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-UNCPBA-
En memoria de Papá
Resumen
1. Introducción .............................................................................................................................1
2. Metodología .............................................................................................................................4
3. Resultados ................................................................................................................................6
5. Bibliografía .............................................................................................................................26
1. Introducción
1
Figura 1. Distribución mundial de tuberculosis bovina para el primer semestre
del año 2014. Fuente: OIE, 2014 http://www.oie.int/es/
2
aproximadas de 6,3 y 22 millones de dólares estadounidenses en las cuencas
lecheras de la provincia de Buenos Aires y en la Cuenca del Río Salado
respectivamente, siendo la merma en la producción del 19% (Paolicchi, 2007).
3
2. Metodología
4
“Factores de riesgo de
“Thermal inactivation of
tuberculosis bovina en
several Mycobacterium
rodeos lecheros de las
spp. in milk by Google académico
provincias de Córdoba y
pasteurization”, Grant et
Santa Fe”, Garro et al.,
al., 1996. Irlanda
2010. Argentina
Referencias
bibliográficas
Criterios de selección:
Límite temporal:
año 2014
5
3. Resultados
M. bovis sensible
100%. Map sobrevive <
En laboratorio. 1% en el 50% de las
30´ 63,5
Inmersión en muestras, equivale a
baño de agua. menos de 100 UFC/mL
10 4 Tubo de ensayo, (reducción > 2 log10)
vol.: 5mL. Map sobrevive <1% en
Sin agitar el 55% de las
15" 71,7 durante proceso muestras, equivale a
menos de 100 UFC/mL
Grant et (reducción > 2 log10)
al., 1996b.
Leche cruda M. bovis sensible
Irlanda del
Norte 100%. Map sobrevive
En laboratorio. <1% en el 96% de las
30´ 63,5 Inmersión en muestras, equivale a
baño de agua. menos de 100.000
Unidad UFC/mL (reducción > 2
10 7 pasteurizadora log10)
HTST a escala, Map sobrevive <1% en
vol.: 250mL. el 85% de las
Sin agitar muestras, equivale a
15" 71,7
durante proceso menos de 100.000
UFC/mL (reducción > 2
log10)
6
Muestreo
semanal de
leche
Millar et Leche Map presente en el 7%
pasteurizada
al., 1996. pasteurizada de las muestras, con
comercializada
Reino de picos de detección en
en Inglaterra y
Unido supermercado ene-mar y sep-nov
Gales, durante
18 meses.
Sometida a PCR
En laboratorio.
Inmersión en
baño de agua.
Tubo de ensayo,
Map bovina y humana.
vol.: 1,5mL.
D72ºC 11.6. HTST 100%
Sin agitar
Varios efectiva en
Sung et 62- durante
intervalos concentraciones
al., 1998. Leche cruda 10 6 65- proceso.
de iniciales <10 1 UFC/mL.
EE.UU. 68-72 Una porción se
tiempo Los agrupamientos
homogeneiza
celulares no afectan al
para estudiar
valor D
efecto del
agrupamiento
celular sobre el
valor D
Stabel, Pasteurizador
2001. Leche cruda 10 3 30´ 65,5 LTLT. Map sensible 100%
EE.UU. Con revolvedor
Pasteurizador a
Pearce et Map sensible 100%.
63- escala HTST.
al., 2001. 3 Valor extrapolado D72ºC:
Leche cruda 10 15" 66- Capacidad de
Nueva 2,03 (implica una
69-72 120L/hora.
Zelanda reducción > 7 log10)
Flujo turbulento
7
Map puede resistir a
73ºC, por 15 o 25”,
Estudio
con o sin
longitudinal.
homogeneizado, si
No calculado. Pasteurizador
se encuentra en
Grant et PCR y cultivo comercial
Leche cruda cantidades
al., 2002. para detectar 15"- HTST.
(infectada 73 suficientes previo al
Irlanda presencia y 25" Capacidad de
naturalmente) tratamiento térmico.
del Norte viabilidad, 2000L/hora.
No obstante, habría
respectivamente. Flujo turbulento.
alguna ventaja si la
Con y sin
pasteurización se
homogeneizado
combina con el
homogeneizado
Leche cruda
10 2-6 15" 72 Map sensible 100%
(12 litros)
A 72ºC: Map
Pasteurizador sensible 100%.
Stabel et
comercial A 64ºC: sobrevive
al., 2004.
