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de Ciencia y Técnica
Secretaría General de Ciencia y Técnica Nº de Presentación:
Fecha de Presentación:
CARATULA DE PROYECTO
Denominación del Proyecto (En lo posible no superar 120 caracteres)
Aislamiento y Caracterizacion de Celulas Madres Mesenquimales de la Pulpa Dental de Terceros Molares
Superiores Incluidos.
Demandantes o Adoptantes (Solo para PDTS, adjuntar las solicitudes impresas de cada uno)
LUGAR DE EJECUCIÓN
Unidad Ejecutora
Universidad Nacional del Nordeste
Área, Depto. o Laboratorio: Departamento de Clínica Estomatológica y Quirúrgic
Facultad o Instituto: Facultad de Odontología
Conformidad del Decano, Director o Responsable de la Facultad o Instituto:
Apellido y Nombres: Rosende, Roque Oscar
Cargo en la Institución: Decano
Toma conocimiento del presente proyecto y presta su conformidad para que el mismo se desarrolle en
el ámbito de su dependencia.
Firma y Sello:
Universidad Nacional del Nordeste
Secretaría General de Ciencia y Técnica
FORMULARIO DE P R E S E N TA C I Ó N DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO
CUIL:
Fecha de Nacimiento:
Domicilio (Calle-Nro.-Piso-Depto.):
C.P. - Localidad – Provincia:
Teléfono/s (Código-Nro.):
Correo Electrónico: Correo Alternativo:
Título Profesional: Título de Posgrado:
Cargo Docente en la UNNE: Dedicación:
Facultad o Instituto: ---
Lugar de Trabajo:
Dedicación al Proyecto(en horas semanales):
Categoría en el Programa de Incentivos: ---
Objetivos Específicos:
Hipótesis:
"Las células madre mesenquimales de la pulpa dental de terceros molares superiores incluidos jovenes
tendra su diferenciacion a linaje osteogenico."
En la práctica odontológica, uno de los más grandes retos es la reposición de tejidos que se han perdido por
lesiones o patologías. En este sentido, una ciencia que se ha desarrollado en las últimas décadas, la
“Ingeniería Tisular”, propone nuevas terapias que implican la regeneración o reemplazo de tejidos u órganos
a través de constructos tridimensionales tisulares,y la devoluciòn de forma y función, a partir de las propias
células del paciente en conjunto con biomateriales y biomoléculas. En lo que se refiere a la regeneración de
tejidos como la pulpa, hueso y mucosa oral, se han realizado avances importantes que, en algunos casos,
ya se han llevado a la práctica clínica.
La utilización de células madres en medicina y odontología ha avanzado a pasos agigantados se lograron
restituir tejidos de diversos orígenes, por lo que creemos que desde el punto de vista de la cirugía dentó
maxilar la aplicación de estas células sería un gran aporte a las terapias ya existentes en cuanto a la
aceleración y regeneración de tejidos.
Materiales y métodos:
nº15c, desde distal del 2do molar, inclinado algo hacia palatino,sobre la cresta osea, hasta el pliegue muco
terigomaxilar, con una pequeña descarga por mesial o distal del 7( segundo molar superior ).
El levantamiento del colgajo es mucoperiostico con movimiento de adelante hacia atrás,la osteotomia se
realizara cuando tenga el hueso muy delgado o fino, con una pinza gubia o periostotomo,en el caso que el
hueso retentivo sea mas grueso se realizaria este paso con fresas quirurgicas cilindrica o redondas nº6 ,con
un elevador recto o elevadores clev dent se luxa la pieza dentaria , manipulando con fórceps Nª67.
El órgano dentario extraído se colocara inmediatamente en medio Dulbelcosmodified eagle medium (DMEM)
frío, para garantizar el estado y conservaciòn celular del tejido pulpar.
Se realizara la extracción de la pulpa dental en el area de biologia molecular en la cabina de flujo laminar,
cortando el diente a nivel de la línea amelocementaria con una turbina y una fresa diamantada a 200.000
revoluciones por minuto.
A continuación se despegara la pulpa de la cámara pulpar y de los conductos radiculares con una sonda.
Una vez despegada, se extraera la pulpa con unas pinzas.
Entre la exodoncia y la extracción de la pulpa dental habra un rango de tiempo de entre una hora y cuatro
días. Durante este tiempo el diente se guardara en un tubo con medio de cultivo y antibióticos a 4ºC. otras
alternativas para la optencion de las muestras de pulpas dentales, seria que a las piezas dentarias se les
confeccionara una cavidad por la cara oclusal ,de tal forma de acceder a la camara pulpar y con un
estractor o tira nervio obtener las muestras,tambien se pueden conseguir utilizando un martillo y un escoplo
de punta diamantada,cada tejido sera cuidadosamente extraido del diente mediante la utilización de hoja
bisturí N°15c,se colocaran luego en medio DMEM frío estéril.
