réplica de la DNA

Cada vez que una célula se divide el genoma debe duplicarse y se transmite a la descendencia. Es decir:

5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---

ACGA ---- 5'
5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
REPLICACIÓN
ACGA ---- 5' 5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
ACGA ---- 5'
molécula original produce 2 moléculas siguientes replicación del ADN.

Nuestro tema en esta sección se cómo se hace esto?

la replicación del ADN debe tener alta fidelidad. ¿Por qué? Bueno, si la replicación del ADN fue baja fidelidad las consecuencias
serían:
1. cambios aleatorios dramáticos y rápidos en la secuencia de genes
2. lo que causaría una reducción extrema de la viabilidad
Debido a esto, en un organismo complejo, evolución seleccionará contra la replicación de baja fidelidad de ADN. La
estructura del ADN sugirió una manera que podría ser replicado con alta fidelidad. Debido a que las hebras son
complementarias, una hebra podría especificar la base en la cadena opuesta. Esto es en realidad lo que sucede.

Durante la década de 1950, se propusieron tres teorías de cómo podría ser replicado ADN. Se fueron por los nombres Conservad
dispersiva y Semi-conservador la replicación del ADN. Se ilustran a continuación.

Las letras minúsculas representan recién sintetizados letras de ADN y de capital representan material de
de la molécula parental inicial.

La replicación
conservadora
Siguiendo
replicación, una molécula
hija contiene ambas de
las cadenas parentales.
La otra molécula hija
contiene dos recién
5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
ACGA ---- 5'
5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
ACGA ---- 5' 5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
ACGA ---- 5'
Esta teoría ha demostrado ser incorrecta.

cadenas de ADN
sintetizadas.

La replicación 5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---

dispersiva
Ambas hebras de cada
molécula hija contienen
nucleótidos derivados de
la molécula parental.
ACGA ---- 5'
5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
ACGA ---- 5' 5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
ACGA ---- 5'
Esta teoría ha demostrado ser incorrecta.

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Replicación
semiconservativa
Cada hebra parental actúa 5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
como una plantilla para la ACGA ---- 5'
síntesis de una nueva hebra 5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
hija. Por lo tanto, en ACGA ---- 5' 5 '--- TGCT ---- 3' 3 '---
ACGA ---- 5'
hija moléculas A hebra recién
La teoría es correcta semiconservative!
sintetizada se base de
emparejado a una de las
cadenas parentales originales.

¿Cómo se demuestra que la replicación del DNA es Semi-Conservadora?

En 1958, el experimento Meselson-Stahl demostró que en las bacterias la replicación del ADN era conservadora semi-. En la
década de 1960 las Herbert Taylor colchicina experimento rootip frijol
demostró que una célula eucariota replicado por la replicación semiconservativa.

Meselson y Stahl Experimento

Para abordar esta cuestión este grupo utilizó una manera de etiquetar isotópicamente ADN recién sintetizado. Para ello se utilizan
dos isótopos diferentes de nitrógeno (N).
14 forma de N más común de nitrógeno
15 N forma menos común y tiene una mayor masa de 14 N DNA hecha usando 15 N es de aproximadamente 1% más denso

que el ADN hace usando 14 N. Estas dos formas se puede separar por centrifugación en gradiente de densidad de equilibrio (también
llamado centrifugación isopícnica).

¿Qué es la centrifugación en gradiente de densidad de equilibrio?

En esta moléculas técnica mixta con una sal (CsCl 2), disuelto
en agua, y se centrifugó a velocidad muy alta. Las
moléculas de sal forman un gradiente de densidad.

tubos de centrífuga que hacen girar en una centrífuga

Antes de la centrifugación las moléculas de sal se distribuyen uniformemente a través del tubo de
centrífuga. Durante la centrifugación, las moléculas de sal son forzados hacia la parte inferior del tubo y
se establece un gradiente de moléculas. Más de la sal se encuentra en la parte inferior del tubo y
menos es en la parte superior. Por lo tanto, la densidad de la solución es más pequeña en la parte
superior y una mayor en la parte inferior.

Cualquier moléculas de ADN en este tubo de centrífuga también serán forzados hacia la parte inferior del tubo. A medida que el
ADN se desplaza hacia abajo el tubo de la densidad de la solución salina circundante aumenta gradualmente. El ADN deja de
moverse con relación a la solución de sal cuando sus dos densidades son iguales. Esto es debido a una propiedad física llamada
flotabilidad. Un ejemplo:

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Antes de
la centrifugación, el ADN se
distribuye uniformemente a
través de los tubos de
centrífuga.
Centrifugación comienza y la sal y el Después de la centrifugación prolongada, el
ADN comienza la sedimentación. ADN ha formado bandas discretas que
refleja su densidad de flotación.

En el tercer panel, observe que el tubo de la izquierda tiene una banda de ADN. Esto significa que en este tubo todas las moléculas
de ADN tienen la misma densidad de flotación. Observe también que el tubo de la derecha tiene dos bandas. Esto significa que el
ADN en este tubo es una mezcla de ADN con dos densidades de flotación diferentes.

De vuelta a 15 NORTE, 14 N cosas.

E. coli pueden ser cultivadas en medios en los que la única fuente de nitrógeno es 15 N o 14 El ADN genómico N. partir de bacterias
cultivadas en 15 N medios serán de aproximadamente 1% más denso que el ADN de las bacterias cultivadas en el 14 medios Ñ. Esta
diferencia de densidad significa que el 15 N y 14 ADN N se puede separar por centrifugación en gradiente de densidad de equilibrio.

la experimentación anterior había demostrado que:

15 ADN marcado 14 N ADN Si el ADN es el 50%
N marcado 15 N y 50% 14 N entonces

sedimentado en sedimentó a se sedimenta en una

esta posición. esta posición posición intermedia.

