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HEMATOLOGÍA

Aspectos Microscópicos

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HEMATOLOGÍA
• La exploración de los elementos presentes
en la sangre perisférica, sus precursores y
algunos de sus productos constituyen la
hematología
• La sangre esta formada por un líquido de
composición compleja y variable, que es el
plasma que contiene eritrocitos, leucocitos
y plaquetas en suspensión.
• El plasma sanguineo y las células de la
sangre forman el volúmen sanguíneo o la
volemia que circula por los vasos
sanguineos
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HEMOGRAMA
• El Hemograma es el exámen clínico de
laboratorio, determinado por el análisis del
Hematocrito (Hto), Hemoglobina (Hb),
Recuento de G. Blancos o leucocitos,
Fórmula Leucocitaria y sus observaciones
morfológicas.

• El profesional médico competente en el


estudio del diagnóstico y tratamiento en
patologías hematológicas y de hemostasia
es el Hematólogo.
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HEMATOPOYESIS

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Visión Microscópica de la Sangre

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HEMATOLOGÍA: Punción Venosa
• La punción para obtener una muestra
representativa de sangre para su estudio es la
venopuntura.
• Para evitar la hemólisis y el líquido histico de
arrastre, no se deberá emplear la muestra sin
sacar la aguja y se deberá desechar la primer gota
antes de hacer el frotis.
• El EDTA como anticoagulante (concentración de 1
a 2 mgr/ ml de sangre), es aceptable para para el
frotis o extensiones sanguíneas en porta hasta 3
horas después de la extracción y hasta 24 horas
en heladera.
• El citrato trisódico al 3,8 % y de dilución aprox. en
1/9 con sangre, esFACULTAD
satisfactorio
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para coagulación.
Muestra Sanguínea por Punción de Dedo
1. Limpiar la yema del dedo con una gota de
alcohol a 70 grados y hacer una punción para
conseguir una gota de sangre.
2. Depositar la gota de sangre, en un lado y en el
centro de un porta bien limpio.
3. Seguidamente, con el empleo de un porta de
borde esmerilado se hace un frotis o extensión
de sangre.
El porta con el que se hace la extensión debe
deslizarse bien colocado y lo más perfectamente
aplicado en su borde contra el otro porta sobre
el que se hace la extensión. Sólo debe pasarse
una vez, de formaFUNDACION
continua e ininterrumpida.
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Realización de las extensiones de sangre periférica

La extensión sanguínea es de gran importancia en algunas


enfermedades hematológicas, ya que su diagnóstico
puede realizarse o sospecharse sólo con observar la
morfología de las células de la sangre.
Uno de los métodos más empleados para la realización del
frotis sanguíneo es el método de los dos portaobjetos.
Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un
portaobjetos mediante otro portaobjetos. La técnica es la
siguiente:
1. Depositar una pequeña gota de sangre en el extremo de
un portaobjetos.
2. Con el borde de otro portaobjetos a 45 grados, tocar la
gota, dejar que la sangre se distribuya por capilaridad y
después deslizar suavemente un portaobjetos sobre el
otro en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien
extendida sobre la superficie del primer portaobjetos.
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3. Dejar secar el frotis.
FROTIS SANGUÍNEO
Cuando la extensión se realiza por este procedimiento, el
frotis presenta tres zonas diferenciadas, en las que la
morfología eritrocitaria puede variar y la distribución
de leucocitos puede ser diferente.
La zona en que inicialmente se depositó la gota
(“cabeza”) es excesivamente gruesa y no puede ser
valorada adecuadamente. A continuación se extiende
el “cuerpo” de la extensión, que corresponde a la
región intermedia del frotis y en ella existe un reparto
equilibrado de las células; es la zona ideal para la
observación microscópica. Por último, al final de la
extensión, se encuentran las “barbas” o la “cola”, es
una zona fina dónde las células adoptan una
disposición de cordones
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FROTIS SANGUÍNEO

LECTURA en GUARDA GRIEGA

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Técnica de Extensión o Frotis Sanguíneo

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Técnica de Extensión o Frotis Sanguíneo

- Es conveniente realizar dos o tres extensiones,


con el fin de seleccionar para la tinción la
mejor lograda.

