Informe Desarrollo

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
MODULO
LABORATORIO DE DESARROLLO ANALÍTICO
TÍTULO DEL PROYECTO:

POTENCIA MICROBIOLÓGICA DE AMPICILINA
EQUIPO 8
ALVARADO RANGEL JESSENIA
LOPEZ VAZQUEZ URIEL
PACHECO RODRIGUEZ CAROLINA
PEREZ GARCIA PAULA REBECA
ASESOR: QFB LILIANA LOPEZ
GRUPO: 20801
SEMESTRE: 2019-2
I. FUNDAMENTO
*Antibióticos
Los agentes antibacterianos indicados para uso clínico son agentes que destruyen
selectivamente bacterias al interferir con el crecimiento bacteriano o la supervivencia. La
inhibición del crecimiento y pérdida completa de viabilidad de las bacterias, es a menudo el
resultado de una serie de eventos provocados por el tratamiento con un agente
antibacteriano, cuyo modo de acción por lo general implica más de un solo objetivo.
En general, los mecanismos de acción están asociados con ruptura de la doble hélice del
ADN, con la inhibición de síntesis de ARN dependiente de ADN, cambios energético
celular, y con alteraciones de su metabolismo central, entre otros.
Hay evidencia creciente de que ciertos antibióticos ejercen su efecto no sólo por matar o
inhibir el crecimiento de bacterias patógenas, también indirectamente por la
inmunomodulación.
Los agentes antibacterianos se utilizan para el tratamiento o la prevención de infecciones
bacterianas. Entre los agentes antibacterianos existentes, los antibióticos se definen como
compuestos que son producidos por organismos vivos, se derivan de bacterias, hongos,
moho, plantas, y fuentes animales; se utilizan para tratar las infecciones bacterianas; y son
una de las clases de fármacos con mayor venta en todo el mundo.
Aunque hay varios esquemas de clasificación para los antibióticos, a partir de su origen,
tipo de actividad, modo de acción bactericida o bacteriostático (los antibióticos que matan
las bacterias se llaman "bactericidas", mientras que los antibióticos que detienen el
crecimiento de las bacterias se llaman "bacteriostáticos"); espectro de acción (amplio o
bajo); el grupo microbiano contra el que actúa (antibacteriano, antimicótico,
antiprotozooario); la vía de administración (inyectable, oral, tópica), etc.
También hay diferentes clasificaciones de antibióticos por familias, que han sido
propuestas basadas en estructura química, tales como lactonas macrocíclicas, hidratos de
carbono, heterociclos que contienen N y O, compuestos que tienen un esqueleto
aromático, y aquellos que presentan una cadena alifática.
Probablemente la clasificación de antibióticos más aceptada, basada en su estructura
química es:
ELABORADO POR: REVISADO POR: RECIBIDO POR: PAGINA 1 DE 13

FECHA: FECHA: FECHA:
FIRMA: FIRMA: FIRMA
1. β-lactámicos
2. Tetraciclinas
3. Macrólidos y Lincomicinas
5. Aminoglucósidos Glucopéptidos
6. Estreptograminas
La mayoría de los antibióticos son de origen natural y también son derivados
semisintéticos, o compuestos sintéticos que imitan la estructura de los productos
naturales. Incluso después del descubrimiento de la penicilina hace aproximadamente 80
años, la búsqueda de nuevos antibióticos aún continúa. Hoy en día, aproximadamente 16
500 antibióticos eficaces han sido descritos. Aproximadamente 100 de ellos han sido
aprobados y cuentan con aplicaciones médicas. Más de 20 nuevas clases de antibióticos
fueron producidos entre la década de 1930 y 1960, pero sólo cuatro de ellos fueron
comercializados. Estas cuatro clases de antibióticos son:
β-lactámicos, tetraciclinas, macrólidos y aminoglucósidos. Los principales
microorganismos productores de antibióticos son las Actinobacterias, en especial, las
especies de Streptomyces, hongos y otras bacterias filamentosas, que todavía
representan fuentes inagotables para los nuevos antibióticos en el futuro.
*Mecanismos de acción. De acuerdo al mecanismo de acción que presentan los
antibióticos, se clasifican en siete grandes grupos:
Tabla 1. Mecanismo de acción de antibióticos
Mecanismo de acción Ejemplos
Penicilinas, cefalosporinas, vancomicina,
Inhibición de la síntesis de la pared celular
bacitracina, oxacilina, nafcilina
Daño a la membrana plasmática Polimixina, nistatina, anfotericina B
Aminoglucósidos, cloranfenicol,
Inhibición de la síntesis de proteínas
eritromicina, tetraciclina
Inhibición de la síntesis de ácidos Rifamicina, actinomicina D, ácido
nucleicos nalidíxico, ciprofloxacino, norfloxacino
Antimetabolitos Trimetoprim, sulfonamidas
Inhibidores de betalactamasas Sulbactam, clavulanato, tazobactam
Etambutol, pirazinamida, isoniazida,
Antifímicos
estreptomicina, rifampicina

