Megacariograma

Como se hace recuento de plaquetas en equipo automatizado y metodología manual ( 2 modalidades: por
cámara de neubauer y por lamina)
EQUIPO AUTOMATIZADO
La mayoría de estos instrumentos son totalmente automatizados, es decir las mediciones se realizan a partir de sangre
entera sin necesidad de que el operador la diluya en forma manual. En efecto, con el fin de garantizar un manejo seguro,
la mayoría de los instrumentos cuenta con dispositivos que atraviesan la tapa del tubo de colecta de sangre, de modo
que el operador no tiene que quitarla. También es común que los instrumentos mezclen las muestras de sangre antes
de que las mismas sean incluidas en el análisis.
Los contadores de sangre automatizados, como cualquier otro instrumental de laboratorio, deben ser manejados de
manera apropiada. Esto requiere que sean totalmente calibrados y que el desempeño sea monitoreado tanto por el
control de calidad interno como por los PEEC. Por último, debido a que el mercado evoluciona muy rápido, es
necesario entender cómo se evalúan los nuevos instrumentos o, al menos, entender críticamente las evaluaciones
emprendidas por otros usuarios.
Plaquetas
Estas células pueden contarse sobre la misma dilución de sangre entera usada para el recuento de eritrocitos. Hay, por
lo general, un umbral superior para eliminar pequeños eritrocitos y un umbral inferior para discriminar del ruido
electrónico y los restos celulares. Estos umbrales simples son adecuados, siempre y cuando el instrumento tenga flujo
laminar, y vale tanto si se usa apertura-impedancia como dispersión de luz para su detección. Sin embargo, si no se
usa flujo laminar –opcional para los contadores de apertura-impedancia y obligatorio para contadores de dispersión de
luz– hay demasiado solapamiento entre las señales de ruido o los residuos y la de los eritrocitos pequeños para que el
recuento sea efectivo, entre los umbrales inferior y superior. Bajo estas circunstancias es necesario ajustar una curva
de distribución teórica al histograma de volumen de plaquetas y extrapolar el recuento de plaquetas a partir del área
bajo la distribución teórica.
Recientemente, se han ampliado los diferentes tipos de métodos empleados por los distintos fabricantes. Estos nuevos
sistemas han sido importantes porque se sabe que el recuento de plaquetas con un solo parámetro tal como la
impedancia, tiene una tendencia a sobreestimar el recuento verdadero de plaquetas, que es importante en las
trombocitopatías y en el manejo de pacientes trombocitopénicos.
Eritrocitos y plaquetas
Los eritrocitos y plaquetas son contados en un canal exclusivo dedicado, que utiliza como método de detección la
impedancia o corriente directa combinada con la tecnología de enfoque hidrodinámico. De esta forma se superan los
retos en el conteo celular tales como la coincidencia o recirculación y unos discriminadores automáticos separan las
dos poblaciones celulares.
Aún en muestras de concentraciones extremadamente bajas o inusualmente altas, el sistema de Sysmex analiza
eritrocitos y plaquetas con gran precisión y exactitud
POR CÁMARA DE NEUBAUER
El recuento de plaquetas mediante cámara consiste en determinar el número de trombocitos presentes en un volumen
determinado de sangre diluída. Se lisan los hematíes y se evita el agregamiento plaquetario para facilitar su
visualización y recuento. La muestra de sangre se diluye lo suficiente para que estén separadas unas de otras y así
poder contarlas. El recuento se realiza en una cámara de Neubauer o similar de dimensiones conocidas.
La profundidad de la cámara es de 0,1 mm. Los cuadrados de las esquinas miden 1 mm2 de superficie y están
subdivididos en 16 cuadrados más pequeños de 0,25 mm de lado. El cuadrado del centro está dividido en 16 cuadrados
de 0,2 mm de lado y éstos a su vez están subdivididos en 16 cuadrados de 0,05 mm de lado.

Recuento de plaquetas en cámara de Neubauer

En el recuento de plaquetas se emplean líquidos de dilución que lisen los hematíes y que impidan la agregación
plaquetaria. Uno de los líquidos diluyentes que se pueden usar es la disolución de 1 gramo de oxalato amónico en 100
ml de agua destilada.