- Las extensiones o frotis deben secarse al aire lo


más rápidamente posible. La desecación se
facilita con movimiento en forma de abanico,
nunca soplando o por calor. La rápida
desecación evita la deformación de los
glóbulos sanguíneos.
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Técnica de Tinción para Frotis
1. Depositar el porta con la extensión de sangre encima del
soporte de tinciones y éste sobre la cubeta.
2. Cubrir la extensión con metanol y esperar que el alcohol
se evapore si se cubrió con gotas. En caso de cubrir
todo el extendido, no dejar más de 3 minutos y lavar con
agua. De esta forma se consigue el fijado.
3. Cubrir toda la extensión con unas gotas de Giemsa puro
o con una dilución de giemsa probada, (1:8 ó 1:10), evitar
la desecación y dejar actuar el colorante unos cinco
minutos si es giemsa pura o más minutos según la
dilución que se ha elegido. (se prueba el punto exacto)
4. Lavar la preparación, hasta que arrastre todo el
colorante.
5. Tomando el porta por los cantos, se seca aireando el
porta, o bien al calorFUNDACION
muy lento de la llama del mechero.
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Frotis: Observación Microscópica
1. Con débil aumento ( objetivo de 10x ó 20x) explorar la
preparación para localizar la zona en la que el frotis
es más perfecto. Los lugares más aptos son aquellos
en los que la extensión de los glóbulos se ha
conseguido en una sola capa, están bien teñidos y no
se han producido precipitados de los colorantes.
Cuando se observe una zona apta, pasar a aumentos
más fuertes: 40x para conteo y 100x para morfología
patológica o diferenciar atípicos.

2. En el campo del microscopio, se verán con un


dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o
eritrocitos , teñidos en color rojo. No tienen núcleo y
son más delgados por el centro que por los bordes.
Los glóbulos blancos o leucocitos de identifican
fácilmente por la presencia de núcleo.
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Hematíes o Eritrocitos
• Los eritrocitos son las células sanguíneas que
contienen en su interior la hemoglobina. Esta
molécula es una proteína que contiene átomos de
hierro que le otorgan el color rojo a la sangre, de
allí su nombre: eritro (rojo) citos (células).
• Dado la forma bicóncava del eritrocito se observa
en la foto un disminución del color en el centro.
Cuando esta dismunución no se observa puede
deberse a una alteración de la forma del glóbulo.
• El número promedio de glóbulos rojos en el
hombre es de 5.000.000 por mm3 de sangre. La
cifra media de glóbulos blancos es de 7.000 a
8.000 por mm3. Hay por tanto un glóbulo blanco
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por cada 600 ó 700FACULTAD
glóbulos rojos.
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Frotis: Hematíes o Eritrocitos

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Valores e Índices de la Serie Roja
En la evaluación de esta serie hematológica se considera:

1. Hematocrito (Hto): porcentaje de la sangre que


corresponde a los glóbulos rojos.
2. Concentración de Hemoglobina (Hb)
3. Volumen Corpuscular Medio (MCV): tamaño globular
promedio.
4. Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media
(MCHC): conc. promedio de Hb del total de eritrocitos.
5. Hemoglobina Corpuscular Media (MCH): concentración
de hemoglobina promedio en cada eritrocito
6. Distribución por Tamaño de los Glóbulos Rojos (RDW): es
la dispersión en los tamaños de los eritrocitos.
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Valores e Índices Hematométricos Normales
Sexo Número Hematocrito Hemoglobina
Eritrocitos

Hombres 4.2-5.4 x 106/mm3 42 - 52 % 14 - 17 g/dl

Mujeres 3.6-5.0 x 106/mm3 36 - 48 % 12 - 16 g/dl

VCM: 82 - 95 . VCM < 85 microcitósis y >95 macrocitósis - (Hto/ n. hematíes)