64- HTST. Flujo menos de 3
EE.UU. Calostro 10 5 15"
72 turbulento UFC/mL.
La IgG presenta una
reducción promedio
del 25%
Muestreo de
leche
pasteurizada
Leche comercializada
Map presente en el
pasteurizada en República
Ayele et 1,6% de las
de Checa (n=244),
al., 2004. muestras
supermercado 15" 72 durante 6
República meses.
Checa. Sometida a
cultivo y PCR.
Leche cruda Unidad
Map presente en el
(infectada pasteurizadora
2% de las muestras
naturalmente) a escala.
Pasteurizador
comercial El homogeneizado
HTST. aumentó 10 veces
McDonald Capacidad de las UFC/mL
15"- 72-
et al., 3000L/hora. presentes. Map
Leche cruda 4 X 10 3-4 20"- 75-
2005. Flujo turbulento. sobrevive 1
25" 78
Australia Homogeneizado UFC/250mL en el
previo al 85% de las muestras
tratamiento (reducción > 6log 10)
térmico
Map sobrevive 10-20
UFC/150mL en el
Pasteurizador a
3% de las muestras
escala HTST.
(reducción de 4-5,2
Grant et Flujo turbulento.
15"- log10).
al., 2005. 72,5- Con y sin
Leche cruda 10 1-5 25"- Extender el tiempo
Irlanda 84,5 homogeneizado
60" no implica mayor
del Norte previo al
reducción
tratamiento
bacteriana. Mejor
térmico
resultado al
homogeneizar.
8
Muestreo de
leche
pasteurizada
Map presente en el
Ellingson Leche comercializada
2,8% de las
et al., pasteurizada en EE.UU.
muestras, con picos
2005. de (n=702),
de detección en Jul-
EE.UU. supermercado durante 12
Sept.
meses.
Sometida a
cultivo y PCR
Pasteurizador
Paolicchi comercial
15"-
et al., HTST. Map y M. phlei
Leche cruda 10 4-6 30"- 72,5
2007. Capacidad de sensibles 100%
60"
Argentina 300L/hora.
Flujo turbulento
Muestreo de
leche
pasteurizada
Paolicchi Leche
30´ 63 comercializada Map presente en el
et al., pasteurizada
15" 72 en Argentina 2,86% de las
2012. de
2" 132 (n=70), durante muestras
Argentina supermercado
7 meses.
Sometida a
cultivo y PCR.
9
evidencian lesiones tuberculosas en la glándula mamaria o en los linfonodos
retromamarios drenantes (Goodchild y Clifton-Hadley, 2001; Pardo et al.,
2001). Estudios basados en PCR sobre muestras de leche de vacas
tuberculinopositivas provenientes de rodeos infectados muestran resultados
oscilantes desde la no detección de animales positivos hasta amplificaciones
del 14 al 100% de las muestras procesadas. Estas diferencias estarían dadas
por el patrón errático de eliminación del bacilo tuberculoso asociado con la
inmunidad mediada por células en vacas tuberculosas y otros factores
epidemiológicos como la inmunosupresión viral, el desbalance metabólico, la
utilización de corticosteroides y la presencia del periparto (Serrano-Moreno et
al., 2008). En este sentido ha sido descripto que una hiporeactividad
inmunológica general asociada al parto en vacas tuberculosas implicaría una
falta de respuesta a la prueba anocaudal (Blood y Radostits, 1992) y una
reactivación de la infección aumentando la excreción de M. bovis (Serrano-
Moreno et al., 2008).
10
produce la contaminación fecal de la ubre, siendo los recuentos de Map en
heces de vacas con PTBC clínica de 108-12 UFC/g (Chiodini y Hermon-Taylor,
1993; Grant et al., 2002). Por otro lado, es posible la excreción directa de Map
en la leche (Stabel et al., 2014). Existen estudios que informan el aislamiento
de Map de un 35% de las muestras de leche obtenidas de vacas con PTBC
clínicamente avanzada, con recuentos microbianos de 100 UFC/mL de leche
(Chiodini y Hermon-Taylor, 1993, Giese y Ahrens, 2000). No obstante, a nivel
de rodeo los animales infectados clínicamente normales son más numerosos.
Los estudios sobre esta población indican un 22% y un 11,6% de positividad a
partir de muestras de linfonodos retromamarios y de leche respectivamente,
con recuentos celulares de 2 a 8 UFC/50mL de muestra (Sweeney et al., 1992).
