Guia de Practicas 2017-I Unw

3B-2
Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
GUÍA DE PRÁCTICA
INTERPRETACIÓN DE ANÁLISIS CLÍNICOS
Autor: Dr. Juan Manuel Parreño Tipian
Dr. Mario Carhuapoma Yance
2017
F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

INTRODUCCIÓN
El laboratorio clínico dispone de los métodos de análisis clínicos, que estudia los diversos procesos
utilizados en la exploración clínica y hace la interpretación bioquímica y patológica de los
resultados.
Por su amplitud y por la evolución vertiginosa de especialización se ha dividido en: hematología,
inmunohematología, bioquímica clínica, microbiología clínica, parasitología clínica y líquidos
biológicos.

PROGRAMACIÓN DE PRÁCTICAS
Semana Practica Contenido
Toma de muestra Sangre total. Plasma. Sangre desfibrinada.

1 1 Reconocimiento de elementos formes. Resistencia globular.
Hematimetría. Recuento de glóbulos rojos. Dosaje de hemoglobina.
2 2 Hematocrito. Microhematocrito.
Leucometría. Recuento de glóbulos blancos.
3 3 Hemograma de Schilling.
Velocidad de sedimentación globular.
Recuento de plaquetas.
4 4 Recuento de reticulocitos.
Recuento de eosinófilos.
Tiempo de coagulación.
Tiempo de Sangría.
5 5
Retracción de coagulo.
Dosaje de fibrinógeno.
Grupos sanguíneos. Sistema ABO, Factor Rh.
6 6 Prueba de Coombs-Variante Du.
Aglutinaciones TO, TH, PA, PB y B
Pruebas Serológicas: VDRL. RPR.
Crioaglutininas.
7 7
Antiestreptolisinas O
Prueba de Proteína C Reactiva.
Prueba de látex.
8 Primer examen (E1)
Examen de orina completa:

9 8 Examen físico. Examen químico. Examen microscópico.
Espermatograma.- Examen físico.- Químico y citológico.
Urocultivo.
Coloración Gram. Pruebas bioquímicas.
Antibiogramas.
10 9
Estudio de las Heces.
Examen parasitológico. Método Directo. Método de Faust.
Técnica de Graham.
Dosaje de glucosa.
11 10 Determinación de Colesterol total.
Determinación de Triglicéridos.
Determinación de GOT y GPT. Curva de calibración.
12 11 Determinación de fosfatasa alcalina. Determinación de Amilasa.
Determinación de Lactato deshidrogenasa.
Determinación de Bilirrubinas totales, directa e indirecta.
13 12 Determinación de proteínas totales y fraccionadas.
Determinación de urea. Determinación de creatinina.
14 13 Determinación de calcio. Determinación de magnesio.

Determinación de T3 y T4. Determinación de HCG sub unidad beta
15 14 cualitativo y cuantitativo.
16 Segundo examen (E2)
PRÁCTICA No. 1: TOMA DE MUESTRA PARA LOS DIVERSOS LÍQUIDOS

BIOLÓGICOS. SANGRE TOTAL, SUERO, PLASMA, SANGRE DESFIBRINADA.
RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES EN SANGRE FRESCA Y
COLOREADA. RESISTENCIA GLOBULAR
1.1 Marco Teórico
La toma de muestra de sangre o de cualquier fluido biológico tiene importancia en la
buena determinación de los análisis clínicos ya que constituyen el primer paso en todo el
proceso dependiendo de una serie de factores. El reconocimiento de los elementos
formes nos informa acerca de las características y diferenciaciones en una muestra de
sangre fresca y sangre coloreada.
Líquidos Biológicos:
1. Sangre
2. Orina
3. Esputo
4. Jugo Gástrico
5. Contenido Duodenal
6. Líquido Cefalorraquídeo
7. Liquido sinovial
8. Lìquidos serosos (pleural, peritoneal, articular)
9. Líquido amniótico y seminal
10. Heces
Las determinaciones hematológicas y bioquímicas pueden realizarse en sangre total, suero

o plasma.
1.2 Competencias
1.-Distingue los diversos métodos para la toma de muestra de los diversos líquidos
biológicos
2. Explica las diferencias entre los líquidos de sangre total, plasma y suero sanguíneo.
3. Identifica los diversos elementos formes
4. Diferencia los elementos formes en sangre fresca y coloreada.
1.3 Materiales y Equipos
 Materiales
1. Agujas descartables 20 G x 1 ½
2. Algodón
3. Alcohol
4. Tubos de ensayo
5. Viales con anticoagulantes
6. Perlas de vidrio
7. Matraz
8. Pipetas
 Reactivos
a. Anticoagulantes:
De Wintrobe:
Oxalato de Amonio ------ 1.2 gr.
Oxalato de Potasio ------ 0.8 gr.
Agua destilada ------ 100 mL.
Formol al 40% ------ 1 mL.
Haskins Trotman: Oxalato de potasio al 2%
Citrato Trisódico al 3.8%
Oxalato de Sodio al 1.34%
Heparina al 0,75%
EDTA
1.4 Procedimiento
A. Toma de muestra.
SANGRE VENOSA:
1. El paciente permanecerá sentado con el brazo extendido reposando sobre la mesa
apoyado sobre una almohadilla.
2. Se colocará una ligadura de goma a unos 7 cm. por encima del codo, teniendo la
precaución de no comprimir fuertemente. Esta ligadura colocada más de 2' provoca una
hemoconcentración con acumulaciones subproductos metabólicos.
Se elige la vena más prominente sobre la superficie de flexión del codo (VENA MEDIANA
CEFALICA)
3. Se desinfecta la región con una torunda de algodón empapada al alcohol yodado.
4. Se atraviesa la piel con la aguja manteniendo el bisel hacia arriba directamente sobre
la vena penetrando en ella.
5. Una vez lograda la cantidad de sangre necesaria se afloja la ligadura mientras la aguja
permanece aun en la vena.
6. Se saca la aguja y se aplica una torunda ligeramente humedecida en alcohol
flexionando el codo.
7. Para efectuar los frotises se tomará una gota de sangre tomada directamente de la
aguja antes de mezclarla con el anticoagulante sobre para objetos desengrasados y secos.
En niños que no son muy palpables las venas se tomará la sangre de la vena yugular.
SANGRE CAPILAR:
Se obtiene por punción cutánea y se utiliza cuando se requieren pequeñas cantidades de
sangre.
Debe utilizarse una lanceta
En la yema del dedo. En los niños en el lóbulo de la oreja o bien en el talón dilatado y la
sangre fluya espontáneamente.
Obtener los siguientes componentes:
1. SANGRE TOTAL Y PLASMA

En une vial con anticoagulante colocar 5 ml. de sangre, Mezclar Colocar en un tubo de
ensayo y centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.
2. SUERO
En un tubo de ensayo colocar 5 mL. de sangre
Centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.
3. SANGRE DESFIBRINADA
En un vaso pequeño o matraz que contiene perlas de vidrio, colocar 3 a 5 mL. de
sangre sin anticoagulante. Se agita durante 15 minutos. La FIBRINA se deposita sobre
estos cuerpos en forma de filamentos elásticos y blancos.
El líquido que queda se denomina sangre desfibrinada y está constituida por suero y
glóbulos que se puede confirmar por centrifugación.
La fibrina es de color blanco y se observa lavando con agua destilada.
RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES:

a. EN MUESTRA FRESCA
b. EN MUESTRA COLOREADA
1. Colocar 1 gota de sangre en un porta-objeto se coloca un cubreobjeto y observar.
Elementos de forma discoidea de color amarillo: eritrocitos unidos formando pilas por
el fenómeno de la tensión superficial, estos discos se observan de color rosado.
Elementos transparentes e incoloros: Leucocitos.
Plaquetas: no se visualizan por ser muy pequeños.
Tamaño: eritrocitos: 7.2 u
leucocitos: 5 a 20 u
plaquetas: 2a4u
2. Otro portaobjeto: 1 gota en uno de los extremos y con otro portaobjeto haciendo un
ángulo de 45 grados hacer un frotis. Secar al medio ambiente.
Se lleva a colorear con colorante Wright: con 10 a 12 gotas cubriendo el frotis. Mezclar
soplando por 30 segundos.
Se adhiere agua destilada, nuevamente se sopla mezclando.
Dejar en reposo por 10 minutos.
Lavar con agua de caño escurrir la lámina en forma vertical.
Una vez seco se coloca 1 gota de aceite de cedro, elevar el condensador y observa con
objetivo de inmersión.
Se observa: Eritrocitos en forma discoidea con un halo en la parte central
Leucocitos: Mononucleares: Monocito 16 a 22 u
Linfocito 7 a 10 u
Polimorfonucleares: Neutrofilos, Eosinófilos, Basófilos: 9 a 12 u
1.5 Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
1.6 Cuestionario
1. ¿Qué diferencia encuentra Ud. entre sangre capilar, sangre venosa y sangre arterial?
2. ¿Cómo se obtiene la sangre desfibrinada?
3. ¿Cuál es la composición química del anticoagulante de Wintrobe y como actúa en la
sangre evitando la coagulación de la misma?
4. ¿Qué diferencias existen entre suero y plasma?
5. ¿Cómo se observan los elementos formes en sangre fresca y sangre coloreada? Dibuje
utilizando colores.
1.7 Fuentes de información

1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001.
2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed. Buenos
Aires: El ateneo; 1985.

3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología estructural y funcional. 6a
ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.
4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana;
1999.
PRÁCTICA No.2: HEMATIMETRIA. RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.DOSAJE

DE HEMOGLOBINA.HEMATOCRITO. MICROHEMATOCRITO.
A. HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.

2.1 Marco teórico
La hematimetría es un método para contar los glóbulos rojos de la sangre. La hemoglobina
es una proteína que se encuentra en el interior de estos elementos y su función fundamental
es la de transportar el O2 y el CO2.
El concepto de anemia descansa sobre la determinación de estos componentes. Estas pruebas
se realizan habitualmente como parte del hemograma completo.
2.2 Competencias
1. Reconoce la cámara de Neubauer y los campos donde se efectúan los contajes
correspondientes de los elementos formes.
2. Opera con destreza el proceso del recuento de glóbulos rojos.
2.3 Materiales y equipos
 Materiales
Camara de Neubauer
Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
 Reactivos
LIQUIDO DE DILUCIÓN:
Las más conocidas son las de GOWER, HAYEM y MARCANO
SOLUCIÓN DE GOWER:
Sulfato de Sodio ........ 12,5 gr.
Acido Acético Glacial …. 33,3 mL
Agua destilada csp ....... 200 mL.
2.4 Procedimiento
1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 según la dilución 1 en 200 ó 1 en 100.
2. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia rápidamente con papel
especial o con gasa.
3. Si la sangre pasa la marca de 0.5 ó 1 se retira por capilaridad tocando la punta de la pipeta
con gasa o algodón.
4. Completar con el líquido de dilución hasta la marca de 101.
5. Mientras se aspira el líquido de dilución, se hace girar la pipeta entre el pulgar y el índice
de la mano derecha.
6. Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 ó 2 minutos.
7. Desechar las primeras gotas y sin perdida de tiempo tocar con una gota pequeña el borde
de la superficie pulimentada en que están en contacto la cuadricular de la cámara y el
portaobjeto.
8. Esta gota se insinúa por debajo del cubreobjeto por capilaridad.
9. La suspensión no debe escurrirse en los surcos laterales ni debe formarse burbujas de aire.
10. Dejar transcurrir 3 minutos para que se depositen los glóbulos.
11. Llevar la cámara a la platina del microscopio. Iluminar bien. Comprobar si hay uniforme
distribución de hematíes.
12. Efectuar el recuento con el objetivo de gran aumento, manteniendo el condensador bajo
y el diafragma parcialmente cerrado, nunca se tocara el cubreobjeto con la lente, ello
induce a groseros errores al modificar la posición de los corpúsculos.
Para evitar toda confusión al contar los glóbulos, se incluyen los hematíes que tocan las líneas
divisorias izquierda y superior como si estuviera dentro de los cuadrados, los que tocan los
lados derecho e inferior no se toman en cuenta.
No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de glóbulos rojos entre los 5
cuadrados.
Cálculos:
Con la dilución al 1 en 200 contar los glóbulos comprendidos en 5 grupos de 16 luego se aplica
la siguiente fórmula: (Cálculo razonado)
N x 10 x 200 x 400
------------------------- = Hematíes por mm3 de sangre.
80
De donde:
N: número total de hematíes en 80 cuadraditos.
10: altura de la cámara. Para referir a 1mm3 de sangre diluida.
200: dilución de la pipeta para referir al 1 m3 de sangre sin diluir.
400: número total de cuadraditos.
80: para referir al número de cuadraditos en el que se ha llevado acabo el recuento.
O también: los glóbulos rojos de los 5 cuadrados se le agregan 4 ceros
Cifras normales:
En estado de salud existe aproximadamente 5’000,000 de hematíes por mm 3 de sangre.
El número es un poco menor en las mujeres 4’500,000 por mm 3.
Interpretación:
La disminución de hematíes se denomina ANEMIA u OLIGOCITEMIA y se da también en
leucemia y después de hemorragias.
El aumento se denomina POLICITEMIA o POLIGLOBULIA.
Hay poliglobulia en el recién nacido hasta 7!000,000 y va descendiendo gradualmente
para llegar al del adulto hacia los 15 años.
La policitemia carece de importancia y en patología es infrecuente.
2.5 Resultados
2.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del proceso de la hematimetria?
2. ¿Cuál es la composición química de los líquidos de Hayem y Marcano en hematimetría?
3. Explique mediante un esquema el reticulo de Thoma
4. Explique por que en las personas que habitan en alturas se encuentra Policitemia.

1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray
Masson S.A; 2001.

2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a
ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.
3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología estructural
y funcional. 6a ed. Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.
4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires:
Interamericana; 1999.
B. DOSAJE DE HEMOGLOBINA (Hb)

2.1 Marco teórico
La Hemoglobina es una molécula formada por 2 estructuras el grupo Hemo y la Globina.
Todas las moléculas de Hb se encuentran en el interior de los glóbulos rojos y su función
fundamental es la de transportar el O2 y el CO2.
La determinación de Hb en sangre es un parámetro que nos ayuda en el diagnóstico de una
anemia.
2.2 Competencias
1. Explica bioquímicamente el proceso para la determinación de la hemoglobina.
2. Determina en el laboratorio el dosaje de hemoglobina.
 Materiales
Pipeta de Sahli
Tubos de ensayos
 Equipos
Espectrofotometro
 Reactivos
a. REACTIVO DE DRABKIN:
o Bicarbonato de Sodio 1 gr.
o Cianuro de Potasio 50 mg.
o Ferricianuro de potasio 200 mg.
o Agua destilada csp 1000ml.
o Guardar en frasco oscuro, la solución de es de color amarillo pálido. Es un reactivo
tóxico.
b. SOLUCIÓN STANDARD:
o Solución de cianometahemoglobina titulada según las recomendaciones del Comité
Internacional para Estandarizar de Hematología. Contiene preservantes.
2.4 Procedimiento
METODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA:
1. Rotular dos tubos con Problema y banco. Deben estar bien secos.
2. Agregar a cada uno de ellos 5ml de reactivo de Drabkin.
3. Adicionar al tubo Problema con la Pipeta de Sahlí 20µl de sangre (capilar o venosa)
4. Mezclar y dejar en reposo por espacio de 10 minutos.

5. Realizar la lectura del tubo Problema ajustando el instrumento a 0 de densidad óptica o
el tubo Blanco.

6. La lectura obtenida llevar a la curva de calibración o multiplicar por el factor para hallar
la concentración de hemoglobina.
7. Leer al espectrofotómetro con filtro verde ó 540 nm.
CALCULOS:
FACTOR= 15 / Absorbancia del Standard
Hb (g/100ml) = Absorbancia de la muestra x FACTOR
FACTOR DE CALIBRACION:
Se sigue el siguiente cuadro:
TUBO# STANDARD SOL. DRABKIN CONCENTRACIÓN
(mL) (mL) (gr %)
1 6.0 0.0 20
2 4.5 1.5 15
3 3.0 3.0 10
4 1.5 4.5 5
Blanco 0.0 6.0 0
El quinto tubo sirve para llegar a 0 con el espectrofotómetro. Aplicando la fórmula de

concentración sobre lectura para cada tubo y sacando el promedio tenemos el factor % en
vista de que el standard viene en g %.
SE realizan 4 divisiones y luego se obtiene el factor promedio, que en este caso es factor por
100.
VALORES NORMALES:
Nacimiento 14 - 24 g/100 mL
3 meses 10.5 - 14.5 g/100 mL
Adulto sexo femenino 12-16 g/100 mL
sexo masculino 14-18 g/100 mL
INTERPRETACIÓN:
AUMENTO: hipercromemia: niños recién nacidos, personas que viven en altura, procesos
hematopoyéticos.
DISMINUCION: Hipocromemia u oligocromemia: anemias
2.5 Resultados
2.6 Cuestionario
1. Explique el fundamento del dosaje de Hemoglobina
2. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina?
3. ¿Cómo se puede hallar el valor del hematocrito a partir de la determinación de la
hemoglobina?

1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 7ª ed. Buenos Aires: Panamericana; 1997.
2. Gradwhol. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. 8ª ed. Buenos Aires: Médica
Panamericana; 1986.
3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed. Buenos
Aires: Librería El Ateneo; 1985.

4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual Moderno
S.A.; 1986.
C. DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO

2.1 Marco teórico
El hematocrito (Hc) es otra de las pruebas de laboratorio que ayuda en el diagnóstico de las
anemias corroborando los otros parámetros como el recuento de glóbulos rojos y la
hemoglobina.
2.2 Competencias
1.- Determina los valores del hematocrito por el método correspondiente.
2.- Realiza el procedimiento en el laboratorio del hematocrito.
 Materiales
Tubo de Wintrobe
Equipos
Centrifuga para capilares
 Reactivos
Anticoagulante de Wintrobe
2.4 Procedimiento
A. Toma de muestra.
 SANGRE VENOSA:
La Sangre venosa obtenida y que se encuentra mezclada con el anticoagulante de
Wintrobe llenar con la pipeta capilar el tubo de Hematocrito hasta la marca 10.
Centrifuga a 3,000 rpm durante 30 minutos.
Cálculos:
Para calcular el Hc la altura de la columna de hematíes sedimentados dado en mm se
multiplica por 10.
Valores normales:
Mujeres: 42 mL%
Hombres: 45 mL%
Interpretación
Están disminuidas en las anemias, en los casos de hemodilución tales como la hidremia
fisiológica (exceso de agua en la sangre) del embarazo.
Es alto en las poliglobulias genuina a una hemoconcentración debida a considerables
perdida de agua como en la deshidratación, quemaduras y schock.
SANGRE CAPILAR:
MICROHEMATOCRITO: Método de Guest-Wichsebaun
En pediatría se esta difundiendo el uso del microhematocrito que utiliza sangre
obtenida por punción digital.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos capilares de 7 cm de largo por 1mm de diámetro interior cubiertos interiormente
con heparina al 1/1000 se tapona con arcilla moldeable (plastilina).
PROCEDIMIENTO:
1. Se llena con sangre por capilaridad las tres cuartas partes del capilar.
2. Centrifugar en la microcentrifuga y leer sobre los normogramas que viene en cada
equipo.
Cuando no se dispone de dicho equipo se pone el tubo dentro de un tubo de ensayo y se
centrifuga por 10 minutos a 2000 rpm. Luego se aplica la siguiente formula:
a
- x 100 = ml%
b
a= longitud de la columna roja en ml
b= longitud total de sangre que llena el tubo capilar
100= para referirse al Hc en mL%
2.5 Resultados
2.6 Cuestionario
1. ¿Qué diferencias en los valores se pueden dar entre el microhematocrito y el hematocrito
de Wintrobe?
2. ¿Qué diferencias existen entre la eritrosedimentación y el hematocrito?
3. ¿Cómo se hallan las constantes corpusculares. Explique las fórmulas correspondientes?

2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed. Buenos Aires:
El ateneo; 1985.
4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.