FIRMA FIRMA: FIRMA:
*Ampicilina
La ampicilina es una penicilina semisintética que tiene un
espectro más amplio que la bencilpenicilina frente a las especies
gramnegativas tales como H. influenzae, es un derivado del
ácido 6- (D(-)α-amino-fenilacetamido)penicilánico. De acción
bactericida.
Figura 1. Estructura de ampicilina
Cuyo mecanismo de acción es inhibir la síntesis de la pared celular. Actúa a distintos

niveles de la biosíntesis del peptidoglucano. Actúa inhibiendo la última etapa de la síntesis
de la pared celular bacteriana uniéndose a unas proteínas específicas llamadas PBPs
localizadas en la pared celular. Impide que la pared se construya correctamente, que
ocasiona la lisis de la bacteria y la muerte.
La ampicilina es bactericida tanto para Gram positivas como para bacterias Gram
negativas. Es un polvo de apariencia cristalina, de color blanco y con olor característico de
las penicilinas.
*Potencia microbiológica
La potencia de una sustancia antimicrobiana se define como la habilidad específica o
capacidad de un producto de lograr su efecto planeado y se basa en la medición de algún
atributo del producto, por ejemplo, su efecto inhibitorio frente a un determinado
microorganismo (halo de inhibición). La potencia debe ser una propiedad o atributo
definible y medible para un producto biológico o semisintético, y debe estar presente en los
estudios de estabilidad. La potencia puede ser demostrada mediante el efecto inhibitorio
de la sustancia en cuestión cuando es evaluado frente a un microorganismo. En los
análisis de potencia, se compara cuantitativamente el efecto de una muestra sobre un
sistema biológico con el efecto producido por una preparación estándar en las mismas
condiciones y para la cual ya se ha determinado exactamente su actividad, obteniendo así
un valor de potencia relativo al del estándar de referencia. Si se prueban las muestras en
diferentes concentraciones se puede determinar una concentración mínima inhibitoria.
La potencia o actividad de los antibióticos se calcula comparando el grado de inhibición de
microorganismos sensibles y específicos producida por concentraciones conocidas del
antibiótico analizado y una sustancia de referencia. Las sustancias de referencia
empleadas en los ensayos, son sustancias cuya actividad se ha definido por un organismo
internacional.
FIRMA: FIRMA: FIRMA:

Para valorar microbiológicamente un antibiótico, se pueden emplear dos métodos: Método

cilindro-placa (método de difusión en agar) y Método turbidimétrico, ambos comparan la
respuesta del microorganismo de prueba, frente a una sustancia de referencia (SRef) de
actividad conocida y una muestra tratada con las mismas condiciones.
La potencia de los antibióticos, cualquiera que sea el método seguido para su
determinación, se expresa en unidades de actividad. En sentido absoluto, una unidad
equivale a x microgramos de la sustancia pura que inhiben totalmente el desarrollo de un
microorganismo dado. Por ejemplo, la unidad tipo de penicilina es la actividad específica
contenida en 0.6 microgramos de la sustancia pura contra Staphylococcus aureus y la
unidad de estreptomicina es la actividad de 1 microgramo
de la sustancia cristalina contra Escherichia coli. En sentido más general, la unidad puede
ser la expresión de una prueba de inhibición, como por ejemplo la cantidad de antibiótico
añadido a 1 mL de medio que inhibe el crecimiento de un microorganismo dado, o bien la
dilución en tubo o en caja que inhibe completamente a este microorganismo.
*Método 2+2
El diseño de este método emplea 2 niveles de dosis tanto para la muestra como para el
patrón de referencia (estándar) del antibiótico en estudio. La proporción entre la dosis alta
y la dosis baja es la misma para ambas presentaciones. El método 2+2 se realiza en
placas de agar en el que el microorganismo de referencia se siembra masivamente,
colocando posteriormente las soluciones de estándar y las muestras en penicilindros
desde los que se dan la difusión del antibiótico, tanto el antibiótico de referencia como la
muestra se colocan en concentraciones altas y bajas. Cada uno de los cuatro penicilindros
que contiene la caja incluye cada una de las cuatro dosis, este diseño se dice es simétrico
o balanceado.
El principio de este método es la concentración de dos líneas paralelas, cada una
correspondiente a la muestra o al estándar.
Las soluciones de la muestra y las del patrón de referencia tienen la misma potencia
nominal. Su diferencia en potencia es revelada por la distancia vertical entre las dos líneas
paralelas.
Se basa entonces en la difusión del antibiótico y en el crecimiento del microorganismo que
se encuentra inoculado en la placa en la capa semilla por lo que esto provoca la formación
de zonas de inhibición o halos de inhibición, cuyo diámetro está relacionado a la
concentración del antibiótico.
Fórmulas para calcular la potencia microbiológica por el método 2+2:

