Tinción Gram Lab2

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA Y DE ALIMENTOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA DE ALIMENTOS
Asignatura: Microbiología de alimentos

Docente: Blg. Pedro Barzola
TEMA: Tinción Gram

Semestre: 2019 A
Integrantes:
Calderón Lourdes
Del Carpio Chavez Jorge
Jesus Veneros Diego
Torres Quiñones Jerit
Yovera Ramos Geraldine
Zambrano Cassana Alexandra
CALLAO-PERÚ
2019
Contenido
INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. - 1 -
OBJETIVO ............................................................................................................................. - 3 -
MARCO TEÓRICO ............................................................................................................... - 4 -
MATERIALES .................................................................................................................... - 14 -
EXPERIMENTACIÓN ........................................................................................................ - 17 -
RESULTADOS .................................................................................................................... - 21 -
CONCLUSIONES ............................................................................................................... - 22 -
RECOMENDACIONES ...................................................................................................... - 23 -
ANEXOS.............................................................................................................................. - 24 -
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................. - 25 -
Bibliografía .......................................................................................................................... - 25 -
Facultad de Ingeniería Pesquera y Alimentos
Escuela Profesional de Ingeniería de Alimentos
INTRODUCCIÓN
El primer paso en cualquier estudio bacteriológico consiste en la observación microscópica de
la muestra. Una observación directa, sin coloración, nos dará escasa información sobre los
microorganismos. Para obtener mayor información debemos colorear el material que vamos a
estudiar y lo haremos con una o varias técnicas que nos den las características deseadas.
La reacción de Gram es un método empírico de tinción, fácil de aplicar y que distingue a las
bacterias en dos grupos respecto de la composición química de su pared celular.
Integridad de pared bacteriana: Si bien es cierto que se ha demostrado que la pared no toma el
colorante, cumple un papel importante en el equilibrio de pasaje y retención del colorante
primario. Tanto las células Gram positivas, como las Gram negativas, acumulan el colorante
primario por medio de un eslabón iónico entre los grupos básicos del colorante y los grupos
ácidos de la célula.
Intervención de sus componentes: La composición química, la permeabilidad y la integridad
de la pared celular intervienen en la diferenciación de Gram.
Algunos autores sugieren que en las bacterias que dan reacción positiva (retienen el cristal
violeta) existe un complejo especial de magnesio: ácido ribonucleato de magnesio -proteína-
hidrato de carbono, el cual forma un complejo insoluble con el colorante y el iodo.
Se demostró que si se extrae Ribonucleato de Mg por acción de sales biliares, los Gram
positivos se tornan Gram negativos y colocándolo nuevamente vuelven a ser Gram positivos. Sin
embargo, no hay conversión de Gram negativo a Gram positivo por el agregado de Ribonucleato
de magnesio.
Otra hipótesis es que las bacterias Gram negativas contienen un porcentaje más alto de lípidos
que las Gram positivas y sus paredes son más delgadas, ya que tienen una cantidad mucho menor
-1-
de péptido glucano. El tratamiento con alcohol extrae lípidos con lo que aumenta la porosidad o
permeabilidad de la pared celular Gram negativa. Así, el complejo cristal violeta iodo (CV-I)
puede extraerse, y los microorganismos se destiñen.
Las paredes celulares de las bacterias Gram positivas, por su composición diferente (bajo
contenido lipídico), se deshidratan bajo tratamiento con alcohol; los poros disminuyen y no se
logra extraer el complejo CV-I.
Probablemente, el grosor de la pared celular más la deshidratación por acción del solvente
decolorante que impide la salida del complejo Cristal Violeta-Iodo, también sea la causa por la
cual las levaduras se tiñen como microorganismos Gram positivos aunque su estructura química
sea distinta.
-2-
OBJETIVO
 Diferenciación entre el tipo de bacterias Gram (+) y Gram (-)
Bacteria Gram (+)  tinción azul
Bacteria Gram (-)  tinción rosada
 Aplicar de manera correcta el frotis para la fijación de la muestra
 Extracción de colonias de las placas Petri, después de haber realizado un cultivo estéril
-3-
MARCO TEÓRICO
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado
en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su
nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884.
La tinción de Gram diferencia a las bacterias en dos grandes grupos. Se llama bacterias Gram
positivas a aquellas que retienen la tinción azul-violeta, y se denomina bacterias Gram
negativas a las que se decoloran y después se tiñen con safranina. Esta diferencia de tinciones
se debe a la estructura de las paredes celulares de ambos tipos de bacterias (tabla 1). Las
bacterias Gram positivas tienen una pared gruesa compuesta de peptidoglucanos y polímeros,
e impermeable, que hace que resista la decoloración. En cambio, las bacterias Gram negativas
tienen una capa delgada de peptidoglucanos más una bicapa de lipoproteínas que se puede
deshacer con la decoloración. La tinción de Gram puede proporcionar información rápida para
diagnósticos de infecciones, puede revelar los agentes causales incluso con una toma de
muestra no adecuada. También hace posible distinguir entre contaminación de la muestra y
-4-
una verdadera infección. Puede ayudar al clínico a seguir o cambiar un tratamiento antibiótico
inicial antes de los resultados del cultivo, y en algunos casos, es capaz de mostrar la necesidad
de una atención médica urgente. Actualmente la tinción de Gram sigue siendo un método
eficaz e importante en el laboratorio, además de que es rápido y económico, por lo que se
debe estandarizar para evitar errores técnicos o de interpretación.
FUNDAMENTO:
-5-
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto gram
positivas como gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto
formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales
están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta
se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y
forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la
misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se
decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la
coloración de contraste las células gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas
permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción
de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al término del protocolo,
las gram positivas se verán azul-violáceas y las gram negativas, se verán rosas (si no se hizo
la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un
decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer
tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de gram positivos, y los que
pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gram negativos. Basándonos pues, en
la reacción gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. Los
-6-
colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloración gram. Los
representantes más usados de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana.
En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina.
El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el número de grupos metilo en
la molécula; por consiguiente, de los tres grupos, el tono más oscuro es la hexametil-p-
rosanilina (violeta cristal), y el tinte más ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo).
Los nombres violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al número de grupos
metilo contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B, tonos azules. El violeta de
cristal contiene seis grupos metilo, y se considera como el mejor colorante primario para teñir
por el método de Gram.
La facultad de las células para tomar la coloración gram no es propia de toda sustancia
viviente, sino que se limita casi en absoluto a hongos y bacterias. Así vemos que las células de
plantas y animales superiores no conservan la primera coloración; los mohos se tiñen con
cierta irregularidad; los gránulos de micelios propenden retener el colorante. La reacción de