PRACTICA No. 3: LEUCOMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS
3.1 Marco teórico
La leucometría es una de las técnicas para realizar el recuento de los leucocitos, que
corresponde al número de elementos celulares por unidad de volumen presente en una
muestra de sangre después de provocar la lisis de los hematíes. Diversas son las causas o
patologías que pueden aumentar (Leucocitosis) o disminuir (Leucopenia) los glóbulos blancos
e influenciar en el diagnostico clínico.
3.2 Competencias
1. Conoce el procedimiento para el recuento de glóbulos blancos.
2. Diferencia los recuentos de glóbulos blancos y rojos.
3. Aplica formulas para el recuento de glóbulos blancos.
3.3 Material y equipos
 Materiales
Pipeta de Thoma para el recuento de Leucocitos
 Reactivos
Líquido de Turck:
Violeta de genciana ...1 mL.
Ácido Acético glacial .. 3 mL.
Agua destilada csp. ...100 mL.
3.4 Procedimiento
1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 (1:20 ó 1:10) según la dilución en la pipeta de Thoma.
Limpiar la punta para eliminar el exceso de sangre.
2. Completar con diluyente hasta 11, haciendo 9 girar la pipeta.
3. Dejar en reposo de 5 a 15 minutos para la completa destrucción de los hematíes y
perfecta tinción de los núcleos leucocitarios.
4. Cargar la cámara cuenta glóbulos, esperar 5 minutos para que se depositen los
leucocitos sobre el retículo.
5. Llevar a la platina del microscopio, comprobar con débil aumento la uniforme
distribución celular y verificar el recuento.
Con el objetivo de menor aumento contar los leucocitos contenidos en los 4 campos
cuadrados situados en las esquinas de retículo.
Se consideran los elementos que se encuentran en los interiores de la derecha y de
arriba, pero se omiten las que se hallan sobre la línea de izquierda.
Se volverá a repetir el procedimiento si la diferencia entre 2 cuadrados sea mayor de 8
células.
Cálculos:
La cantidad encontrada en los 4 cuadrados se divide entre 2 y al resultado se añade 2
ceros (o se multiplica por 50)
También:
N x 10 x 20 = Leucocitos por mm3 de sangre
N = Total de leucocitos en 4 cuadrados dividido entre 4
10 = par referir al mm3
20 =.dilución cuando se aspira sangre hasta 0.5
Valores normales:
6,000 a 9.000 por mm3 de sangre.
Interpretación:
La disminución de leucocitos se denomina LEUCOPENIA y se presenta en algunas
enfermedades infecciosas como ocurre en la angina agranulocítica o granulocitopenia
idiopática, anemia perniciosa, clorosis, mala nutrición, fiebre tifoidea, malta, virales:
rubéola, sarampión, hepatitis, parotiditis, etc.
El aumento de denomina LEUCOCITOSIS:
Existe una leucocitosis fisiológica con neutrofilia entre 12,000 y 14,000 en el recién
nacido, durante el embarazo en el 9º mes, durante el parto, durante la digestión.
De orden patológico: la leucocitosis se debe a la quimiotaxis y al estimulo de los
órganos hematopoyéticos (la quimiotaxis es la propiedad que tiene ciertos agentes de
atraer o repeler células vivas) Una inflamación tiene poder quimiotáctico de atraer
muchos leucocitos, lo mismo ocurre con las bacterias y alguno tóxico se que atraen
leucocitos a la circulación general.
3.5 Resultados
3.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del reactivo de Turck en el recuento de leucocitos?
2. Indique que otros líquidos de dilución se emplean para el recuento de leucocitos y su
composición química.
3. ¿Qué importancia clínica tendría el recuento de leucocitos?

4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.
FÓRMULA LEUCOCITARIA. HEMOGRAMA DE SCHILLING

3.1 Marco teórico
Es el método analítico más frecuentemente solicitado en la práctica médica diaria, no solo
para el diagnóstico, valoración y seguimiento de las diversas patologías hematológicas, sino
también de las que no lo son, pero que curan con alguna alteración valorable del mismo. Su
facilidad de realización y rápida modificación en muy diversas circunstancias fisiológicas y
patológicas hacen también de él un método analítico de práctica casi obligada. El
hemograma incluye la cuantificación de los elementos formes que contiene la sangre por
unidad de volumen, recuento porcentual de los leucocitos(habitualmente compuestos sólo
por linfocitos, monocitos, y granulocitos, neutrófilos, eosinófilos y basófilos), además informa
sobre valores o índices relacionados con el contenido hemoglobínico de los glóbulos rojos y
el tamaño de éstos y el de las plaquetas. La formula leucocitaria indica la presencia relativa
de los diferentes tipos de leucocitos en la sangre periférica y se expresa en porcentajes
sobre el total.
3.2 Competencia
1. Utiliza el colorante adecuado para la identificación de los elementos formes en sangre
coloreada.
2. Identifica los diversos tipos de leucocitos de acuerdo a su forma, tamaño y color.
3. Aplica el método más conveniente para el recuento de los diversos tipos de leucocitos.
 Materiales
Laminas portaobjetos
 Reactivos
Colorantes:
En general los colorantes hematológicos que más se utilizan son los derivados de
Rowanowsky, entre los que tenemos el de Giemsa, Leishman, Wright y Hastings.
Colorante de Wright:
Es una combinación especial a base de azul de metileno y eosina que, para los trabajos
de rutina da excelentes resultados.
Pesar 0,4g. de colorante Wright en polvo, agregar 194 mL de alcohol metílico libre de
acetona, añadir 6 ml. de glicerina. Agitar enérgicamente. Conservar en frasco oscuro
agitando un minuto diario durante una semana. Finalmente filtrar cada vez que ha de
usarse, después de cumplida la semana. Dura seis meses.
3.4 Procedimiento
ESTUDIO CITOMORFOLOGICO DE EXTENDIDOS COLOREADOS:

Métodos para el examen del extendido sanguíneo en el recuento diferencial:
a. Observación reglada en 4 campos
b. Observación reglada en dos campos
En indispensable para obtener el porcentaje de cada tipo de leucocito que estos se

hallen uniformemente distribuidos en el extendido sanguíneo. Como los granulocitos
generalmente están en los márgenes del extendido y los linfocitos en el centro, se
recomienda el método aconsejado por Schilling, que consiste en tomar 4 puntos
marginales distintos recorriendo el campo en zigzag desde el borde hacia la parte
central y contar 25 o 50 elementos en cada uno de los 4 puntos.
Debe anotarse el tamaño celular; en el núcleo: forma, posición, color, estructura de la
cromatina, membrana nuclear, presencia o ausencia de nucleolos; en el citoplasma:
cantidad relativa(cociente núcleo citoplasma), color, presencia o ausencia de zona
perinuclear clara y características de los gránulos: número, color, tamaño y
distribución, granulación tóxica, vacuolas o degeneración del citoplasma.
FORMULA LEUCOCITARIA
La formula leucocitaria permite conocer la cantidad de cada tipo de célula, y para ello
se procede a contar un número determinado de leucocitos (100-200 ó más), en un frotis
bien coloreado, anotando por separado cada variedad celular. Procediendo en estar
forma, la llamada FORMULA RELATIVA, o sea el porcentaje de cada tipo de leucocitos.
La condición indispensable para justipreciar el porcentaje de cada tipo de leucocitos
más bien en la mitad de la extensión la técnica más recomendable para obviar el
inconveniente anotado, es de recorrer el preparado en la forma que aconseja
SCHILLING, siguiendo el método serpenteando los cuatro campos.
HEMOGRAMA DE SCHILLING
El hematólogo Von Schilling establecio un cuadro para el recuento diferencial de
leucocitos. Clasifica además a los neutrófilos en dos grupo fundamentales: neutrófilos
no lobulados e incompletamente lobulados y neutrófilos completamente lobuladados (2
ó más lóbulos).
El hemograma normal según Schilling es el siguiente:
Tipo de leucocitos Porcentajes
Neutrófilos Mielocito 0
Metamielocito 0-1
Núcleo en cayado 3-5
Núcleo segmentado 55-65
Eosinófilos 2-4
Basófilos 0-1
Linfocitos 20-30
Monocitos 4-8
3.4 INTERPRETACION:
Se denominarán los aumentos de los tipos de leucocitos denominándose eosinofilia,
basofilia, linfocitosis, monocitosis.
Según Arneth se habla de desviación hacia la izquierda del hemograma cuando
aumentan las formas no segmentadas o inmaduras de los neutrófilos; y se dice que hay
desviación hacia la derecha, cuando aumentan las células maduras o adultas.
.
3.5 Resultados
3.6 Cuestionario:
1. Dibuje y coloree los diferentes tipos de leucocitos.
2. ¿En que patologías se presentan linfocitosis, monocitosis, neutrofilia, eosinofilia y
basofilia?
3. ¿Cual es la diferencia entre el Hemograma de Schilling y el Esquema de Arneth?
3.7 Fuente de información:

1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica
panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a
ed. Barcelona: Masson; 2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos.
Madrid: Masson; 2005.
4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.:
Manual moderno, 2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en
hematología. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

3.1 Marco teórico
Prueba de laboratorio inespecífico importante para evaluar el curso de una enfermedad; es
inespecífico porque no sirve para el diagnóstico etiológico de una enfermedad.
Esta sencilla prueba es utilizada como índice de la presencia activa de enfermedades diversas
3.2 Competencias

1. Utiliza con precisión el tubo de Wintrobe para la lectura del hematocrito y la
eritrosedimentación.
2. Realiza la lectura de la velocidad de sedimentación utilizando la escala adecuada.
 Materiales
Tubo de Wintrobe
 Reactivos
3.4 Procedimiento
A. METODO DE WINTROBE Y LANDSBERG
La eritrosedimentación se determina con el tubo de Wintrobe en la siguiente forma:
Recoger 5 mL. de sangre con anticoagulante.
Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca "O" de sangre utilizando la pipeta de Wright y
antes de que la muestra tenga más de dos horas de extraída.
Mantener el tubo en posición vertical tapar con un capuchón de goma y esperar UNA HORA
para hacer una sola lectura o con intervalos frecuentes para expresar en gráficas.
VALORES NORMALES:
Hombre: 1 - 11 mm
Mujeres 1 - 15 mm
Determinada la velocidad de sedimentación puede centrifugarse a 3000 rpm durante 30
minutos para comprobar el volumen globular.
En esta forma se corrige la eritrosedimentación si existen alteraciones ocasionadas por
anemia.
En el mismo tubo puede medirse el volumen de leucocitos, plaquetas y el índice ictérico.
B. METODO DE CUTLER
Se emplea el tubo de sedimentación de Cutler que tiene 1 ml. de capacidad, 5mm de
diámetro interno y está graduado en 40 divisiones con el "O" a nivel del "Y que representan
milímetros.
Procedimiento:
Llenar el tubo con sangre con anticoagulante. Colocar en posición vertical y hacer la
lectura a la hora, cada 5 minutos para construir la gráfica.
Es mejor trabajar con sangre citratada en la siguiente forma:
Con una jeringa de 2 mL. aspirar 0.1 mL. de solución de citrato de sodio al 3.8 g % y
completar a 1 mL con sangre venosa.
Mezclar llenar el tubo de Cutler, tapar con un tapón de goma y mantener en posición
vertical.
En el nuevo tubo modificado de Cutler, se deposita 0.5 ml de anticoagulante citrato de
sodio 3.8% y se completa a 5ml con sangre venosa en la marca "O". la cantidad insuficiente
de citrato aumenta la VSG y un exceso disminuye o retarda.
Valores normales:
Las cifras normales a la hora de lectura son de:
2 - 10 mm para mujeres
2 8 mm para hombres.
Estas cifras deben estar en líneas casi horizontal cuando se gráfica a intervalos de 5
minutos.
El carácter de la curva en estado patológico se interpreta según su forma:
Si la línea es diagonal, apartándose ligeramente de la curva normal, indica proceso leve o
en quietud.
Cuando la curva sigue diagonal con gran descenso indica estado morboso activo o recaídas
de mucho cuidado.
Si la curva es caso vertical se trata de una enfermedad muy grave.
Se debe indicar el método, tiempo en minutos, índice de sedimentación en mm y el
carácter de la gráfica.
INTERPRETACION CLINICA:
Prescindiendo del embarazo, la determinación de la VSG.
Está aumentada en los estados patológicos mas dispares, sin ser esto específico de ninguno
en particular.
La VSG aumenta sobre todo, cuando existe un foco inflamatorio en estrecha conexión con
el árbol vascular; por ello son especialmente aceleradores los focos vecinos a las serosas
(Infarto al miocardio, focos pulmonares, etc.)
Todas las infecciones generales de cierta intensidad, salvo raras excepciones evolucionan
con VSG aumenta principalmente cuando coinciden los períodos de fiebre y anemia.
En las inflamaciones locales agudas (por ej. apendicitis) la velocidad no esta alterada,
sobre todo en las fases iniciales.
Las neoplasias malignas al principio no modifican la eritrosedimentación, pero si la
aceleran cuando hay lísis de los tejidos derivados de la proliferación neoplásica.
La VSG está más o menos aumentada en todos los tipos de anemias. En el curso del
embarazo la VSG se acelera, debido a una hemodilución de la sangre circulante.
En la mujer normal la menstruación produce variaciones muy ligeras de la velocidad.
Por último los focos sépticos muy aislados del torrente sanguíneo (caries dentarias,
sinusitis, amigdalitis crípticas) apenas aumentan la VSG.
3.5 Resultados
3.6 Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de la velocidad de sedimentación?
2.- ¿Qué diferencias existen en la utilización de los diversos métodos para determinar la
eritrosedimentación?
3.- ¿Cuál es el fundamento físico químico de la eritrosedimentación?
4. ¿Por qué la diferencia de valores en la eritrosedimentación en varones y en mujeres?

4. 4.Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana;
1999.
PRÁCTICA No. 4: RECUENTO DE PLAQUETAS, RECUENTO DE RETICULOCITOS

Y RECUENTO DE EOSINÓFILOS
RECUENTO DE PLAQUETAS
4.1 Marco teórico

El recuento de plaquetas es el número de esos elementos (Trombocitos) por milímetro
cúbico de sangre. La actividad plaquetaria esencial es la de conformar el tapón hemostático
primario en los mecanismos de la coagulación (Hemostasia). La visualización de una
extensión de sangre permite descubrir ciertas alteraciones de la serie plaquetaria y su
cuantificación para determinar si existe una disminución (Trombocitopenia) ó un aumento
(Trombocitosis).
4.2 Competencias
1.- Distingue los métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas
2.- Aplica el método más conveniente para el recuento de plaquetas
 Materiales
Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
Camara de Neubauer
 Reactivos
1. Reactivo de Sulfato de Magnesio al 14%
2. Colorante de Wright
3. Reactivo de Rees-Ecker:
Citrato de sodio 3.8 gr.
Formaldehído al 40% 0.2 mL.
4. Azul brillante de cresil 0.05 gr.
Los métodos para el recuento se pueden clasificar en:

METODOS INDIRECTOS:
Se basa en determinar la relación entre plaquetas y eritrocitos
M. de Fonio
M de Clef
M. de Demeshek
METODOS DIRECTOS:
Se basa en contar directamente las plaquetas de la sangre diluida en una cámara
hemocitométrica.
M. Rees - Ecker
M. Wright
4.4 Procedimiento
METODO DE FONIO:
1. Sobre la yema del dedo limpio, seco y desinfectado colóquese una gota grande de
solución esterilizado de sulfato de magnesio al 14% para que la sangre no tome contacto
con el aire. A través de la gota puncionar la piel con una lanceta de tal manera que
salga espontáneamente una pequeña gota de sangre a razón de 1:5 aproximadamente.
2. Mezclar con el borde de un portaobjeto para homogeneizar e impedir la aglutinación
de las plaquetas.
3. Con la misma lanceta llevar una gota de la suspensión sobre un portaobjetos y
verificar el frotis como si tratara de sangre sola.
Al sacar la preparación toma un brillo aterciopelado y casi incoloro al trasluz, teñir con
Wright en la forma habitual dejando actuar el colorante un tiempo mayor de dedicado a
la formula leucocitaria.
4. Con objetivo de inmersión y aceite de cedro contar en varios campos
simultáneamente los glóbulos rojos y las plaquetas hasta completar 1000 a 2000
hematíes.
CALCULOS
Para los cálculos se multiplica el número de plaquetas, contadas en el frotis, por el
número de hematíes por mmc. y dividir entre el número de eritrocitos contadas en la
extensión.
Hematimetria: 4'8000,0000 por mm3 de sangre.
50 x 4'800,000
----------------- = 240,000 plaquetas por mm3.
1000
METODO DE REES-ECKER:
Se debe operar con suma rapidez y limpieza para evitar la aglutinación y para no
confundir impurezas con los trombocitos.
1. Aspirar líquido de dilución hasta la marca de 0.5 con la pipeta para glóbulos rojos
2. Llenar con sangre capilar hasta completar con líquido de dilución hasta la marca de
101.
3. Dejar en reposo por espacio de 5 minutos.
4. Cargar la cámara cuenta glóbulos y dejar en reposo de 15 a 20 minutos para que
sedimente las plaquetas.
5. Con el objetivo potente contar en todo el cuadrado central de retículo para
hematíes (25 cuadrados de 16 cuadraditos cada uno)
CALCULOS: N X 10 x 200 = plaquetas por mm3.
N : numero de plaquetas en el mm central de retículo
10 : para referir al 1 mm3
200 : dilución cuando se toma sangre hasta 0.5
Las plaquetas se presentan redondeadas, ovales, alargadas, en forma de cono o
poliédricas e irregulares.
Se las ve muy refringentes, plateada, veces de color lila.
CIFRAS NORMALES: 50,000 a 400,000 plaquetas por mm3 de sangre
INTERPRETACION:
Las variaciones fisiológicas se presentación la ingestión de alimentos, actividad
muscular, menstruación, etc.
TROMBOPENIAS:
Por debajo de 30,000 dan manifestaciones hemorrágicas. Estados alérgicos, anemia
aplástica, leucemia linfática, intoxicaciones crónicas, atrofia de la medula ósea,
púrpura trombopénica esencial.
TROMBOSIS O TROMBOCITOSIS: (escasa significación clínica)
hemorragias copiosas, anemia poshemorrágica, después de las intervenciones
quirúrgicas, anemia hemolítica, policitemia genuina, leucemia mieloide crónica,
traumatismo, esplenomegalia, infecciones crónicas, fiebre reumática.
4.5 Resultados
4.6 Cuestionario:
1. Mencione los principales métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas.
2. Explique el fundamento del método de fonio y mencione los valores normales.
3. Explique el fundamento del método de Rees-Ecker
4.7 Fuentes de información:

1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona:
Masson; 2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid: Masson;
2005.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual moderno,
2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed. Madrid:
Elsevier-Masson; 2006.
RECUENTOS DE RETICULOCITOS
4.1 Marco teórico
Son hematíes jóvenes inmaduros pero de tamaño superior (macrocitos), reconocibles en las
extensiones de sangre por tinción especial, se observa en las anemias hemorrágicas y
hemolíticas.
4.2 Competencias
1. Utiliza el método en forma conveniente para el recuento de reticulocitos
2. Realiza el recuento de reticulocitos y aplica los cálculos correspondientes.
 Materiales
 Reactivos
Según el método humedo en tubo:
Azul brillante de cresil 0.25 gr.
Citrato de Sodio 0.1 gr.
Formol al 40% 0.05 mL.
Soluc. Fisiológica cps. 25 mL.
Según El método de Wolfer:
Azul cresil brillante.... 0.5 gr.
Alcohol absoluto........... 100 mL
4.4 Procedimiento
METODO HUMEDO EN TUBO:
En un tubo de Kahan se mezclan 2 gotas de sangre venosa o capital y 2 gts del reactivo.
Se tapa el tubo y se mantiene a la temperatura ambiente por el término de 2 a 30
minutos.
Luego se extrae 1 gota de la mezcla y se hace un frotis delgado, se seca al aire y se
práctica el recuento.
Cálculos:
Se cuentan 1000 hematíes anotando todos los que tienen filamentos azules de
reticulos.
Dividir por 10 para obtener el porcentaje.
Ej. 20/10 = 2%
METODO DE WOLFER
Procedimiento:
1. Sobre portaobjetos hace extensiones de la solución de azul cresil brillante. Secar al
aire.
2. Depositar 1 gota de sangre capilar y hacer un frotis sobre el cresil, cuyo alcohol se
ha evaporado. Dejar en reposo 10 minutos.
3. La sustancia retículo gránulo filamentoso de los reticulocitos se tiñe de azul claro
con este colorante supravital y ofrece el aspecto de madeja.
4. Mientras mas tenues son las capas de la solución alcohólica y de las sangres mejor
será la lectura.
5. Después del desecado las muestras son ligeramente teñidas por Wright
6. Se observa con objetivos de inmersión.
Valores Normales
Adultos: 0.5 -2.5%
Niños: 5-10%
Interpretación:
Aumento: Recién nacidos hasta 2 a 5 días después del nacimiento. Anemias hemolíticas
constitucionales Anemias que evoluciona con regeneración por tratamiento
específico de vit. B 12 en la anemia perniciosa, Acido fólico en anemia
megaloblásticas del sprue Hierro, anemia microcítica e hipocrómica
ferroprivas. Anemia hemolítica hereditaria (10-20%). Cuando la sangre se
regenera rápidamente después de una hemorragia (aumenta hasta constituir
el 50% de hematíes)
Disminución Anemia aplástica (falta absoluta) anemias que evolucionan con
insuficiencia e hiperactividad funcional de la medula ósea (anemia
perniciosa muy avanzada)
4.5 Resultados
4.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica del recuento de reticulocitos?
2. ¿Describa las características de un reticulocito. Tipos de reticulocitos.
3. Mencione y explique el fundamento de los métodos para el recuento de reticulocitosis.

