INTRODUCCION

La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es

una técnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los
estudios microbiológicos de las bacterias. Fue diseñada por Christian
Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era
conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes
grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La
prueba resultó todo un éxito y pronto se convirtió en una técnica muy
útil no solo para el estudio de las bacterias, sino también para poder
identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar el antibiótico
más adecuado para tratarla.
La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra
de cualquier origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente
contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tiñen la pared de
las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un
lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante
permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer
caso permanecería el color morado, y se trataría de bacterias Gram
positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y serían
Gram negativas.

Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la
clasificación de la amplía mayoría de las bacterias. Cada uno de los
grupos responde de forma diferente a cada tipo de antibióticos, por
eso es una técnica útil para seleccionar el fármaco antimicrobiano
inicial ante una infección. Hay que tener en cuenta que en ciertas
situaciones (como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento
antibiótico adecuado de forma precoz, por eso la tinción de Gram se
pide de urgencia en muchas ocasiones.
La tinción de Gram también tiene ciertas limitaciones. Algunas
bacterias no tienen pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se
podrán identificar, al igual que los virus. En esos casos la tinción no
coloreará ningún germen. Otro aspecto negativo de la prueba es que
no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la
infección. Para ello es necesario realizar un cultivo microbiológico
que se acompaña siempre de un antibiograma para estudiar de forma
exacta el antibiótico más efectivo

OBJETIVOS GENERALES

● La comprensión de la tinción Gram y su utilidad en la

microbiología haciendo uso de técnicas y métodos para la
identificación de bacterias.

● Conocer la técnica correcta sobre la preparación de un frotis de

tinción.

● Objetivo principal diferenciar las bacterias Gram negativas y

Gram positivas.
FUNDAMENTO TEÓRICO

Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta

(colorante básico), lugol (mordiente), alcohol cetona (decolorante) y
safranina (colorante de contraste).
El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared
celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la
unión del colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la
estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el
complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el
decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan de
color púrpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas
pierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante
debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared
celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como
resultado la pérdida del complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias
decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la
cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio.
PARTE EXPERIMENTAL

• Materiales:

➢ Muestra de agua
contaminada
➢ Glicerina
➢ Acetona
➢ Lugol
➢ Safranina
➢ Cristal violeta
➢ Tubos de ensayo de 5 ml
➢ 4 pipetas Pasteur
➢ Portaobjetos
➢ Cubreobjetos
➢ Microscopio
➢ Papel toalla
➢ Guantes y cubre boca
● Procedimiento

➢ Recoger muestra de agua contaminada, tomar una alícuota

con pipeta Pasteur y extender sobre un portaobjetos y
fijarlas con un mechero.

➢ Fijar la muestra con metanol durante un

minuto o al calor (flameando tres veces) y
luego agregar cristal violeta y esperar un
minuto, enjuagar con agua no directamente
sobre la muestra.
 Se agrego lugol y esperar un minuto, limpiamos con agua
no directamente sobre la muestra y le agregamos alcohol
acetona y esperar 5 y 30 segundos según la concentración
del reactivo y enjuagar con agua.

➢ Tinción de contraste agregando safranina y esperar un minuto, este

tinte dejara de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
➢ Al finalizar se limpio levemente con agua y agregar una gota de
glicerina y cubrir con el cubreobjetos y observar en el microscopio.
RESULTADOS
DISCUSIÓN

➢ En esta experiencia pudimos observar que con la de

tinción de Gram ( diferencial) facilita la diferencia de una
bacteria gran positiva y Gram negativa realizando cada uno
de los pasos fundamentales que nos facilitan tener un buen
resultad teniendo en cuenta que para que se de este tipo
de tinción la pared bacteriana de peptidoglucano de las
bacterias juega un papel importante ya que esta nos
permite diferenciar el tipo de bacteria al momento de teñir
la célula utilizadas en el laboratorio ya que en el momento
de teñir su estructura gruesa o delgada de la pared permite
que la célula quede incolora o con color.
➢ Para observar las preparaciones en el microscopio óptico
siempre tenemos que realizar de forma correcta todos los
pasos para tener un buen enfoque de nuestra muestra.
➢ Existen dos tipos pared celular en bacterias, que se
diferencian en la tinción de Gram la Gram positiva mono
estratificada gruesa, Gram negativa pluriestratificada y
delgada / multicapa.
CONCLUSIÓN

➢ En conclusión las bacterias Gram (+) y las Gram (-) fueron

observadas de manera correcta en el microscopio y así
logramos diferenciarla según su color roja en las que son las
Gram (-) y azul en las Gram (+) de la muestra de agua
contaminada.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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