Biologia de Los Liquenes

MÉTODOS EMPLEADOS EN
ECOLOGIA MICROBIANA
DOCENTE: Msc. DANIEL LUQUE ZURITA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

SANITARIA
INTEGRANTES:
CARRILLO DAZA GRECIA RUBI
FLORES CALCINA VICTOR
HUANCA LLACHO ABEL
AREQUIPA - PERÚ
2017
MÉTODOS EMPLEADOS EN ECOLOGIA MICROBIANA - 2
MÉTODOS EMPLEADOS EN
ECOLOGIA MICROBIANA
La historia de la vida en la tierra ha sido mayormente microbiana. Desde que comenzó la vida hace
3800 millones de años hasta la fecha los microbios son las mas abundantes y efectivas formas de vida
en la tierra.
Los microbios, además han jugado un papel importante en los procesos biogeoquímicos, que
ayudaron a hacer la biosfera un lugar más habitable para otras formas de vida, y que siguen siendo
indispensables en la mineralización y ciclo de nutrientes.
La Ecología Microbiana, es la ciencia encargada del estudiar el papel que juegan los microorganismos
en la biosfera. Este puente de unión entre la Ecología y la Microbiología, se caracteriza por avances
significativos hacia un mejor entendimiento de los principios fundamentales que rigen la estructura
y función de ecosistemas acuáticos, aéreos y terrestres y el papel que juegan los microorganismos
dentro de estos.
Los mecanismos que la diversidad microbiana mantienen en biosfera son la base de la dinámica de
los ecosistemas. Por ejemplo, son la base de la existencia por ejemplo de las selvas y de los sistemas
agrícolas. Por otra parte, la diversidad microbiana del suelo es la causa de la fertilidad del mismo.
La importancia de los microbios es además ejemplificada por el papel crucial de sus relaciones
simbióticas con plantas y animales. Relaciones parasitarias simbiontes son capaces de causar
enfermedades virulentas y son un factor significativo en la conducción de la diversidad biológica. En
el polo opuesto, mutualismos con microorganismos, alguna vez considerados como raros y de escasa
importancia, son ahora reconocidos por haber influenciado la evolución de la vida en una gran
variedad de formas.
Este mundo invisible, presente en todo el ambiente cuyas condiciones permitan de alguna manera la
vida, ha sido durante largo tiempo ignorado o tratado de forma muy rudimentaria en los estudios de
Ecología clásicos. Pero su participación en la mayoría de los ciclos fundamentales que permiten la
vida sobre la tierra ha generado un auge en su estudio principalmente a través de técnicas de biología
molecular, las cuales han ido avanzando muy en paralelo con los nuevos descubrimientos en este
campo.
ECOLOGÍA MICROBIANA
La 'ecología microbiana' es la rama de la ecología que estudia a los microorganismos en su ambiente

natural, los cuales mantienen una actividad continua imprescindible para la vida en la Tierra. Los
mecanismos que mantienen la diversidad microbiana de la biosfera son la base de la dinámica de los
ecosistemas terrestres, acuáticos y aéreos. Es decir, la base de la existencia de las selvas y de los
sistemas agrícolas, entre otros. Por otra parte, la diversidad microbiana del suelo es la causa de la
fertilidad del mismo.
Esto va más allá del papel que se les adjudicaba tradicionalmente, el cual se restringía a la
degradación y reciclaje de la materia orgánica y al mantenimiento de los principales ciclos de fijación,
captación y liberación de algunos elementos químicos y sus principales compuestos. Comúnmente
no se concibe la extinción de las comunidades microbianas; sin embargo, el impacto de esta posibilidad
será evidente cuando decaigan las funciones ecosistémicas reguladas por los microorganismos. Ya que esto
nos ayuda a mejorar la calidad de vida
La Ecología Microbiana, puente de unión entre la Ecología y la Microbiología, aborda el complejo estudio del
papel que juegan los microorganismos en la biosfera. Esta disciplina, surgida con fuerza a partir de la segunda
mitad del siglo XX, nos muestra hoy en día como todos los seres vivos de la tierra dependen de la enorme
diversidad de sus actividades. Este mundo invisible, presente en todo tipo de ambientes cuyas condiciones
sean compatibles con la existencia de vida, ha sido durante largo tiempo ignorado o tratado de forma muy
rudimentaria en los estudios de Ecología clásicos. Pero su posición clave en los niveles tróficos de los
ecosistemas, sus funciones centrales en los ciclos biogeoquímicos, la importancia básica de sus interacciones
con el resto de los seres vivos y, en definitiva, su papel fundamental para mantener la salud de los ecosistemas,
ha puesto de manifiesto, en los últimos años, la necesidad de integrar a los microorganismos como un
componente esencial en los estudios ecológicos para la comprensión del funcionamiento de la biosfera.
MÉTODOS EN ECOLOGÍA MICROBIANA
La biodiversidad, es decir que MOs y en que numero se encuentran en un