Panamericana; 1986.
3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed. Buenos Aires:
Librería El Ateneo; 1985.
4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual Moderno S.A.;
1986.
RECUENTO DE EOSINOFILOS
4.1 Marco teórico

Serie celular que pasa por las mismas etapas que la serie neutrófila polimorfonuclear. El
recuento es de importancia clínica para determinar las eosinofilias características en
enfermedades alérgicas y parasitarias.

4.2 Competencias
1. Desarrolla el método de Dunger para el recuento de eosinófilos.
2. Efectúa los cálculos correspondientes para el recuento de eosinófilos
 Materiales
Cámara de Neubauer
Pipeta de Thoma para glóbulos blancos
 Reactivos
REACTIVO DE DUNGER
Solución acuosa de Eosina al 2% ------------- 15 mL.
Acetona -------------------------- 10 mL.
Agua destilada csp. ----------------------- 100 mL.
Debe conservarse bien tapado y a baja temperatura.
La solución de Dunger lisa los hematíes y leucocitos pero los eosinófilos son más
resistentes.
La eosina tiñe de amarillo brillante los gránulos eosinófilos y la acetona disminuye la
tendencia de los eosinófilos a romperse.
El líquido puede conservarse durante dos semanas en la nevera.
4.4 Procedimiento
METODO DE DUNGER:
Seguir la misma técnica que para el recuento de Leucocitos con dilución 1/20 (marca
0.5) y los cálculos son iguales.
CIFRAS NORMALES:
Hasta 500 eosinófilos
EOSINOFILIA:
En infestaciones parasitarias y afecciones alérgicas, asma bronquial, urticarias se llegan
a contar hasta 3000 eosinófilos raramente puede encontrarse cifras mayores de 10,000
por mm3.
EOSINOPENIA:
Provocada por la hormona adrenocorticotrofica (ACTH), ciertosesteroides de la corteza
suprarrenal y la adrenalina.
La misión exacta de los eosinófilos en la reacción inmunológica alérgica no está
determinada. Se supone que los complejos Ag-Ac o la histamina que están implicados
en estas reacciones, atraen los eosinófilos por quimiotactismo.
4.5 Resultados:
4.6 Cuestionario
1. Explique el fundamento del recuento de eosinófilos?
2. ¿Cuál es la interpretación clínica de los eosinófilos?
3. ¿En que casos se solicita un recuento de eosinófilos por parte del profesional médico?

Masson; 2005.

2005.
2006.
PRÁCTICA No. 5: TIEMPO DE COAGULACIÓN, TIEMPO DE SANGRIA, TIEMPO

DE PROTROMBINA, DOSAJE DE FIBRINÓGENO
5.1 Marco teórico
Debido a la enorme complejidad de todos los procesos que intervienen en el hecho
hemostático, resulta imposible determinar la verdadera capacidad hemostática in vivo de un
individuo mediante la realización de pruebas en el laboratorio, llevada acabo, además bajo
condiciones artificiales. Sin embargo, la realización y valoración de unas cuantas técnicas
puede ser suficientes muchas veces para presuponer, con un alto margen de seguridad, la
existencia, o no de un riesgo hemorrágico. Atendiendo a los puntos fundamentales de la
fisiología de la coagulación de la sangre, se deduce que la valoración rutinaria de la
hemostasia debe englobar por lo menos la prueba de Quick, el tiempo de coagulación
sanguínea, cuantificación del fibrinógeno y de las plaquetas.
5.2 Competencias
1. Aplica las técnicas apropiadas para determinar el tiempo de coagulación, tiempo de
sangría y de protrombina.
2. Hace la interpretación clínica y correlacionar las coagulopatias.
3. Utiliza el método espectrofotométrico para el dosaje de fibrinógeno.
 Materiales
Cronometro
Tubos capilares
Tira de papeles secantes
Tubos pequeños
Tubo cónico graduado
Equipos
Espectrofotometro
 Reactivos

Reactivo de Tromboplastina
5.4 Procedimiento
1. TIEMPO DE COAGULACIÓN:
A. METODO DE BURKER: 2' - 8'
1. En una lámina portaobjeto colocar 2 gotas de sangre
2. Dejar en reposo 3'. Con el estilete a la 1ra. gota levantar c/ 30". Hasta formar la
FIBRINA.
3. Luego de 30" pasar a las 2da gota. Levantar hasta formar la FIBRINA.
4. Anotar dicho tiempo.
NOTA: El índice de coagulación está dado por el tiempo trascurrido entre colocar
la gota y la formación de fibrina
B. METODO DE SABRAZE: 3' - 8'
1. 3 tubos capilares (8 en. de largo)
2. Obtener sangre capilar detectar la 2 primeras gotas en la 3ra cargar los capilares.
3. Se deja en reposo 3'. Luego romper su trozo c/ 30' hasta que al romper se forme
un filamento de FIBRINA. Toma el tiempo.
C. METODO DE LEE Y WHITE: 5' - 10'
1. Sangre venosa (3,5 ml) verter en 2 tubos 1 mL de sangre.
2. Anotar el tiempo cuando la sangre entra en la jeringa.
3. La indica uno de los tubos c/ minuto. ángulo de 45° hasta que la sangre coagulada
no se desplace. Anotar el tiempo.
4. Para el otro tubo hacer la misma operación. Anotar el tiempo, se recomienda
reportar la lectura del 2do tubo, porque la agitación y manipulación aceleran la
coagulación.
2. TIEMPO DE SANGRIA O DE HEMORRAGIA

METODO DE DUKE: 1' - 3'
1. Desinfectar el lóbulo de la oreja y pinche con una profundidad de 3 mm.
2. C/30" límpiese con papel de filtro la gota de sangre que fluye el papel no debe
rozar la piel.
3. Cuando ya no haya hemorragia toma el tiempo no debe haber menos de 2
manchas ni más de 6.
4. Se recomienda hacer 2 determinaciones.
NOTA: El lapso transcurrido entre la aparición de la 1ra. gota y la toma de la
última es el tiempo de sangría.
3. TIEMPO DE PROTOMBINA
METODO ORTHO-BRAIN
1. En un tubo de prueba de 13 x 100 mm colocar 0,5 ml de solución de oxalato de sodio
0.1 M y adicionar 4.5 mL de sangre venosa recién obtenida, mezclar y separar el
plasma mediante centrifugación.
2. En otro tubo de 13 x 100 mm depositar 0.2 ml de tromboplastina activada + cloruro
de calcio 0.02 M.
3. Incubar los tubos del plasma y del reactivo a 37oC por 2'.
4. Con una pipeta terminal de un mL graduada en décimos, medir 0.1 mL de plasma
oxalatada y agregar rápidamente al tubo que contiene el reactivo de
tromboplastina, el agregado debe hacer desde una distancia de 2 cm. soplando el
contenido, simultáneamente poner en marcha el cronómetro, el contenido debe
mezclarse por movimientos laterales del tubo dentro del agua a 37 oC.
5. Observar la formación de una masa de coagulo que es el final de la reacción de
protrombina.
Valores normales: 10 segundos a 12 segundos
4. VALOR PROTOMBINICO O INDICE PROTROMBINICO
Se obtiene dividiendo el Tiempo de Protrombina Normal entre el tiempo de Protombina
encontrado y multiplicado por 100.
V.P. = T.P.N. x 100

T.P.E.
4. TIEMPO DE RETRACCION DEL COAGULO

La retracción del coagulo es la contracción espontánea de la sangre total, obteniéndose
una masa sólida con todo los componentes sanguíneos y la exudación de suero; dicha
actividad es función retráctil de las plaquetas y del Fibrinógeno para formar fibrina.
METODO DE MAC FARLAND.
El método utiliza un tubo de centrífuga graduada en divisiones de 0.1 mL; un alambre
de 1 mm de espesor, 12 cm. de longitud con un ensanchamiento en forma de botón de
1.2 cm. de diámetro en un extremo; un corcho que se adapta a la boca del tubo, el
corcho debe tener un orificio para dar paso al alambre del extremo opuesto al botón.
1. En un tubo de centrífuga graduado depositar 5 mL de sangre venosa recién extraída.

2. Colocar la varilla de alambre de modo que quede el ensanchamiento dentro de la
sangre, adopte el corcho en la boca del tubo.
3. Llevar el tubo a un baño de agua a 37 oC y observar de tiempo la coagulación de la
sangre.
4. Permanezca el tubo dentro del agua a 37 oC por una hora después de la formación
del coagulo.
5. Con cuidado retirar el alambre con el coagulo hacia arriba, dejar escurrir el suero
dentro del tubo por 1 ó 2 minutos.
6. Leer el volumen del suero que ha quedado en el tubo sobre la escala graduada.
Cálculos:
El tiempo de retracción del coagulo se expresa en función del volumen del suero
obtenido, multiplicado por 100 y dividido entre el volumen de sangre total obtenido.
Ejemplo:
Se ha obtenido 5 ml de sangre venosa y después de coagular ha dejado 3 ml de suero, la
retracción porcentual será:
3 x 100 = 60%
5
Valores normales: De 44 - 67%
Interpretación Clínica:
Está aumentada en las anemias por disminución del volumen celular, en la
trombocitopenia, eritremia y en enfermos con defectos en la coagulación.
5. DOSAJE DE FIBRINOGENO
Constituye el 5% de las proteínas plasmáticas.
Es una proteína soluble en el plasma sanguíneo muy lábil debido a su punto isoeléctrico
(pH 6,6 - 7). Un litro de plasma contiene 4 g de fibrinógeno.
Precipita por el calor de 52 a 56 oC y por solución de cloruro de sodio al 0,85% a
semisaturación.
El fibrinógeno se origina en el hígado y en todo el sistema reticuloendotelial
Se relaciona estrechamente con todo el proceso de la coagulación de la sangre.
METODO DE GORNALL - BARDAWILL Y DAVID
Fundamento:
Por este método se determina dosando proteínas totales séricas en el plasma y el suero,
la diferencia de ambas proteínas totales corresponde a la cantidad de fibrinógeno.
1. Reactivo de Gornall: (Biuret)
Sulfato de cobre con 5H2O . . . . . . . . . . . . . 1,5 g.
Tartrato de sodio y potasio . . . . . . . . . . . . 6.0 g.
Disolver en 500 mL de agua destilada, agregar 300 mL de hidróxido de sodio al 10%,
enfriar y completar a 1000 mL con agua destilada.
2. Solución del Cloruro de sodio al 0.85%

PROCEDIMIENTO:
En tres tubos de prueba limpios y secos membretar y colocar:
S P B
Suero Problema 0.1 mL - -
Plasma Problema - 0.1 mL -
Cloruro de Sodio al 0.85% 1.9 mL 1.9 mL 2 mL.
Reactivo de Gornall 8 mL 8 mL 8 mL.
Mezclar por inversión y dejar en reposo por 20 minutos a temperatura ambiente.
Leer a 540 nm. contra el blanco del reactivo.
Cálculos.
Por ejemplo si las lecturas para proteína totales en el plasma es de 130 y para el suero
de 125, ambos se multiplican por el factor de proteínas (0.060), luego los resultados
obtenidos se restan obteniéndose mg. % de fibrinógeno.

Proteínas totales en el plasma: 130 x 0.060 = 7.80 g -
Proteínas totales en el suero: 125 x 0.060 = 7.50 g
= 0.30 g
O sea: 300 mg. %
Valores normales: 200 - 400 mg. %
METODO DE STIRLAND:
FUNDAMENTO:
Se basa en la propiedad del fibrinógeno de coagular a 56 oC mientras que las demas
proteínas plasmáticas solo coagulan por encima de los 60 oC
El fibrinógeno se precipita con solución de Cloruro de Sodio al 0.85%
La intensidad del enturbamiento es proporcional a la concentración de fibrinógeno.
PROCEDIMIENTO:
1. En un vial con anticoagulante obtener 5mL de sangre venosa.
2. Transferir a un tubo y centrifugar por 5 minutos a 3000rpm
3. En 2 tubos P y B depositar 0.6ml de plasma y agregar 6ml de ClNa al 0.85%
4. Mezclar ambos tubos.
5. El tubo P se pone en Baño Marìa a 56 °C por 15 minutos
6. el tubo B se deja a temperatura ambiente y sirve para llevar a “O” de D.O.
7. Retirar el tubo del baño y enfriar a temperatura ambiente.
8. Lectura: Se lee el enturbamiento al espectrofotometro a 660 nm.
9. Dicha lectura se lleva a la curva de enturbamiento del Timol. Cada unidad de
enturbamiento equivale a 29.5mg% de Fibrinógeno.
INTERPRETACIÓN:
Cifras altas: Hiperhinosis: Neumonía, Embarazo normal, TBC pulmonar, hepatitis tóxica,
fiebre reumática, artritis reumatoidea, nefritis, tumores malignos, septicemia.
Disminución: Fibrinopenia: desnutrición, fiebre tifoidea, Anemia intensa, lesiones
difusas de las células hepáticas, intoxicaciones por fósforo y cloroformo.
5.5 Resultados
5.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de coagulación?
2. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de sangría?
3. ¿Cuál es el fundamento bioquímico del proceso de retracción del coagulo?
4. ¿Cuál es el fundamento del dosaje de fibrinógeno?

Masson; 2005.
2005.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Edit. Manual
moderno, 2006.
PRÁCTICA No. 6: DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA

ABO, VARIANTE DU y PRUEBA DE COOMBS.
DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA ABO Y FACTOR RH.

6.1 Marco teórico:

El polimorfismo mas significativos de los eritrocitos depende de las características
inmunológicas, basándose en la presencia o ausencia de las propiedades químicas en la
superficie de los hematíes que permiten diferenciarlos y clasificarlos en un gran número de
grupos sanguíneos bien definidos por sus reacciones con las hemaglutininas específicas.
6.2 Competencias:
1.-Distingue los diversos grupos sanguíneos del sistema ABO
2.- Diferencia el Rh positivo del negativo
3.-Aplica la Variante Du para la comprobación del Rh negativo.
 Materiales
Laminas de porcelana
Tubos de ensayo
 Reactivos
6.4 Procedimiento
Método Indirecto de Beth Vincent:

1. Colocar una gota de sangre en un portaobjeto.
2. Agregar 1 gt. del suero tipificado anti-A y 1 gt. del suero tipificado anti-B, mezclar y
observar.
Si no hay aglutinación el grupo será CERO.
Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-A será GRUPO A
Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-B: grupo B.
Si hay aglutinación en ambos el grupo será AB.
FACTOR Rh .-
En un porcentaje se coloca 1 gota de sangre mas 1 gto. del anti-Rho (D). Mezclar y observar.
Si hay aglutinación es Rh positivo.
6.5 Resultados
VARIANTE Du DETERMINACION DEL ANTIGUO Rho DEBIL O D

6.1 Marco teórico
El término Du se refiere a la expresión débil del antígeno D normal es decir, la menor
concentración del antígeno D por glóbulo rojo esta es una característica heredada. Como
entre los anti-D existen ligeras diferencias la potencia de la reacción de los eritrocitos Du
varia con el suero utilizado.
6.2 Competencias
1. Aplicar la variante Du para la comprobación del Rh negativo.
2. Realiza el proceso para la determinación de la variante Du
6. 3 Materiales y equipos
 Materiales
Tubos de ensayo
 Reactivos

Suero antihumano de Coombs
6.4 Procedimiento
1. Hacer una suspensión globular al 2% en SSF.

2. En un tubo pequeño depositar:
1 gota de suero anti-Rh + 2 gotas de la suspensión globular al 2%.
3. Incubar a 37 oC por 60 minutos para sensibilizar a las células.
4. Sacar el tubo de la incubadora y lavar las células 3 veces en tubo de ensayo llenos de
solución salina hasta cerca del borde del tubo.
Decantar completamente después del último lavado, acercando a la boca del tubo
un papel de filtro para absorber el líquido. (centrifugación a 2,000rpm por 5 minutos)
5. Agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. Agitar bien el tubo para homogenizar.
6. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.
7. Retirar el tubo y suspender nuevamente las células empaquetas mediante agitación
moderada y examinar si existe aglutinación o no.
Si hay aglutinación: Du es Rh positivo
Si no hay aglutinación: Du es Rh negativo
PRUEBA DE COOMBS
6.1 Marco teórico
Se basa en que los dos anticuerpos llamados incompletos pueden encontrarse revistiendo los
eritrocitos o bien estar en suspensión en el plasma,. Como corresponden a la fracción
gammaglobulínica de las proteínas séricas, un suero antigamaglobulina humana de conejo
(suero de Coombs) aglutinan directamente los eritrocitos cuando están revestidos, pero no
cuando los anticuerpos están en suspensión. De esta diferencia surgen dos tipos de pruebas de
Coombs: la directa y la indirecta.
6.2 Competencias
1. Diferencia las pruebas de Coombs directa e indirecta
2. Emplea las técnicas adecuadas para determinar los anticuerpos incompletos.
 Materiales
Tubos de ensayo
Equipos
Centrifuga
 Reactivos
1. Suspensión globular al 2%
2. Solución salina fisiológica
3. Suero antihumano de Coombs
6.4 Procedimiento
A. PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA:
Se emplea para detectar isoanticuerpo circulantes en el suero que cubren pero no aglutinan a
los glóbulos suspendidos en solución Salina fisiológica.
La aglutinación solo se produce al tratar los glóbulos recubiertos con suero de Coombs.
1. Prepara suspensión globular al 2% en solución salina fisiológica de la sangre del grupo O Rh

positivo.
2. En un tubo de ensayo: 2 gotas de la solución preparada + 2 gotas del suero de la madre

3. Incubar en B.M. a 37 oC por 60 minutos.
4. Llenar con solución salina fisiológica. Mezclar. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos.
5. Decantar el sobrenadante. Repetir por 3 veces dicho lavado. Absorber con papel filtro.
6. Al sedimento que queda agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs.
7. Mezclar.
8. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.
9. Retirar el tubo y agitar moderadamente a las células.
Examinar el Tubo: Si hay aglutinación POSITIVO (contiene anticuerpos anti-Rh incompleto
o bien anticuerpos cuya especificidad y nombre está determinado por la calidad de
glóbulos empleados).
No hay aglutinación NEGATIVO.
B. PRUEBA DE COOMBS PRUEBA DIRECTA:

Es empleada para detectar anticuerpos que se han fijado en los glóbulos del paciente in vivo,
por ejemplo en la eritroblastosis hemolítica del recién nacido, en ciertas anemias hemolíticas
auto-inmunes y pacientes que hay recibido transfusiones incompatibles.
En los niños no tratados de eritoblastosis fetal, la reacción positiva persiste durante varias
semanas, mientras que en las exanguineo - transfusión va seguida de una negativización a los
pocos días.
1. En un tubo de ensayo se colocan 5 gotas de la sangre en estudio y se llena con solución
fisiológica.
2. Mezclar invirtiendo el tubo varias veces, y centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos.
Decantar el líquido sobrenadante.
3. Repetir el lavado dos veces, retirando cada vez todo el líquido remanente.
4. Luego se prepara una suspensión de hematíes al 2% en SSF.
5. En un tubo se coloca: 1 gota de susp. Globular + 1 gota del suero antiglobulínico
6. Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm y observar si hay aglutinación.
La aglutinación en el tubo contenido los hematíes problemas y su ausencia en el tubo testigo
evidencia su sensibilización.
Esta prueba es utilizada para el diagnóstico de la eritroblastosis fetal (ictericia hemolítica del
recién nacido).
Se estudia la sensibilización de los eritrocitos de la sangre umbilical.
Como profilaxis de la enfermedad, se buscan los Anticuerpos antes del parto en el suero de la
madre mediante la prueba indirecta.
También se emplea para el diagnóstico de algunos tipos de anemias hemolíticas.
6.5 Resultados
6.6 Cuestionario
1. ¿Cuándo se solicita una determinación de la Prueba de Coombs Indirecta?
2. ¿Porque es importante la determinación de la Variante Du?
3. ¿Cuál es la importancia clínica de la prueba de Coombs Directa.
4. ¿Cuál es la importancia clínica de la prueba de Coombs Indirecta.