-Diferencia debida a la respuesta
1
𝐸 = [(𝑆2 + 𝑇2 ) − (𝑆1 + 𝑇1 )]
2
-Diferencia debida a la dosis
1
𝐹 = [(𝑇1 + 𝑇2 ) − (𝑆1 + 𝑆2 )]
2
-Relación entre las dosis
𝐼 = log⁡[⁡⁡]mayor – log[ ]menor
-Relación respuesta-dosis
𝐸
𝑏=
𝐼
-Número de veces de la potencia de la muestra en relación al estándar
𝐹
𝜇 = 𝑎𝑛𝑡𝑖𝑙𝑜𝑔
𝑏
-Potencia microbiológica de la muestra
𝑃𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝜇⁡(𝑃𝑠𝑡𝑑)
II. OBJETIVO
 Determinar la potencia microbiológica de una muestra de ampicilina (genérico)
mediante el método 2+2 en difusión en placa.
 Comparar la potencia microbiológica de un antibiótico de patente (ampicilina) con
una muestra de un genérico de ampicilina.
 Establecer la relación dosis – respuesta en análisis microbiológico por difusión en
placa.
III. HIPÓTESIS
La ampicilina que proviene de genérico (muestra) preparada a la misma concentración que
la ampicilina de patente, mostrará halos de inhibición semejantes por lo que su potencia
microbiológica será muy similar.
ELABORADO POR: REVISADO POR: RECIBIDO POR: PAGINA 5DE 13

IV. METODOLOGÍA
*Material
Material general
4 Cajas Petri con tapas de porcelana
16 penicilindros
1 Matraz Erlenmeyer de 25 mL
2 Matraz Erlenmeyer de 250 mL
1 pipeta graduada de 1 mL
1 pipeta graduada de 10 mL
1 probeta graduada de 25 mL
6 perlas de ebullición
1 termómetro de inmersión parcial
10 tubos de 18x150 mm
4 jeringas para insulina
*Equipo
Autoclave
Incubadora
Estufa
Espectrofotómetro
*Reactivos y microorganismo de prueba

Solución salina estéril
Agar no.1 para antibióticos
Cepa de Micrococcus luteus
*Procedimiento
1. Usando material limpio se preparó agar del no.1 y se colocó en tubos de ensayo. Se
sometió a esterilización y una vez solidificado el agar se sembró Micrococcus luteus en
uno de ellos incubando a 32-35°C. Cada 24 horas se realizaron resiembras hasta el
día de la práctica.

2. Se lavó material de vidrio. Se esterilizaron las cajas petri con tapa de porcelana y los
penicilindros por calor seco en estufa a 170°C por 1h.
3. Se preparó agar del no.1 para antibióticos.
4. El material de vidrio, la solución salina y el agar se esterilizaron en autoclave a 15
libras de presión por pulgada cuadrada durante 15 minutos.
5. Se prepararon 4 soluciones: a concentraciones de 0.06 µg/mL y de 0.12 µg/mL de
ampicilina sódica tanto de patente como de genérico.
6. Con ayuda de la probeta graduada estéril de 25 mL se añadieron 21 mL de agar no. 1
para antibióticos a las cajas Petri que funcionó como agar base; se dejó reposando
hasta solidificar.
7. Se añadieron 3 perlas de ebullición a los 4 últimos tubos de ensayo con las
resiembras de Micrococcus luteus además de 3 mL de solución salina estéril.
8. Se recuperaron los 3 mL vertidos en cada tubo de ensayo en un matraz Erlenmeyer
estéril de 25 mL recuperando todo el microorganismo, haciendo una suspensión.
9. Se ajustó la suspensión de Micrococcus luteus a una transmitancia del 25% +- a una
longitud de onda de 580 nm.
10. A cada caja Petri se le añadieron 4 mL de ésta suspensión y se dejó solidificar,
funcionando como agar semilla o capa siembra.
11. Se colocaron 4 penicilindros a cada una de las cajas Petri con ayuda de unas pinzas
esterilizadas a la flama.
12. Se llenaron los penicilindros, cada uno con una solución diferente de las preparadas
de ampicilina.
13. Se incubaron a 32-35° C y se observo la presencia de halos de inhibición.