Los valores de referencia en el recuento de plaquetas son de 150-400 Gigaplaquetas por litro (Gl/L) para hombres y
mujeres. O lo que es lo mismo, 150000-400000 plaquetas/mm3. Cuando los valores son superiores a los de referencia
estamos ante una trombocitosis. Y si son inferiores estaremos ante una trombocitopenia/trombopenia.

Material
 Pipeta de 2 ml
 Micropipeta automática de 20 microlitros
 Puntas de micropipeta
 Guatis
 Cubreobjetos
 Cámara de Neubauer
 Tubo de ensayo
 Cristalizador
 Capilares de vidrio
 Microscopio óptico
Reactivos
 Sangre anticoagulada con EDTA
 Líquido diluidor de plaquetas
 Agua desionizada
Técnica
1. Con una pipeta echar en un tubo de ensayo 2 ml de líquido diluidor de plaquetas.
2. Con la micropipeta automática de 20 microlitros retirar dicho volumen del tubo de ensayo.
3. Echar 20 microlitros de sangre anticoagulada homogeneizada en el tubo, haciendo un factor de dilución de
1/100.
4. Homogeneizar bien la mezcla.
 5. Poner el cubreobjetos sobre la cámara de Neubauer.
6. Cargar la cámara, por capilaridad, con la micropipeta automática.
7. Incubar durante 15 minutos en una cámara húmeda.
8. Observar al microscopio óptico, realizando un recuento de plaquetas dentro del cuadrado central. De los 16
cuadrados medianos que componen el cuadrado central elegiremos 5 al azar. De cada cuadrado mediano
elegido leeremos 4 cuadrados pequeños, haciendo una lectura total de 20 cuadrados pequeños.
Resultado
Se leyeron los 20 cuadrados pequeños de los cinco cuadrados
medianos. Es conveniente tener cuidado al contar las plaquetas
que están en contacto con las rayas que delimitan los cuadrados.
Si una plaqueta está en contacto con las rayas superior y derecha,
entonces se cuenta. En cambio, si está en contacto con las rayas
inferior e izquierda, no se cuenta.

Cinco cuadrados elegidos para leer dentro del cuadrado grande

central de la cámara de Neubauer.Lectura de los cinco cuadrados
medianos seleccionados con anterioridad. Cada uno de ellos posee 16
cuadrados pequeños, de los que se leen 4.

Los conteos fueron los siguientes: 3, 2, 3, 4 y 10 haciendo una suma

de 22 plaquetas en esos 20 cuadrados pequeños. El cálculo consiste en una simple regla de 3, si hay 22 plaquetas en
20*(0,05*0,05*0,1) mm3, en 1 mm3 habrá X plaquetas. La resolución de esta regla de 3, una vez despejada la X, es de
4400 plaquetas/mm3 diluídas.
Esa cifra hay que multiplicarla por la inversa del factor de dilución
(1/100), es decir, 4400*100 = 440000 plaquetas/mm3 o, lo que es lo
mismo, 440 Gp/L.

Incubando las cámaras de Neubauer en un cristalizador con papel de

filtro empapado en agua desionizada.Incubando el líquido diluidor con
los 20 microlitros de sangre de la muestra problema.Recuento de
plaquetas en cámara de Neubauer.

Interpretación de los resultados

Los valores de referencia son de 150000-400000 plaquetas/mm3. La cifra obtenida en la práctica es superior a ese
rango de valores, por tanto estamos ante
una trombocitosis.
Observaciones
Los recuentos de células mediante cámara
de recuento, o hemocitómetros, son
técnicas con un elevado margen de error,
especialmente en el recuento de hematíes
donde puede llegar a ser del 20%. En
determinadas circunstancias el error puede
ser incluso mayor (vejez de la muestra,
muestra de sangre con coágulos, material
sucio, mala calibración de pipetas, etc.)