Gram no es infalible ni constante; puede variar con el tiempo del cultivo y el pH del medio, y
quizá por otras causas.
-7-
TEORÍAS:
Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El mismo
microorganismo, si sufre daño de la pared por una u otra causa, se vuelve gram negativo. Esto
indica la importancia de la pared para la retención o el escape del colorante. Una posible
teoría del mecanismo de tinción es la siguiente:
El colorante básico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca insoluble en
agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidrata las paredes de los
microorganismos gram positivos, tratados con mordiente, y forma una barrera que la laca no
puede atravesar. En las células gram negativas, los lípidos de la pared (más abundantes que en
las células gram positivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del
complejo de cristal violeta con yodo. Algunos autores objetan esta teoría, pero es indudable la
importancia general de la pared celular.
Varias son las teorías emitidas para explicar el mecanismo de la tinción de Gram. Stearn
(1923) basó la suya en una combinación química entre el colorante y las proteínas de las
bacterias, las proteínas y aminoácidos son cuerpos anfóteros, esto es, tienen la facultad de
reaccionar con ácidos y con bases, gracias a sus grupos amino y carboxilo; en soluciones
ácidas, reaccionan con los ácidos, y en soluciones alcalinas lo hacen con las bases. De igual
manera, comprobaron que la reacción de tinción de las bacterias obedece en gran parte a su
contenido proteínico; estos microorganismos se conducen como cuerpos anfóteros, al
combinarse con colorantes ácidos en soluciones ácidas y con los básicos en medio alcalino.
La combinación con ambos tipos de colorante no se produce en el «punto isoeléctrico». Como
los microorganismos contienen más de una proteína, ese punto no tiene un valor preciso y
-8-
definido, sino que constituye más bien una gama o escala que comprende dos o tres unidades
de pH. Según Stern y Stearn, los microorganismos gram positivos tienen una escala
isoeléctrica de pH inferior a la de los microorganismos gram negativos; y, a base de sus datos
experimentales, deducen las siguientes conclusiones:
 Los microorganismos gram positivos pueden hacerse gram negativos al aumentar la
acidez.
 Los microorganismos gram negativos pueden hacerse gram positivos al aumentar la
alcalinidad.
 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes ácidos pueden hacerse
gram negativos por aumentar la alcalinidad.
 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes básicos pueden hacerse
gram negativos por aumentar la acidez.
 En la zona isoeléctrica característica de cada especie es muy escasa la tendencia a
retener cualquier colorante.
 Parece estar bien demostrado que las proteínas de las bacterias no son simples, sino
más bien una débil combinación de sustancias proteínicas con otras lipoideas o grasas.
 La materia grasa extraída de los microorganismos gram positivos difiere de la
obtenida de los microorganismos gram negativos, en que la primera contiene una
proporción mucho mayor de ácidos no saturados que muestren gran afinidad por los
agentes oxidantes. Todos los mordientes (como el yodo) empleados en la coloración
gram son oxidantes; su efecto, en general, consiste en dar a la sustancia oxidada un
-9-
carácter más ácido. Esto aumenta la afinidad de un microorganismo por los colorantes
básicos.
 El cambio de respuesta a la coloración de Gram con el tiempo es propio, sobre todo,
de los microorganismos débilmente gram positivos cultivados en los medios que
contengan sustancias capaces de fermentar, y cuya reacción se vuelve ácida en el curso
del desarrollo.
Gianni (1952) comprobó que las bacterias gram positivas Bacillus subtilis y Bacillus
anthracis originaban una reacción negativa cuando los cultivos databan de dos a tres horas.
Luego se desarrollaba la sustancia gram positiva debajo de la pared celular y se invertía la
reacción. Otra explicación de la reacción de Gram puede ser la posible existencia de una capa
exterior alrededor de un núcleo gram negativo. Libenson y Mcllroy, han comunicado que, si
la reacción gram positiva depende de que se forme una combinación compleja entre los
componentes de la coloración de Gram y las proteínas de la pared celular, sería de esperar que
las bacterias desintegradas por medios físicos retuviesen este tinte, ya que ese tratamiento no
podría cambiar el carácter químico de los materiales de dicha pared. Por el contrario, los
gérmenes gram positivos desintegrados pierden su capacidad de retener el colorante primario
y no se tiñen
La pared celular de los microorganismos gram positivos y gram negativos es permeable al
violeta cristal. Sin embargo, la de los primeros no lo es al complejo de yodo y colorante
formado en el interior de la célula. Los resultados experimentales obtenidos con una difusión
celular exentan de proteínas, y la escasa solubilidad del complejo de yodo y violeta cristal en
alcohol y acetona, parecen sustentar la opinión de que la reacción gram positiva consiste
esencialmente en la formación, dentro de la célula, de una cantidad apreciable de complejo de
- 10 -
yodo y colorante difícil de eliminar con el disolvente. La pared celular de los
microorganismos gram positivos, a diferencia de la de los gram negativos, sería prácticamente
impermeable al violeta cristal. Los microorganismos aparecerán teñidos después de tratarlos
con violeta cristal, por ser absorbido el colorante en la superficie externa de la pared celular, y
el disolvente eliminará sin dificultad el complejo formado después del tratamiento con yodo.
Ni los grupos sulfhidrilo ni las proteínas básicas han influido específicamente en el
mecanismo del colorante de Gram. Libenson y Mcllroy han sostenido que la permeabilidad de
la pared celular al violeta cristal, la escasa solubilidad del complejo de yodo y colorante en
alcohol y acetona, y el libre acceso del disolvente al complejo constituido, son los principales
factores que intervienen en el mecanismo de esa coloración.
BACTERIAS RESISTENTES A LA TINCIÓN GRAM:
Las siguientes bacterias de naturaleza gram positiva se tiñen como gram negativas:
 Mycobacterias (están encapsuladas).
 Mycoplasmas (no tienen pared).
 Formas L (pérdida ocasional de la pared).
- 11 -
 Protoplastos y esferoplastos (eliminación total y parcial de la pared, respectivamente).
UTILIDADES:
En el análisis de muestras clínicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias
funciones:
 Identificación preliminar de la bacteria causal de una infección.
 Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos
bacterianos identificados en la tinción de Gram se deben de corresponder con
- 12 -
aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor número de
formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos
empleados, así como la atmósfera de incubación.
A partir de la tinción de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Los cocos son
de forma esférica. Pueden aparecer aislados después de la división celular (micrococos),
aparecer por pares (diplococos), formar cadenas (estreptococos), o agruparse de manera
irregular (estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena
(estreptobacilos) o en empalizada.
También pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos (si son de forma
rígida) o espiroquetas (si son blandas y onduladas). Si, por el contrario, poseen forma de
«coma» (o curvados) entonces se los designa vibrios.
FACTORES QUE ALTERAN LA TINCIÓN:
 Edad de la bacteria.
 Errores del operador.
 Uso de antibióticos
A pesar de la gran utilidad de la tinción de Gram, este método debe ser valorado con
precaución, ya que la reacción puede variar según la edad de las células (cultivos viejos de
- 13 -
bacterias gram positivas pueden perder capas de peptidoglicanos y teñirse como gram
negativos) y la técnica empleada (al decolorar por un tiempo muy prolongado se puede correr
el riesgo que bacterias gram positivas se tiñan como gram negativas). Por esta situación, junto
a la muestra deben teñirse controles con bacterias gram positivas (por
ejemplo, Staphylococcus aureus) y gram negativas (por ejemplo, Escherichia coli).
MATERIALES
COCINILLA ELECTRICA ESPATULA ALCOHOL (90%)
- 14 -
MICROSCOPIO MECHERO DE BUNSEN ENCENDEDOR
VASO PRECIPITADO (600ML) PLACA PETRI PICETA
BALANZA ELECTRICA BAGUETA ASA DE SIEMBRA
- 15 -
GOTERO PLUNA DE RELOJ PORTA OBJETOS
Fuente: Elaboración propia
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EXPERIMENTACIÓN
 Haciendo uso de una placa sembrada en el conteo de mesofilos, se procederá a esterilizar