FRIMA: FRIMA: FIRMA:
Cálculos para la preparación de las disoluciones de ampicilina de un estándar

(patente) y muestra (genérico).
Pesar 300mg de ampicilina
Concentración= 0.12µg/mL
300𝑚𝑔⁡𝑎𝑚𝑝𝑐𝑖𝑙𝑖𝑛𝑎 𝟐𝒎𝒍 𝟏𝒎𝒍
( )( )( ) = 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟏𝟐𝒎𝒈/𝒎𝑳
50𝑚𝐿⁡𝑎𝑔𝑢𝑎 𝟏𝟎𝟎𝒎𝒍 𝟏𝟎𝟎𝒎𝒍
1000µ𝑔
0.00012𝑚𝑔/𝑚𝐿 ( ) = 0.12µ𝑔/𝑚𝐿
1𝑚𝑔

Concentración= 0.06 µg/mL
300𝑚𝑔⁡𝑎𝑚𝑝𝑐𝑖𝑙𝑖𝑛𝑎 𝟏𝒎𝒍 𝟏𝒎𝒍

( )( )( ) = 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟎𝟔𝒎𝒈/𝒎𝑳
50𝑚𝐿⁡𝑎𝑔𝑢𝑎 𝟏𝟎𝟎𝒎𝒍 𝟏𝟎𝟎𝒎𝒍
1000µ𝑔
0.00006𝑚𝑔/𝑚𝐿 ( ) = 0.06µ𝑔/𝑚𝐿
1𝑚𝑔
V. RESULTADOS


VI. ANÁLISIS DE RESULTADOS
VII. CONCLUSIONES
VIII. SUGERENCIAS

Aguilar Flores Flores Gómez
IX. REFERENCIAS BILIOGRAFICAS

 Antibióticos y su control mediante el laboratorio. Bryant A.I.M.L.T. Editorial El
manual moderno, México 1976, pp 19-20.
 Ruben Vardanyan and Victor Hruby. Synthesis of Best-Seller Drugs. Academic
Press: USA; 2016.
 Brooks F. Microbiología Medica.25ª Edición. México: Editorial Mc Graw Hill;2010.
 Tortora G. Microbiology an Introduction. Fifth Edition. Estados Unidos: Editorial
Benjamin Cummings; 1995.
 Burrows W. Tratado de microbiología. 20ª Edición. México: Editorial Interamericana;
1974.
 Murray P., Microbiología Medica. 5ta Edición. Madrid España: Editorial El servier;
1996.

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LABORATORIO DE DESARROLLO ANALÍTICO

TÍTULO DEL PROYECTO:

ASESOR: QFB LILIANA LOPEZ

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Figura 1. Estructura de ampicilina

Cuyo mecanismo de acción es inhibir la síntesis de la pared celular. Actúa a distintos

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

Para valorar microbiológicamente un antibiótico, se pueden emplear dos métodos: Método

Fórmulas para calcular la potencia microbiológica por el método 2+2:

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*Reactivos y microorganismo de prueba

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Cálculos para la preparación de las disoluciones de ampicilina de un estándar

Pesar 300mg de ampicilina

ELABORADO POR: REVISADO POR: RECIBIDO POR: PAGINA 8 DE 13

Concentración= 0.06 µg/mL

300𝑚𝑔⁡𝑎𝑚𝑝𝑐𝑖𝑙𝑖𝑛𝑎 𝟏𝒎𝒍 𝟏𝒎𝒍

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ELABORADO POR: REVISADO POR: RECIBIDO POR: PAGINA 10 DE 13

VI. ANÁLISIS DE RESULTADOS

ELABORADO POR: REVISADO POR: RECIBIDO POR: PAGINA 12 DE 13

IX. REFERENCIAS BILIOGRAFICAS

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