Universidad Nacional de Jujuy

Facultad de Ciencias Agrarias

Química Biológica

T.P de Laboratorio N° 7

Refractometría

Integrantes:

Cardozo Rodrigo

Cruz Mara

Guevara Soto Joel

Llanes Yolanda

Salas José Luis Alfredo

Tolaba Alejandro Matías

Villegas Bárbara

Quispe Matías Javier

Cuestionario:

1) ¿Qué método biofísico químico conoce para determinar la concentración de proteínas en

un fluido biológico extracelular como sería el plasma o suero sanguíneo?

Hemos visto que existe un método químico basado en la reacción con …… cúprico, otro es la
precipitación fraccionada con solución de distintas concentraciones de sulfato de sodio y
sulfato de amonio, y finalmente tenemos un método directo que se basa en una medida física
que es el índice de refracción.

2) Definir que es índice de refracción, de que variable depende.

El índice de refracción es la relación entre el seno del ángulo de incidencia y de refracción de un haz de
luz monocromático, separado entre dos medios de distinta densidad.

La variable de la que depende son: longitud de onda (λ), concentración (c) y temperatura (t).

3) ¿Qué diferencia existe entre fluido biológico que es un poli electrolito y una solución verdadera?

Sabemos que las soluciones volumétricas son aquellas cuyos tamaños también monometricos de
partículas son menores a 1mμ como son todas las disoluciones de sales inorgánicas.

Todos los fluidos biológicos se denominan poli electrolito porque en disolución posee iones verdaderos
más partículas de macromoléculas proteicas verdaderas al estado micela coloidal cuyo tamaño esta
entre 1mμ-100mμ

En nuestro caso la muestra de trabajo será un suero de equinos con una enfermedad carenciada,
hipotiroidismo de caprinos de la localidad de Volcán.

4) ¿Qué función matemática se cumple cuando representamos un sistema de coordenadas?

En la ordenada índice de referencia, y en la abscisa concentración, que en nuestro caso será un fluido
biológico proveniente de distintas concentraciones de suero de un vertebrado.

Podemos observar que la función es la ecuación de una recta con ordenada en el origen del tipo
y=mx+n, y en el caso de índice de refracción tendremos la ecuación (2), que al sacar la derivada con
respecto a la concentración tendremos pendiente que es igual a la tangente de β.

1
5) Graficar los valores de las tablas que figuran en la guía de la variación de índice de referencia en
función de las concentraciones.

Concentración (gr%) Índice de refracción

0 1,33600
6,30 1,33705
13,00 1,33820
26,02 1,34048
32,80 1,34162
50,30 1,34463
61,20 1,34650
72,00 1,34836
80,60 1,34984

Variación del índice de refracción en función de la

concentración de proteínas
1.35200
1.35000
1.34800
Indice derefracción

1.34600
1.34400
1.34200
1.34000
1.33800
1.33600
1.33400
0 20 40 60 80 100
Concentración gr%

2
 Concentración (gr%) Índice de refracción
0 1,3330
2 1,3359
5 1,3403
10 1,3479
15 1,3557
20 1,3639
30 1,3811
40 1,3997
50 1,4200
60 1,4418
70 1,4651

Variación del índice de refracción en función de la

concentración de sacarosa
1.4800
1.4600
Indice derefracción

1.4400
1.4200
1.4000
1.3800
1.3600
1.3400
1.3200
0 20 40 60 80 100
Concentración gr%

6) ¿A qué denominamos coeficiente alfa del índice de refracción de una curva de calibración de una
macromolécula?, como se calcula, hacer desarrollo matemático de su cálculo.

Denominamos coeficiente de corrección o alfa del índice de refracción de una curva, a la variación del
índice de refracción respecto del índice de refracción tomado como referencia, por unidad de
concentración.

Dado que es una función lineal del tipo y = mx+ n, o sea la ecuación de la recta con ordenada en el
origen.

ηt = η0 + η0 .  . c

δη / δc = η0 .  = tg β

 = tg β / η0

3
7) Calcular los distintos valores de  a partir de la curva de calibración de sacarosa y de proteínas.

 = (Δη / Δc) . 1 / η0

Variación del índice de refracción en función de la concentración de proteínas.

Concentración (gr%) Índice de refracción

0 1,33600
6,30 1,33705
13,00 1,33820
26,02 1,34048
32,80 1,34162
50,30 1,34463
61,20 1,34650
72,00 1,34836
80,60 1,34984

 (1,33705 - 1,33600) / (6,30 - 0) . 1 / 1,3330 = 0,00012503



 (1,33820 - 1,33705) / (13,00 - 6,30) . 1 / 1,3330 = 0,00012876

 (1,34048 - 1,33820) / (26,02 - 13,00) . 1 / 1,3330 = 0,00013137

 (1,34162 - 1,34048) / (32,80 - 26,02) . 1 / 1,3330 = 0,00012614

 (1,34463 - 1,34162) / (50,30 - 32,80) . 1 / 1,3330 = 0,00012903

 (1,34650 - 1,34463) / (61,20 - 50,30) . 1 / 1,3330 = 0,0001287

 (1,34836 - 1,34650) / (72,00 - 61,20) . 1 / 1,3330 = 0,0001292

 (1,34984 - 1,34836) / (80,60 - 72,00) . 1 / 1,3330 = 0,0001291

4
Variación del índice de refracción en función de la concentración de sacarosa.

Concentración (gr%) Índice de refracción

0 1,3330
2 1,3359
5 1,3403
10 1,3479
15 1,3557
20 1,3639
30 1,3811
40 1,3997
50 1,4200
60 1,4418
70 1,4651

