Transcripción en Eucariontes Parte 2

Proceso de transcripción en eucariontes
Generalidades
--Unidad de transcripción
--Iniciación, elongación y terminación
AVR Herráez A. Biología molecular e ingeniería genética. 2da edición. Elsevier. 2012
Iniciación: desnaturalización de la hebras cerca de la secuencia

promotora, y que la RNApol sintetice fragmento corto (10pb)
complementario al molde. Unión de factores de transcripción
Elongación: RNApol continúa elongando la cadena de RNA mientras

avanza por el DNA (RNApol y RNA naciente).
Terminación: alcanza la secuencia de terminación, la RNApol

interrumpe la síntesis y se separa del DNA.
Iniciación
-- Separación de las hebras de DNA cerca de la región promotora,
RNApol sintetiza una secuencia de 10nt complementarios al molde.
-- Formación de burbuja de transcripción.
-- Para lo anterior se requieren los TFs.
Iniciación: Formación del complejo de iniciación
-- Unión de diversos TF a las regiones promotoras del DNA
-- Incorporación de la RNApol-II
Biología molecular de la célula, quinta edición (© Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
Iniciación: Desnaturalización del promotor
-- El complejo de iniciación produce el desenrrollamiento y separación de

las hebras del DNA (burbuja de transcripción).
-- Actividad DNA-helicasa (TFIIF y TFIIH).
-- TFIIE estabiliza la región desnaturalizada del promotor.
Iniciación: Formación de los enlaces fosfodiéster
-- RNApol sintetiza oligoribonuclótido

complementario a las primeras 10 bases,
temporalmente unido.
-- Se separan los TFs.
-- La RNApol se desplaza.
AVR
Herráez A. Biología molecular e ingeniería genética. 2da edición. Elsevier. 2012
Transición de Iniciación a elongación
-- Está marcada por la fosforilación del dominio CTD de

la RNApol-II . Esta fosforilación la lleva a cabo el factor
de transcripción TFIIH.
AVR
Elongación
-- Por delante: se separan las dos hebras, topoisomerasas.

Añade nucleótidos en el extremo 3´.
-- Detrás: el RNA naciente se separa y el DNA se vuelve a aparear.
Terminación
Factores o mecanismos:
Detención o pausa de la RNA polimerasa

Desestabilización del hibrido RNA/DNA.
Terminación de RNApol-I
Terminación de RNApol-II y RNApol-III
Modificaciones postranscripcionales
AVR
Capping (Caperuza):
modificación del
extremo 5’
AVR Watson y cols. Molecular Biology of the gene. 7th edition. Pearson. 2013
Capping (Caperuza):
modificación del
extremo 5’
Capping (Caperuza):
modificación del
extremo 5’
Capping (Caperuza): modificación del extremo 5’
-- Evitar la degradación del RNA por exonucleasas
-- Exportación
-- Promover la escisión de los intrones cercanos a 5’
-- Promover la traducción mediante la unión de Cap a los ribosomas
Capping (Caperuza): modificación del extremo 5’
-- Evitar la degradación del RNA por exonucleasas
-- Exportación
-- Promover la escisión de los intrones cercanos a 5’
-- Promover la traducción
CBC. Complejo de unión a caperuza

AVR Modificado de Watson y cols. Molecular Biology of the gene. 7th edition. Pearson. 2013
Poliadenilación:
modificación del
extremo 3’ AAUAAA
Factor estimulador de la
poliadenilación por
escisión (CPSF)
-- Exportación y evita la degradación

del RNAm
VIDEO
Modelos de terminación: torpedo y alostérico
SPLICING
AVR
Gen eucariótico
Número de intrones por gen
Generalidades
-- Edición y eliminación de los intrones de un pre-mRNA
-- “Splicing” alternativo, lo que produce más de un producto polipeptídico

(isoformas)
-- >90% de los genes que codifican proteínas
-- Gen Slo en rata produce 500 isoformas (canales de potasio)
-- Gen en Drosophila codifica para >38, 000 productos
¿Cómo se distinguen los intrones de los exones?
Generalidades
-- Ataque nucleofílico
-- Se escinde el enlace
fosfodiéster entre intrón
y exón
-- Unión del extremo 5’ al

sitio “branch” (A)
Maquinaria denominada “Spliceosoma” (Spliceosome)
-- Complejo con ~150 proteínas y 5 RNAs
-- El spliceosoma hidroliza ATP
-- Las moléculas de RNA son las responsables del funcionamiento
-- Estos se unen en las secuencias consenso ubicadas entre exón e intrón
-- Los 5 RNAs (U1, U2, U4, U5 y U6) se denominan RNAs pequeños

nucleares (snRNAs)
-- 100 – 300 nt y se unen a proteínas para formar un complejo

denominado proteínas ribonucleares nucleares pequeñas (snRNPs)
Funciones de las snRNPs
-- Reconocimiento del sitio “splice” 5’ y en sitio “branch”, unen los sitios y

catalizan las reacciones de escisión y unión.
-- Son importantes las interacciones RNA-RNA, RNA- proteína y proteína-

proteína
Sitio de empalme 5’ Sitio de ramificación

Sitio de empalme 3’
Funciones de las snRNPs
-- Reconocimiento del sitio “splice” 5’ y en sitio “branch”, unen los sitios y

catalizan las reacciones de escisión y unión.
-- Son importantes las interacciones RNA-RNA, RNA- proteína y proteína-

proteína
-- Unión de U1 por complementariedad de

bases en sitio “splice” 5’
-- Subsecuente unión de U6
-- Unión de U2 en el sitio “branch”
-- Interacción de U6 y U2. Produce la unión

del sitio “splice” 5’ con el sitio branch
-- Proteínas auxiliares (No-snRNPs)
-- U2AF reconoce el sitio Py, y recluta a

proteínas de unión (BBP) y se une al sitio
“branch”
-- BBP es desplazado por U2
MECANISMOS DE
SPLICING: Reacción de
splicing dependiente del
“spliceosoma”
AVR
1 3 ↔2 8
Complejo
temprano
9
Complejo C
4 Complejo A
Partícula 5
tri-snRNP
U5 facilita la
reacción para
la unión entre
Complejo B ambos exones
MECANISMOS DE
SPLICING: Intrones “self-
splicing”
MECANISMOS DE
SPLICING: Alternativo
Generalidades
-- Edición y eliminación de los intrones de un pre-mRNA
-- “Splicing” alternativo, lo que produce más de un producto polipeptídico

(isoformas)
-- >90% de los genes que codifican proteínas
-- Gen Slo en rata produce 500 isoformas (canales de potasio)
-- Gen en Drosophila codifica para >38, 000 productos
Generalidades
Watson y cols. Molecular Biology of the gene. 7th edition. Pearson. 2013
Cinco diferentes vías de splicing alternativo
Watson y cols. Molecular Biology of the gene. 7th edition. Pearson. 2013

Transcripción en Eucariontes Parte 2

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Transcripción en Eucariontes Parte 2

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Proceso de transcripción en eucariontes

--Iniciación, elongación y terminación

Iniciación: desnaturalización de la hebras cerca de la secuencia

Elongación: RNApol continúa elongando la cadena de RNA mientras

Terminación: alcanza la secuencia de terminación, la RNApol

-- Unión de diversos TF a las regiones promotoras del DNA

-- El complejo de iniciación produce el desenrrollamiento y separación de

-- Actividad DNA-helicasa (TFIIF y TFIIH).

-- TFIIE estabiliza la región desnaturalizada del promotor.

-- RNApol sintetiza oligoribonuclótido

-- Se separan los TFs.

Transición de Iniciación a elongación

-- Está marcada por la fosforilación del dominio CTD de

-- Por delante: se separan las dos hebras, topoisomerasas.

-- Detrás: el RNA naciente se separa y el DNA se vuelve a aparear.

Detención o pausa de la RNA polimerasa

-- Evitar la degradación del RNA por exonucleasas

-- Promover la escisión de los intrones cercanos a 5’

-- Promover la traducción mediante la unión de Cap a los ribosomas

-- Evitar la degradación del RNA por exonucleasas

-- Promover la escisión de los intrones cercanos a 5’

CBC. Complejo de unión a caperuza

-- Exportación y evita la degradación

-- Edición y eliminación de los intrones de un pre-mRNA

-- “Splicing” alternativo, lo que produce más de un producto polipeptídico

-- >90% de los genes que codifican proteínas

-- Gen Slo en rata produce 500 isoformas (canales de potasio)

-- Gen en Drosophila codifica para >38, 000 productos

-- Unión del extremo 5’ al

-- Complejo con ~150 proteínas y 5 RNAs

-- El spliceosoma hidroliza ATP

-- Las moléculas de RNA son las responsables del funcionamiento

-- Estos se unen en las secuencias consenso ubicadas entre exón e intrón

-- Los 5 RNAs (U1, U2, U4, U5 y U6) se denominan RNAs pequeños

-- 100 – 300 nt y se unen a proteínas para formar un complejo

-- Reconocimiento del sitio “splice” 5’ y en sitio “branch”, unen los sitios y

-- Son importantes las interacciones RNA-RNA, RNA- proteína y proteína-

Sitio de empalme 5’ Sitio de ramificación

-- Reconocimiento del sitio “splice” 5’ y en sitio “branch”, unen los sitios y

-- Son importantes las interacciones RNA-RNA, RNA- proteína y proteína-

-- Unión de U1 por complementariedad de

-- Interacción de U6 y U2. Produce la unión

-- U2AF reconoce el sitio Py, y recluta a

-- BBP es desplazado por U2

-- Edición y eliminación de los intrones de un pre-mRNA

-- “Splicing” alternativo, lo que produce más de un producto polipeptídico

-- >90% de los genes que codifican proteínas

-- Gen Slo en rata produce 500 isoformas (canales de potasio)

-- Gen en Drosophila codifica para >38, 000 productos

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