determinado hábitat.
Apreciar la biodiversidad de los microorganismos y entender la interacción entre los
diferentes grupos que componen la comunidad.
La actividad microbiológica, ósea como afecta la presencia un determinado MOs al
ecosistema
Medir la actividad de los microorganismos en la naturaleza y controlar sus efectos en

el ecosistema.
Esto se puede llevar a cabo realizando las siguientes actividades:

Análisis de las comunidades microbianas dependiendo del cultivo
Análisis molecular de las comunidades microbianas
Medición de las actividades microbianas en la naturaleza
I. ANÁLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS BASADOS EN

TÉCNICAS DE CULTIVO
Este proceso consiste en separar los organismos de interés de una comunidad microbiana,
un procedimiento que se conoce como ENRIQUECIMIENTO, y que permite aislarlos
después en un cultivo axénico. El aislamiento es importante porque se obtienen cultivos para
estudios detallados y controlados de laboratorio y para su aplicación en biotecnología y
microbiología ambiental e industrial.
Enriquecimiento y aislamiento
En un ambiente natural no es frecuente encontrar un solo tipo de microorganismo. Lo que

existe son comunidades microbianas, y el desarrollo de métodos y procedimientos que
permitan el aislamiento y cultivo de microorganismos interés es un reto para el ecólogo
microbiano.
El enfoque más corriente para alcanzar este propósito es la TECNICA DEL CULTIVO DE
ENRIQUECIMIENTO.
TECNICA DEL CULTIVO DE ENRIQUECIMIENTO.

Este método requiere que el medio de cultivo y las condiciones de incubación sean selectivos
para el organismo que se desea aislar y contra selectivos para los organismos no deseados.
Por tanto se necesita reproducir lo más fielmente posible los recursos y las condiciones que
se dan en este nicho ecológico y buscar luego los habitantes potenciales de aquel hábitat
capaces de desarrollarse en las condiciones de enriquecimiento seleccionadas.
Para que un cultivo de enriquecimiento tenga éxito es necesario contar con un inóculo
apropiado (una muestra que contenga el microorganismo). Por tanto, la metodología del
cultivo de enriquecimiento se inicia con la elección del hábitat adecuado.
El cultivo de enriquecimiento suele establecerse sembrando el inóculo directamente en un

medio altamente selectivo; muchos de los procariotas más frecuentes pueden aislarse de
esta manera.
Tanto el medio de cultivo como las condiciones de incubación son críticos para que tenga
éxito un cultivo de enriquecimiento; es decir deben optimizarse tanto los recursos como las
condiciones para tener las mejores posibilidades de enriquecer el microorganismo que
interesa.
La columna de Winogradsky
Tradicionalmente, la columna de Winogradsky se ha utilizado en el cultivo de enriquecimiento

para el aislamiento de bacterias fototróficas rojas y verdes, de bacterias sulfatoreductoras y
de muchos otros anaerobios.
El nombre corresponde al famoso microbiólogo ruso Sergei Winogradsky, quien utilizó la

columna por primera vez a finales del siglo XIX para estudiar microorganismos del suelo.
La columna de Winogradsky es un ecosistema anóxico en miniatura, que puede usarse como

suministro a largo plazo de bacterias para cultivos de enriquecimiento.
La columna de Winogradsky se prepara con un cilindro de vidrio grande que se llena