 (1,3359 - 1,3330) / (2 - 0) 1 / 1,3330 = 0,00108777



 (1,3403 - 1,3359) / (5 - 2) 1 / 1,3330 = 0,00110028

 (1,3479 - 1,3403) / (10 - 5) 1 / 1,3330 = 0,00114029

 (1,3557 - 1,3479) / (15 - 10) 1 / 1,3330 = 0,00117029

 (1,3639 - 1,3557) / (20 - 15) 1 / 1,3330 = 0,00123031

 (1,3811 - 1,3639) / (30 - 20) 1 / 1,3330 = 0,00129032



 (1,3997 - 1,3811) / (40 - 30) 1 / 1,3330 = 0,00139535

 (1,4200 - 1,3997) / (50 - 40) 1 / 1,3330 = 0,00152288

 (1,4418 - 1,4200) / (60 - 50) 1 / 1,3330 = 0,00163541

 (1,4651 - 1,4418) / (70 - 60) 1 / 1,3330 = 0,00174794

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8) ¿Qué ocurre cuando estudiamos la variación del índice de refracción en función de temperatura a
concentración constante, en nuestro caso del agua pura?

Al realizar la curva de variación del índice de refracción a partir de los valores de la tabla que nos da la
variación del índice de refracción del agua pura a concentración constante en función de la
temperatura, veremos que en dicho caso la ecuación también es una recta pero con pendiente negativa
debido a que el índice de refracción disminuye en función de la temperatura, debido a que no sigue en
toda la porción de la variable una recta uniforme, descomponemos la ecuación ligeramente exponencial
negativa, en tres rectas que de acuerdo a los valores que tenemos en la tabla: de 14°- 20°, 20°- 30° y
30°- 40° a partir de la representación gráfica de la variable del índice de refracción en función de la
temperatura para el agua pura.

9) Calcular los valores de  de 0°- 20°, 20°- 30° y 30°- 40°.

ηt = η0 - η0 .  . t

δηt / δt = - η0 .  = tg β

 = - tg β / η0

 = - (Δη / Δt) . 1 / η0

Variación del índice de refracción en función de la temperatura.

T°C Indice de
refracción
14 1,33348
15 1,33341
16 1,33333
18 1,33317
20 1,33299
22 1,33281
24 1,33262
26 1,33242
28 1,33219
30 1,33192
32 1,33164
34 1,33136
36 1,33107
38 1,33079
40 1,33051

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 de 0° a 20°

 = - (1,33341 - 1,33348) / (15 - 14) . 1 / 1.33348 = 5,24942 . 10-05

 = - (1,33333 - 1,33341) / (16 - 15) . 1 / 1.33348 = 5,99934 . 10-05

 = - (1,33317 - 1,33333) / (18 - 16) . 1 / 1.33348 = 5,99934 . 10-05

 = - (1,33299 - 1,33317) / (20 - 18) . 1 / 1.33348 = 6,74926 . 10-05

 de 20° a 30°

 = (1,33281 - 1,33299) / (22 - 20) . 1 / 1,33299 = 6,75174 . 10-05

 = (1,33262 - 1,33281) / (24 - 22) . 1 / 1,33299 = 7,12684 . 10-05

 = (1,33242 - 1,33262) / (26 - 24) . 1 / 1,33299 = 7,50193 . 10-05

 = (1,33219 - 1,33242) / (28 - 26) . 1 / 1,33299 = 8,62722 . 10-05

 = (1,33192 - 1,33219) / (30 - 28) . 1 / 1,33299 = 0,000101276

 de 30° a 40°

 = (1,33164 - 1,33192) / (32 - 30) . 1 / 1,33192 = 0,000105111

 = (1,33136 - 1,33164) / (34 - 32) . 1 / 1,33192 = 0,000105111

 = (1,33107 - 1,33136) / (36 - 34) . 1 / 1,33192 = 0,000108865

 = (1,33079 - 1,33107) / (38 - 36) . 1 / 1,33192 = 0,000105111

 = (1,33051 - 1,33079) / (40 - 38) . 1 / 1,33192 = 0,000105111

7
10) ¿Qué corrección debe realizar cuando calcula el porcentaje de proteínas de un suero en un fluido
biológico?

Teniendo en cuenta el índice medido del suero en el cual tenemos además el índice de refracción del
agua, que es igual a 1,3332 y el número de la sustancia cristaloide igual a 0,00277, a su vez sabemos que
para 10g por mil de una disolución de proteínas corresponde un Δn de 0,00172.

ηm = ηprot + ηcristaloides ηH20 = 1,33320

ηcristaloides = 0,00277

η = 0,00172 10 g%0

ηcorregido x g%0 de prot

ηcorregido = ηm – (ηprot + ηcristaloides)

g%0 = [ηmedido – (ηH20 + ηcristaloides)/0,00172] . 10

g%0 = [ηmedido – (1,33320 + 0,00277)/0,00172] . 10

Calcular los g%0 de una muestra de suelo cuyo índice de refracción fue 1,34836 medido a 17,5°C:

g%0 = [1,34836 – (1,33320 + 0,00277)/0,00172] . 10

g%0 = 72,03

8
Práctica: