sugieren que la molécula que causa dicha respuesta es el GPI presente en las
glicoproteínas de superficie principalmente en las mucinas.

Almeida et al (2000) reporta la habilidad del GPI de las mucinas de tripomastigotes,

pero no de epimastigotes y metacíclicos, de producir síntesis de factor de necrosis
tumoral (TNF)-α, IL-12 y ON por macrófagos de ratón. Ellos sugieren que el GPI de
tripomastigotes se une a un receptor en el macrófago que provoca una señalización
transmembrana y la subsiguiente transcripción de los genes que codifican ciertas
citocinas y ON.

11
Actualmente se conoce que la producción de citocinas y ON liberados por macrófagos
se debe a la interacción del GPI con TLR2.40 TLR2 pertenece a la familia TLR que son
receptores de membrana tipo I.41

Existe otra molécula antigénica presente en la superficie de los tripomastigotes

derivados de células que presenta características similares a las TcMUC, esta molécula
fue denominada TSSA (por trypomastigote small surface antigen).

TSSA es codificada por un gen copia única y codifica un pequeño polipéptido que no
posee regiones ricas en treonina, pero presenta sitios putativos de glicosilación, el
péptido señal y el GPI característicos de las TcMUC.2

Análisis genómicos del locus tssa revelan la existencia de dos alelos que codifican para
dos distintas formas de la proteína. Interesantemente, la distribución de estos alelos
corresponde con los dos mayores linajes propuestos para la especie. Di Noia et al
(2002) reporta a TSSA como el primer marcador inmunológico capaz de discriminar
entre los dos linajes.

12
Conclusiones

El Mal de Chagas es una parasitosis que afecta a toda América latina y es causada por
un parásito el Trypanosoma cruzi, él cual tiene en su superficie una serie de moléculas
que le permiten interactuar, reaccionar y censar las condiciones del medio, es decir, el
organismo del hospedador. Actualmente la estrategia de control involucra la prevención
de la transmisión del parásito y eliminación del insecto vector. No se han podido
desarrollar vacunas efectivas contra la enfermedad, además es crítico el no tener un
método de diagnostico en fase temprana y un tratamiento realmente efectivo.

Debido a que las mucinas, son las mayores moléculas de superficie presentes en el
parásito, y se ha demostrado que son reconocidas por las células del hospedador gracias
al AS, es que se ha hecho cada vez más importante estudiar los genes que codifican los
elementos que están en la superficie, para poder comprender los factores que permiten
al T. cruzi interaccionar con el hospedador.

La mucinas se caracterizan por ser unos glicoconjugados que incluyen un alto contenido
de aminoácidos hidrofílicos (treonina, serina, lisina y glicina), glicosilación del tipo O,
y ácido siálico, que son las características que definen las mucinas de mamíferos.

Las mucinas son altamente variables los que nos hace pensar que pueden ser una forma
de evadir o modular la respuesta inmune del hospedador. Tal como lo hace la

13
Leishmania mediante sus moléculas de superficie (VSG). Por lo tanto las moléculas de
superficie del parásito son de gran importancia para la supervivencia e invasión.
Durante el proceso de invasión los residuos de AS en las TcMUC son importantes para
que ocurra el reconocimiento por parte de la célula hospedadora y a la vez para
protegerse de la respuesta inmune. Mientras que en las TcSMUC los residuos de SA no
juegan ningún papel protectivo ya que son removidas de la superficie por acción de las
sialidasas presentes en el insecto. Por lo tanto en el caso de los humanos las trans-
sialidasas serían un buen blanco de ataque para impedir la invasión y bloquear así el
ciclo del parásito.

El hecho de que una de estas proteínas tipo mucina se transcriba en T. cruzi y no en T.

rangeli nos da la posibilidad de poder tener una herramienta de diagnostico diferencial,
ya que en nuestro país es un problema a la hora del diagnostico la reactividad cruzada
con Leishmania y T. rangeli.

Por último las mucinas junto con las demás glicoproteínas de superficie, son
importantes en la interacción con ambos hospedadores, por lo tanto si logramos
bloquear su síntesis o su transcripción podemos controlar la interacción con los
hospedadores.

14
Bibliografía

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Anexos

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 Fig. 1. Ciclo de vida del T. cruzi y la variación en las mucinas de superficie. Tomado de Buscaglia et

al.2006.

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Fig. 2. Representación esquemática del GPI de las mucinas en los diferentes estados del ciclo de
vida. (A) Epimastigotes; (B) Tripomastigotes metacíclicos; (C) Tripomastigotes derivados de células.
Tomado de Acosta-Serrano et al. 2001.

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Tabla 1. Características de las familias de genes tipo mucina de T. cruzi. (A) amastigotes, (T)
tripomastigotes derivados de células, (E) epimastigotes, (SP) péptido señal, (HV) región hipervariable,
(Thr-rich) rico en treonina. Tomado de Buscaglia et al.2006.

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