Masson; 2005.
2005.
2006.

PRACTICA No 7: PRUEBAS SEROLÓGICAS: DETERMINACIÓN DE FIEBRE
TIFOIDEA, PARATIFOIDEA, MALTA, SIFILIS
AGLUTINACIONES
7.1 Marco teórico

Las pruebas inmunológicas son muy útiles para el diagnóstico de muchas patologías a través
de los métodos cualitativos y cuantitativos.
Los antígenos febriles se utilizan para efectuar diagnósticos rápidos de las fiebres tificas,
paratificas y brucellosis. Se utilizan en la prueba rápida de aglutinación en lámina mediante
la reacción antígeno-anticuerpo con el objeto de detectar la presencia en suero de
anticuerpos que los pacientes producen durante las enfermedades mencionadas.
7.2 Competencias
1. Realiza las determinaciones inmunológicas de las pruebas de aglutinaciones.
2. Explica los resultados obtenidos a través de las pruebas cualitativas y cuantitativas.
 Materiales
Lamina de vidrio
 Reactivos
a. Antígenos febriles
o Suspensiones de cepas bacterianas estabilizadas y standarizadas: tifico O,
tifico H, paratífico A, paratífico B y brucella abortus.
7.4 Procedimiento
Las determinaciones comprenden dos etapas:

1. Prueba presuntiva:
Con una pipeta serológica o una micropipeta depositar una gota de suero problema en
cada cuadrado.
A cada gota de suero se le añade una gota de cada antígeno previa agitación.
Mezclar con un palillo mondadientes para cada cuadrado y leer en el término de uno a
tres minutos.
Lectura: La reacción es positiva cuando aparece aglutinación en uno de los 5 cuadrados.
2. Prueba de titulación:
Se preparan 5 cuadrados limpios y con una pipeta depositar en cada uno el volumen de
suero:
0,08, 0,04, 0,02, 0,01 y 0,005 mL de suero respectivamente.
Los títulos serán: 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320.
Agregar a cada suero una gota del antígeno. Mezclar.
Luego hacer la lectura.
Los resultados se expresan en términos de la más alta dilución que presenta
aglutinación.
7.5 Resultados
7.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de las aglutinaciones?

2. ¿Cómo se relacionan los valores positivos de las aglutinaciones con el Hemograma de
Schilling?
7.7 Fuente de información

Masson; 2005.
2005.
2006.
DIAGNÓSTICO DE SIFILIS
7.1 Marco teórico
La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual causado por una bacteria espiritada, el
Treponema pallidium. Para el diagnóstico se emplean pruebas serológicas treponémicas y
no treponémicas, dentro de las no treponémicas: VDRL y RPR.
7.2 Competencias
1. Determina los anticuerpos del Treponema pallidium a través de los métodos serológicos no
treponémicas.
2. Realizar una correcta interpretación de los resultados de las pruebas serológicas.
 Materiales
Equipos
Rotador eléctrico
Microscópio
Baño María
 Reactivos
1. Solución antigénica de VDRL
2. Solución salina al 0,9%
3. Sueros controles
7.4 Procedimiento
A. MÉTODO DE VDRL
 VDRL CUALITATIVO EN SUERO
1. Numerar los anillos de la lámina
2. Cargar 0.05mL de los surcos control reactivo y no reactivo al primer y tercer anillo
respectivamente
3. En el segundo anillo cargar la muestra problema.
4. Añadir con la micro pipeta 0.05mL de solución antigénica preparada sobre el suero
contenido en cada uno de los anillos de la lámina.
5. Colocar la lámina serológica con las muestras en un rotador a 1800 rpm por 4 min.
6. Terminada la rotación examinar la lámina inmediatamente usando un microscopio con
objetivo de 10x.
LECTURA E INFORME
1. Reactivo (R)- grumoso grandes y medianos

2. Reactivo débil (RD) grumos pequeños
3. No reactivo (NR) sin grumos.
 VDRL CUANTITATIVA EN SUERO

1. Colocar 0.05ml de solución salina al 0.9% a 6 anillos de la lámina serológica
2. Añadir 0.05ml de suero problema en el anillo 1.
3. Mezclar la solución salina y el suero del anillo uno y transferir de este anillo,
0.05mL al anillo dos.
1. Mezclar el contenido del anillo dos y transferir 0.05ml al anillo tres.
2. Y asi sucesivamente hasta el anillo seis.
3. Añadir con una micropipeta 0.05 mL de la solución antigénica sobre el contenido de
cada anillo de la lámina serológica. Del anillo 1 al 6.
4. Colocar la lámina con las muestras sobre el rotador a 180 rpm por 4 min. o rotarlo
manualmente.
5. Examinar al microscopio con objetivo de 10x.
6. De obtener reactivo sobre el título del sexto anillo continuar con las diluciones.
7. Los títulos correspondientes serán 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 y así sucesivamente.
LECTURA E INFORME
Se considera positiva el título que da la máxima precipitación.
 B. MÉTODO DE RPR
Es una prueba serológica plasmática de floculación macroscópica
RPR CUALITATIVO EN PLASMA
1. Colocar 0.05ml de los sueros a evaluar o una gota utilizando el aplicador del kit no
olvidar colocar los sueros control.
2. Con ayuda del aplicador extender la muestra dentro del círculo sin salir del margen.
3. Agregar 0.017ml del antígeno con micropipeta o una gota con el gotero del kit sobre
la muestra a evaluar.
4. Colocar la tarjeta con las muestras sobre el rotador, por 8 min a 100 RPM, o hacerlo
manualmente.
5. Luego de los ocho minutos hacer la lectura con ayuda de la lámpara de luz.
6. - LECTURA E INFORME
7. Reactivo.-(R) Grumos grandes medianos, o pequeños pero definidos
8. No reactivo (NR) Sin grumos si se observa grumos definidos o pequeños debe
realizarse la prueba cuantitativa.de igual manera que para VDRL .
7.5 Resultados
7.6 Cuestionario
1. ¿En que se diferencian las pruebas de VDRL y RPR?
2. ¿Cuáles son las pruebas confirmatorias de un VDRL positivo?
3. ¿Cómo se relaciona el Hemograma de Schilling con un VDRL positivo?
7. 7 Fuentes de información
Masson; 2005.
2005.
2006.

DETERMINACIÓN DE CRIOAGLUTININAS
7.1 Marco teórico

Las crioaglutininas son anticuerpos que en el suero son capaces de causar la aglutinación de
sus propios eritrocitos (autoaglutininas), asi como las de otras personas (isoaglutininas), a
una temperatura comprendida entre o y 5 oc. Estos anticuerpos que también se les conoce
con el nombre de crioaglutininas se hallan presentes en títulos muy bajos en las personas
sanas.
La aglutinación es de carácter reversible, es decir que desaparece a 37 oc y reaparece a
baja temperatura. Este es un buen procedimiento para detectar una aglutinación auténtica
al frío.
7.2 Competencias
1. Determina el proceso para la determinación de crioaglutininas
2. Interpreta los resultados encontrados en la prueba de crioaglutininas

 Materiales
Tubos de ensayo
 Reactivos:
Oxalato de Potasio al 2%
Solución de citrato de sodio al 3,8%
Solución de cloruro de sodio al 0,85%
7.4 Procedimiento
MÉTODO DE AIQUEL
1. Extraer 10 mL de sangre: colocar 4,5mL en un tubo que contiene 0,5mL de
anticoagulante y el resto de sangre colocar en otro tubo sin anticoagulante.
2. A los dos tubos llevar a la temperatura de 37 oC los dos hasta que la sangre del segundo
tubo coagule.
3. Centrifugar el tubo que contiene el coagulo, a fin de separar el suero.
4. Del tubo con anticoagulante tomar una cantidad determinada y lavar los eritrocitos por
3 veces con SSF.
5. Después de eliminar el líquido del último lavado preparar una suspensión al 2% en SSF.
TITULACION:
6. En 8 tubos de ensayo colocar en el primer tubo o,8mL de SSF y a los demás 0,5mL luego
se agrega 0,2 mL de suero se mezcla y se pasa 0,5mL al 2do tubo y así sucesivamente
hasta el séptimo tubo de donde se extraen 0,5ml que se desechan. El tubo octavo sirve
de testigo.
7. Se agregan a todos los tubos 0,5mL de la suspensión de hematíes. Las diluciones serán:
8. 1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320 y 1/640.
9. Colocar los tubos en la heladera a 4º hasta el día siguiente.
10. Hacer las lecturas.
MÉTODO DE TRÖNBERG:
1. Obtener 6 mL de sangre, mezclar con 1,5mL de citrato de sodio al 3,8%
2. Centrifugar a 2,000rpm durante 5 minutos.
3. Separar el plasma en un tubo de ensayo.
4. Con el paquete de glóbulos rojos preparar una suspensión de hematíes al 0,5% (0,05ml
de glóbulos rojos y completar a 10mL de SSF)
TITULACIÓN:
5. En 6 tubos de ensayo colocar en cada uno 0,3mL de SSF
6. Al primer tubo colocar 0,3mL del plasma, mezclar y pasar al segundo tubo y así
sucesivamente hasta el sexto tubo del cual se desecha 0,3mL

7. Las diluciones serán: ½, ¼ , 1/8, 1/16, 1/32 y 1/64.
8. Adicionar 0,3mL de la suspensión de hematíes al 0,5% a cada uno de los tubos.
9. Colocar en una gradilla y llevar a refrigeración (2-5 oC por 24 horas).
10. Examinar todos los tubos balanceándolos o girando ligeramente para apreciar la
intensidad de aglutinación en caso de ser positiva se considera al de mayor dilución y
son negativas cuando no existe aglutinación.
SIGNIFICANCIA CLÍNICA
Se asocia con el síndrome clínico de la neumonía atípica primaria causado por el
Micoplasma pneumoniae, así mismo en la anemia hemolítica adquirida y congénita, en el
falciformismo, en la tripanosomiasis, algunas hepatitis se pueden encontrar títulos
elevados.
ANTIESTREPTOLISINAS O (ASTO o AS0)

7.1 Marco teórico
La antiestreptolisina “o” prueba que a menudo se designa el nombre de asto , es útil para
el diagnóstico y tratamiento de la fiebre reumática , la glomérulo nefritis aguda y otras
infecciones por estreptococo beta hemolítico.
Un título alto de antiestreptolisina o significa infección estreptocócica sobrepasada o actual
y concretamente debido a estreptococos beta – hemolíticos del grupo serológico A
(excepcionalmente de los grupos C y D de la clasificación de lancefield) amigdalitis,
escarlatina, sepsis puerperal, erisipela etc. Pero tienen especial interés en los procesos
estreptocócicos que aparecen como segunda enfermedad: fiebre reumática y glomérulo
nefritis aguda. No es por, lo tanto una prueba específica de fiebre reumática, pero apoya su
diagnóstico cuando la historia y los signos clínicos la sugieren.
7.2 Competencias
1. Explica el fundamento de la determinación de antiestreptolisina.
2. Realiza el proceso para determinar antiestreptolisina.
3. Interpreta los resultados cuantitativos para un ASTO positivo.
 Materiales
Tubos de ensayo
Pipetas automáticas
 Reactivos
1. Suspensión de eritrocitos humanos lavados dos veces con solución fisiológica y una
con solución buffer de ASTO, se suspende al 5% en este buffer.
2. Buffer de ASTO, cloruro de sodio 7.40 g, fosfato monopotásico 3.17g , fosfato disódico
anhidro 1.81g, se disuelve c.s.p 1000cc con agua destilada conservar en heladera.
3. Antígeno de estreptolisina “O”
4. Suero del paciente no hemolizado ni contaminada debe ser inactivada a 56 oCx 30min ó
60 oC x 10min.
7.4 Procedimiento
1. Se hace una dilución del suero 1/20
2. En ocho tubos numerados del 1 al 8 colocar 0.20mL de buffer de ASTO.
3. En el primer tubo colocar 0.20mL del suero diluido 1/20 se mezcla bien y de el se
toma 0.20mL y pasar al siguiente tubo y así sucesivamente hasta el séptimo tubo
eliminando finalmente 0.20mL del tubo siete el octavo sirve de control.
4. De esa manera obtenemos las siguientes diluciones 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640,
1/1280, 1/2560.A los ocho tubos se coloca 0.10 mL de antígeno y se incuban en
baño maría a 37 oC durante 15 minutos, luego añadir 0.10 ml de las suspensión de
eritrocitos al 5% en buffer de ASTO. Se agita para homogenizar y se incuba
nuevamente a baño de agua a 37 oC por 45min.

VALORES NORMALES. Por este método los valores normales van de 1/40
a 1/60 unidades Todd.
INTERPRETACIÓN. La presente determinación es útil para el diagnóstico y
tratamiento de la fiebre reumática y sirve para la comprobación serológica de las
antitoxinas de defensa contra las toxinas bacterianas, es decir para la
comprobación de una infección existente o pasada por estreptococos beta
hemolítico de los grupos serológicos humanos A, C y G.
7.5 Resultados
7.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de ASTO?
2. Mencionar los estados fisiológicos y medicamentos que interfieran con la prueba de
antiestreptolisina.
3. ¿Cómo se determinan las pruebas de PCR y LATEX?
4. ¿Qué importancia clínica tienen las determinaciones de PCR y LATEX?

1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed.
Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001.
2. Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed.
Barcelona: Elsevier España SL; 2008.
3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros
s.l.; 2007.
4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992.
5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –
Hill Interamericana; 2002.
PRACTICA Nº 8: EXAMEN DE ORINA COMPLETA: EXÁMEN FÍSICO, QUÍMICO

y MICROSCÓPICO
8.1 Marco teórico
La utilidad del análisis de orina tiene una doble vertiente: por un lado, permite la valoración
directa del propio aparato urinario, por otra, más indirecta, resulta ser un reflejo de
determinadas situaciones bioquímicas de la sangre. A estas ventajas hay que añadir, además
la facilidad de su recogida, que habitualmente no representa ninguna molestia valorable
para el paciente .el examen de orina completa significa que se realizara varias pruebas
física (densidad, pH, color. Etc.), bioquímicas (glucosa, proteínas, nitritos, pigmentos
biliares, etc.) Y microscópicas del sedimento urinario (leucocitos, hematíes, cilindros,
bacterias ,cristales, etc.)
8.2 Competencias
1. Aplica el proceso físico-químico para el examen de orina
2. Identifica los diversos elementos en el examen microscópicos de la orina
3. Explica la interpretación clínica de los resultados del examen de orina
 Materiales
Tubos de ensayo
Equipos
Microscopio

Centrifuga
Urodensimetro
 Reactivos
Tiras reactivas para determinaciones bioquímicas en orina
8.4 Procedimiento
Según la finalidad del análisis y no mediando indicaciones especiales del médico se instruirá
al paciente acerca de como procederá para la recolección de muestra de orina, teniendo en
cuenta:
Par los exámenes de rutina, es suficiente una muestra de reciente micción salvo en los casos
en que se necesario practicar determinaciones casos es preciso realizar los exámenes en un
muestra correspondiente a la mezcla de la orina total de 24 horas, es decir que compensa el
metabolismo de un almuerzo o de una cena. Para reunir esta muestra, el paciente iniciará la
recolección a las 8 a.m. vaciando la vejiga y desechando esa primera micción. Luego las
distintas micciones se recogerán en un recipiente de boca ancha y perfectamente limpio
incluyendo la micción de las 8 de la mañana del día siguiente.
El recipiente conteniendo la muestra deberá conservarse en un ambiente fresco como para
impedir la descomposición prematura de la orina.
Para el examen microscópico del sedimento, se utiliza preferentemente una muestra de
reciente micción y en especial la obtenida por la mañana al levantarse el paciente.
Se prefiere las primeras muestras de la mañana, que suelen ser las más concentradas.
En todo examen de orina se tomará en cuenta:

1. EXAMEN FISICO:
Cantidad
Color
Olor
Espuma
Reacción
Densidad
2. EXAMEN QUIMICO:
Determinación de:
acidez total proteínas
cloruros glucosa
fosfatos cuerpos cetónicos
urea pigmentos biliares
urobilinógeno hemoglobina
Hoy en día existe en el mercado la utilización de papeles o tiras reactivas para el análisis
de orina que facilita la determinación cualitativa y cuantitativa de los componentes
químicos de la orina.
3. EXAMEN MICROSCOPICO DE SEDIMENTO:
El sedimento se obtiene centrifugando 10 ml. de orina a 1500rpm durante 5 minutos,
transcurrido dicho tiempo se vuelca el líquido sobrenadante y se suspende el sedimento
en el liquido remanente o sea que queda adherido a las paredes del tubo de centrífuga.
Se coloca entre porta y cubreobjetos se observa al microscopio con objetivo de menor
aumento y luego con el de mayor aumento.
Los constituyentes del sedimento urinario pueden agruparse dentro de 3 grupos: no
organizados, organizados y cuerpos extraños.
Sedimento no organizado:
En la orina normalmente no hay cristales y su presencia en orina no tiene significado
clínico salvo si se trata de cristales de oxalato, uratos o de cistina.
Sedimento organizado:
Células epiteliales

Escamosas o pavimentosas
Células redondas o poliédricas
Células de transición
Cilindros
Cilindroides
Leucocitos y Piocitos
Eritrocitos
8.5 Resultados
8.6 Cuestionario
1. ¿Cuales son las condiciones para una buena toma de muestra de orina?
2. ¿En que casos se presentan proteínas positivas en un examen de orina?
3. ¿En que procesos patológicos se presenta Thevenon positivo?
4. ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que se utilizan para el examen de orina?
5. ¿Cual es la importancia clínica de encontrar piocitos en una muestra de orina?.

1. Aiquel f. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos aires: médica panamericana; 1999.
Masson; 2005.
2005.
2006.
EXAMEN DEL LÍQUIDO SEMINAL

8.1 Marco teórico
El análisis de semen es uno de los aspectos más importantes de la investigación de la
fertilidad, ya que la causa de incapacidad femenina para concebir radica con frecuencia en
el varón. Un análisis simple de esperma, sobre todo si indica infertilidad no es concluyente,
ya que el recuento de espermatozoides varía de unos días a otros..El análisis de semen
debe repetirse al menos dos veces. Además de su importancia en el estudio de la fertilidad,
el análisis de semen también es útil para documentar la esterilización adecuada tras la
vasectomía.
8.2 Competencias
1. Adquiere experiencia en el manejo de otros líquidos biológicos.
2. Identifica elementos anormales en una muestra de semen.
 Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
3. Baguetas
4. Pipeta de Thoma para glóbulos blancos
5. Camara de Neubauer
6. Microscopio

8.4 Procedimiento
Recolección
Los médicos que solicitan el examen del semen en el estudio de la esterilidad deben
respetar el código moral que su religión impone a cada paciente.
De no haber dificultades desde el punto de vista religiosos, se instruye al paciente

para que recoja la muestra con no menos de cuatro días de abstinencia sexual.
El procedimiento de obtención del material por masturbación, o bien con

preservativo, debe desecharse categóricamente por antinatural.
Además, las muestras recogidas en preservativos no son satisfactorias, aun cuando

éstos fueran lavados previamente, ya que corrientemente se los trata con sustancias
químicas (polvo, licopodio, talco, etc), de energía acción espermicida y que, además,
deforman las imágenes del semen durante su observación posterior.
El procedimiento aconsejable para la obtención del material es por relación sexual

normal, de tal modo que una vez producida la eyaculación y la más mínima parte del
semen haya impregnado la
vagina, se recoge el resto en un frasco bien limpio, seco, de boca ancha , con tapa de
vidrio de cierre esmerilado y preferentemente de color caramelo, en el que se pegará
un rótulo con la siguiente información, que el paciente llenará:
Nombre y apellidos del paciente

Edad y forma que se obtuvo el material (eyaculado)
Día y hora de la eyaculación.
Día de abstención sexual.
Una vez obtenida la muestra, el paciente debe llevarla al laboratorio, lo más pronto
posible (de preferencia antes de una hora), poniéndola en contacto con su cuerpo
durante este tiempo, a fin de evitar que la temperatura descienda mucho.
Notas.- El protocolo se debe registrar: a) abstinencia previa; b) la hora de la

eyaculación, y la hora de recepción en el laboratorio.
Con referencia al recipiente donde se recibe la muestra, debe ser de boca ancha para
que no surjan inconvenientes al recoger el eyaculado. En ambientes hospitalarios,
generalmente se usan frascos de crema o desodorante, por lo que es importante que
estén bien lavados con agua caliente y detergente, pues los restos de estas sustancias
poseen una acción negativa sobre la motilidad.
Lo mismo acontece si no están secos, pues el agua, además de aumentar el volumen

de la muestra, modifica la tonicidad de la misma alterando la motilidad.
Debe descartarse totalmente el seco de envases térmicos para el traslado del

material, ya que esto contribuye a que los espermatozoides consuman las sustancias
nutritivas.
EXAMEN FISICO
VOLUMEN
El volumen de una eyaculación depende, ante todo, de la secreción prostática y de

las vesículas seminales, ya que la fracción segregada por las glándulas de Cowper y el
epidídimo es pequeña y menor aún, el testicular.

Normalmente, el volumen oscila entre 2 y 6ml, aproximadamente, después de tres
días de abstinencia como mínimo.
Para determinar el volumen, se pasa la totalidad del mismo a una probeta graduada
de 10 ml y se lee el volumen con una aproximación de 0,1 ml.
Cuando el volumen es muy pequeño se informa sin medirlo: “menos de 0,5 ml” o “
unas pocas gotas”.
Interpretación
A los fines de la fertilidad masculina se catalogan como “dudoso” los sémenes con
concentración espermática, morfología y motilidad normales pero cuyos volúmenes
son inferiores a 1,5 mL.
La falta de semen se denominan aspermia. Cuando es menor de 1,5 ml se denominas

hipospermia.
Es frecuente el hallazgo de volúmenes aumentados de semen. Se catalogan como

“sospechosos” los sémenes con volúmenes mayores de 5 mL, siempre que la
concentración espermática esté por debajo de 60 millones por ml.
Aspecto
Normalmente es homogéneo y opaco.
Interpretación
El aspecto es heterogéneo cuando se observan restos groseros de material sin licuar.
Es traslúcido cuando hay pocos espermatozoides y no hay células de la espermatogénesis,

leucocitos, hematíes o gérmenes.
Color
Normalmente es blanco grisáceo, opalescente. Puede presentar un tinte ligeramente

amarillento después de una prolongada abstinencia sexual.
Interpretación
Un color amarillo (amarillo canario intenso) se observa en los casos que hay pus
(piospermia). Generalmente no hay relación entre la cantidad de leucocitos y la
intensidad del color amarillo del semen. La causa se debe a procesos infecciosos de las
vías seminales.
Un color herrumbre se debe a sangre hemolizada como se observa en casos de vesiculitis

seminal o prostatitis.
Un color rojo se debe a la presencia de sangre (hemospermia) que se observa en casos

de prostatitis o traumatismo.
Un color verdoso se debe a infecciones con bacilo piociánico.
Viscosidad
El líquido seminal normal presenta una considerable viscosidad recientemente eyaculado,
pero inmediatamente comienza su licuación que se completa a los 15-30 minutos.

El semen recién eliminado suele mostrar granos espesos de mucus que decantan por
reposo; posteriormente y debido al fenómeno de mucólisis, toma un aspecto uniforme y
poco denso con escasas partículas visibles en suspensión.
La viscosidad, según Hotchkiss, tiene cierta importancia sobre todo el cuidado las
espermatozoides presentan vitalidad y movilidad inferior a lo normal.
Este auto recomienda un método sencillo para su estimación. Consiste en agitar

vivamente el semen con una varilla de vidrio, colocando 2 mL de la muestra, temperatura
ordinaria, en un tubo de ensayo de 10cm de largo por 1,5 cm de diámetro
aproximadamente, retirando luego con suavidad la misma. En condiciones normales,
cuando el extremo inferior de la varilla llega al borde del tubo de ensayo, ya se habrá
cortado el filamento del semen. En condiciones de viscosidad elevada se comprobará la
integridad de éste.
Otro procedimiento consiste en introducir la varilla de vidrio en el semen contenido en el

frasco y se la retira suavemente, observando si hay formación de filamento de semen. En
este caso se acepta como valor normal una filancia de 2 a 5 mm.
La licuación depende de la fibrinolisina potente presente en condiciones normales.
Interpretación
La viscosidad disminuida se observa generalmente en sémenes con muy poco

espermatozoides.
La viscosidad aumentada según algunos autores puede interferir el movimiento de los

espermatozoides in vitro. Es común observar viscosidad aumentada en prostatitis
crónica y en vesiculitis seminales.
Reacción
El pH del semen recién eyaculado es alcalino, oscilando entre 7,3 y 7,5.

En contacto con el medio ambiente se va alcalinizando a medida que transcurre el
tiempo por escape de anhídrido carbónico, pudiendo alcanzar un pH de 8.
Examen microscópico directo

Examinar entre porta y cubreobjetos después de la fluidificación. Apreciar el número por
campo microscópico de: leucocitos, hematíes, células epiteliales y de espermatozoides.
Hace constar la presencia o no piocitos y de cristales.
Recuento celular
El recuento se efectúa en la misma forma que para los glóbulos sanguíneos. Puede
utilizarse cualquiera de los líquidos de dilución que se mencionan.
Técnica. Con una pipeta para glóbulos blancos se aspira semen hasta la marca 0,5, y
luego, el líquido de dilución hasta la marca 11 (dilución 1: 20). Si el número de
espermatozoides es muy bajo, conviene aspirar semen hasta la marca 1 de la pipeta. Se
agita vigorosamente la pipeta hasta que el líquido en la porción ampular sea homogéneo.
Se desechan las dos primeras gotas y se carga la cámara cuenta glóbulos y se cuentan los
espermatozoides en 1 mm2; para el cálculo se multiplica por la dilución y por la altura
de la cámara (X10) para obtener la cifra por mm3 y finalmente por 1000 para obtener la
cifra por mililitro.

Notas. En el líquido de Macomber y Sauders, el bicarbonato de sodio provee un medio
alcalino en el cual se solubilizan las proteínas del semen permitiendo obtener una
distribución homogénea de los espermatozoides en la pipeta cuentaglóbulos. El formol
los mata, inmovilizándolos.
Antes de cargar la pipeta cuentaglóbulos, la muestra debe homogenizarse

perfectamente puesto que en el semen hay espermatozoides móviles e inmóviles,
sedimentado estos últimos en el frasco. La homogeneización debe hacerse por rotación
cuidadosa, evitando la formación de espuma.
Cuando los sémenes son muy viscosos es necesario rotar mucho la muestra para
homogenizar lo mejor posible y cargar dos pipetas promediando los resultados.
Interpretación
Resulta conveniente familiarizarse con la terminología que hace a las cifras de

espermatozoides del eyaculado en distintas situaciones, propuestos por la mayoría de los
autores que se han ocupado del tema:
Normospermia: Corresponde a cifras comprendidas entre 60 y 90 millones por mililitro.
Hiperespermia: Por arriba de 90 millones /mL.

Hipospermia: por debajo de 60 millones /mL.
Oligospermia: Cifras menores de 30 millones / mL.
MOVILIDAD
Tiene muchísima importancia comprobar el grado y duración de la movilidad de los

espermatozoides. Para ello, se hacen preparaciones húmedas entre porta y
cubreobjetos, de hora en hora, durante 5 ó 6 horas, manteniendo la muestra a la
temperatura ambiente.
El porcentaje de espermatozoides móviles se establece fácilmente, si se coloca un

disco de papel negro en el ocular del microscopio después de haber practicado un
pequeño cuadrado en el centro de aquél, de tal modo que sólo permita ver un
cuarto del campo microscópico.
La apreciación del número de espermatozoides móviles se hace contando en el cuarto

del campo microscópico, durante 10 segundos, todos los espermatozoides activos e
inactivos, multiplicando los resultados por 4 para determinar la cantidad que
corresponde a todo el campo.
Interpretación
Normalmente, antes de las dos horas de la eyaculación se encuentra una gran movilidad
en el 70% de los espermatozoides, con desplazamiento progresivo.
Una buena muestra seminal mantiene una considerable actividad, aún al cabo de 5 ó 6
horas de permanencia a la temperatura ambiente.
Cuando la motilidad es elevada pero está reducida a espermatozoides móviles “in situ”
(1 +) o traslativos lentos (2+), no existiendo espermatozoides traslativos rápidos (3 ó 4
+), el semen no tiene capacidad fecundante y se habla de una astenozoospermia
absoluta.

Se habla simplemente de astenozoospermia cuando el porcentaje de espermatozoides de
movimiento traslativo rápido (4+) se encuentra disminuido en valores menores a un 30%.
La ausencia e motilidad se conoce con el nombre de adrozoospermia.
MORFOLOGIA
Es estudio morfológico tiene por objeto comprobar la presencia de espermatozoides

anormales y establecer su porcentaje en relación a los normales.
La siguiente técnica de coloración permite diferenciar claramente la cabeza, sección

media y la cola.
Se cuentan de 100 a 200 espermatozoides, que no este método de coloración se

presentan con el núcleo azulado y el citoplasma rojizo.
Se establece el porcentaje de formas anormales con respecto al tamaño, forma y

disposición nuclear.
Notas. También puede teñirse el preparado con May-Grünwald-Giemsa empleado agua

tamponada a pH 7-7,2 y dejando actuar el colorante de Giemsa durante 20 minutos.
Como se ha manifestado en un comienzo, el frotis debe ser bien delgado para que se
seque rápidamente; si el frotis es grueso, tarda mucho en secar produciéndose
alteraciones morfológicas
de los espermatozoides, que en ocasiones son difíciles de evaluar. No debe emplearse

calor para secar el preparado, pues se producen morfológicos de las colas (se
enroscan).
Interpretación
Normalmente no deben encontrarse anomalías morfológicas (doble cabeza,
macerocefalia, microcefalia, cabezo priforme, cuerpo o cola defectuosos, etc) en más
de 25% de espermatozoides, no debiendo hallarse más de 2 células de la
espermatogénesis cada 100 espermatozoides.
PRUEBA DE LA VITALIDAD DE LOS ESPERMATOZOIDES INMOVILES
Método de Hurgop y Di Paola
Se basa en la propiedad de la eosina de colorear únicamente las células muertas y no

las vivas.
Reactivo
Eosina azul ........................................................... 0,5 g.
Solución fisiológica............................................... 100 mL
Técnica
En un portaobjetos se coloca una gota de semen y una gota del reactivo. Se mezcla y se
deposita en un cubreobjetos. La observación microscópica se hace dentro de las dos
primeras horas.
Se cuentan 200 elementos, teniendo en cuenta las tres categorías siguientes:
1. Espermatozoides muertos coloreados.

2. Espermatozoides vivos inmóviles no coloreados.

3. Espermatozoides vivos móviles no coloreados.
Interpretación
Los diversos autores dan como valores normales las siguientes cifras:
1. Espermatozoides muertos coloreados: 0 a 5%
2. Espermatozoides vivos inmóviles no coloreados: hasta un 40%.
3. Espermatozoides vivos móviles no coloreados: hasta un 60%.
Nota. En lugar de la eosina azulada puede utilizarse una solución de pirrol o azul cresil al
0,5%.
Una vez mezclado el semen con el reactivo, se espera 5 minutos y se observa al

microscopio. La observación corresponderá a:
1. Espermatozoides muertos coloreados.
2. Espermatozoides vivos inmóviles no coloreados.
3. Espermatozoides vivos móviles no coloreados.
Test de Williams
Este test permite también distinguir los espermatozoides muertos (necrospermia) de los
espermatozoides vivos (astenospemia): los primeros se colorean con una solución de eosina
– nigrosina , mientras que los segundos permanecen incoloros.
Reactivos
1. Solución acuosa de nigrosina al 10%.

2. Solución acuosa de eosina al 5%.
Técnica.
Sobre un portaobjetos se colocan separadamente; en un extremo 1 gota de la solución de

nigorsina y en el optar; 1 gota de la solución de eosina y 1 gota de semen o esperma.
Mezclar la gota de semen con la de eosina, y luego la gota de nigrosiana con la mezcla
precedente. Se opera con rapidez (15 a 20 segundos ). Hacer un extendido, secar
rápidamente al calor y examinar al microscopio.
Interpretación
Sólo se colorean de rojo los espermatozoides que estaban muertos en el momento de la

mezcla.
8.5. Resultados
8.6 Cuestionario
1. Explique Ud. Los diferentes métodos que se emplean en la actualidad para descartar
infertilidad en el hombre.
2. En que casos se puede solicitar la prueba de la determinación de líquido seminal
3. ¿Qué factores alterarían la prueba del espermatograma?
8.7. Fuentes de información

1. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México D.F.: Manual moderno
S.A; 1986.

2. 2,Lluis VJ. Manual de técnicas de laboratorio. Hematología. 2ª ed. Barcelona: Masson
S.A.; 1997.
3. 3.Instituto Nacional de Salud. Ministerio de Salud. Manual de procedimientos de
laboratorio. Lima. Impresora Amarilys e,i,r,l,; 1997.
4. 4.San Miguel JF y Sanchez-Guijo F. Cuestiones en hematología, 3ª ed. Madrid: Harcourt
Brace S.A.; 1997.
5. 5.Pagana-Pagana. Pruebas diagnósticas y de laboratorio. 2da. ed. Barcelona: Mosby-
Doyma Libros, SA; 1996.

PRÁCTICA No. 10 : UROCULTIVO: COLORACIÓN GRAM, PRUEBAS
BIOQUÍMICAS, ANTIBIOGRAMA.
9. 1 Marco teórico
El urocultivo es uno de los métodos de análisis microbiológico de suma importancia para
el diagnóstico de las enfermedades infecciosas del tracto urinario y asi dar un tratamiento
adecuado y oportuno
9.2 Competencias
1. Aplica técnicas de laboratorio para la determinación del urocultivo y coprocultivo.
2. Utiliza los medios de cultivo adecuado para el desarrollo de los microorganismos
3. Interpreta los hallazgos de laboratorio
 Materiales
Tubos de ensayo
Asa de Kole
Placas Petri
 Reactivos
1. Colorante Gram
Cristal violeta alcalino:
Sol. A: cristal violeta 1g. Agua destilada csp. 100 mL.
Sol. B: bicarbonato de sodio 5g. Agua destilada csp 100mL.
Sol. De yodo 1g. Ioduro de potasio 2g. Agua destilada csp 200mL.
Sol. Decolorante: eter 1 vol. Acetona 3 vol.
Colorante de contraste: safranina 0.5g agua destilada csp 100 mL.
2. Medios de cultivo:
Agar Mac Conkey ó EMB
Agar Azida Sangre
Agar Chapman
3. Coloración de Ziehl-Nelsen (bacilos ácido-resistente)

4. Sol. A: fucsina básica 0.3g alcohol de 95º. 10ml.
5. Sol. B: fenol 5ml. Agua destilada csp. 95ml.
6. Mezclar las soluciones a y b
7. Sol. Alcohólica de ácido clorhídrico
8. Sol. De azul de metileno
12.4 Procedimiento
RECOLECCION DE MUESTRAS:
1. La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infección y debe
recogerse con un mínimo de contaminación de tejidos, órganos o secreciones
adyacentes.
2. Establecer periodos óptimos para la recolección de muestras a fin de tener la
mejor oportunidad de aislar los microorganismos causantes.
3. Obtener suficiente cantidad de muestra para llevar a cabo las técnicas de cultivo
solicitada.
4. Utilizar dispositivos de recolección, recipientes para las muestras y medios de
cultivo adecuados para asegurar el óptimo aislamiento de microorganismos.
5. Siempre que sea posible obtener las muestras antes de la administración de
antibióticos.
6. El envase recolector de la muestra debe estar correctamente rotulado.

UROCULTIVO:
Primer Día: Recolección de la muestra.
- Examen de orina completo: físico, químico, microscopio, sedimento.
- Coloración Gram del sedimento.
- Sembrar en: Agar Mac Konkey ó EMB
Agar Azida Sangre
Agar Chapman
- Si el sedimento se observará además de leucocitos, bacilos y en la coloración
estos últimos aparecen teñidos, entonces se práctica una coloración de Ziehl-
Neelsen (bacilos ácido-resistente)
Segundo día: Lectura del recuento microbiano. Si hay mas de 100 colonias.
No existe infección. Si hay entre 10 a 1000 colonias realizar nuevamente la técnica.
No. de colonias X 1000 = bacterias / mL de orina
1. Crecimiento en agar Mac Conkey:

Coloración gram negativo
Siembra en diferenciales: LIA,TSI,CS,SIM-INDOL, UREA.
Siembra en agar MH o TSA por diseminación general.
(usar discos antibióticos para gram negativos)
2. Crecimiento en Agar Azida Sangre

Coloracion gram positivo
Observar si hay hemolisis.
Observar si hay crecimiento en Agar Chapman (Positivo)

 Si hay crecimiento en Azida Sangre y Agar Chapman es: Stf sp (si las colonias son
amarillas son Stf aureus)
 Si hay crecimiento en Azida Sangre y no en Agar Chapman: existe hemólisis, puede
ser Stp. (puede demorar 36 a 48 horas).
Resembrar (cuarta parte) en agar Chapman colonias sospechosas del Azida Sangre.
Diferenciales para Stp:
Resembrar (en la cuarta parte) de colonias sospechosas: por diseminación y colocar
discos de Optoquima y Bacitracina. Observar a las 24 horas.
Sembrar por diseminación en Agar MH o TSA y usar discos de antibióticos para gram
positivos.
Tercer día:
1. Lectura de diferenciales: identificacion de Enterobacterias
2. Lectura: sensible a la optoquima: Stp pneumoniae
Sensible a la bacitracina:Stp tipo A.
3. Sea 1 o 2 leer antibiograma y definir
ANTIBIOTICOS: A: SENSIBLE
B: MEDIANAMENTE SENSIBLE
C: RESISTENTES
9.5 Resultados
9.6 Cuestionario
1. ¿Cuáles son los medios de cultivo utilizados en la identificación de microorganismos
gram negativos?
2. ¿Desarrolle un mapa conceptual de un urocultivo.
3. ¿Cómo es el proceso para la toma de muestra de un hemocultivo?
4. ¿Qué importancia tiene el antibiograma?

5. ¿Qué importancia tienen los medios de enriquecimiento en un coprocultivo?