aproximadamente hasta la mitad con lodo rico en materia orgánica, y que preferiblemente
contenga sulfuro.
Los sustratos de carbono se mezclan previamente con el lodo; éstos determinarán que
organismos serán enriquecidos, pero deben evitarse los sustratos fácilmente fermentables
(que pueden llevar a una formación excesiva de gas). Al lodo se le añade CaCO 3 y CaSO4
como tampón y como fuente de sulfato respectivamente.
El lodo se compacta en el envase, cuidando de no atrapar aire. El lodo se cubre con agua
de un lago, embalse o acequia (o agua de mar si se prepara una columna marina), y se tapa
el cilindro para evitar la evaporación. Se coloca el cilindro cerca de una ventana donde reciba
luz solar atenuada y se deja durante varias semanas.
En una columna de Winogradsky típica se desarrolla una mezcla de organismos.
Las algas y cianobacterias ocupan rápidamente la parte superior y al producir O2 ayudan a

mantener esta zona óxica.
El proceso de descomposición en el sedimento lleva rápidamente a la producción de ácidos

orgánicos, alcoholes y H2, sustratos adecuados para las bacterias sulfato reductoras.
El sulfuro producido por las bacterias sulfato reductoras provoca el crecimiento de
bacterias rojas y verdes del azufre.
Estos organismos aparecen generalmente como zonas de crecimiento en el lodo de la
columna, pero también pueden desarrollarse profusamente en el agua si los fotótrofos
oxigénicos son escasos.
Para el muestreo de bacterias fototróficas de la columna se introduce una pipeta larga con
la que se recoge un poco de lodo o agua coloreada. Estas muestras se pueden usar para
microscopía y para inocular medios de enriquecimiento para aislamiento y caracterización.
SESGO EN EL ENRIQUECIMIENTO
Aunque el cultivo de enriquecimiento es una herramienta poderosa, en muchos casos se

produce un sesgo en el enriquecimiento.
En los cultivos líquidos de enriquecimiento típicos, el organismo más adaptado a las

condiciones escogidas puede convertirse en la población dominante.
Desgraciadamente, el organismo mejor adaptado en los cultivos de laboratorio a menudo es

sólo un componente minoritario del ecosistema microbiano, en lugar de ser el mayoritario o
el más relevante desde el punto de vista ecológico.
El sesgo en el enriquecimiento puede demostrarse cuando se comparan los métodos de

dilución con el clásico enriquecimiento en líquido.
La dilución del inóculo seguida de un enriquecimiento a menudo da lugar a un organismo

diferente que cuando se enriquece un inóculo sin diluir.
Se cree que la dilución elimina aquellas poblaciones minoritarias pero de rápido crecimiento,
dando de este modo la oportunidad de desarrollarse a otros miembros de la comunidad. Por
tanto, la dilución del inóculo es una práctica común en el cultivo de enriquecimiento en la
microbiología actual.
AISLAMIENTO EN CULTIVO AXÉNICO
Los cultivos axénicos (o puros) se pueden obtener de muchas maneras a partir de un

enriquecimiento; los métodos empleados más frecuentes son la siembra por estría en
superficie (en placa petri), la siembra en profundidad (agar shake) y la dilución en líquido.
Para aquellos microorganismos que crecen bien en medio de cultivo sólido (con agar), el
método de elección es la siembra por estría.
A partir de una población mixta, mediante la siembra por estría se obtienen colonias
separadas; repitiendo esta técnica con una de estas colonias aisladas se consigue un cultivo
axénico, que puede ser transferido a un medio líquido.
Las placas sembradas de este modo e incubadas en las condiciones adecuadas (por ejemplo
en una jarra anóxica para anaerobios) nos permiten aislar tanto microorganismos aerobios
como anaerobios.
SIEMBRA EN PROFUNDIDAD Y NÚMERO MÁS PROBABLE
El método de siembra en profundidad consiste en la dilución de un cultivo mixto en tubos de

agar fundido; cuando el agar solidifica, las colonias se desarrollan embebidas en el tubo de
agar en vez de en la superficie, como ocurre en la siembra por estría en placa.
Es un método de gran utilidad para purificar determinados tipos de microorganismos

anaerobios, por ejemplo, las bacterias fototróficas del azufre y sulfato reductoras de las
columnas de Winogradsky.
Es posible obtener cultivos axénicos mediante diluciones sucesivas de una suspensión de