¿Cómo se ha utilizado para determinar cuál de los modelos de replicación de ADN de tres es la correcta? Bueno, Meselson y Stahl
crecieron bacterias en 15 N medios de comunicación hasta que todo el ADN se marcó uniformemente con 15 N. A continuación,
sincroniza estos cultivos (en este contexto sincronía significa que todas las bacterias en el cultivo están replicando su ADN y la
realización de la división celular al unísono) y les creció en 14 medios Ñ. Aquí están los detalles.

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 Primera Generación
Crecer bacterias en 15N y bacterias transferencia al medio 14N división Una célula se ha
sincronizar sus divisiones producido.
celulares
Extraer una muestra y
aislar ADN. Llámalo Muestra Extraer una muestra y
1. aislar ADN. Llámalo Muestra
2.

Segundas divisiones celulares

de dos generaciones han
producido.

Extraer una muestra y

aislar ADN. Llámalo Muestra
3.

Ahora muestras 1, 2 y 3 están sometidos al equilibrio centrifugación en gradiente de densidad.

Los tres modelos de replicación de ADN hacen predicciones específicas sobre el resultado de este experimento. Estas

predicciones se presentan a continuación. En esta tabla representa

ADN sintetizado con 15 N y representa ADN sintetizado con 14 NORTE.

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 resultados predichos ADN en replicación
después de la en muestras
centrifugación 1, 2 y 3

Las predicciones basadas en el

modelo conservador de replicación

15N
Muestra 1: todo el ADN es 15 NORTE.

14N

15N
Muestra 2: medio de la ADN es 15 N y medio es 14 NORTE.

15N

14N
Muestra 3: más de ADN es 14 N pero algunos 15 N
permanece.
Las predicciones basadas en el modelo de
replicación dispersiva

15N
Muestra 1: todo el ADN es 15 NORTE.

Muestra 2: todo el ADN se desplaza a la

15N / 14N
densidad de ADN que es un medio
15 N y media 14 NORTE.

Muestra 3: todo el ADN se desplaza a la

densidad de ADN que es 25% 15 N y 75% 14 N. 15N / 14N
En las sucesivas generaciones el ADN se
vuelve gradualmente menos denso.

Las predicciones basadas en el modelo

semi-conservador de replicación

15N
Muestra 1: todo el ADN es 15 NORTE.

Muestra 2: todo el ADN se desplaza a la

15N / 14N
densidad de ADN que es un medio
15 N y media 14 NORTE.

14N
Muestra 3: más de ADN es 14 N pero algunos
media 14 N y media 15 N permanece. 15N / 14N

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 Los resultados reales del experimento
Muestra Muestra Muestra
1 2 3

posición del ADN 14N

15N de media y medio DNA

posición de la posición de ADN

Estos resultados indican que el ADN bacteriano se replica por un mecanismo semiconservativo.

Ahora es el momento para el bean experimento punta de la raíz Herbert Taylor colchicina
El experimento Meselson-Stahl mostró que las bacterias utilizan la replicación semi-conservador. Pero ¿qué pasa con
las células eucariotas? Por razones técnicas, el experimento Meselson-Stahl no pudo realizarse con células eucariotas.
Herbert Taylor fue el primero para probar si eucariotas utilizan replicación semi-conservador. Tomó células de la punta de la
raíz (células vegetales) y les permitió replicar en presencia de 3 H-timidina. 3 H es un isótopo radiactivo de hidrógeno.
Cuando se descompone, libera β- partículas. Cuando β- partículas golpean una emulsión fotográfica que exponga '' se
produce un punto negro. Esta técnica se llama autorradiografía.

Durante la replicación del ADN, el ADN recién sintetizado se marcó radiactivamente con 3 Después H.
una ronda de replicación del 3 H-timidina se lavó y se reemplazó con timidina 'frío'. En este contexto, 'frío' significa no
radiactivo. Se dejó que estas células que pasar por una segunda ronda de replicación del ADN. La siguiente
ilustración representa un cromosoma replicante. Negro significa que 3 H en el cromosoma expone la emulsión
fotográfica. Gris significa que el material no está radiomarcado y por lo tanto no expone la emulsión.

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 Frío
Resultados experimentales:

3H

Frío

Frío
Inicio de primera
división

Fin de la primera división y el

inicio del segundo

división

La interpretación de
los resultados.
Frío
Cada
cromosoma se 3H
muestra como un
Frío
doble
molécula de ADN de
cadena.
Frío
Centrómeros no se
muestran.

definiciones
autorradiografía Una técnica en la que los compuestos radiactivos se incorporan en una molécula o parte de una célula.
Cualquiera de un trozo de película fotográfica se coloca contra la muestra o emulsión fotográfica se vierte
sobre la muestra. La desintegración del isótopo radiactivo hace que la emulsión sea expuesto. Después de la
'película' se desarrollaron las regiones expuestas se muestran como puntos negros.

densidad La cantidad de materia en un espacio determinado basa en la ración de la masa a volumen. Esto se puede medir
mediante la centrifugación de una molécula y midiendo su velocidad de sedimentación.

isótopo Una de las varias formas diferentes de un átomo con el mismo número atómico pero diferentes masas
atómicas. Algunos isótopos son radiactivos.

marcado con isótopos Se refiere a un compuesto que se ha hecho utilizando un isótopo poco común de un átomo. Por ejemplo, el
azufre en las proteínas es generalmente el isótopo S. Pero si una célula se cultiva en presencia de 35 S
entonces las proteínas recién sintetizadas serán isotópicamente etiquetados con 35 S.

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