HCM: 26 - 34 pgr./ célula. HCM < 26 hipocromía y < 34 hipercrómico
(Hto/ número de hematíes)
CHCM: 31 - 37 g/ dl . <31 hipocromía y > 37 hipercromía ( Hb/ Hto.)
RDW: 11.5 - 14.5 es la distribuciónFUNDACION
o dispersión de los hematíes.
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ANEMIA: principal patología de G.R.
• Los parámetros normales para los glóbulos
rojos son; tamaño normocítico de 7- 8 µm,
color: normocrómico (coloración normal),
forma: disco bicóncavo y ser anucleado.
• El mejor parámetro para evaluar si la cantidad
de eritrocitos es adecuada para el organismo,
es la hemoglobina que lleva oxígeno a la
perisferia del organismo.
• La disminución de Hb también origina anemia,
cuya clasificación será discutida junto con la
disminución del número eritrocitario y Hto.
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Función de los Índices Hematométricos
Los índices de los glóbulos rojos permiten
diferenciar las anemias:
Según tamaño:
Microcíticas (MCV disminuido),
Normocíticas (MCV normal)
Macrocíticas (MCV aumentado).
Según concentración de hemoglobina:
Hipocrómica (MCH o MCHC disminuido)
Normocrómica (MCH o MCHC normal).
Hipercromía (MCH o MCHC
FUNDACION BARCELO, aumentado)
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ANEMIAS

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ANEMIAS y RETICULOCITOS
Para evaluar si la capacidad regenerativa de los
eritrocitos por parte de la médula ósea es
adecuada, existe un examen llamado recuento de
reticulocitos, (V. N. 0 - 2 %) que permite distinguir
anemias causadas por falla medular.
- Para corregir anemias se calcula el Índice
Reticulocitario (IR):
Reticulocitos corregidos = % reticulocitos x (Hto del
paciente/ 45).
- Son hiporegenerativas con Indice Reticulocitario
(IR) menor a 2. Las originadas por destrucción, se
llaman regenerativas y tienen un IR mayor de 3.
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Tinción para Reticulocitos

El azul brillante de cresilo tiñe el tramado nuclear que


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corresponde aFACULTAD
cadenas de ARN del hematíe.
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G. Rojos: Anormalidades
• Anisocitosis: amplia variación de tamaño globular, ( hay
pequeños y grandes: anemia ferropénica, anemia hemolítica,
Anisocromía: variedad de color globular.
• Microcitosis: glóbulos pequeños ( ANEMIA MICROCÍTICA).
• Macrocitosis: glóbulos grandes ( ANEMIA MACROCÍTICA).
• Hipocromía: color globular pálido ( ANEMIA HIPOCRÓMICA.
• Poiquilocitos: variación anormal de la forma. Son anemias
más severas ( anemias ferropénicas, megaloblástica, síndrome
mieloproliferativo, hemólisis, etc).
• Esferocitos: células esféricas sin centro pálido,
frecuentemente pequeños (microesferocitosis):
esferocitosis hereditaria, anemia hemolítica autoinmune
Coombs (+) y post tranfusional.
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Anemia
 Tipos de anemia:
 Normocítica
 Microcítica
 Macrocítica
 Clasificación:
 Hemorragia
 Deficiencia de hierro
 Def. Ac. Fólico y B12
 Enfermedad crónoica
 Falciforme
 Talasemia

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Microcitos en Anemia Ferropénica

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Macrocitos en Anemia Megaloblástica

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Hipocromía, Anisocitosis y Reticulocitos

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Patologías con Poiquilocitosis
• OVALOCITOS: células ovaladas: esferocitosis hereditaria, deficiencia
de fierro.
• TARGET CELLS, LEPTOCITOS o Células en DIANA: glóbulos con
centro y periferia oscuros y anillo claro entremedio (como disco de
"tiro al blanco"): Insuficiencia hepática, talasemias.
• ESQUISTOCITOSIS: glóbulos contraídos irregularmente o
fragmentados: uremia, anemia hemolítica, púrpura trombocitopénico
trombótico.
• ACANTOSITOS: glóbulos pequeños con evaginaciones espinosas de
membrana: abetalipoproteinemia.
• LAGRIMA: síndrome mieloproliferativo, talasemia.
• Eritrocitos NUCLEADOS: glóbulos nucleados: anemias hemolíticas,
leucemias, síndrome mieloproliferativo, policitemia vera, mieloma
múltiple, cualquier anemia muy severa.
• Cuerpos de HOWELL - JOLLY: cuerpos oscuros dentro de los
glóbulos: esplenectomizados, anemia perniciosa, talasemia.
• ROULEAUX: eritrocitos agrupados uno sobre otro: mieloma múltiple,
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hipergammaglobulinemia,FACULTAD
embarazo.
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G.R. : Otras Anormalidades