células en tubos de agar fundido. A partir de una colonia crecida en el tubo de mayor dilución
utilizada como inóculo, se puede volver a hacer otro banco de diluciones, de tal manera que
se acabe obteniendo un cultivo axénico.
Un procedimiento similar sin usar agar es la dilución seriada de un inóculo en un medio

líquido hasta que el tubo o tubos finales de la serie no muestran crecimiento.
Utilizando diluciones seriadas de diez en diez, por ejemplo, el último tubo que muestre
crecimiento tiene que haberse originado a partir de 10 células o menos. Si se repite varias
veces este proceso se obtienen cultivos axénicos. Esta técnica se conoce como la Técnica
del Número Más Probable (NMP).
La Técnica del NMP se usa para estimar el número de microorganismos en alimentos, aguas
residuales y en otras muestras donde hay que evaluar rutinariamente el número de células.
Se puede hacer con medios altamente selectivos y condiciones de incubación dirigidos a
uno o a un pequeño grupo de organismos, como por ejemplo un determinado patógeno, o
usando un medio complejo para obtener una estimación del número total de células.
Con independencia del método utilizado para purificar el cultivo, una vez obtenido un
supuesto cultivo axénico es esencial comprobar su pureza. Se utiliza para ello una
combinación de técnicas microscópicas, observación de las características de la colonia en
placas, o en siembras en profundidad en tubo, y comprobación del crecimiento en medios
donde el microorganismo que nos interesa aislar crece muy poco, pero que favorecen el
crecimiento de los microorganismos acompañantes.
La observación microscópica de un solo tipo morfológico de célula, junto con unas

características uniformes de la colonia y ausencia de contaminación en test con diversos
medios de cultivo, puede tomarse como prueba de que un cultivo es axénico (puro).
CULTIVOS AXÉNICOS DE ALTA TECNOLOGÍA: LAS PINZAS DE LÁSER
Además de los métodos clásicos descritos, los avances tecnológicos han permitido la
utilización de nuevas herramientas para la obtención de cultivos axénicos; una de ellas son
las pinzas (ópticas) de láser.
Las pinzas de láser consisten en un microscopio óptico invertido equipado con un láser
infrarrojo enfocado con precisión y un instrumento de micro manipulación.
Una célula individual del campo de visión es atrapada por el haz de rayos laser y separada
del resto de microorganismos. La célula queda atrapada por que la fuerza creada por el láser
que empuja hacia abajo los objetos pequeños (como las células microbianas) y los mantiene
en el lugar; cuando el haz de láser se desplaza, las células atrapadas se mueven junto con
él. Si la muestra está en un tubo capilar, se atrapa una única célula que después se aísla
rompiendo el tubo en un punto entre la célula y el resto de la población.
La célula recogida se introduce entonces en un tubo pequeño de medio estéril para iniciar
su crecimiento como cultivo axénico.
La tecnología de pinzas de láser es especialmente útil para el aislamiento de bacterias de

desarrollo lento, que pueden ser superadas por el desarrollo rápido de otras poblaciones en
los cultivos de enriquecimiento típicos, o para los organismos presentes en números tan
bajos que podrían perderse con los métodos de enriquecimiento a partir de la dilución. Y
junto con el uso de tinciones específicas capaces de identificar organismos determinados en
un campo del microscopio, las pinzas de láser se emplean para seleccionar organismos a
partir de una mezcla para su purificación y posterior estudio en el laboratorio.
II. ANÁLISIS MOLECULAR DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS

VIABILIDAD Y CUANTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS DE TINCIÓN
TINCIONES GENÉTICAS
PCR: RELACIONANDO GENES ESPECÍFICOS CON ORGANISMOS ESPECÍFICOS.
A.- VIABILIDAD Y CUANTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS DE TINCIÓN
Tinción Fluorescente con DAPI.
Tinción de viables.
Anticuerpos fluorescentes.
Proteína fluorescente verde para el etiquetado celular.
Tinción Fluorescente con DAPI.
Las tinciones fluorescentes se han usado mucho para teñir microorganismos en hábitats
opacos. El colorante DAPI (4’,6-diamido-2-fenilindo) se utiliza con frecuencia para este
propósito; las células teñidas con DAPI presentan fluorescencia azul brillante y son muy
fáciles de ver y enumerar. La tinción DAPI se emplea para la enumeración de
microorganismos en muestras clínicas, del ambiente y de alimentos.
Dependiendo de la muestra, la tinción con colorantes fluorescentes no específicos puede

representar un problema, pero el DAPI, que tiñe ácidos nucleicos, no suele reaccionar con
la materia inerte.
Por tanto, para muchas muestras de suelo y agua, la tinción DAPI proporciona una
estimación razonable del número de células presente. Para muestras acuáticas, las células
se tiñen en la superficie de un filtro después de haber filtrado un volumen determinado de
líquido. Estas técnicas sencillas tienen la ventaja de no ser específicas (tiñen todos los
microorganismos de una muestra), pero con el inconveniente de que no diferencian entre
células vivas y muertas, ni permiten el rastreo de organismos específicos en el ambiente.
2.-Tinción de viables:
Se ha desarrollado una tinción con colorantes fluorescentes que diferencia entre células
vivas y muertas. Esto proporciona información no sólo del número de organismos de una
muestra sino también de su viabilidad. Esta distinción se basa en la integridad de la
membrana citoplasmática celular.
A la muestra se añaden dos colorantes, verde y rojo; el colorante fluorescente verde penetra
en todas las células, viables o no, mientras que el rojo, que contiene yoduro de propidio,
penetra sólo en aquellas células cuya membrana ya no se encuentra intacta y por tanto,
están muertas.
Las células verdes estaban vivas y las rojas muertas, lo que ofrece una evaluación
instantánea de la viabilidad.
Este método se utiliza con cultivos bacterianos de laboratorio, pero no es adecuado para el
examen microscópico de hábitats naturales debido a problemas de tinción inespecífica de
los materiales inertes.
3.-Anticuerpos Fluorescentes:
Las técnicas de tinción con sustancias fluorescentes pueden hacerse más específicas con
el empleo de anticuerpos fluorescentes.
La gran especificidad de los anticuerpos frente a los constituyentes de la superficie de un

organismo particular puede explotarse para identificar o rastrear un organismo en un hábitat
complejo; por ejemplo, suelo o una muestra clínica que contenga una mezcla de muchos
organismos.
El método requiere la preparación de anticuerpos específicos contra los organismos que

interesan, lo cual es largo y laborioso.
Sin embargo, para el caso de microorganismos de importancia clínica, se dispone

comercialmente de anticuerpos de alta especificidad.
4.-Proteína Fluorescente Verde para el Etiquetado Celular:
En el genoma bacteriano se puede insertar un gen que codifica una proteína fluorescente
verde (GFP, green fluorecens protein). Al expresarse, las células que contienen la GFP
aparecen de color verde cuando se observan con un microscopio de luz ultravioleta.
Aunque no resulta útil para el estudio de poblaciones naturales (por que estas células
carecen del gen GFP), las células etiquetadas con GFP se pueden introducir en un medio,
como las raíces de las plantas y seguir con el microscopio la cepa etiquetada.
Con este método los ecólogos microbianos pueden estudiar in situ la competencia
microbiana entre la microbiota nativa y la cepa con GFP introducida o evaluar el efecto de la
perturbación en el ambiente.
La GFP también se ha usado ampliamente en cultivos de laboratorio como gen “indicador”.
B. TINCIONES GENÉTICAS
TINCIÓN FILOGENÉTICA CON HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE IN SUTU (FISH,

fluorescen in situ hybridization).
TINCIÓN DE CROMOSOMAS Y TRANSCRIPCIÓN INVERSA IN SITU.
TINCIÓN FILOGENÉTICA CON HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE IN SUTU (FISH,

fluorescen in situ hybridization).
Los colorantes filogenéticos son oligonucleotidos fluorescentes complementarios en la

secuencia de base a las secuencias en el ARNr 16s o 18s. Los colorantes filogenéticos
penetran en la célula, donde hibridan con el ARNr directamente en los ribosomas.
Como se han identificado sondas filogenéticas para especies microbianas individuales, así
como para dominios enteros de organismos, el grado de especificidad de un colorante
filogenético puede controlarse mediante la secuencia de la sonda fusionada. La FISH permite
identificar o rastrear un organismo particular o un grupo de organismos relacionados,
dependiendo de la especificidad de la sonda.
TINCIÓN DE CROMOSOMAS Y TRANSCRIPCIÓN INVERSA IN SUTU
La tinción de cromosomas se emplea para identificar genes específicos de la microbiota de

muestras naturales, mientras que la transcripción se dirige a un ARNm específico (es decir
genes expresados).
La tinción de cromosomas se inicia con el marcado fluorescente de una sonda de

oligonucleótidos o del gen completo, de un conjunto de genes, o incluso de un genoma
completo digerido para obtener sondas pequeñas. Las sondas se utilizan para averiguar qué
organismo(s) de una muestra contiene(n) el gen o los genes presentes en las sonda(s).
La tinción de cromosomas es útil para identificar bacterias que contienen genes específicos,
como los que codifican la nitrogenasa (responsable de la fijación del nitrógeno), los
componentes del centro de reacción fotosintético, o vías autotróficas específicas.
Los números de células fluorescentes en cada caso darían una estimación de las bacterias
fijadoras de nitrógeno, fotótrofas o autótrofas, respectivamente, en una muestra natural.
A diferencia de la técnica anterior, la transcripción inversa in situ, busca si un organismo está

expresando un gen o genes determinados en la naturaleza en un momento determinado.
El método utiliza una sonda que hibrida con un ARNm específico previamente transcrito por
las células en una muestra.
Una vez que la sonda reacciona, tiene lugar la transcripción inversa, produciendo un ADN
complementario que es amplificado por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
Finalmente, el ADN amplificado reacciona con una sonda fluorescente.
C. PCR: RELACIONANDO GENES ESPECÍFICOS CON ORGANISMOS ESPECÍFICOS.
Muchos estudios en ecología microbiana no necesitan aislar los microorganismos, ni siquiera

identificarlos por microscopía con las tinciones antes descritas.
Generalmente, el objetivo de un estudio es evaluar la biodiversidad de un hábitat sin emplear

técnicas de cultivo, ni observar células. Con este objetivo, se han aislado y caracterizado
genes específicos como medida de la biodiversidad de la comunidad microbiana. Como los
genes específicos están ligados frecuentemente a organismos específicos la detección del
gen implica la presencia del organismo.
Las principales técnicas en este tipo de análisis microbiano son:
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y análisis de la comunidad microbiana.
Electroforesis en gel desnaturalizante en gradiente (DGGE): Separación de genes similares.
Clonación molecular
Secuenciación y análisis de ADN

III. MEDICIÓN DE LA ACTIVIDAD MICROBIANA EN LA

NATURALEZA
Cualquier medición de la actividad microbiana (reducción de sulfato, fotosíntesis, respiración
etc.) en una muestra natural es una estimación colectiva del conjunto de la comunidad
microbiana.
Radioisótopos
Microelectrodos
Isótopos estables
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
https://www.academia.edu/15080964/M%C3%A9todos_en_ecolog%C3%ADa_microbiana?auto=download
https://es.wikipedia.org/wiki/Ecolog%C3%ADa_microbiana
file:///C:/Users/Alexander/Downloads/148-289-1-SM.pdf
https://www.google.com.pe/search?q=METODOS+EMPLEADOS+EN+ECOLOGIA+MICROBIANA&rlz=1C1NHXL
_esPE720PE720&oq=METODOS+EMPLEADOS+EN+ECOLOGIA+MICROBIANA&aqs=chrome..69i57.11039j0j7&
sourceid=chrome&ie=UTF-8#q=+ECOLOGIA+MICROBIANA

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FLORES CALCINA VICTOR

HUANCA LLACHO ABEL

La 'ecología microbiana' es la rama de la ecología que estudia a los microorganismos en su ambiente

MÉTODOS EN ECOLOGÍA MICROBIANA

La biodiversidad, es decir que MOs y en que numero se encuentran en un

Medir la actividad de los microorganismos en la naturaleza y controlar sus efectos en

Esto se puede llevar a cabo realizando las siguientes actividades:

I. ANÁLISIS DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS BASADOS EN

En un ambiente natural no es frecuente encontrar un solo tipo de microorganismo. Lo que

TECNICA DEL CULTIVO DE ENRIQUECIMIENTO.