Teniendo en cuenta que la PTBC tiene un largo periodo de incubación, y los
signos clínicos pueden no ser visibles hasta que el animal tiene entre 3 y 5
años de vida, es posible que animales asintomáticos eliminen Map en heces y
leche por 18 meses previo a mostrar signos de enfermedad, por lo que el
productor no es consciente del problema (Blood y Radostits, 1992). A pesar de
las dificultades que se presentan al momento de cultivar este microorganismo
que posee desarrollo lento y requerimientos nutricionales especiales, estos
investigadores han logrado aislarlo y cuantificarlo a partir de leche naturalmente
infectada ratificando la posibilidad de difusión hematógena y linfógena del
bacilo hacia la leche (Matthias, 1981).
11
2000). Un ejemplo de esto son los resultados obtenidos en el laboratorio que
no pueden extrapolarse directamente a las condiciones de pasteurización
comercial. No obstante, ambas metodologías se complementan; mientras los
estudios de laboratorio proveen el conocimiento básico sobre la resistencia
térmica microbiana, los resultados obtenidos en el laboratorio son validados
bajo condiciones de pasteurización comercial (Condron et al., 2014).
12
Figura 5. Variables analizadas en los estudios acerca de resistencia térmica de
las micobacterias.
3.2.1. Valor D
14
Figura 6. Curva de muerte térmica para M. bovis en leche a 63,5ºC. Cada
punto representa la media de tres repeticiones (± error estándar). Fuente:
Grant, et al., 1996b.
Figura 7. Curva de muerte térmica para Map en leche a 63,5ºC. Cada punto
representa la media de tres repeticiones (± error estándar). Fuente: Grant et al.,
1996b.
Estos hallazgos coinciden con un estudio posterior (Grant et al., 1996b) sobre
varias micobacterias aisladas en leche de origen bovino. M. bovis y M. fortuitum
son destruidas en su totalidad. Sin embargo, el resto de las micobacterias
estudiadas, M. avium, M. intracellulare y M. kansasii, describen una curva de
muerte térmica con cola, similar a la obtenida para Map, pudiendo recuperarse
15
microorganismos viables de las tres especies luego del tratamiento térmico
(Figura 8). Es importante destacar que M. intracellulare es patógeno para los
animales y se aísla de reactores positivos a la prueba tuberculínica anocaudal
que presentan lesiones compatibles con tuberculosis (Traversa et al., 2011) y
M. kansasii es responsable de infecciones pulmonares en los seres humanos y
se aísla de ganglios linfáticos y leche de vacas asintomáticas (Bercovier y
Vincent, 2001).
16
M. bovis es la excepción, la cual muestra una orientación paralela en su
agrupamiento (Grant et al., 1996a). Esta diferencia podría ser la responsable
de su mayor sensibilidad térmica.
B. Velocidad de crecimiento. El incremento en la resistencia térmica ha sido
relacionado con una célula microbiana menos activa. Aunque el mecanismo no
es conocido, las células bacterianas tienden a ser más resistentes al calor en la
fase estacionaria del crecimiento y menos durante la fase logarítmica, (Jay et
al., 2009). Esto podría explicar la mayor sensibilidad térmica de M. fortuitum,
una bacteria de crecimiento rápido dentro de las micobacterias.
17
Con el uso de pasteurizadores comerciales a escala se logró imitar el flujo
turbulento de la leche y bajo estas condiciones inóculos de Map de entre 103 y
106 UFC/mL de leche son destruidos totalmente (Stabel et al., 1997; Pearce et
al., 2001).
18
Figura 10. Recuperación de Map viables en la leche antes y después del
tratamiento térmico en la unidad pasteurizadora discontinua. Los valores
representan la media ± desvío estándar para dos experimentos replicados.
Fuente: Stabel, 2001.
20
3.3.2. Consideraciones para el uso diario
Cultivos
País Referencia
positivos (%)
Reino Unido 2 Grant et al., 2002
Estados Unidos 2,8 Ellingson et al., 2005
República Checa 1,6 Ayele et al., 2005
Argentina 2,86 Paolicchi et al., 2005
.
23
En relación a la temperatura de pasteurización, tampoco se obtienen ventajas
significativas en cuanto a la reducción microbiana de Map al elevar la
temperatura del tratamiento térmico entre 74 y 85°C (Stabel et al., 1997;
McDonald et al., 2005; Grant et al., 2005).
3.4.2. Homogeneizado
24
4. Conclusiones
25
5. Bibliografía
26
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