1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat
Editores S.A.; 2001.
2. Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona:
Elsevier España SL; 2008.
3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.; 2007.
4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: Editorial JIMS; 1992.
5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill
ESTUDIO DE LAS HECES: EXÁMEN PARASITOLÓGICO. METODO DE FAUST

9.1 Marco teórico
En la patología parasitaria tiene importancia la investigación de los parásitos intestinales
en las heces, utilizando técnicas del laboratorio más usadas como las del método directo,
método de concentración de faust,, jarabe fenolado, willis, método de sedimentación de
teleman, etc. De esta manera se contribuye al mejor conocimiento de la sintomatología,
diagnóstico, tratamiento y prevención de la parasitosis intestinal.
9.2 Competencias
1. Identifica los parásitos mas frecuente en muestro medio utilizando las técnicas de
examen directo y concentración
2. Relaciona el parásito hallado con el fármaco a utilizar para el tratamiento

CONSERVADORES
Cuando las muestras provienen de lugares lejanos o no van a ser examinados
inmediatamente, se aconseja conservarlos mediante diversas formas:
Conservación por el frío.
Son para huevos de helmintos y quiste de protozoarios, así podemos mencionar:
a. Solución fijadora y conservadora por el agua formolada.
La aplicación y conservación de esta solución, varía según las consistencia de las
heces, así por ej:
Las heces duras emplean agua formolada al 5%.
Las heces pastosas emplean agua formolada al 10%
Las heces conteniendo huevos de helmintos muy resistentes, emplean agua formolada
al 20%.
La cantidad que se utiliza para cualquiera de las 3 formas volúmenes de agua
formolada por 1 volumen de muestra de heces.
b. Líquido de Deschiens:
Glicerina 100 mL.
Formaldehído al 40% 100 mL
Agua destilada 800 mL
c. Solución de De la Plaza:
Formaldehído al 40% 12.5 mL
Glicerina 12.5 mL
Sol. de Ringer o sol. fisiológica 250 mL
Sol. de Ringer > ClNa 6g

ClK 75 g
Cl2Ca 100 mg
HCO3Na 100 mg
Agua destilada csp 1000 mL
Existe otros conservadores tales como: Sol. MIF (Mertiolato-Yodo-Fromaldehido) de

Sapreso y Lawles.
Sol de PVa (Alcohol Polivinilico)
REACTIVO DE FAUST:
Sulfato de Zinc al 33% (D>1,180)
REACTIVO DEL JARABE FONOLADO:

Reactivo: Azúcar granulada 400 g
Agua destilada 300 mL
Fenol 1g
Disolver el azúcar en agua caliente de 80 a 90 oC (No debe hervir) hasta consistencia de
jarabe y añadir 1g de fenol como conservador.
9.4 Procedimiento
El estudio debe identificarse en las heces:
Las formas vegetativas
Huevos
Larvas
Quiste de los parásitos.
RECOLECCION DE LAS MUESTRAS
El paciente colocará la primera deposición sin mezclar con la orina en un recipiente de
vidrio de boca ancha limpia y seca, rotulará su nombre y será remitido inmediatamente al
laboratorio cerrándole herméticamente, no debe utilizar recipientes porosos; ya será de
papel o de cartón.
Cuando se quiere investigar protozoarios en su forma vegetativa se requiere muestra fresca.
Las muestras formadas son mejores para encontrar quiste, en cambio las líquidas nos
permite identificar trofozoitos y deben se examinadas de inmediato o pueden ser
conservadas.
Ciertos parásitos para ser investigados requieren procedimientos especiales, por ej. Por el
método de Graham (cinta adhesiva) para Enterobius vermicularis.
En todo examen de heces para la búsqueda de parásitos deben considerarse el siguiente
orden:
1. EXAMEN MACROSCOPICO:
Este examen consiste en buscar por simple observación visual y minuciosa la consistencia de
las heces, mucus, sangre y formas adultas de parásitos tales como: Enterobius vemincularis,
Tenias, Ascaris Lumbricoides, Ancylostoma duocenales, Trichuris trichiura, etc.
Cuando las heces son blancas o líquidas, las larvas o formas adultas de los parásitos pueden
encontrarse ocultos en medio de la masa fecal, en esta caso se filtrarán la muestra a través
de un tamiz y se hará la observación.
2. EXAMEN MICROSCOPICO:
En este examen parasitológico obligatoriamente debe realizarse dos procedimientos:
1. Examen por el método directo de heces frescas, empleando sol. de lugol parasitológico y
sol fisiológica de cloruro de sodio.
2. Examen por el Método de Concentración, empleando un método de rutina.
METODO DIRECTO
Permite encontrar mayoría de los parásitos, quiste de protozoarios con núcleos teñido de
amarillo, las vacuolas de color pardo, larvas y huevos de helmintos.
En dos láminas portaobjetos limpios y secos, colocar en uno de ellos dos gotas de sol. de
lugol, en la otra lámina 2 gotas de sol. fisiológica y con la ayuda de un mondadientes
colocar una porción de muestra a ambas láminas preparadas, mezclar homogéneamente,

cubrir con un cubreobjeto y observar al microscopio con objetivo de menor y mayor
aumento.
METODO DE CONCENTRACION:
Tiene por objeto reunir en un pequeño volumen a los elementos parasitarios inicialmente
dispersos en una gran masa de heces.
Los métodos de concentración son muy numerosos, clasificándose en dos grupos:
I. METODOS FISICOS:
A. Por sedimentación y por flotación.

Método de Faust
Método del Jarabe Fenolado
Método de Willis
B. Método de sedimentación de Teleman
METODOS DIFASICOS:
Comprende dos etapas:
a. Fases de separación residuos mas voluminosos
b. Fase de concentración y enriquecimiento de los elementos parasitarios:
Método de Ritchie
Método de Carles-Barthelemy
METODOS DE SEDIMENTACION Y FLOTACION:
METODO DE FAUST:
1. En un recipiente adecuado, se prepara una suspensión de materia fecal mezclado una
parte de heces con 10 partes de agua tibia.
2. Filtrar la mezcla sobre una gasa en 4 dobleces colocado en un embudo y se recoge 10 ml
en un tubo de centrifuga.
3. Centrifugar a 2000 rpm durante 2 minutos, retirar de la centrifugadora y decantar el
liquido sobrenadante.
4. Al sedimento obtenido agregar 3 ml de agua tibia, mezclar bien.
5. Centrifugar y decantar el líquido sobrenadante repitiendo la operación por 3 veces hasta
que el agua del sobrenadante permanezca límpida.
6. Después de la centrifugación se decanta el líquido sobrenadante, y añadir 3 a 4 ml. de; la
sol de sulfato de zinc al 33% agitar bien durante un minuto y centrifugar al 2500 rpm
durante 1 o 2 minutos.
7. Con el asa de platino recoger la película superficial donde se encuentra flotando los
quistes de protozoario y huevos de helmintos colocar sobre un portaobjeto limpio y seco
agregar una pequeña gota de lugol parasitológico y efectuar el examen al microscopio.
METODO DEL JARABE FENOLADO (Flotación)
1. En un vial colocar el jarabe fenolado hasta la mitad y agregar con una bagueta unos 2 g de
heces.
2. Mezclar bien las heces con el jarabe fenolado hasta observar uniforme la suspensión.
3. Adicionar mas jarabe fenolado hasta el borde del vial
4. Al borde del vial aplicarle un portaobjeto y dejar en reposo por 20 minutos como tiempo
mínimo.
5. Retirar el portaobjeto y sobre la muestra aplicarle un cubreobjeto efectuar el examen
microscópico.
Por este método se observan larvas y huevos de los helmintos.
9.5 Resultados
9.6 Cuestionario
1. ¿En que consiste la Técnica de Graham ?
2. ¿Cuales son las condiciones para la toma de muestra de heces para un paciente que se
sospecha parasitosis?
3. ¿Desde el punto de vista patológico como se adquiere una tricuriasis?
4. ¿Cuál es el fundamento del Método del jarabe fenolado?

1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat
Editores S.A.; 2001.
3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.; 2007.
4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992.
5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill

PRACTICA No. 10: DOSAJE DE GLUCOSA, PRUEBA DE TOLERANCIA A LA
GLUCOSA, GLUCOSA POST PRANDIAL.
10.1 Marco teórico
La determinación de glucosa sérica es útil para el diagnostico de numerosas enfermedades
metabólicas (diabetes mellitus). Los niveles séricos, de glucosa deben interpretarse de
acuerdo con la hora, día en la que se tomo la muestra. La concentración de glucosa en los
líquidos extracelulares se mueve en una banda de tolerancia que es regulada a la baja de
insulina (acción hipoglucemiante y la alza mediante el glucagón, cortisol, catecolaminas y
hormona de crecimiento).las determinaciones de glucosa en pacientes recientemente
diagnosticados de diabetes se deben realizar con frecuencia para controlar de cerca la dosis
de insulina que debe administrarse.
10.2 Competencias
1. Utiliza métodos bioquímicos para la determinación de la glucosa en sangre
2. Interpreta los resultados y correlacionarlos con otras determinaciones solicitados en
análisis clínicos

 Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
3. Pipetas volumétricas
4. Pipetas automáticas
5. Baguetas
6. Centrifuga
7. Espectrofotómetro
 Reactivos
1. Reactivo enzimático
2. Standard de glucosa: una solución de glucosa 100mg/dl que contiene preservantes
y estabilizadores. Mantener en refrigeración.
10.4 Procedimiento
METODO ENZIMÁTICO COLORIMÉTRICO:
Preparar 3 tubos y agregar en ellos:

BLANCO STANDARD MUESTRA
(mL) (mL) (mL)
Standard - 0.01 -
Suero - - 0.01
Reactivo constituido 1.0 1 .0 1.0
Mezclar suavemente.
Incubar por 5 minutos a 37oC
Leer absorbancia a 505nm contra el blanco. El color es estable por 1 hora.
Cálculos:
Glucosa (mg/dL) = 100
--------------------- x A muestra problema

A standard
A= valor de absorbancia obtenido.

VALORES:
Suero o plasma: 65 – 110 mg/dL
10.5 Resultados
10.6 Cuestionario
1. ¿En que consiste la prueba de la tolerancia a la glucosa?
2. ¿En que consiste la prueba de la hemoglobina glicosilada?
3. ¿Cuál es el fundamento del método enzimático para determinar glucosa en sangre ?

2. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed.
Barcelona: Salvat Editores S.A.; 2001.
3. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación.
3a ed. Buenos Aires: El ateneo; 1985.
4. Kumar V, Cotran R, Robbins S. Patología humana. 7a ed. Madrid:
Elsevier; 2004.
5. Widmann F. Interpretación clínica de las pruebas de laboratorio. 4a ed.
Barcelona: JIMS; 1997.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en
hematología. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.
COLESTEROL TOTAL
10.1 Marco teórico
El colesterol es un esteroide muy abundante en las células de los animales en los que se
desarrolla diversas funciones, como componte estructural fundamental de las membranas
celulares, contribuyendo a sus propiedades fisicoquímicas, como precursor de las hormonas
sexuales y de la corteza suprarrenal, participa en la síntesis de ácidos biliares, de hecho,
la bilis es la única vía de eliminación del colesterol. El colesterol circula en la sangre unido
a las lipoproteínas de manera las de bajo densidad (LDL) transportan el 70%, las de alta
densidad (HDL) el 15 y 20 % y el resto circula unida a las de muy baja densidad (VLDL) y a
los quilomicrones. Por ello es el principal lípido relacionado con la enfermedad vascular
arteriosclerótica.
10.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función lipídica en muestras de suero o plasma
utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis, cumpliendo y haciendo cumplir
las normas de bioseguridad y ética.
2. Determina el colesterol por métodos espectrofotométricos conociendo sus propiedades
físico-químicas, a partir de una muestra de sangre (suero sanguíneo)

 Materiales
2. Tubos de ensayo

3. Gradillas
4. Centrifuga
METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACION EN SUERO

 Reactivos
1. REACTIVO ENZIMATICO:
2. Mantener en congelación hasta el momento de su reconstitución.
3. El reactivo, después de reconstruirse contiene:

4. 4- amino-antipirina 0.40 mmol/L, colesterol esterasa = 2,000 U/L, activadores,
estabilizadores y buffer.
5. VIAL x 10
6. Reconstruir cada vial con 10.5 mL de Buffer Reconstituyente. Para esto ir agregando
el buffer al vial hasta alcanzar el volumen indicado. Mezclar suavemente hasta
disolver. Dejar a temperatura ambiente por 30 minutos antes de usar. Este reactivo
reconstituido es estable por 30 días a 4° C y debe ser protegido de la luz.
7. VIAL x 20
8. Reconstituir cada vial con 21 mL de Buffer reconstituyente. Para esto ir agregando el

buffer poco a poco al vial, vertiendo el contenido en una probeta hasta alcanzar el
volumen deseado. Mezclar suavemente hasta disolver. Dejar de usar. Este reactivo
reconstituido es estable por 30 días a 4°C y debe de ser protegido de la luz.
9. BUFFER RECONSTITUYENTE
10. Solución de fenol bufferada. Contiene perseverantes y estabilizadores. Mantener
en refrigeración.
11. STANDARD DE COLESTEROL

12. Contiene 200 mg/dL de colesterol en etilen glicol mono metileter y surfactantes.
Refrigerar (2-8°C).
10.4 Procedimiento
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE COLESTEROL EN SUERO
Blanco Standard Muestra

(mL) (mL) (mL)
Standard --------- 0.01 --------
Suero --------- ---------- 0.01
Rvo. Reconstituido 1.0 1.0 1.0
Mezclar suavemente.
Incubar por 5 minutos a 37°C.
Leer la absorbancia a 500 nm contra el blanco.
El color es estable por una hora.

CALCULOS
A Suero
Colesterol (mg/dL) = --------------------- x 200
A Standard
A= Valor de absorbancia obtenido
MANEJO DE LA MUESTRA Y REACTIVOS

 El reactivo reconstituido es estable por 30 días a 4°C y debe ser protegido de la luz.
 En caso que se requiera obtener un volumen final mayor de 1.0 ml, se puede agregar
inmediatamente antes de realizar la lectura, hasta 1.2 ml de agua destilada en todos
los tubos, incluyendo el blanco.
 El método es lineal hasta 500 mg/dL.
Menos de 200 mg/dL. Valor deseable
200 a 239 mg/dL. Valor frontera
Mayor de 240 mg/dL. Valor alto
10.5 Resultados
10.6 Cuestionario
1. ¿Cómo se explica las reacciones que ocurren en la determinación de colesterol total por
el método enzimático?
2. ¿Qué precauciones se debe tener con respecto a los reactivos que intervienen
en esta prueba enzimático?
3. ¿Qué lipoproteínas transportan al colesterol?
4. ¿Por qué es importante la determinación de colesterol en una persona de edad
avanzada?

Panamericana; 1986.
S.A.; 1986.
TRIGLICERIDOS
10.1 Marco teórico
Los triglicéridos están formados por la esterificación de la glicerina con tres ácidos grasos. Se
depositan en el tejido graso, desde donde constituyen una reserva importante de energía.
Su síntesis se produce a partir de diversas fuentes: una erógena, constituida por la dieta, y
otra endógena que corresponde a su formación hepática. Los primeros se vehiculizan por la
sangre por medio de los quilo micrones; los segundos se transportan mediante las
lipoproteínas de muy baja densidad .Cuando los niveles sanguíneos son excesivos, los
triglicéridos se depositan en el tejido graso. La determinación de triglicéridos forma parte
del perfil lipídico, El perfil lipídico se emplea para evaluar el riesgo de enfermedad coronaria
y vascular periférica.
10.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función lipídica en muestras de suero o plasma
utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis, cumpliendo y haciendo cumplir las
normas de bioseguridad y ética.

2. Determina los triglicéridos por métodos espectrofotométricos conociendo sus propiedades
físico-químicas, a partir de una muestra de sangre (suero sanguíneo).
 Materiales
2. Tubos de ensayo
3. Gradillas
4. Centrifuga
METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACION DE

TRIGLICERIDOS EN SUERO
 Reactivos
Mantener en congelación hasta el momento de su reconstrucción.
VIAL X 10
Reconstruir cada vial con 10.5 mL de agua destilada.
Mezclar suavemente hasta disolver. Este reactivo reconstruido es estable por 15 días a 4°C.
No reconstituido congelar el reactivo reconstituido.
VIAL x 20
Reconstituir cada vial con 21 mL. de agua destilada.
Mezclar suavemente hasta disolver. Este reactivo reconstituido es estable 15 días a 4°C. No
congelar el reactivo reconstituido.
STANDARD DE TRIGLICERIDOS
Solución a base de glicerol, equivalente a 200 mg/dL de trioleína. Contiene perseverantes y
estabilizadores. Conservar en refrigeración.
10.4 Procedimiento
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS EN SUERO

(mL) (mL) (mL)
Standard --------- 0.01 ----------
Suero --------- ---------- 0.01
Rvo. Reconstituido 1.0 1.0 1.0
Mezclar suavemente.
Incubar por 5 minutos a 37°C
Leer la absorbancia a 520 nm contra el blanco. El color es estable por 1 hora.
CALCULOS
A Suero
Triglicérido (mg/dL) = ---------------- x 200
A Standard
A = valor de absorbancia obtenido.

MANEJO DE LA MUESTRA Y REACTIVOS
 En caso que se requiera obtener un volumen final mayor de 1.0 mL, se puede agregar
inmediatamente antes de realizar la lectura, hasta 1.2 mL de agua destilada en todos
los tubos incluyendo el blanco.
 La coloración rosa del reactivo reconstituido es normal. Reactivos con blancos hasta
0.4 unidades de absorbancia puede ser empleados.
 Si se desea que el blanco del reactivo reconstituido imprescindible mantenerlo bajo
refrigeración (2-8°C) el mayor tiempo posible.
 Debido a que con el transcurrir del tiempo el reactivo reconstituido va oscureciéndose
ligeramente, es importante que siempre se realicen las lecturas contra el blanco de
reactivo.
 El método es lineal hasta 700 mg/dL.
VALORES NORMALES
Menores de 30 años 10 – 140 mg/dL
Entre 30 y 39 años 10 – 150 mg/dL
Entre 40 y 49 años 10 - 160 mg/dL
De 50 años a más 10 – 190 mg/dL
10.5 Resultados
10.6 Cuestionario
1. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de los triglicéridos?
2. ¿Cómo trabajaría Ud. Un suero lipémico, para la determinaciones bioquímicas?
3. ¿Qué recomendaciones daría Ud. al paciente para obtener una buena muestra de sangre?
4. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de triglicéridos?

Masson; 2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid:
Masson; 2005.
2006.
PRACTICA No 11 ENZIMAS
TRASAMINASAS – GOT Y GPT

11.1 Marco teórico
Las transaminasas forman un importante eslabón entre el metabolismo de los prótidos y el de
los glúcidos y se hallan ampliamente distribuidos en todos los tejidos. La alanina-
transaminasa (TGP) y la aspartato- transaminasa existen normalmente en el plasma, bilis,
LCR y saliva, pero no en la orina. El mecanismo de excreción es desconocido. La aspartato-
trasaminasa (TGO) es más abundante en todos los tejidos humanos que la alanina –
trasaminasa, la TGO del suero están elevadas en las enfermedades hepatobiliares y

cardiovasculares, en las miopatías y en otras afecciones diversas. Los niveles de TGP se
encuentran elevados en suero de enfermos hepáticos. Estas enzimas canalizan reacciones
de transaminación de tipo reversible.
11.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función hepática en muestras de suero o plasma
utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis, cumpliendo y haciendo cumplir las
normas de bioseguridad y ética.
2. Determina las transaminasas por métodos espectrofotométricos conociendo sus
propiedades físico-químicas, a partir de una muestra de sangre (suero sanguíneo).
 Materiales
1. Gradillas
3. Tubos de ensayo
4. Centrifuga
METODOS COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE TRANSAMINASAS GOT Y

GPT EN SUERO
 Reactivos
1. SUSTRATO GOT
Una solución de ácido DL – aspartato y ácido alfacetoglutárico bufferada a pH 7.4
Contiene estabilizadores y perseverantes.
2. SUSTRATOS GPT
Una solución de DL – alanina y ácido alfa-cetoglutárico bufferada a pH 7.4.
Contiene estabilizadores y perseverantes.
3. DESARROLLADOR DE COLOR
Una solución de 2,4 – dinitrofenilhadrazina en ácido clorhídrico diluido. Esta
solución es corrosiva y debe conservarse en lugar oscuro.
Conservar el frasco lejos del reactivo de NaOH pues los vapores pueden contaminar
los reactivos.
4. STANDARD DE CALIBRACION
Una solución de ácido pirúvico bufferada al pH 7.4. Contiene estabilizadores y
perseverantes.
5. HIDROXIDO DE SODIO 0.4 N (10x)
Una solución de NaOH 4N. Antes de usarse, se deberá diluir el contenido de este
frasco 1 en 10 para sí alcanzar la concentración requerida de NaOH 0.4 N.
Es importante notar que el hidróxido de sodio debe conservarse en frasco de
plástico y no de vidrio.
Conservar el frasco lejos del reactivo de color pues los vapores pueden contaminar
ambos reactivos.
11.4 Procedimiento
PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION
Antes de utilizar por primera vez el juego de reactivos, preparar una curva de
calibración par GOT y otra para GPT, de acuerdo a las siguientes indicaciones.
Pipetear en dos series de tubos:
Tubo Agua Sustrato Standard de GOT GPT

# destilada * calibración

mL) (mL) (mL) U/mL
U/mL
1 0.2 1.0 0.0 0 0
2 0.2 0.9 0.1 22 25
3 0.2 0.8 0.2 55 50
4 0.2 0.7 0.3 96 82
5 0.2 0.6 0.4 150 125
6 0.2 0.5 0.5 212 -----
Utilizar sustrato GOT para la curva de calibración de GOT y GPT para la curva de
calibración de GPT, respectivamente.
Agregar 1mL de desarrollar de color.

