ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA PARA ANALISIS DE ACIDOS NUCLEICOS

DISCUSIÓN

Para el gel de agarosa

Esta se polimeriza con ayuda del buffer TBE-0,5x, esta es un polvito y para diluirla usamos una
plancha de calentamiento. Primero pesamos 1g de agarosa, luego la adicionamos a un Erlenmeyer
y aforamos con buffer TBE 0,5X más específicamente 50 micros litros hasta completar 50ml del
volumen.

Calentamos en el microondas durante 30 segundos (385) °C, posteriormente esperamos un

proceso de ebullición y agitamos durante el proceso hasta que se diluya completamente.

Si pasa mucho tiempo de la ebullición nos podríamos quemar y se perdería la concentración de

agarosa, un dato importante es que se deja más tiempito para que quede más líquido que denso.

Preparación de cámara electroforética

Servimos el gel y ponemos el peine, esto nos permite formar los pozos en el gel, cuando este
caliente se agregó el agente intercalante pero esperamos a que baje un poco la temperatura (se
agrega directamente 5 micro litros y un poco más en el Erlenmeyer (0,18 de mas)). Se mezcla para
asegurar que toda la solución quede homogenizada.

Otro dato importante es que en lugar de usar como agente intercalante el Bromuro de etidio,
usamos 5 micro litros de EZ-visión 10,000V a 50ml.

Vertimos el gel sin formar burbujas, después se pone el peine y verificamos que no haya burbujas.
Posteriormente esperamos a que se dé el proceso de polimeracion, esta duro más o menos
30minutos (120V por 60 minutos para que corra la muestra).

Esta muestra es el DNA genómico es decir el de las células que extrajimos y preparamos
anteriormente.

Adicionamos el DNA 5 micro litros exactamente al gel mas 2microlitros del buffer carga
(concentración 6X), este se adiciono en la caja de terizaki.

Específicamente agregamos 15 micros litros del DNA y encima 3 micro litros del buffer de carga.

Después de observar que el gel ya está salificado removemos con mucho cuidado el peine y ya
quedarían los pozos, quitamos la cama de la cámara, la volteamos para observar bien los pocillos.

Cubrimos con fase liquida del buffer TAE. Antes de haber adicionado las muestras (17 micro litros),
antes de hacerlo hacemos una pequeña resuspencion del mismo huequito del terisaki y ya de ahí
lo llevamos a la cámara electroforética, lo conectamos a la fuente de poder ( voltaje 120v) ,
esperamos 30 minutos a que corra , y pasamos la cama a revelar por la tensión. (Imagen A.V
detección del ADN total transiluminador)