POR LÁMINA
El recuento de plaquetas consiste en la determinación del número de trombocitos en un determinado volumen de
sangre.
En un frotis, el recuento se realiza contando los trombocitos presentes en varios campos, aunque también se puede
llevar a cabo utilizando cámaras de recuento o con contadores electrónicos de células.

Este estudio también permite el estudio de la morfología plaquetaria.

Las plaquetas son los pequeños puntos violetas.

MATERIAL NECESARIO
 Microscopio

 Dos portas limpios

 Pipeta pasteur y chupete

 Agua destilada

Material necesario:

-Papel de filtro.

-Papel.

-Bolígrafo.

-Cristalizador.

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

Muestra utilizada:
Frotis de sangre venosa anticoagulada con EDTA o frotis de sangre capilar obtenida con un capilar heparinizado.

Una vez realizado el frotis debemos teñirlo con un método de tinción tradicional, por ejemplo: el Panóptico rápido.

Objetivos de la práctica:
-Decir cuántas plaquetas por campo microscópico hay, en condiciones normales, en una zona de un frotis sanguíneo
,donde los eritrocitos no están superpuestos.

REACTIVOS
 Tinción de panóptico rápido

 Aceite de inmersión

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
 Realizamos la extensión sanguínea

 Teñimos con panóptico rápido

 Lavamos la muestra con agua destilada y dejamos secar.

  No ponemos cubre al portaobjetos y añadimos una gota de aceite de inmersión para observar
la muestra al microscopio óptico.

3. Contar el número de plaquetas presentes en 10 campos microscópicos.

4. Calcular la media del número de plaquetas contadas en los 10 campos microscópicos.

Cálculos:

Para cuantificar de forma aproximada el número de trombocitos comprendidos en 1 mm cúbico

de sangre, se aplica la siguiente fórmula:

PLT / mm cúbico = PLT / C x 20.000

PLT / mm cúbico = Número de plaquetas por mm cúbico de sangre.

PLT / C = Media del número de plaquetas contadas en varios campos microscópicos (en este caso, en 10 campos
microscópicos)

20.000 = Es el número de campos que equivaldrían a 1 mm cúbico de sangre.

PLT / mm cúbico = (7 + 8 + 11 + 6 + 12 + 10 + 8 + 15 + 7 + 9) / 10 x 20.000 = ( 93 / 10 ) x 20.000 = 9,3 x 20.000 =

186.000 trombocitos.

Resultados obtenidos:

-Número de plaquetas contadas en 10 campos microscópicos:

En total 93 plaquetas.

-Media del número de plaquetas contadas en 10 campos microscópicos (PLT / C):

La media de plaquetas es 9,3 porque hay 93 plaquetas en 10 campos microscópicos.

-Número de plaquetas por mm cúbico de sangre (PLT /mm cúbico):

Hay 186.000 plaquetas por mm cúbico de sangre.

Interpretación clínica de los resultados:

Cuando se observa un frotis sanguíneo con el objetivo de inmersión, en condiciones normales, debe haber de 5 a 25
trombocitos por campo.

El valor normal de plaquetas está comprendido entre 130.000 y 400.000 plaquetas / mm cúbico de sangre.

Cuando el número de plaquetas por mm cúbico de sangre es inferior a 130.000, se dice que hay
una trombocitopenia o trombopenia, y , cuando es superior a 400.000, se dice que hay una trombocitosis.

En nuestro caso hemos encontrado 186.000 plaquetas, por lo tanto, se encuentra entre los valores normales.

Valoración de los resultados:

El PLT / mm cúbico obtenido implica que el sujeto tiene:

Un número de plaquetas normal.

Resolución de los objetivos propuestos:

-En condiciones normales hay de 5 a 25 plaquetas por campo microscópico.

OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO

 Observamos que la muestra es muy rica en plaquetas, por lo que el conteo va a ser
un poco más complejo.
 Contamos las plaquetas que hay presentes en 10 campos microscópicos.
RESULTADO
Al realizar el recuento hemos contado alrededor de 60 plaquetas en un sólo campo, por lo
que la muestra refleja un dato de trombocitosis.