Biochemistry test report

Angie A. Carreño, y María F. Bejarano.

Estudiantes del programa de Biología Aplicada, Facultad de Ciencias Básicas y Aplicadas, Universidad
Militar Nueva Granada. u0501023@unimilitar.edu.co; u0501035@unimilitar.edu.co. Fecha de entrega: 4
de abril de 2018

RESUMEN
De acuerdo con la práctica realizada se debe tener en cuenta la importancia de realizar
pruebas bioquímicas en análisis microbiológicos, correspondiente a estos análisis permite
determinar la actividad metabólica de cepas puras de microorganismos (bacterias aisladas).
Estas pruebas facilitan la identificación y clasificación de bacterias y hongos. Teniendo​ ​en​
​cuenta​ ​que​ ​para​ ​un​ ​crecimiento​ ​bacteriano​ ​óptimo​ ​se​ ​requiere​ ​la​ ​implementación​ ​de medios​
​de​ ​cultivo​ ​(con​ ​nutrientes​ ​específicos)​ ​.​ ​En​ ​la​ ​práctica​ ​se​ ​llevaron​ ​a​ ​cabo​ ​siembras​ ​por
agotamiento​ ​ ​en​ ​diferentes​ ​medios​ ​de​ ​cultivo​, ​para​ ​observar​ ​la​ ​afinidad​ ​de un​ ​tipo​
​desconocido​ ​de​ ​microorganismos,​ y correspondiente a esto poder determinar qué tipo de
bacteria se tenía, realizando una​ ​observación​ del​ ​comportamiento​ ​de​ ​los mismos​ ​ante​ ​la​
​presencia​ ​de​ ​diferentes​ ​sustancias​ ​como​ ​por​ ​ejemplo,​ ​la​ ​posible​ ​producción​ ​de​ ​ácidos grasos​
​por​ ​medio​ ​de​ ​carbohidratos​ ​(glucosa)​ ​o​ ​la​ ​posible​ ​reducción​ ​de​ ​nitratos​ ​por​ ​la​ ​acción​ ​de
algunas​ ​bacterias.​ ​Estos​ ​métodos​ ​permitieron​ ​descartar​ ​la​ ​presencia​ ​por​ ​ejemplo​ ​de​ ​E.​ ​Coli​ ​en​
​las muestras​ ​desconocidas​ ​(crecimiento​ ​en​ ​EMB)​ ​y​ ​habilitar​ ​la​ ​posibilidad​ ​de​ ​que​ ​algunas​
​bacterias utilizadas​ ​podrían​ ​reaccionar​ ​químicamente con ​los diferentes medios de cultivo
​como​ ​por​ ​ejemplo la​ ​producción​ ​de​ ​ácidos​ ​grasos​ ​a​ ​partir​ ​de​ ​carbohidratos​ ​(cambio​ ​de​ ​color​
​rojo​ ​a​ ​amarillo​ ​en​ ​el​ ​tubo​ ​de ensayo).
PALABRAS CLAVES ​Medio​ ​de​ ​cultivo​ ​selectivo,​ ​actividad metabólica,​ ​aislamiento. ​
ABSTRACT
In accordance with the practice carried out, the importance of carrying out biochemical tests in
microbiological analysis must be taken into account, corresponding to these analyzes allows
to determine the metabolic activity of pure strains of microorganisms (isolated bacteria).
These tests facilitate the identification and classification of bacteria and fungi. Bearing in
mind that for optimal bacterial growth the implementation of culture media is required ( with
specific nutrients.) In practice, plantings were carried out due to exhaustion in different media
Of culture, to observe the affinity of an unknown type of microorganisms, and corresponding
to this being able to determine what type of bacterium was had, making an observation of the
behavior of the same in the presence of different substances such as, for example, possible
production of fatty acids by means of carbohydrates (glucose) or the possible reduction of
nitrates by the action of some bacteria. ​These methods allowed to rule out the presence, for
example, of E. Coli in the unknown samples (growth in EMB) and enable the possibility that
some bacteria used could react chemically with different culture media as per Example the
production of fatty acids from carbohydrates (change from red to yellow in The test tube).
KEYWORDS ​Selective culture medium, metabolic activity, isolation.
 1. Introducción en la investigación aislada de
microorganismos para la identificación de
La aplicación del reconocimiento de los mismo y por ende la clasificación
microorganismos es importante para (Vizcarrondo ​et al​,2002).
determinar la influencia que estos tienen
en relación al ser humano.Las pruebas En el proceso de identificación se utilizan
bioquímicas permiten identificar distintas distintos métodos con el objetivo de
características fisicoquímicas que es de identificar el agente microbial establecido
mayor importancia para la clasificación para la diferenciación y clasificación, los
microbial en el aspecto morfológico y cuales se dividen en tres importantes que
metabólico de los microbios.Dependiendo son los métodos fenotípicos
del tipo de cultivo, reactivo de tradicionales,métodos moleculares y
identificación y crecimiento bacterial se métodos basados en proteómica.Sin
obtienen distintos resultados.(Olmos ​et embargo los métodos anteriormente
al​,2010). descritos presentan una sub clasificación,
expuesta de la siguiente manera:
La identificación microbiana parte del
conjunto de técnicas y procesos de ● Metodo de identificacion
investigación que establecen la identidad morfologica.
de un organismo, estas técnicas se utilizan ● Metodo de tincion diferencial.
en distintas áreas como la medicina para ● Método de pruebas bioquímicas
diferenciar microorganismos patógenos, ● Método de tipificación con fagos.
industria farmacéutica para establecer ● Método de ensayos serológicos
normas de control de calidad y por último ● Métodos moleculares