Una vez extraída la pulpa dental, se almacenara en tubos de 15 mL estériles con medio de cultivo Dulbecco
´s modified Eagle® con suplemento bajo de glucosa (1mg/mL) y antibióticos (Penicilina 100U/ml y
Estreptomicina 100 μg/ml). La pulpa se transportara a temperatura ambiente en un tubo desde el sevicio de
Cirugia Traumatologia Bucomaxilofacial de la facultad de Odontológia de la Universidad Nacional Nordeste
hasta el Area de Biologia Molecular. Entre la extracción de la pulpa y su cultivo hubo un rango de tiempo de
entre una y veinticuatro horas. Durante este tiempo se guardó a 4ºC.
periodontales (PDLSCs), y las células madre de la mucosa bucal. Las células madre que aparecen en pulpa
de dientes temporales pueden ser manipuladas enzimáticamente y sometidas a factores tisulares de
crecimiento, y son capaces de diferenciarse en células nerviosas, adipocitos y osteocitos (Gonzalez, 2011).
La principal fuente de células madre adultas de dientes permanentes son los terceros molares y se
caracterizan por su capacidad de regenerar el complejo pulpodentinal (Sánchez, 2013; Rendón, 2011).
El hueso está en continua remodelación y necesita la formación de muchos nuevos osteoblastos. La
activación de las células madre y la proliferación de los progenitores celulares para formar nuevos
osteoblastos se aceleran como resultado de un trauma, fractura, inflamación, necrosis o tumor. La
movilización y la diferenciación de las células madre mesenquimáticas estarían influidas por la quimiotaxis y
las interacciones con la matriz extracelular a través de las proteínas transmembrana como las integrinas.
Las MSC parecen diferenciarse en las células de la población local bajo la influencia del microambiente
(López Pinto, 2009; Prósper, 2006).
La osteonecrosis (ON) de la cabeza femoral, una de las patologías que generan más dolor en la cadera,
suele asociarse con el tratamiento prolongado con corticosteroides y alcoholismo, y frecuentemente termina
en el colapso de la cabeza del fémur con el subsecuente reemplazo total de la cadera. Hermigou fue el
primero que sugirió que la ON podría también ser una enfermedad de las células del hueso o MSC. Estos
descubrimientos permitieron el acercamiento a la fisiopatología y el tratamiento de la ON, como la
implantación en la lesión necrótica de células madre de tejidos mesenquimáticos, obtenidos después de la
concentración de médula ósea autóloga (Hermingou, 1999).
El retraso de consolidación y la seudoartrosis son dos patologías frecuentes en los pacientes que sufrieron
un politraumatismo con fracturas expuestas o en los que tienen una estabilización deficitaria. El tratamiento
habitual es el cambio de la osteosíntesis más el aporte biológico a través de injerto óseo autólogo, tomado
casi siempre de la cresta ilíaca. Es una posibilidad la utilización de MSC en los defectos pequeños a través
de aporte percutáneo teniendo una osteosíntesis estable (Hermingou, 2005). Existen varios estudios clínicos
en los últimos treinta años en los cuales se usó el trasplante autólogo de células madre mesenquimáticas en
el tratamiento del retraso de consolidación o seudoartrosis de los huesos largos. Aunque todavía no se
demostró una ventaja sobre los tratamientos anteriores, se probó que la aplicación de estas células no
produce efectos adversos (Enhert, 2009). En cambio, hay varios informes que muestran éxito en la
combinación de MSC con matriz de sostén (scaffolds), para la fusión de los huesos largos y la desaparición
de los defectos cavitarios (Tseng, 2008).
Estudios recientes realizados en la Universidad de Columbia muestran, en defectos óseos particularmente,
la posibilidad de fabricar piezas funcionales de hueso humano in vitro usando MSC y un sistema de scaffold-
biorreactor. Esta práctica tiene un gran potencial para la reconstrucción ósea después de defectos
congénitos, cáncer, resecciones y traumas (Grayson, 2010). Se han obtenido buenos resultados en relación
a lesiones invalidantes de rodilla como la osteoartrosis mediante la inyección intraarticular de CMM
autólogas obtebidas de médula ósea del paciente (Orozco, 2013).
Sin duda la frontera del conocimiento en esta materia está en plena expansión con CMM caracterizadas
adecuadamente (Dominici, 2006). Las mismas se obtienen de distintas fuentes más allá de la médula ósea
tales como cordón umbilical, pulpa dentaria, proyectando nuevas aplicaciones (Mathieu, 2012; Ito, 2011). Se
ha propuesto criopreservar las CMM de pulpa dentaria con un procesamiento mínimo para posibles usos
futuros (Perry, 2008).