El cultivo de enriquecimiento suele establecerse sembrando el inóculo directamente en un

Tradicionalmente, la columna de Winogradsky se ha utilizado en el cultivo de enriquecimiento

El nombre corresponde al famoso microbiólogo ruso Sergei Winogradsky, quien utilizó la

La columna de Winogradsky es un ecosistema anóxico en miniatura, que puede usarse como

La columna de Winogradsky se prepara con un cilindro de vidrio grande que se llena

En una columna de Winogradsky típica se desarrolla una mezcla de organismos.

Las algas y cianobacterias ocupan rápidamente la parte superior y al producir O2 ayudan a

El proceso de descomposición en el sedimento lleva rápidamente a la producción de ácidos

Aunque el cultivo de enriquecimiento es una herramienta poderosa, en muchos casos se

En los cultivos líquidos de enriquecimiento típicos, el organismo más adaptado a las

Desgraciadamente, el organismo mejor adaptado en los cultivos de laboratorio a menudo es

El sesgo en el enriquecimiento puede demostrarse cuando se comparan los métodos de

La dilución del inóculo seguida de un enriquecimiento a menudo da lugar a un organismo

AISLAMIENTO EN CULTIVO AXÉNICO

Los cultivos axénicos (o puros) se pueden obtener de muchas maneras a partir de un

SIEMBRA EN PROFUNDIDAD Y NÚMERO MÁS PROBABLE

El método de siembra en profundidad consiste en la dilución de un cultivo mixto en tubos de

Es un método de gran utilidad para purificar determinados tipos de microorganismos

Es posible obtener cultivos axénicos mediante diluciones sucesivas de una suspensión de

Un procedimiento similar sin usar agar es la dilución seriada de un inóculo en un medio

La observación microscópica de un solo tipo morfológico de célula, junto con unas

CULTIVOS AXÉNICOS DE ALTA TECNOLOGÍA: LAS PINZAS DE LÁSER

La tecnología de pinzas de láser es especialmente útil para el aislamiento de bacterias de

II. ANÁLISIS MOLECULAR DE LAS COMUNIDADES MICROBIANAS

PCR: RELACIONANDO GENES ESPECÍFICOS CON ORGANISMOS ESPECÍFICOS.

A.- VIABILIDAD Y CUANTIFICACIÓN MEDIANTE TÉCNICAS DE TINCIÓN

Tinción Fluorescente con DAPI.

Proteína fluorescente verde para el etiquetado celular.

Tinción Fluorescente con DAPI.

Dependiendo de la muestra, la tinción con colorantes fluorescentes no específicos puede

La gran especificidad de los anticuerpos frente a los constituyentes de la superficie de un

El método requiere la preparación de anticuerpos específicos contra los organismos que

Sin embargo, para el caso de microorganismos de importancia clínica, se dispone

4.-Proteína Fluorescente Verde para el Etiquetado Celular:

TINCIÓN FILOGENÉTICA CON HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE IN SUTU (FISH,

TINCIÓN DE CROMOSOMAS Y TRANSCRIPCIÓN INVERSA IN SITU.

TINCIÓN FILOGENÉTICA CON HIBRIDACIÓN FLUORESCENTE IN SUTU (FISH,

Los colorantes filogenéticos son oligonucleotidos fluorescentes complementarios en la

TINCIÓN DE CROMOSOMAS Y TRANSCRIPCIÓN INVERSA IN SUTU

La tinción de cromosomas se emplea para identificar genes específicos de la microbiota de

La tinción de cromosomas se inicia con el marcado fluorescente de una sonda de

A diferencia de la técnica anterior, la transcripción inversa in situ, busca si un organismo está

Finalmente, el ADN amplificado reacciona con una sonda fluorescente.

C. PCR: RELACIONANDO GENES ESPECÍFICOS CON ORGANISMOS ESPECÍFICOS.

Muchos estudios en ecología microbiana no necesitan aislar los microorganismos, ni siquiera

Generalmente, el objetivo de un estudio es evaluar la biodiversidad de un hábitat sin emplear

Las principales técnicas en este tipo de análisis microbiano son:

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y análisis de la comunidad microbiana.

Electroforesis en gel desnaturalizante en gradiente (DGGE): Separación de genes similares.

Secuenciación y análisis de ADN