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Anormalidad: Hematíes Nucleados

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Anormalidad: Hematíes Nucleados

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Glóbulos Blancos o Leucocitos

La evaluación de esta serie hematológica


considera el conteo total de los
leucocitos (WBC), y diferencial en
neutrófilos, basófilos, eosinófilos,
monocitos, linfocitos, así como también
el conteo diferencial de las series
hematopoyéticas de los neutrófilos y
otros de condición inmadura o atípicas

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Valores Normales de Rto. de Blancos

- Adultos : 4.000 - 11.000 / mm3


- Recién nacidos: 10.000 - 25.000 / mm3
- Niños de 1 año: 6.000 - 18.000 / mm3
- Niños de 4 a 7 años: 6.000 - 15.000 / mm3
- Niños de 8 a 12 años: 4.500- 13.000 / mm3

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Recuento de Blancos
• Muestra: sangre anticoagulada con EDTA
• Liquido de Dilución: solución 2% de Acético
Glacial. Líquido de Turk u otros.
• Dilución; 1 en 20 (puede ser 1:10).
Ejemplo: 20ul. en 0,38 ml.
• Secar bien la punta de la micropipeta antes de
descargar la sangre en el liquido de dilución.
• Usar objetivo y ocular de 10x
• Diafragma semicerrado y condensador arriba
• Contar en los 4 ó 2 cuadrantes grandes
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Cámara de Recuento - NEUBAUER

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Cámara de Recuento - NEUBAUER

Los puentes exteriores se humedecen con agua


destilada y luego se coloca el cubreobjeto a suave
presión desde delante sobre la cámara de conteo.

¡Atención: Peligro de rotura del cubreobjeto!

La formación de líneas de interferencia (anillos de Newton)


entre los puentes exteriores y el cubreobjeto indica que el
cubreobjeto ha sido correctamente colocado.
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Técnica de conteo
Para realizar el recuento se leen todos los blancos de los cuadrantes grandes. Si
se leen en los 4 cuadrantes grandes, el resultado se multiplica por 50. Si se lee
solo los 2 cuadrantes que estan en diagonal, se multiplica el resultado por 100.
El valor obtenido es por mm3. Ej: (25+28+29+27) x 50 = 5450 por mm3

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Técnica de conteo
Para que las células, que están en o cerca de las líneas de limitación, no
se cuenten dos veces o se sobrepasen en el conteo, hay que atenerse
a determinadas reglas. Se cuentan todas las células dentro de una
zona de medición definida.
También se cuentan las células (marcadas en negro), que se apoyan o
tocan en las 2 caras (I), p.ej. en la línea de medida izquierda y superior.

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Valores Normales – Serie Blanca
• Número total de Leucocitos • 5.000 — 11.000 mm3

• Neutrófilos • 50 - 65 %
• Segmentados • 97 %
• Cayados • 1-2 x mm3 (0 - 3%)

• Juveniles • 0 x mm3
• Mielocitos • 0 x mm3
• Mieloblastos • 0 x mm3
• Basófilos •0-1%
• Eosinófilos •1-3%
• Monocitos •2-8%
• Linfocitos • 25 - 40 %
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Anormalidades de la Serie Blanca
• La medición del número total de los leucocitos, (WBC),
sirve para evaluar la severidad de la enfermedad.
• El análisis diferencial puede ayudar a precisar el
diagnóstico del paciente, asociado a la clínica que
presente. Un aumento de los WBC por sobre 10.000, se
llama leucocitosis, que generalmente es causada por el
aumento de una serie celular. Es raro que aumenten todas
las series, ( ej. Hemoconcentración). Generalmente se
produce en infecciones agudas, donde el número de los
leucocitos depende de la gravedad de la infección,
resistencia del paciente, edad, eficiencia y reserva de la
médula ósea.
• La disminución de los WBC, se llama leucopenia y ocurre
como consecuencia de infecciones virales, fiebre tifoidea,
depresión medular porFUNDACION
causas varias, etc.
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NEUTRÓFILO
• Los neutrófilos son los leucocitos más importantes y
numerosos, (9-14 micras), que forman la primera defensa en
contra de una invasión microbiológica. Neutrofilia es el
aumento del número absoluto de neutrófilos a más de
8000/mm3 o más del 70% de los leucocitos, en respuesta a
una infección o a células tumorales. Neutropenia es la
disminución de estas células en cantidades menores a
1800/mm3 o menores del 40% de los leucocitos.
• Según la forma de su núcleo se los puede clasificar en
neutrófilos en banda o cayados y en neutrófilos
segmentados. Presentan divisiones de sus núcleos en
lóbulos en un número que va de 3 a 5. Si es mayor el
número de divisiones nucleares se habla de neutrófilos
hipersegmentados.
• La denominada desviación a la izquierda es la aparición en
el torrente circulatorio de un
FUNDACION gran porcentaje de células
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inmaduras. FACULTAD DE MEDICINA
NEUTRÓFILO. Aumento: 20X