el asa de siembra y raspar una colonia cualquiera de la placa sembrarla en una lámina porta
objetos.
 La lámina se agregará una gota de agua destilada y luego se hará el frotis con el inóculo y
se procede a secar con aire.
 Una vez secada la lámina, haciendo uso del mechero se hace la fijación y se acerca la
lámina al fuego hasta que se ponga suave y tibia.
Fig.1
 Una vez fijada, se cubre la zona del frotis con gotas de cristal violeta y se deja en reposo
durante un minuto.
- 17 -
Fig.2 Fig.3
 Se procede a lavar la lámina, verter agua sobre ella hasta eliminar lo restante.
Fig.4 Fig.5
 Se cubre el frotis con gotas de lugol y se deja reposar por un minuto, luego lavar
nuevamente como en el paso anterior.
- 18 -
Fig.6 Fig.7
 Cubrir la lámina con alcohol acetona y dejar reposar durante un minuto, luego lavar lamina.
Fig.8
Fig.9
 Finalmente cubrir frotis con safranina y reposar por un minuto y pasar a lavar, secar y
sacudir.
 Llevar lámina al microscopio y observar la coloración de las células.
- 19 -
- 20 -
RESULTADOS
Una vez llevada al microscopio se observa de acuerdo a la coloración si son Gram positivas
(púrpuras) o Gram negativas (rosas), qué forma tienen, y cómo se organizan. Según su forma
pueden ser cocos (esferas), bacilos (cilindros finos) o cocobacilos. Se pueden organizar en racimo
o en cadenas; a veces están dispersas.
Características de la
Coloración Gram Imagen
colonia utilizada
Elevación: Convexa
Borde: Entero
Rosada Gram negativa
Forma: Circular
Margen: Entera
Elevación: Convexa
Borde: Entero
Azul Gram positiva
Forma: Circular
Margen: Entera
Fuente: Elaboración Propia
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CONCLUSIONES
 Se debe emplear medios y condiciones de cultivo óptimos para la reproducción del
máximo posible de microorganismos.
 Los cultivos deben estar exentos de contaminación exógena, al igual que los
instrumentos para inocular esterilizados y evitar resultados generados por malas
prácticas de laboratorio.
 Habiendo realizado la diferenciación de las bacterias Gram (+) y (-) en la muestra, se
llega a un gran avance en la clasificación y tipificación. Sin embargo es necesario hacer
pruebas bioquímicas para determinar específicamente que bacterias son.
- 22 -
RECOMENDACIONES
 Es necesario realizar correcta y minuciosamente los procedimientos del frotis y la fijación