Figura 1.​Métodos de identificación bacteriana.

En la identificación fenotípica microbial se
tiene en cuenta características
microscópicas y macroscópicas de manera
que pueda establecer resultados más
cercanos al reconocimiento del
microorganismo. Este estudio fenotípico se
basa en la comparación de las distintas
características observadas con respecto a
microorganismos ya identificados, de
manera que la cercanía al número de
resultados obtenidos con respecto a la
comparación entre los organismos permite
una fiabilidad en la conclusión de la
identificación del organismo que se está
tratando. (Olmos ​et al​,2010). A
continuación se relaciona específicamente
las pruebas bioquímicas tratadas en
laboratorio.
1.1 Pruebas bioquímicas
Las pruebas bioquímicas han sido de gran
importancia en el reconocimiento
microbial pues, estas permiten identificar
el funcionamiento metabólico de los
microorganismos permitiendo así una
clasificación funcional de los
mismos.Estas pruebas han sido
implementadas ampliamente para la
identificación de bacterias, y con respecto
al reconocimiento se obtiene distintos
resultados que varían respecto a la prueba
y al microorganismo ejemplo la
fermentación de azúcares, la presencia de
enzimas la degradación de compuestos, el
crecimiento oxígeno o anoxigénico, la
producción de pigmentos a través de la
intervención con distintos reactivos, etc, de
manera que estas pruebas son eficaces para
dicho reconocimiento. De igual manera la
identificación bacteriana no solo depende
de la prueba sino que también, depende del
tipo de medio o cultivo que se va a utilizar.
1.1.1 Medios de cultivo según su función.
Un medio de cultivo ofrece características
adicionales para el reconocimiento
microbial, dadas los distintos
requerimientos nutricionales que
establecen los microbios para tener un
óptimo crecimiento, obtencion de energia,
fuente de carbono, fuente de nitrógeno,
algunas sales, oligoelementos y agua, se
reconocen distintos tipos de cultivos
(López ​et al,​2003). A continuación se
relaciona los dos grupos de cultivos
generales utilizados en la identificación
microbiana:
a. Medios no selectivos: ​Estos
medios permiten el crecimiento de
distintos tipos de especies
bacteriana, sin embargo no
Permiten el aislamiento de una sola
especie en específico a partir de
muestras con un gran número de
microorganismo, entre ellos
encontramos el medio de algar de
sangre y el agar de chocolate
(López ​et al,​2003).
Figura 2. ​Agar Biplaca Sangre/Chocolate
 b. Medios selectivos: Estos medios
permiten el crecimiento de
organismos aislados que resultan
importantes para obtener una
muestra pura de dichos
microorganismos, estos medios se
establecen a partir de la adición de
muestras inhibidoras,sistemas
indicadores y tampones que
permiten la identificación
diferencial y, a diferencia de los
medios no selectivos estos
permiten sembrar diferentes tipos
de muestras contaminadas (López
et al,​2003).A continuación se
muestra los principales tipos
medios selectivos diferenciales.
● Agar Mossel.
● Agar Eosina Metil Blue (EMB).
● Agar M.R.S (Man Rogosa Sharpe).
● Agar Vogel-Johnson.
● Agar Cetrimide.
1.2 Tipos de pruebas bioquímicas
Las distintas pruebas bioquímicas sobre
colonias aisladas de bacterias a partir de
los distintos tipos de medios diferenciales
permiten la identificación presuntiva entre
los distintos tipos de microorganismos o
especies bacterianas, además, sin embargo
algunas de estas pruebas requieren de
procedimientos adicionales para la
identificación definitiva del
microorganismos (López ​et al,​2003).Las
distintas pruebas se pueden clasificar por
el tiempo de reacción en la obtención de
resultados:
1.2.1 Pruebas con lectura inmediata.
Otorgan una información preliminar acerca
del microorganismo estudiado:
a. Oxidasa.
b. Catalasa.
1.2.2 Pruebas rápidas con lectura en 6h.
Otorgan una información definida acerca
del microorganismo estudiado:
a. SIM: Sulfuro, Indol y Motilidad.
1.2.3 Pruebas lentas, con lectura de 18 a
48h:
a. Produccion de acidos a partir de
carbohidratos: Lactosa y Glucosa.
b. Reducción de nitratos.
c. Prueba de ADN asa.
d. Prueba de la gelatina
2. Materiales y métodos
Para llevar a cabo la descripción y
observación de medios de cultivo
selectivos se realizó la siembra por
agotamiento de dos colonias de
microorganismos aisladas en cada uno de
los siguientes medios: EMB,
Vogel-Johnson, MRS, Agar nutritivo,
cetrimide y ADNasa). Al transcurrir 8 días,
cada muestra fue comparada con un medio
patron para observar si alguna de las dos
colonias a estudiar tenía afinidad por
alguno de ellos. Con respecto a las pruebas
bioquímicas, de cada microorganismo
aislado se tomó un inóculo y se dispuso en
diferentes tubos de ensayo (prueba glucosa
y lactosa, prueba nitratos y prueba
gelatinasa),se marcó cada tubo y se llevó a
incubar (37°C).Cada prueba a excepción
de gelatinasa se observó su resultado al
pasar 8 días, Para la última prueba
mencionada, se observó el resultado al
pasar 48 horas. Se realizaron dos pruebas
adicionales, Oxidasa y Catalasa, para la
 primera se usaron tiras de marcación, se
depositó un frotis de la muestra sobre la
tira y se observó si ocurría un viraje de
color azul en cada microorganismo. Para la
segunda prueba, se realizó una fijación de
cada microorganismo en un portaobjetos y
se añadió peroxido de hidrogeno,
observando en cada colonia una reacción
de efervescencia (marcada como prueba
positiva ante la presencia)​.
3. Resultados
3.1 Cuestionario
3.1.1 ​Realice un cuadro en el que para cada una de las pruebas bioquímicas realizadas
en clase indique: - nombre de la prueba, -sustrato requerido, -enzima involucrada en la
reacción, -producto generado, -la prueba requiere o no indicador y cuál es, - como se
observa una reacción positiva, -como es la observación negativa, -ejemplos de bacterias
positivas en cada prueba, y -ejemplos de bacterias negativas a la prueba.

Prueba Sustrato Enzima Producto Ind Control (+) Control (-) Ejemplos (+) Ejemplos (-)

Tiras de Citocromo Azul de El color de No cambia P.aeruginosa, E. coli, y todas las

papel C-oxidasa indofenol, la tira de color en Neisseria, enterobacterias
Oxidasa diclorhidr CO2 y agua. No cambia a la zona de Moraxella, anaerobias
ato de azul (+). aplicación. aeromonas, obligados
tetrametil aerobios y
p-fenilend anaerobios
iamina facultativo
1%