A partir del presente proyecto se comenzará a desarrollar el cultivo de las CMM y su posible diferenciación a
los linajes óseo y cartilaginoso en un nivel de investigación. Cuando se hayan alcanzado los resultados
esperados, se espera poder pasar a la etapa de cultivo y diferenciación de las CMM con grado clínico,
asegurando que la calidad de las mismas sea la adecuada para comenzar a realizar ensayos pre-clínicos.
Todo esto requiere una progresiva complejización de las tareas a realizar en el laboratorio y la formación de
recursos humanos que permita llevar a delante estos desafíos. De este modo se establecerá un vínculo
entre el laboratorio de Biología Molecular de la Facultad de Odontología de la UNNE con el hospital público,
estableciendo las bases para la generación de un servicio de Medicina Regenerativa. La perspectiva a
futuro es la implementación de un servicio de criopreservación de CMM con dos sedes regionales en las
ciudades de Resistencia y Corrientes. El desarrollo que comienza con el presente proyecto, tiende a
contribuir a mejorar la salud de la población mediante su proyeccción a futuro.
Trabajos Previos
Indicar la relación del tema y los objetivos del Proyecto con trabajos previos o contemporáneos ejecutados por el GID o
sus integrantes.
Resultados esperados
Describir el tipo de resultados que se esperan según se trate de un PI o un PDTS (publicaciones, presentaciones a
congresos, tesis terminadas, desarrollos tecnológicos a transferir, productos, procesos, prospectivas o propuestas).
Universidad Nacional del Nordeste
Secretaría General de Ciencia y Técnica
FORMULARIO DE P R E S E N TA C I Ó N DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO
Bibliografía
Detallar la bibliografía citada en el ítem “Estado del Conocimiento” de acuerdo con las normas internacionales
establecidas.
Las células madre que aparecen en pulpa de dientes temporales pueden ser manipuladas enzimáticamente
y sometidas a factores tisulares de crecimiento, y son capaces de diferenciarse en células nerviosas,
adipocitos y osteocitos (Gonzalez, 2011). La principal fuente de células madre adultas de dientes
permanentes son los terceros molares y se caracterizan por su capacidad de regenerar el complejo
pulpodentinal (Sánchez, 2013; Rendón, 2011).
El hueso está en continua remodelación y necesita la formación de muchos nuevos osteoblastos. La
activación de las células madre y la proliferación de los progenitores celulares para formar nuevos
osteoblastos se aceleran como resultado de un trauma, fractura, inflamación, necrosis o tumor. La
movilización y la diferenciación de las células madre mesenquimáticas estarían influidas por la quimiotaxis y
las interacciones con la matriz extracelular a través de las proteínas transmembrana como las integrinas.
Las MSC parecen diferenciarse en las células de la población local bajo la influencia del microambiente
(López Pinto, 2009; Prósper, 2006).
La osteonecrosis (ON) de la cabeza femoral, una de las patologías que generan más dolor en la cadera,
suele asociarse con el tratamiento prolongado con corticosteroides y alcoholismo, y frecuentemente termina
en el colapso de la cabeza del fémur con el subsecuente reemplazo total de la cadera. Hermigou fue el
primero que sugirió que la ON podría también ser una enfermedad de las células del hueso o MSC. Estos
descubrimientos permitieron el acercamiento a la fisiopatología y el tratamiento de la ON, como la
implantación en la lesión necrótica de células madre de tejidos mesenquimáticos, obtenidos después de la
concentración de médula ósea autóloga (Hermingou, 1999).
El retraso de consolidación y la seudoartrosis son dos patologías frecuentes en los pacientes que sufrieron
un politraumatismo con fracturas expuestas o en los que tienen una estabilización deficitaria. El tratamiento
habitual es el cambio de la osteosíntesis más el aporte biológico a través de injerto óseo autólogo, tomado
casi siempre de la cresta ilíaca. Es una posibilidad la utilización de MSC en los defectos pequeños a través
de aporte percutáneo teniendo una osteosíntesis estable (Hermingou, 2005). Existen varios estudios clínicos
en los últimos treinta años en los cuales se usó el trasplante autólogo de células madre mesenquimáticas en
el tratamiento del retraso de consolidación o seudoartrosis de los huesos largos. Aunque todavía no se
demostró una ventaja sobre los tratamientos anteriores, se probó que la aplicación de estas células no
produce efectos adversos (Enhert, 2009). En cambio, hay varios informes que muestran éxito en la
combinación de MSC con matriz de sostén (scaffolds), para la fusión de los huesos largos y la desaparición
de los defectos cavitarios (Tseng, 2008).