Mezclar y esperar 20 minutos a temperatura ambiente.
Agregar 10 mL de hidróxido de sodio 0.4N (NaOH 4N diluido con agua 1 en 10).
Mezclar y esperar 15minutos a temperatura ambiente antes de leer.
Leer las transmitancia a 505 nm usando agua destilada como blanco de lectura. El color
es estable durante sólo 30 minutos.
Graficar en papel semilogarítmico los valores de transmitancia en el eje vertical, y en el

eje horizontal las U/mL, GOT o GPT según sea el caso, que se indica en la tabla superior.
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR TRANSAMINASA GOT EN SUERO

1. Pipetear 0.5 mL de sustrato GOT en un tubo de prueba.
2. Incubar a 37ªC durante 5 minutos.
3. Agregar 0.1 mL de suero. Comenzar a controlar el tiempo inmediatamente.
4. Incubar a 37ºC. Durante 60 minutos, exactamente.
5. Al cumplirse los 60 minutos, agregar 0.5 mL de desarrollador de color. Mezclar y
esperar 20 minutos a temperatura ambiente.
6. Agregar 5 mL de Hidróxido de Sodio 0.4N (NaOH)4N diluido 1 en 10). Mezclar y esperar
15 minutos antes de leer.
7. Leer la absorbancia a 505 nm usando agua destilada como blanco. Tener en cuenta
que el color es estable durante 30 minutos solamente.
8. Obtener el valor de Unidades/mL de GOT a partir de la curva de GOT de calibración,
graficada según instrucciones previas.
Nota: El tiempo de incubación referido en el punto 4 podrá reducirse a 30 minutos, si la

cantidad de suero que se agrega (ver punto 3) es de 0.2 mL
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR TRANSAMINASA GPT EN SUERO.

1. Pipetear 0.5 mL de Sustrato GPT en un tubo de prueba.
2. Incubar a 37ªC. Durante 5 minutos.
3. Agregar 0.1 mL de suero. Comenzar a controlar el tiempo inmediatamente.
4. Incubar a 37ª C durante 30 minutos, exactamente.
5. Al cumplirse los 30 minutos, agregar 0.5 mL de desarrollador de color. Mezclar y
6. Agregar 5 mL de hidróxido de sodio 0.4 N (NaOH 4N diluido 1 en 10). Mezclar y
7. Leer la absorbancia a 505 nm usando agua destilada como blanco. Tener en cuenta
que el color es estable durante 30 minutos solamente.
8. Obtener el valor de Unidades/mL de GPT a partir de la curva GPT de calibración,
graficada según instrucciones previas.
11.5 Resultados

11.6 Cuestionario
1. ¿Cuáles son las denominaciones que tienen la GOT y GPT ?
2. ¿En qué patologías se incrementan las transaminasas?
3. ¿Cuáles son las condiciones de un paciente que se les va a determinar transaminasas?
4. Explique el fundamento bioquímico para determinar transaminasas.

Masson; 2005.
2005.
2006.
FOSFATASA ALCALINA
11.1 Marco teórico
Las fosfatasas son enzimas de especificidad relativamente amplia que son capaces de
reaccionar sobre un cierto número de sustratos de estructura relacionada, como son la
fosfatasa alcalina, que actúa en medio alcalino, su determinación es importante en pacientes
con enfermedades hepáticas y óseas. La fosfatasa ácida conocida como fosfatasa ácida
prostática se encuentra en la próstata, se utiliza para diagnosticar y determinar el estadio
de carcinoma prostático.
La prueba de determinación sérica de la amilasa se lleva a cabo con facilidad y rapidez y se
usa con frecuencia para diagnosticar la pancreatitis y realizar el seguimiento del tratamiento
de este trastorno.
La lactato deshidrogenasa, se encuentra en las células de muchos tejidos del organismo,
especialmente en corazón, hígado, hematíes, riñones, músculo esquelético, cerebro y
pulmones. Dado que la lactato deshidrogenasa está ampliamente distribuida por el
organismo, el nivel totalde esta enzima no es un indicador específico de una enfermedad
concreta que afecte a un único órgano.
11.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas enzimáticas en muestras de suero o plasma.
2. Utiliza las técnicas de laboratorio para su determinación, cumpliendo y haciendo cumplir
las normas de bioseguridad y ética
 Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
4. Centrífuga
METODO COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACION DE FOSFATASA SERICAS ALCALINA.
 Reactivos
1. SUSTRATO DE FOSFATASA
A. VIAL x 20

Reconstruir cada vial de sustrato p-nitrofenilfosfato con 11 ml de agua destilada y
separar en alicuotas de 1 ml en viales o tubos con tapa.
Después de reconstituido, el sustrato es estable hasta 6 meses en congelación.
B. VIAL x 5
Reconstruir cada vial de sustrato p-nitrofenilfosfato con 2.7 mL de agua destilada.
Después de usar, el sustrato reconstruido sobrante se puede guardar en congelación.
En condiciones de congelación .el sustrato es estable durante 6 meses.
2. BUFFER ALCALINO
Solución de glicina, MgCl 2, pH 10.5 con preservadores. Refrigerar.
3. NaOH 0.02 N (10 x)
Solución de hidróxido de sodio 0.2. Diluir 1:10 (100 mL NaOH 0.02 N(10 x) + 900 ml de
agua destilada ó 20 mLLNaOH 0.02N (10 x) + 180 mL de agua destilada). Conservar en
frasco de plástico a temperatura ambiente.
4. STANDARD DE CALIBRACION
Solución de p-nitrofenol. Refrigerar.
5. BUFFER ACIDO
Solución de ácido cítrico en HCl, pH 4.8 con preservadores y estabilizadores. Refrigerar.
6. BUFFER TARTARO
Solución de ácido tratárico en citrato pH 4.8 con preservadores y estabilizadores.
Refrigerar.
7. NaOH 0.1 (10x) (Fosfatasa x 20)
Solución de hidróxido de sodio 1N
Diluir 1:10 (50 ml de NaOH 0.1N (10x) + 450 ml de agua destilada). Conservar en frasco
de plástico a temperatura ambiente.
8. NaOH 0.1 N (5x) (Fosfatasas 20x)

Solución de hidróxido de sodio 0.5N
Diluir 1:5 (20 ml de NaOH 0.1N (5x) + 80 ml de agua destilada). Conservarse en frasco
plástico a temperatura ambiente.
11.4 Procedimiento
PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACIÒN
Pipetear 0.25 mL de Standard de fosfatasas y completar a un volumen de 50mL con NaOH
0.02N. Mezclar bien.
Este constituye el Standard diluido, el cual es estable únicamente por 24 horas. Con la
Standard diluido Pipetear en una serie de tubos:
Tubo Standard NaOH 0.02N Fosfatasa Fosfatasa

# diluido Acida Alcalina
(mL) (mL) (U/mL) (U/mL)
1 0.5 5.0 0.28 1
2 1.0 4.5 0.56 2
3 2.0 3.5 1.12 4
4 3.0 2.5 1.68 6
5 4.0 1.5 2.24 8
6 5.0 0.5 2.80 10
Leer la absorbancia a una longitud de onda de 410 nm vs el blanco de agua destilada.

Graficar al absorbancia vs las Unidades de Fosfatasa ácida o de fosfatasa alcalina, según sea
el caso.
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR FOSFATASA ALCALINA EN SUERO

Blanco Muestra
(mL) (mL)
________________________________________________________________________

Sustrato de fosfatasas 0.25 0.25
Buffer alcalino 0.25 0.25
Suero ------ 0.05
Incubar en un baño de agua a 37°C. Durante 30 minutos.

Agregar:
NaOH 0.02 5.0 5.0

Suero 0.05 ------
Leer la absorbancia a 410 nm vs el blanco.

Buscar el valor de la Fosfatasa Alcalina usando la curva Standard correspondiente.
DETERMINACIÓN FOTOMÉTRICA DE LA AMILASA EN SUERO
REACTIVOS
Conservados entre 2° y 8°C. y protegidos de la luz, estables hasta la fecha de caducidad indicada en
la etiqueta.
Componentes del reactivo:
Buffer MES pH 6,0 +/- 0,1
CNP-G3 1,8 mM
Cloruro de Sodio 350 mM
Acetato Calcio 6 mM
Tiocianato de Potasio 900 mM
Azida de Sodio 0,01%
Preparacion del Reactivo de Trabajo: los reactivos se proveen listo para su uso. Descartar el
reactivo si su absorbancia es mayor de 0.6 a 405 nm. contra blanco de agua y paso de luz de 1 cm o
presenta turbidez.
MUESTRA
Suero o plasma heparinizado libre de hemolisis. La amilasa es estable por 7 dias conservada entre
18 y 25oC. y 2 meses a 4°C.
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura de reaccion (37° C.) y poner el espectrofotometro en cero
contra blanco de agua destilada.
Reactivo de trabajo (ml) 1.0
Volumen de muestra (ml) 0.025
Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotometro . Incubar 60 segundos a la temperatura de
reaccion. Leer la absorbancia inicial (A1) a 405 nm. Repetir las lecturas a intervalos de 60 segundos,
hasta por dos minutos.
CALCULOS
Determine el cambio de Absorbancia por minuto (DA/min)
Actividad a-amilasa (UI/L) = DA/min x 3178
Factor = Vt x 1000 = 3178
SCNP 405 x P x Vm
Vt = Volumen total de reaccion
SCNP405= Coef. de extincion milimolar del CNP a 405 nm.=12,9
P = Espesor del paso de luz en la cubeta (1 cm.)
Vm = Volumen de muestra utilizado
RANGOS DE REFERENCIA
Los rangos de referencia que se enumeran a continuacion están tomados de la bibliografia
existente.
25 a 125 U/L

11.5 Resultados
11.6 Cuestionario
1. ¿Explique que otras pruebas bioquímicas corroboran los resultados elevados de fosfatasas
acidas?
2. ¿Qué precauciones debemos tener con la muestra sanguínea (suero) cuando realizamos las
pruebas de fosfatasa tanto alcalina como ácida?
3. ¿Qué otras pruebas de laboratorio corroboran una amilasa aumentada?
4. ¿Cuál el procedimiento para la determinación de la lactato deshidrogenasa?
5. Indique los valores normales de la lactato deshidrogenasa.

1. Angel G, Angel M. Interpretación clínica del laboratorio. 7a ed. Bogota: Médica
panamericana; 2001.
2. Balcells A. La clínica y el laboratorio. 19a ed. Barcelona: Masson s.a.; 2001.
3. Diccionario Médico Biológico University. 3a ed. México D.F.: Panamericana; 1998.
1986.
PRÁCTICA No 12 PRUEBAS DE FUNCION HEPATICA
A. DETERMINACION DE BILIRRUBINAS:
12.1 Marco teórico
La bilirrubina es producida por la destrucción de la hemoglobina por las células del sistema
reticuloendotelial. En condiciones normales la concentración de bilirrubina en la sangre es
baja, un incremento ocurre en los casos de ictericia.. Varía son las causa de este
incremento, fundamentalmente cuando el hígado no es capaz de depurar la bilirrubina
producida en grandes cantidades, sobre todo cuando hay daño del parénquima hepático., en
otros casos se debe a una obstrucción del tracto biliar. La bilirrubina directa o conjugada y
la bilirrubina total, se determinan por una serie de métodos, cuyo fundamento principal es
la formación de un complejo azobilirrubina.
12.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función hepática en muestras de suero o plasma
2. Utiliza las técnicas de laboratorio como la espectrofotometría para su determinación,
cumpliendo y haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
 Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
4. Centrifuga

 Reactivos
12.4 Procedimiento
METODO DE JENDRASSIK GROF MODIFICADO
1. Fundamento.-Este método permite determinar la bilirrubina directa o
conjugada y la bilirrubina total. La bilirrubina directa es más soluble
en el agua que la libre ,y reacciona relativamente más rápido, en
solución acuosa directamente con el diazoreactivo, toda la bilirrubina
presente en la sangre reacciona formando un complejo de color
rojo violáceo de azobilirrubina, cuya máxima absorción se da a una
longitud de onda de 530 nm. La forma libre es menos soluble en el
agua y no reacciona en una solución acuosa.
2. Reactivos:
 Solución de cafeína 50g/L y benzoato de sodio 75g /L en acetato de sodio.
 Mantener estable a temperatura ambiente
 Reactivo de ácido de ácido sulfanílico al 0.5 x litro en agua destilada que
 Contiene 15 mL de HCL concentrado. Refrigerar
 Nitrito al 1% en agua destilada. Refrigerar
 Standard de bilirrubina, es una solución patrón de bilirrubina equivalente a
 2 mg/dL calibrada y estabilizada. Conservar bajo refrigeración y protegida de
la luz.
 Diazorreactivo, se prepara al momento de usar, agregando una gota de nitrito
de sodio por cada 1.5 mL de ác. Sulfaníco.
3. Equipos: 1. Espectrofotocolorimetro , centrìfuga.
12.4 Procedimiento
A. Factor de calibración: Antes de utilizar el kit, es necesario proceder a la
calibración como Sigue :
a. En una gradilla colocar dos tubos y luego pipetear:
Blanco de St Standard
mL. mL
Standard 0.2 0.2

Agua destilada. 2.4 --
Desarrollador. -- 2.4
Reactivo sulfanilico. 0.2 --
Diazorreactivo. -- 0.2
b. Mezclar dejar en reposo durante 5 minutos a la temperatura

ambiente.
c. Leer la absorbancia a una longitud de onda de 530 nm.
Factor = 2
Absorbancia del St.
B. Para determinar bilirrubina en suero.
a. Colocar en una gradilla tres tubos de prueba y luego proceder como sigue:
Blanco de la Bilirrubina Bilirrubina

Muestra mL. directa mL. total mL.

Suero 0.2 0.2 0.2
Agua destilada. 2.4 2.4 --
Desarrollador --- --- 2.4
Reac. Sulfanílico 0.2 --- --
Diazorreactivo -- 0.2 0.2
b. Mezclar suavemente todos los tubos.

c. A los 5 minutos exactamente, leer la absorbancia de las muestras directa y
total, frente al blanco, a una longitud de onda de 530 nm
d. Cálculos:
mg/dL Bilirrubina directa = Absorbancia de bilirubina directa x
factor.
Mg/dL Bilirrubina total = Absorbancia de bilirrubina total x factor.
e. Valores normales:
Bilirrubina total. 0.3 a 1.3 mg/dL.
Bilirrubina directa. 0.1 a 0.4 mg/dL
Bilirrubina indirecta 0.2 a 0.8 mg/dL.
12.5 Resultados
12.6 Cuestionario
1. ¿Qué métodos existen para la determinación de bilirrubina? .
2. ¿Cuál es la importancia clínica de las bilirrubinas directa o conjugada y la indirecta no
conjugada ?.
3. En la ictericia hemolítica cuál de las bilirrubinas se encuentra alterada y porqué?
4. ¿En una anemia hemolítica cual de las bilirrubinas se encuentra alterada y por qué?
5. ¿Qué importancia clínica tiene en las pruebas hepáticas completas la determinación de
proteínas totales y colesterol?

1. Angel G, Angel M. Interpretación clínica del laboratorio. 7a ed. Bogota: Editorial médica
panamericana; 2001.
1986.
B. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y FRACCIONADAS

12.1 Marco teórico
El hígado juega un papel importante en la producción de proteínas plasmáticas. La
determinación de proteínas totales y fraccionadas, a menudo es una información muy útil en
el tratamiento de las enfermedades crónicas del hígado. En etapas avanzadas de
la enfermedad, se produce una disminución de la albúmina con incremento de la globulina,
de tal manera que se produce una inversión de la relación A/G. En la fase temprana
de la hepatitis, pueden encontrarse concentraciones normales de proteínas. El método más
exacto para la determinación de proteínas es el método de Kjeldahl.
La determinación de sólo proteínas totales, tiene poco valor como prueba aislada, debido
a que la alteración en una de sus fracciones puede ser balanceada por una alteración

opuesta de otra fracción, por lo que es importante determinar también sus
fracciones, albúmina y globulina.
12.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función hepática en muestras de suero o plasma.
2. Utiliza las técnicas de laboratorio como la espectrofotometría para su determinación de
las proteínas totales y fraccionadas., cumpliendo y haciendo cumplir las normas de
bioseguridad y ética.
 Materiales
1. Gradillas
2. Baguetas
3. Tubos de ensayo
5. Centrifuga
 Reactivos
12.4 Procedimiento
METODO DE BIURET PARA DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES
a. Fundamento. Las proteínas debido a sus enlaces peptídico reaccionan, en medio
alcalino con el ión cúprico del Reactivo de Biuret, estabilizado con el
tartrato, formando un complejo de color violeta. La intensidad del color es
proporcional a la concentración de proteicas existentes en el suero, la absorbancia se
mide a longitud de onda de 555 nm.
b. Reactivos:
1.Reactivo de Biuret para proteínas.
2. Standard de proteínas 3.4 g/dL
c. Equipos: 1. Espectrofotocolorimetro.
Disponer en una gradilla tres tubos de prueba y trabajar como sigue:

mL. mL. mL.
Suero --- --- 0.05

Standard --- 0.05 ---
Biuret. 2.5 2.50 2.50
1. Mezclar y dejar en reposo durante 10 minutos.

2. Leer la absorbancia de la muestra y del standard a una longitud de onda de 55
5nm.
3. Cálculos:
g/ dl de proteinas = A. de la muestra x 3.4
A del standard.
A= absorbancia

12.5 Resultados
12.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento para la determinación de las proteínas?
2. ¿Qué métodos existen para determinar proteínas totales y fraccionadas?
3. ¿Utilizar un standard de proteínas con una concentración por debajo de las cifras
normales, lleva a resultados poco exactos.
4. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de las proteínas totales?
5. ¿En que casos se solicitan determinación de proteínas en orina?

panamericana; 2001.
S.A.; 1986.
C. DETERMINACION DE ALBUMINA CON EL VERDE DE BROMOCRESOL

12.1 Marco teórico
Fundamento. Las proteínas debido a sus enlaces peptídico reaccionan, en medio alcalino
con el ión cúprico del Reactivo de Biuret, estabilizado con el tartrato, formando un
complejo de color violeta. La intensidad del color es proporcional a la concentración de
proteicas existentes en el suero., la absorbancia se mide a a longitud de onda de 555 nm.
12.2 Competencia
1. Conoce el método de laboratorio para determinar de albúminas
2. Explica el procedimiento para la determinación de albúminas

a) Reactivos: Reactivo de albúmina de verde de bromocresol en buffer de succinato pH 4,2 ,
estabilizado.
b) Standard de albúmina de 3.2 g/dL. Refrigerar.
c) Equipos: Espectrofotómetro.
12.4 Procedimiento
1. Disponer en una gradilla tres tubos de prueba y proceder como sigue:

mL. mL. mL
Suero --- --- 0.02

Standard --- 0.02 ---
R. de Albúmina 2.5 2.50 2.5
3. Leer la absorbancia de la muestra y del standard a una longitud de onda de 630.
4. Cálculos :
g/dl de albúmina = A de la muestra x 3.2

A del standard

5. Valores Normales:
Albúmina De 3.5 a 5.5 g/dL.
Globúlina De 1.5 a 3.0 g/dL
12.5 Resultados
12.6 Cuestionario
1. ¿Considera que las globulinas pueden interferir el dosaje de albúmina por el Método de
verde de bromocresol?.
2. ¿Cómo se determinan las globulinas en el laboratorio. A su criterio cual es el mejor
método para determinar globulinas?.
3. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de las globulinas?

panamericana; 2001.
2. Balcells A. La clínica y el laboratorio. 19a ed. Barcelona: Masson S.A. 2001.
1986.
PRACTICA No. 13 PRUEBAS DE FUNCION RENAL
A. DETERMINACIÓN DE UREA
13.1 Marco teórico
Una de las pruebas mas comunes para determinar la función renal en pacientes que padecen
de alguna patología renal ya sea de tipo ambulatorio como hospitalizado es la Urea y
Creatinina en sangre. La Urea es el producto final del catabolismo de las proteínas, tras
sintetizarse en el, hígado, la urea pasa a la sangre y de aquí es eliminada finalmente por el
ríñanla concentración de urea en el filtrado glomerular es idéntica a la del plasma, dado que
se filtra libremente por los glomérulos y que el riñón es su único punto de eliminación.
La creatinina que es el producto resultante del catabolismo muscular, formándose a partir
del fosfato de cretina que contiene el músculo, tras pasar a la sangre se elimina en su
mayoría por el riñón. Las causas de aumento de estos dos parámetros que miden la función
renal, nos darán una clara idea como esta funcionando el riñón, o también nos permitirá
monitorizar drogas nefrotoxicas.
13.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función renal en muestras de suero o plasma Y
orina utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis, cumpliendo y haciendo cumplir
las normas de bioseguridad y ética.
2. Permite al estudiante la oportunidad de aplicar sus conocimientos y practicar con
muestras clínicas la monitorización de algunos fármacos nefrotóxicos.