Catalasa Peróxido Catalasa o Agua y O2 Formación No hay Staphylococos, Streptococcus,

de peroxidasa No de burbujas burbujas Micrococus, clostridium,
hidrógeno Bacillus, microaerofilicas y
10% Listeria,Corinebac anaerobias.
terium Aerobias y
anaerobias
facultativas

Almidón Amilosa Amilasa Glucosa.Malt Halo blanco Siembra B. Subtilis Escherichia Coli
+ osa y Lugol en la color
Amilopep Dextrinas siembra purpura-cafe
tina

Triptófan Triptofanas Indol, ácido Reactivo El medio el medio se E-coli (movil), son indol negativo:
SIM o a pirúvico y de forma un mantiene bacilos gram Klebsiella
amoniaco, Kovacs anillo de amarillo no neg.entericos pneumoniae
ac.indol o Erlich color rojo, cambia de (inmovil) y
acético, metil rosado ó color enterobacter movil
 indol, buganvilia
sobre el
caldo

Cisteína, Tiosulfato H2S+sales Citrato Precipitado No hay E-coli (movil), Son indol
tiosulfato reductasa, férricas=FeS de negro precipitado bacilos gram negativo:
o grupos cisteina amonio neg.entericos Klebsiella
SH de la desulfurilas férrico pneumoniae
cisteína y a que son (inmovil) y
triptófano sales de enterobacter movil
hierro
presente
s en el
agar.

Gelatina Gelatina Gelatinasas Aminoácidos No Licuefacción No hay S.Aureus Listerina,S

licuefacción epidermidis.

R. Nitratos Nitrato de Reductasa Nitrito Alfa Color rojo o No hay E. coli, P. Acinetobacter
potasio. de nitrato naftilam cafe color stutzeri,
NO​3​- ina y corinebacterium,
ácido Clostridium,
sulfaníli Actynomices
co
(reactivo
Griess)

R. Nitritos Nitrito Reductasa N2 Polvo de No color Color rojo P. fluorescens. Azoarcus

de nitritos zinc Paracocous,
NO​2​− Alcaligenes,
Bacillus

Produccion Glucosa, Glucosidas Ácidos Rojo Cambio de No hay Fermentan No fermentan

de acidos a lactosa, a lactasa orgánicos y fenol color y cambio de lactosa: E. coli, P. lactosa
partir de manosa, manasa CO2 vía burbujas color ni aeruginosa, Salmonella,
CHO manitol. sacarasa oxidativa o x burbujas Klebsiella, Proteus y Shigella.
fermentación Enterobacter. No sacarolítico
Fermenta glucosa: Moraxela
Ecoli, oxida
glucosa P.

ADN asa DNA Desoxirribo Nucleotidos HCL 1N Aclaramient No hay Cocos gram E. cloacae
nucleasa o alrededor cambio en el positivos y
de las medio. bacterias
colonias y patógenas, S.
opacidad en aureus
el resto del
medio
 3.1.2. ¿En qué se diferencia un medio de cultivo Diferencial de uno Selectivo? Dé
un ejemplo de cada uno.

​R/ ​La diferencia entre los dos tipos de medios está dada por el tipo de microorganismo que
se desea estudiar, en el caso de medios de cultivo selectivos permite la proliferación de un
solo tipo de microorganismos e inhibe otros tipos de microorganismos que no se desean
estudiar, no solo se utiliza a modo de seleccionar sino también permite el aislamiento del
microorganismo partiendo de grupos mixtos. Por ejemplo Agar salado-manitol o
Chapman (permite el crecimiento de ciertos estafilococos). En el caso de medios de
cultivos diferenciales estos permiten distinguir entre varios géneros y especies de
microorganismos, aunque en algunos casos también juegan un papel ‘’selectivo’’ porque
solo crecen determinadas bacterias. Un claro ejemplo sería el agar metil blue - eosina que
permite diferenciar E. coli (colonias oscuras y de brillo metálico) de Enterobacter
aerogenes (colonias rosadas de centro azul sin brillo). (​López, 2006​).

3.1.3. ¿Qué características tiene un medio de cultivo Enriquecido y para qué se

utiliza?