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NEUTRÓFILO. Aumento: 20X

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Borde Lateral. Aumento: 20X

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Neutrófilos Normales – 40x
Leucocitos normales
Referencias:
1-

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NEUTRÓFILO. Aumento: 100X

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Neutrófilos en Banda o Cayado. 10x

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Neutrófilo en Banda o Cayado

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LINFOCÍTOS
Los linfocitos son los leucocitos que migran más
tardíamente a las zonas de inflamación. (6-10 micras).
Son células esféricas o ligeramente ovoides con un
diámetro de 8 a 12 micrones. El núcleo (azul oscuro)
ocupa el 90% de la célula. El citoplasma es muy
delgado y se tiñe de color azul claro formando un anillo
alrededor del núcleo. El linfocito bajo ciertos estímulos
químicos endógenos puede dividirse y crear muchas
células hijas para defender al cuerpo liberando
anticuerpos.
Linfocitosis se llama a cantidades mayores de 4000
linfocitos/mm3 en adultos.
Se diferencian en los lugares de maduración: L.”B” si lo
hacen en la médula ósea, y L.”T” si lo hacen en el timo.
Los linfocitos B originan los anticuerpos específicos, y los
linfocitos T actúan en la inmunidad
FUNDACION celular.
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Sangre Normal en zona densa.
Linfocitos y Neutrófilos. Aumento: 20X

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Linfocito chico en 40x

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Linfocito chico y un neutrófilo
en zona densa del frotis

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Linfocito grandes en 40x

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Linfocito chico en 100x

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Linfocito chico en 100x

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Linfocito mediano y chico en 100x

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Linfocito grande en 100x

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EOSINÓFILO
• Los eosinófilos son leucocitos que se activan en forma
tardía en una inflamación. Responden principalmente a
enfermedades alérgicas y por parásitos, pero también se
presentan en otras enfermedades como las endócrinas,
linfomas y otros. Tamaño: 10-15 micras.
• Eosinofilia es el aumento de los eosinófilos circulantes
(mayor a 5% leucocitos o 500/mm3). Eosinopenia
(disminución de los eosinófilos circulantes bajo 50/mm3)
es causada generalmente por un aumento de la producción
de corticoides que acompaña la mayoría de las
condiciones de stress del organismo
• Los Eosinófilos tienen actividad fagocítica, es decir que
"se comen" a los agentes extraños al organismo. Sus
gránulos tienen sustancias para degradar aquello que
incorporan. Tienen un papel muy importante en las
parasitosis donde con sus gránulos degradan las larvas
para que puedan ser ingeridas por los neutrófilos y los
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macrófagos. El eosinófilo regula
FACULTAD las reacciones alérgicas.
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EOSINÓFILO a 100x

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EOSINÓFILO a 100x

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EOSINÓFILO a 100x

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Eosinófilo machacado. 100X

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BASÓFILOS
• Los basófilos son un pequeño porcentaje del
total del conteo de los leucocitos. (8-12 micras).
• Basofilia (conteo aumentado mayor de 100/mm3)
se asocia comúnmente a leucemia granulocítica,
metaplasia mieloide, linfoma de Hodgkin. Menos
frecuentemente se asocia a inflamación, alergia y
otras patologías
• Los Basófilos poseen gránulos de heparina e
histamina. Estas sustancias son mediadores
químicos que modulan la inflamación. Tienen
función en los estados alérgicos en la
hipersensibilidad retardada. La liberación masiva
del contenido de sus gránulos puede causar un
shock anafiláctico que puede llegar hasta la
muerte si no es controlado.
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BASÓFILOS a 100x