para obtener los resultados correctos.
 Es recomendable tener en cuenta saber el manejo del microscopio correctamente para no

dañar el microscopio.
 Se recomienda seguir el procedimiento minuciosamente, pues si no se corre el riesgo de no

obtener ningún resultado.
- 23 -
ANEXOS
Tabla en relación a enfermedades microbianas que son transmitidas por el aire, agua y alimento.
ENFERMEDAD SÍNTOMAS ALIMENTOS MODO DE TRANSMISIÓN

PRINCIPALES TÍPICOS
Salmonelosis Diarrea, dolor Huevos, carnes y Comienzan entre las 8 y 48 horas
abdominal, dolor de productos lácteos sin después de comer el alimento
cabeza, fiebre y pasteurizar. contaminado y dura entre 1 y 8 días.
náuseas
Escherichia coli Dolor de cabeza, Leche sin pasteurizar, Comienzan entre 3 y 9 días después de
diarrea y dolor vegetales crecidos ingerir el alimento contaminado, dura
abdominal severo. con estiércol, etc. de 2 a 9 días si no hay complicaciones.
Listeria Leche sin pasteurizar Fiebre repentina, Comienza dentro de las 24 horas
monocytogenes y quesos blandos, escalofríos, dolor de después de comer el alimento
carnes de ave, paté de espalda, dolor contaminado. Dura entre 2 y 7 días.
carne, ensaladas, etc. abdominal y diarrea.
Lista de Bacterias Gram positivas y Gram negativas con las enfermedades que provocan.
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS

Bacillus subtilis Achromobacter
Clostridium tetani Brucella ovis
Corynebacterium diphtheriae Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus acidophilus Escherichia coli
Streptococcus pyogenes Salmonella typhi
- 24 -
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Bibliografía
Díaz R Gamazo C y López Goñi I. 1999. Manual práctico de microbiología. Edición Masson
Microbiología general. Coloración de bacterias.2017/02/03.
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-content/uploads/2017/02/03-
COLORACIONES.pdf
Tincion Gram. Microbiologia. 2014/07/09
https://www.slideshare.net/mobile/noheding/tincion-gram-42074172
Tablas de microbiología 2018/08/10
https://www.academia.edu/6513411/Tablas_de_Microbiologia
- 25 -

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Asignatura: Microbiología de alimentos

TEMA: Tinción Gram

MARCO TEÓRICO ............................................................................................................... - 4 -

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................. - 25 -

El primer paso en cualquier estudio bacteriológico consiste en la observación microscópica de

bacterias en dos grupos respecto de la composición química de su pared celular.

colorante, cumple un papel importante en el equilibrio de pasaje y retención del colorante

Intervención de sus componentes: La composición química, la permeabilidad y la integridad

de la pared celular intervienen en la diferenciación de Gram.

violeta) existe un complejo especial de magnesio: ácido ribonucleato de magnesio -proteína-

hidrato de carbono, el cual forma un complejo insoluble con el colorante y el iodo.

puede extraerse, y los microorganismos se destiñen.

logra extraer el complejo CV-I.

 Diferenciación entre el tipo de bacterias Gram (+) y Gram (-)

Bacteria Gram (+)  tinción azul

Bacteria Gram (-)  tinción rosada

 Aplicar de manera correcta el frotis para la fijación de la muestra

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado

en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su

positivas a aquellas que retienen la tinción azul-violeta, y se denomina bacterias Gram

muestra no adecuada. También hace posible distinguir entre contaminación de la muestra y

eficaz e importante en el laboratorio, además de que es rápido y económico, por lo que se

debe estandarizar para evitar errores técnicos o de interpretación.

positivas como gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto

forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.

La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la

misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se

decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen.

Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la

la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).

Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un

pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gram negativos. Basándonos pues, en

En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina.

El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el número de grupos metilo en

rosanilina (violeta cristal), y el tinte más ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo).

por el método de Gram.

cierta irregularidad; los gránulos de micelios propenden retener el colorante. La reacción de

quizá por otras causas.

teoría del mecanismo de tinción es la siguiente:

importancia general de la pared celular.

contenido proteínico; estos microorganismos se conducen como cuerpos anfóteros, al

La combinación con ambos tipos de colorante no se produce en el «punto isoeléctrico». Como

isoeléctrica de pH inferior a la de los microorganismos gram negativos; y, a base de sus datos

experimentales, deducen las siguientes conclusiones:

 Los microorganismos gram positivos pueden hacerse gram negativos al aumentar la

 Los microorganismos gram negativos pueden hacerse gram positivos al aumentar la

 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes ácidos pueden hacerse

gram negativos por aumentar la alcalinidad.

 Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes básicos pueden hacerse

gram negativos por aumentar la acidez.

 En la zona isoeléctrica característica de cada especie es muy escasa la tendencia a

retener cualquier colorante.

 La materia grasa extraída de los microorganismos gram positivos difiere de la

obtenida de los microorganismos gram negativos, en que la primera contiene una

agentes oxidantes. Todos los mordientes (como el yodo) empleados en la coloración

gram son oxidantes; su efecto, en general, consiste en dar a la sustancia oxidada un

 El cambio de respuesta a la coloración de Gram con el tiempo es propio, sobre todo,

de los microorganismos débilmente gram positivos cultivados en los medios que

contengan sustancias capaces de fermentar, y cuya reacción se vuelve ácida en el curso

Luego se desarrollaba la sustancia gram positiva debajo de la pared celular y se invertía la

gérmenes gram positivos desintegrados pierden su capacidad de retener el colorante primario

La pared celular de los microorganismos gram positivos y gram negativos es permeable al