​R/ ​A un medio enriquecido se le agregan más nutrientes de lo normal para que bacterias
que están en menor proporción puedan proliferar de manera más rápida y eficaz. Están
compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le puede agregar un
gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero,
líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias
nutricionales. (​López, 2006​).

3.1.4. Según lo observado en cada caja de los medios de cultivo según su función,
defina los términos:

a.Control Negativo

R/ ​Un control negativo es una muestra que se realiza para verificar que el
microorganismo (bacterias) para este caso, no se encuentre en relación con otros
microorganismos, es decir no haya una contaminación en el medio de cultivo, que
permita el crecimiento de otras bacterias externas a la que se desea estudiar.

b.Control Positivo

R/ ​Un control positivo es una muestra o estudio que se realiza para determinar la
presencia de una bacteria en específico, de acuerdo al tipo de medio de cultivo que se
use inhibe o permite el crecimiento de la bacteria. Se dice que la prueba es positiva
cuando la bacteria tiene una reacción como por ejemplo degradación de compuestos
químicos presentes en el medio de cultivo.

c. Control Absoluto

R/ ​Muestra características fisicoquímicas que determinan el metabolismo e

interacción con el medio de acuerdo de un microorganismo en específico, otorgando así
la identificación exacta del mismo.

3.1.5. En el caso de no contar con una cámara de anaerobiosis durante su trabajo

en el laboratorio, ¿cómo podría garantizar condiciones anoxigénicas para el
crecimiento de un microorganismo?

R/ ​El procedimiento análogo al la cámara de anaerobiosis que cumple con la misma

función de otorgar las condiciones óptimas de oxígeno requeridas para el desarrollo de
distintos tipos de organismos (Aerobios y anaerobio), es la adición de aceite al cultivo
líquido de las prueba que requieren reconocer la acción catabólica de distintos
organismos en presencia de oxígeno y en ausencia del mismo. El procedimiento se lleva
a cabo con la inoculación de la muestra del microorganismo puro en el caldo donde
debe desarrollarse distinguiendo del tipo de prueba requerido, luego, se realiza un
duplicado del sembrado y a uno de los cultivos se le adiciona aceite. El aceite tiene la
función de restringir el paso de oxígeno al medio permitiendo solo el desarrollo de
organismos anaerobios.
 3.2​ ​Identificación microbiana de muestra pura de suelo extraída a partir de la
dilución 10​-6​ de la misma muestra por caracterizacion fenotipica .

3.2.1 ​Descripción macro y microscópica de morfotipos obtenidos de muestra de suelo.

MORFOTIPO 1

Descripción macroscópica

Crecimiento circular, colonia plana, lisa,

convexa, cremosa, brillante y blanca no
difusible.

Descripción microscópica:

Bacilococos gram-positivos.

Tabla 1: ​Descripción macro y microscópica de morfotipo 1, obtenido a partir de dilución

10​-6 ​ de muestra de suelo.

MORFOTIPO 2

Descripción macroscópica:

Crecimiento puntiforme, colonia plana,

lisa, seca,opaca y blanca difusible.

Descripción microscópica:

Bacilos gram-negativos

Tabla 2: ​Descripción macro y microscópica de morfotipo 2, obtenido a partir de dilución

10​-6 ​ de muestra de suelo.
 3.2.2 Identificación bacteriana a partir de la selectividad de distintos medios de
cultivo.

Posterior a la identificación macro y microscópica se realizó la siembra de la muestra de

los morfotipos en distintos tipos de cultivos diferenciales, los resultados se muestran a
continuación y las muestras gráficas de lo obtenido se muestra en anexos :

MORFOTIPO 1

Cultivo Clasificación Agentes inhibidores Indicador de pH Bacteria Forma de

control (+) crecimiento (+)

Volgen Diferencial Telurita de Negativa -

Johnson potasio,glicina y Rojo fenol
cloruro de litio.

Mossel Azul de bromotimol Positivo Formación de

Diferencial NA y el azul de timol colonias con viraje
amarillo.