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Basófilo maduro. Sangre normal - 100X

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Basófilo machacado. Sangre normal - 100X

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Sangre Normal: Un basófilo y 3 eosinófilos
Aumento: 100X

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MONOCITOS
• Los monocitos junto con los linfocitos son los
leucocitos agranulados o agranulocitos, que forman la
segunda línea de defensa del organismo. Son los
blancos más grandes: 12-20 micras.
• Monocitosis hay un aumento celular mayor de
500/mm3, donde las causas más frecuentes son
infecciones bacterianas, TBC, endocarditis subaguda y
sífilis
• Los Monocitos son células fagocíticas con gran
capacidad bactericida. Ante estímulos de sustancias
químicas siguen a los neutrófilos en la reacción
inflamatoria. Por la fagocitosis aumentan de tamaño y
pueden fijarse a los tejidos del baza, hígado y pulmón,
dando lugar a los macrófagos tisulares que forman el
sistema retículo endotelial encargado de remover el
material extraño queFUNDACION
circulaBARCELO,
en la sangre.
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Sangre Normal: 1 Monoc. y 1 Linfoc. Aum. 40 x

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Monocito con núcleo doblado y
vacuola. Aumento 100 x

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Monocito con núcleo doblado y vacuola.
Aumento 100 x

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Sangre Normal: Monocito desgranulado.
Aumento 100 x. Zona densa

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Sangre Normal. Aumento 100 x. Zona densa
Un linfocito pequeño, un monocito y un Neutrófilo

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Sangre Normal.1 Ns, 1 Nc y 1L. Aumento: 100X

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Linfocitos Atípicos

Estos linfocitos atípicos poseen un citoplasma mayor y un


núcleo mas laxo que los normales. Aparecen en enfermedades virales
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Neutrófilos Hipersegmentados

Los núcleos de los neutrófilos se encuentran divididos


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en un número de lóbulos mayor que lo normal.
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Plaquetas: Muestra de Sangre con EDTA

El número medio normal de plaquetas en un campo apropiado se


extiende a partir del 8 a 15. En muestras con EDTA, se distribuyen,
se redondean generalmente paraBARCELO,
FUNDACION arriba y pueden ser levemente
hinchadas y/o que desgranuladas.
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Plaquetas Agrupadas

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Plaquetas: Muestra de Sangre con EDTA

Tres plaquetas pequeñas, varias plaquetas grandes y 4


Megatrombocitos.FUNDACION
Todos están de morfología normal.
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LMA (leucemia mieloide aguda). 20x

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LMA (leucemia mieloide aguda)- 100x

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Leucemia Mieloide Aguda - Comparativo

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LMA (leucemia mieloide aguda)- 100x

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L.L.A.(Leucemia Linfocítica Aguda)- 100x

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Leucemia Linfocítica Aguda - Comparativo

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L.M.C. (Leucemia Mieloide Crónica) – 100x

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Leucemia Mieloide Crónica - Comparativo

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Linfoma Maligno – 100x

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Linfoma Maligno - Comparativo

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Linfoma de Hodgkin –100x

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Linfoma de Hodgkin- Comparativo

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Fuentes Bibiográficas y de Imágenes
• http://escuela.med.puc.cl/Publ/ManualSemiologia/Hemogramatext
.html
• http://escuela.med.puc.cl/publicaciones/ManualPed/InterpretHem
og.html
• http://medocs.ucdavis.edu/IMD/420A/dib/index.htm
• http://pathy.med.nagoya-u.ac.jp/atlas/doc/
• http://www.perinat.org.ar/Atlas%204%20-%206.html
• http://www.forobioquimico.com.ar/atlashemato.html
• http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/encyclopedia.html
• http://www.galeon.com/hematologiauss/microteca.htm
• http://www.arrakis.es/~rfluengo/frotissangre.html
• http://www3.unileon.es/personal/wwdmamgi/Sangre.pdf#search='f
rotis%20sanguineo‘
• http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/imagenes_de_neubauer.htm
#Imágenes%20de%20la%20cámara%20de%20Neubauer
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