 Gradillas

 Pipetas automáticas
 Baguetas
 Centrifuga
 Espectrofotometro
a. Material biológico:
Suero obtenido estando el paciente en ayunas.
b. Reactivos:
1. Solución de ácido picríco al 0.05M. Estable a temperatura ambiente
2. Solución de hidróxido de sodio al 0.75 N.
3. Standard de creatinina 2 mg/dL . Refrigerar.
13.4 Procedimiento
DETERMINACION DE CREATININA EN SANGRE
1. En un tubo de prueba colocar 0.75 ml de suero y 3.75 ml de Reactivo.
2. Mezclar por inversión y dejar en reposo durante 10 minutos. Centrifugar a 3000 g
durante 5 minutos.
3. Colocar en una gradilla tres tubos y proceder como sigue
Blanco Standard Problema

mL. mL. mL.
Centrifugado - - 3
Standard. - 0.5 -
Agua. 1.25 0.75 -
Reactivo 1 1.75 1.75 -
Reactivo 2 0.50 0.50 0.50

5. Leer la absorbancia a una longitud de onda de 530 nm.
6. Cálculos:
mg/dL de creatinina = A de la muestra x 2
A del standard
13.5 Resultados
13.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento para la determinación de la Urea por el método de la ureasa?
2. ¿Qué otros métodos existen para determinar urea?
3. ¿Qué relación hay entre la urea y la creatinina?

Masson; 2005.
Masson; 2005.

2006.
B. DETEREMINACION DE CREATININA
13.1 Marco teórico
La creatinina es un producto de desecho, del metabolismo de la creatina, cuya
valoración es una medición de gran importancia y un índice excepcionalmente útil de la
función renal.
En condiciones normales, la cantidad diaria de creatinina producida es prácticamente
constante y depende del índice metabólico y del tamaño corporal. Tan pronto se forma
la creatinina se difunde pasivamente en el torrente sanguíneo, de donde es extraída por
la filtración glomerular del riñón, luego pasa a través del sistema tubular, de donde una
pequeñísima cantidad es reabsorbida a través de los túbulos renales. La prueba de
depuración de la creatinina tiene la ventaja sobre la depuración de urea, en que la
de creatinina es afectada muy poco por la ingesta dietética y porque su excreción se
hace totalmente por filtración glomerular, sin una contribución celular de valor, de tal
manera que la filtración glomerular refleja la concentración sérica de creatinina.
13.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función renal en muestras de suero o plasma
Y orina utilizando las técnicas de laboratorio para su determinación, cumpliendo y
haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
2. Permite al estudiante la oportunidad de aplicar sus conocimientos y practicar con
muestras clínicas la monitorización de algunos fármacos nefrotóxicos.

Para realizar la depuración se requiere:
a) Material biológico :
1. Orina de 5 o 24 horas según indicación médica
2. Suero obtenido estando el paciente en ayunas.
b) Reactivos:
1. Solución de ácido picríco al 0.05M. Estable a temperatura ambiente
2. Solución de hidróxido de sodio al 0.75 N.
3. Standard de creatinina 2 mg/dL . Refrigerar.
c) Equipos:
1. Espectrofotometro.
2. Centrifuga.
13.4 Procedimiento
1. Se pide al paciente que vacié totalmente la vejiga descartando la orina eliminada,
luego se anota la hora , comenzando a partir de esta hora a recolectar toda la
orina por un período de 24 hrs, o por el tiempo que indique el médico.
2. Durante el período de recolección y encontrándose el paciente en ayunas, se le extrae
sangre
3. Finalizada la recolección, se mide el volumen total de la orina y se obtiene el volumen
minuto de orina , aplicando la siguiente fórmula:
V= mL. de orina recolectados

Tiempo de recolección en minuto

4. Luego se determina tanto en orina como en suero mg/dL de creatinina en orina y suero.
5. Cálculos
ml, creatinina depurados por minuto = U x V x 1.73

P
 U = mg/dL de creatinina en orina.

 V = volumen minuto de orina.
 P = mg/dL de creatinina en sangre.
 1.73 = superficie corporal standard.
6. Valores Normales: Hombres 140 + 27.2 mL/ min.

Mujeres: 112 + 20.2 mL/min.
Leer la absorbancia a una longitud de onda de 530 nm
7. Cálculos:
mg/dL de creatinina en orina = Absorbancia de Muestra x 1000

Absorbancia del standaard
13.5 Resultados
13.6 Cuestionario
1. ¿Qué tipo de muestras biológicas se requieren para la depuración de creatinina?
2. ¿Porqué la orina se diluye previamente al 1/10 con agua destilada ?
3. ¿Cuál es la interpretación clínica y los valores normales de la depuración de cratinina?
4. ¿Cuál es la interpretación clínica del incremento de la creatinina?
13.7. Fuentes de información

Masson; 2005.
Masson; 2005.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual
moderno, 2006.
ELECTROLITOS: CALCIO Y MAGNESIO
A. CALCIO
13.1 Marco teórico
La determinación del calcio sérico se utiliza para evaluar la función paratiroidea y el
metabolismo del calcio mediante análisis directo de la cantidad total de calcio en la sangre.
Cuando el nivel sérico de calcio esta elevado en al menos tres determinaciones separadas, el
paciente tienen hipercalcemia. Sabemos que el calcio existe dentro de la sangre en forma
libre (calcio ionizado) y ligado a proteínas (con albúmina).La determinación del calcio sérico
mide ambas formas.

La mayor parte del magnesio del organismo se encuentra en el interior de las células, y
aproximadamente la mitad se localiza en el tejido oseo. El magnesio está mayoritariamente
ligado a una molecula de ATP y es importante en la fosforilación de esta molécula. Por otra
parte este electrolito interviene en casi todos los procesos metabólicos.
13.2 Competencia
1. Determina e interpreta las pruebas por espectrofotometría de los principales
electrolitos en muestras de suero, plasma y orina.
2. Analiza e interpreta los resultados relacionando con las diversas enfermedades que se
presentan cuando hay disminución o incrementos.
 Materiales
1. Gradilla
2. Tubo de centrifuga
3. BAguetas
4. Centrifuga
5. Espectrofotometro
13.4 Procedimiento
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE CALCIO EN SUERO
REACTIVOS
Conservados entre 15° y 25°C. y protegidos de la luz, estables hasta la fecha de caducidad indicada
en la etiqueta.
-Buffer Alcalino: 2-Amino-2-Metil-1-Propanol 350 mM
Cianuro de Potasio 2 mM
Estabilizantes e ingredientes no reactivos c.s.
-Reactivo CFC: o-Cresolftaleína complexona 0.05 mM
8-Hidroxiquinolina 5 mM
Preparación del Reactivo de Trabajo: Mezclar 1 ml. de Buffer Alcalino con 1 gota (50 ul) de Reactivo
CFC. Estable por 24 horas protegido de la luz. Para mayores volúmenes, preparar manteniendo la
proporción de los componentes.
MUESTRA
Utilizar suero o plasma heparinizado. El uso de otros anticoagulantes puede interferir con el ensayo.
Obtener la muestra evitando estasis venosa. El uso de torniquetes puede arrojar resultados más
elevados.
De preferencia el paciente debe encontrarse en ayunas.
.
TECNICA
TECNICA CON BLANCO TUBO
Calibrador Muestra
Reactivo de Trabajo (ml) 1.00 1.00
Mezclar y leer para cada tubo las absorbancias A1 contra blanco de agua.
Calibrador (ml) 0.01 ---

Muestra (ml) --- 0.01
Mezclar e incubar a lo menos 60 segundos y leer para cada tubo las absorbancias A2 contra blanco
de agua. El color resultante es estable por a lo menos 1 hora.
TECNICA SIN BLANCO TUBO
Blanco Calibrador Muestra
Calibrador (ml) --- 0.01 ---
Muestra (ml) --- --- 0.01
Reactivo de Trabajo (ml) 1.00 1.00 1.00

Mezclar e incubar a lo menos 60 segundos y leer las absorbancias contra blanco de reactivos. El
color resultante es estable por a lo menos 1 hora.
Adaptaciones para la aplicación de este reactivo en autoanalizadores están disponibles a solicitud.
Es responsabilidad del laboratorio validar esta aplicación.
CALIBRACION
• La calibración con el Standard acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos en métodos
automáticos. En la calibración se
recomienda utilizar calibrador sérico VALTROL-C proceder de igual forma que con las muestras.
CALCULOS
TECNICA CON BLANCO TUBO
Factor = ____Concentración Calibrador_______
(Abs.2 Calibrador - Abs.1 Calibrador)
Calcio (mg/dL)= Factor x (Abs. 2 Muestra – Abs. 1 Muestra)
TECNICA SIN BLANCO TUBO
Factor = _Concentración Calibrador_
Abs.Calibrador
Calcio (mg/dL)= Factor x Abs. Muestra
En el caso de las muestras de orina, multiplicar el resultado por el factor de dilución. Si la muestra
es de 24 horas multiplicar además por el volumen total expresado en litros y luego por 10.
RANGOS DE REFERENCIA
Suero o plasma:
Adulto : 8.8 a 10.7 mg/dL
Niño (*) : 10.0 a 12.0 mg/dL
(*) El rango de referencia para los niños es levemente más elevado que el de los adultos, y decrece
lentamente con el crecimiento.
Orina : 50 a 400 mg/24 h.
13.5 Resultados
13.6 Cuestionario
1-¿Cuáles son los electrolitos más comunes que se solicitan al laboratorio de análisis
clínicos?
2.-¿Qué recomendaciones se le debe hacer al paciente antes de la toma de muestra para
determinar electrolitos?
4.-¿Qué papel cumplen los electrolitos en la sangre y que relación tienen con las
hormonas?
5. ¿Cómo se determina Magnesio en suero y que importancia clínica tiene?

panamericana; 2001.
S.A.; 1986.
PRACTICA Nº 14 HORMONAS
A. DETERMINACIÓN DE T3 y T4 por ELISA

14.1 Marco teórico
La glándula tiroides segrega dos hormonas la tiroxina y la calcitonina , la de importancia
de esta radica en que la primera regula el metabolismo basal y están involucradas la
Triyodotironina(T3) que representa el2% de la hormona tiroidea presente en la sangre .Solo
la quinta parte procede del propio tiroides, ya que la mayoría se forma en los tejidos a
partir de la T4.Sin embargo, es cinco veces más activa que la T4.No es un buen parámetro
de estimación de la función tiroidea, ya que su concentración en sangre depende de
múltiples circunstancias cuyo origen no es tiroideo .Una parte de la T3(solo el 0.4%) esta
libre (no unida a proteínas ) y es por lo tanto, la fracción metabólicamente activa ,La T3
inversa T3 es otro metabolito histico de la T4,pero inactivo. Parece ser que la T4 se
metaboliza, bien hacia T3 (Forma activa)o T3( forma inactiva) dependiendo de diversas
circunstancias .Las causas de aumento es que la T3 puede ser alta si hay un aumento de la
concentración de globulina fijadora (Para mantener normal la cifra de T3 libre, aumenta
en enfermedades con destrucción y en la insuficiencia hepática y renal.
14.2 Competencia
1. Profundiza sus conocimientos de esta patologías de tipo hormonal, referidas a las
hormonas tiroideas.
2. 2. Determina por métodos de ELISA el análisis e interpretación de los resultados.
14.3. Materiales y equipos

Se trabajara con bibliografía actualizada, revistas con trabajos de investigación sobre esta
patología referida a la tiroides, y sus hormonas.
14.4 Procedimiento
Se realizara según la técnica de ELISA indicada por el laboratorio de procedencia del set de
reactivos.
14.5 Resultados
14.6 Cuestionario
1. ¿Cuáles son las pruebas de laboratorio para determinar hormonas T3 y T4?
2. ¿Qué pruebas se utilizan para determinar el perfil tiroideo?
3. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de TSH?.

Masson; 2005.
3. Kumar V, Cotran R, Robbins S. Patología humana. 7a ed. Madrid: Elsevier; 2004.
4. Widmann F. Interpretación clínica de las pruebas de laboratorio. 4a ed. Barcelona: JIMS;
1997.
DETERMINACIÓN DE HCG: PRUEBA DE EMBARAZO MONOCLONAL
B. PRUEBA DIRECTA EN LAMINA PARA LA DETECTACION ESPECIFICA DE HCG

EN ORINA O SUERO
14.1. Marco teórico
La prueba inmunológica, se basa en la presencia en la orina o en suero de la mujer
embarazada de gonadotrofina coriónica humana(HCG), que estimula la producción de

anticuerpos específicos demostrables en vivo. Se han descrito diversas pruebas
inmunológicas., y actualmente se dispone de preparados comerciales para detectar la
HCG urinaria. Se basan en la inhibición de la aglutinación de las partículas de látex, que
recubiertas con HCG sirven como antígeno capaz de reaccionar con un suero inmune anti-
HCG (de conejo).
14.2 Competencias
1. 1.Utiliza los diferentes métodos de detección para el diagnostico de embarazo
adquiriendo destreza.
2. 2.Analiza e interpreta los resultados obtenidos.
Materiales
Laminas de fondo oscuro

Pipetas volumetricas
Micropipetas
Reactivos
1. LATEX ANTI – HCG

Partículas látex recubiertas covalentemente con anti – HCG de origen monoclonal.
Refrigerar.
14.4 Procedimiento
METODO CUALITATIVO PARA EL DOSAJE DE HCG EN ORINA O SUERO
1. Colocar 80 pl (0.08 mL) de orina o suero en el centro de uno de los anillos de una
lámina de vidrio.
2. Agregar 1 gota de Látex anti – hCG sobre la gota de suero u orina de la lámina.
3. Mezclar bien usando el extremo plano de la varilla y ladear la lámina lenta y
suavemente por no más de 2 minutos.
4. Examinar presencia o ausencia de aglutinación usando una luz apropiada.
Interpretación.-
POSITIVO Aglutinación
NEGATIVO no aglutinación
METODO SEMI – CUANTITATIVIO PARA EL DOSAJE DE HCG EN ORINA
1. Cuando la colección de orina de 24 horas es completa, se mide el volumen total

(V).
Se mezcla bien la muestra y se separa una alícuota de aproximadamente 2mL.
2. Preparar diluciones progresiva de la orina usando suero salino (ejemplo, 1:2,
1:4, 1:8, etc).
2. Realizar una prueba cualitativa (en lámina) en cada una de las diluciones.
3. El punto final se determina como la mayor dilución que dé resultado positivo
(es decir la última dilución que da aglutinación).
La cantidad de HCG es derivada de la fórmula siguiente:
Ul /mL = SxD

Donde:
S = sensibilidad de la prueba (0.02 Ul/ mL).
D = Inversa de la dilución que produce un resultado positivo (1/ dilución).
Ejemplo:
S = 0.20
D = 16 (dilución 1:16)
HCG Ul/mL. = 0.20 x 16 = 3.2 Ul/mL
Si se desea estimar el nivel en 24 horas añadir el volumen urinario en 24 horas a la

ejecución:
Ul/ 24 horas = S x D x V
Ejemplo:
Ul/24 horas = 0.20 x 16 x 1,500 = 4,800 Ul/24 horas
14.5 Resultados
14.6 Cuestionario
1. ¿Qué métodos conoce Ud. para la determinación de HCG?
2. ¿Qué otras patologías se puede diagnosticar con la determinación de la HCG?
3. ¿Cómo es el proceso para la determinación de HCG cuantitativo?.

1. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México D.F.: Manual moderno
S.A; 1986.
2. Lluis VJ. Manual de técnicas de laboratorio. Hematología. 2ª ed. Barcelona: Masson S.A.;
1997.
3. Instituto Nacional de Salud. Ministerio de Salud. Manual de procedimientos de
laboratorio. Lima. Impresora Amarilys e,i,r,l,; 1997.
4. San Miguel JF y Sanchez-Guijo F. Cuestiones en hematología, 3ª ed. Madrid: Harcourt
Brace S.A.; 1997.
5. Pagana-Pagana. Pruebas diagnósticas y de laboratorio. 2da. ed. Barcelona: Mosby-
Doyma Libros, SA; 1996.


Guia de Practicas 2017-I Unw

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3B-2

Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INTERPRETACIÓN DE ANÁLISIS CLÍNICOS

Autor: Dr. Juan Manuel Parreño Tipian

Dr. Mario Carhuapoma Yance

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Semana Practica Contenido

Toma de muestra Sangre total. Plasma. Sangre desfibrinada.

8 Primer examen (E1)

Examen de orina completa:

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

16 Segundo examen (E2)

PRÁCTICA No. 1: TOMA DE MUESTRA PARA LOS DIVERSOS LÍQUIDOS

Las determinaciones hematológicas y bioquímicas pueden realizarse en sangre total, suero

1.3 Materiales y Equipos

Obtener los siguientes componentes:

1. SANGRE TOTAL Y PLASMA

RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS FORMES:

1.7 Fuentes de información

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

PRÁCTICA No.2: HEMATIMETRIA. RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.DOSAJE

A. HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.

2.3 Materiales y equipos

2.7 Fuentes de información

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

B. DOSAJE DE HEMOGLOBINA (Hb)

2.3 Materiales y equipos

4. Mezclar y dejar en reposo por espacio de 10 minutos.

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

El quinto tubo sirve para llegar a 0 con el espectrofotómetro. Aplicando la fórmula de

DISMINUCION: Hipocromemia u oligocromemia: anemias

2.7 Fuentes de información

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

C. DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO

2.3 Materiales y equipos

2.7 Fuentes de información

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

3.3 Material y equipos

3.7 Fuentes de información

FÓRMULA LEUCOCITARIA. HEMOGRAMA DE SCHILLING

3.3 Materiales y equipos

ESTUDIO CITOMORFOLOGICO DE EXTENDIDOS COLOREADOS:

En indispensable para obtener el porcentaje de cada tipo de leucocito que estos se

3.7 Fuente de información:

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

3.3 Materiales y equipos

3.7 Fuentes de información

PRÁCTICA No. 4: RECUENTO DE PLAQUETAS, RECUENTO DE RETICULOCITOS

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

4.3 Materiales y equipos

Los métodos para el recuento se pueden clasificar en:

Hematimetria: 4'8000,0000 por mm3 de sangre.

4.7 Fuentes de información:

4.3 Materiales y equipos

4.7 Fuentes de información:

4.1 Marco teórico

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

4.3 Materiales y equipos

4.7 Fuentes de información:

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

PRÁCTICA No. 5: TIEMPO DE COAGULACIÓN, TIEMPO DE SANGRIA, TIEMPO