Estudios recientes realizados en la Universidad de Columbia muestran, en defectos óseos particularmente,
la posibilidad de fabricar piezas funcionales de hueso humano in vitro usando MSC y un sistema de scaffold-
biorreactor. Esta práctica tiene un gran potencial para la reconstrucción ósea después de defectos
congénitos, cáncer, resecciones y traumas (Grayson, 2010). Se han obtenido buenos resultados en relación
a lesiones invalidantes de rodilla como la osteoartrosis mediante la inyección intraarticular de CMM
autólogas obtebidas de médula ósea del paciente (Orozco, 2013).
Sin duda la frontera del conocimiento en esta materia está en plena expansión con CMM caracterizadas
adecuadamente (Dominici, 2006). Las mismas se obtienen de distintas fuentes más allá de la médula ósea
tales como cordón umbilical, pulpa dentaria, proyectando nuevas aplicaciones (Mathieu, 2012; Ito, 2011). Se
ha propuesto criopreservar las CMM de pulpa dentaria con un procesamiento mínimo para posibles usos
futuros (Perry, 2008).
A partir del presente proyecto se comenzará a desarrollar el cultivo de las CMM y su posible diferenciación a
los linajes óseo y cartilaginoso en un nivel de investigación. Cuando se hayan alcanzado los resultados
esperados, se espera poder pasar a la etapa de cultivo y diferenciación de las CMM con grado clínico,
asegurando que la calidad de las mismas sea la adecuada para comenzar a realizar ensayos pre-clínicos.
Todo esto requiere una progresiva complejización de las tareas a realizar en el laboratorio y la formación de
recursos humanos que permita llevar a delante estos desafíos. De este modo se establecerá un vínculo
entre el laboratorio de Biología Molecular de la Facultad de Odontología de la UNNE con el hospital público,
Universidad Nacional del Nordeste
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FORMULARIO DE P R E S E N TA C I Ó N DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN Y DESARROLLO
Los conocimientos obtenidos de los resultados del trabajo de investigación serán beneficiosos para:
• Introducción a la Odontología
• Clínica Preventiva I
• Práctica Preventiva II
• Práctica Social y Comunitaria
• Clínica Estomatológica
• Periodoncia
• Cirugía Bucal I Técnica quirúrgica y anestésicas
• Cirugía II Dentomaxilar.
• Cirugía Bucal III Traumatología Bucomaxilofacial.
• Clínica Operatoria Dental
• Clínica de Prótesis
• Odontología Integral Adultos.
• Odontopediatría
• Materiales Dentales
• Microbiología
PROGRAMACION
Universidad Nacional del Nordeste
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Cronograma
Ubicar el tiempo que demandará el logro de las Metas indicadas.
El 1er. Semestre del Año Primero corresponde al primer semestre de funcionamiento del Proyecto.
Año Primero Año Segundo Año Tercero Año Cuarto
Meta 1er. 2do. 1er. 2do. 1er. 2do. 1er. 2do.
Semestre Semestre Semestre Semestre Semestre Semestre Semestre Semestre
A X
B X X X
C
D X X
E . . X
F X
Universidad Nacional del Nordeste
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RECURSOS HUMANOS
RECURSOS MATERIALES
Año Primero:
Necesidades Presupuestarias
Rubro: Descripción Justificación Monto:
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Año Segundo:
Necesidades Presupuestarias
Rubro: Descripción Justificación Monto:
Viajes de Campaña:
Equipamiento Menor: Instrumental de diagnóstico Evaluación y selección de pac. 1.500,00
Descartables
Insumos: (Baberos,gasas,etc )
Para uso en cada paciente 600,00
Año Tercero:
Necesidades Presupuestarias
Rubro: Descripción Justificación Monto:
Viajes de Campaña:
Para tarea específica de
Equipamiento Menor: Instrumental`para muestras
laboratorio
1.800,00
Descartables
Insumos: (Baberos,gasas,etc )
Para uso en cada paciente 80.000,00
Año Cuarto:
Necesidades Presupuestarias
Rubro: Descripción Justificación Monto:
Viajes de Campaña:
Para tarea específica de
Equipamiento Menor: Instrumental`para muestras
laboratorio
1.800,00
Descartables
Insumos: (Baberos,gasas,etc )
Para uso en cada paciente 1.100,00
CURRICULUM VITAE del Director, Codirector, Subdirector y personal interviniente del Proyecto.
Se debe adjuntar en soporte digital Curriculum Vitae (CV) del Director, Codirector, Subdirector (si
correspondiere) y de cada uno de los integrantes del GID.
Los mismos deben incluir los títulos obtenidos y la actividad referida únicamente a los últimos 5 años, siendo
confeccionados individualmente en el formulario que se provee a tal fin, y renombrándolo con el apellido (y
nombres de ser necesario) del integrante.