EMB Diferencial Azul de metileno Eosina Negativa -

Cetrimide Selectivo Cetrimida Rojo fenol Negativa -

ADNasa Diferencial NA Ácido clorhídrico Negativo Formación de

colonias blancas sin
formación de halos

MRS Selectivo y Citrato de amonio NA Negativa -

diferencial
Tabla 3. ​Resultados obtenidos en cultivos diferenciables con respecto al morfotipo 2
obtenido en muestra de suelo (10​-6 ​).
 MORFOTIPO 2

Cultivo Clasificación Agentes inhibidores Indicador de pH Bacteria Forma de

control (+) crecimiento (+)

Volgen Diferencial Telurita de Negativo

Johnson potasio,glicina y Rojo fenol -
cloruro de litio.

Mossel Azul de Negativo -

Diferencial NA bromotimol y el
azul de timol

EMB Diferencial Azul de metileno Eosina Negativo -

Cetrimide Selectivo Cetrimida Rojo fenol Negativo -

ADNasa Diferencial NA Ácido Negativo Formación de

clorhídrico colonias blancas sin
formación de halos

MRS Selectivo y Citrato de amonio NA Negativo -

diferencial
Tabla 4. ​Resultados obtenidos en cultivos diferenciables con respecto al morfotipo 2
obtenido en muestra de suelo (10​-6 ​).

3.2.3 Determinación de características metabólicas de los morfotipos obtenidos en

muestra de suela (10​-6​ ​) por medio de pruebas bioquímicas

Morfotip Glucosa Lactosa Catalasa Oxidasa SIM R. Gelatina

o Nitrato
s
I S M

1 Oil (+) Oil (-) (+) (-) (+) (-) (-) (-) (-)
(-) (-)

2 Oil (-) Oil (-) (+) (+) NA (+) (+) (+) (-)
(+) (+)
Tabla 5.​ Representación de resultados de pruebas bioquímicas en morfotipos 1 y 2
extraídas de muestra de suelo.
 3.2.4 Cuadro comparativo de características fenotípicas de los morfotipos obtenidos
en muestra de suelo.
MORFOTIPO 1
BaciloCocos- Gram positivo, resistente a
la polimixina con formación de colonias
blanco- amarillas cerosas, degradadoras de
glucosa en medio aerobio y descomponen
peróxido de hidrógeno en presencia de
agua y oxígeno. No hubo acción de
ADNasa puesto que no se observa la
formación de halos alrededor de la colonia.
Tabla 6. Comparación de característica fisicoquímicas de morfotipos 1 y 2 extraídos
de muestra de suelo.
4. Análisis de Resultados
Para poder determinar el tipo de bacteria
que se obtuvo, se partió por el análisis de
las pruebas bioquímicas realizadas,
correspondiente a esto se es de gran
importancia las reacciones que tienen
dichas bacterias con los medios de cultivo
utilizados en la práctica. Se utilizaron dos
tipos de medios en la práctica realizada
posteriormente, los medios de cultivo
selectivos y los medios de cultivo
diferenciales; los medio selectivos son
sólidos en los que la selectividad
se consigue alterando las condiciones
físicas del medio o añadiendo o
suprimiendo componentes
químicos específicos con el fin de inhibir
el crecimiento de especies químicas cuyo
crecimiento no interesa, estos medios dan
paso a crecimiento de ciertos
microorganismos. Y los medios de cultivo
diferenciales nos permiten distinguir entre
MORFOTIPO 2
Bacilos - Gram negativos, formación de
colonias planas, blancas difusibles,
degradadoras de glucosa y lactosa en
medio anaeróbico. Bacteria móvil de
acuerdo al desplazamiento que se presenta
hacia la superficie, productoras de sulfuro
de hierro. Presentan una reducción de
nitrato a nitrito. No hubo acción de
ADNasa puesto que no se observa la
formación de halos alrededor de la colonia.
varios géneros y especies de
microorganismos. (López et.,al 2006). De
acuerdo a los resultados obtenidos y la
bibliografía consultada el medio de cultivo
Mossel en el que crecen bacterias como
bacillus cereus, dichas bacterias presentan
resistencia a la polimixina presente en el
medio de cultivo. Sin embargo al realizar
el análisis de las tablas de resultados
obtenidas en la diferenciación de ambos
morfotipos, se infiere que en el caso del
morfotipo Nº1 pertenece al género
Staphylococcus pues, según Cervantes
(2014) este género posee características
microbiológicas importantes, destacando
principalmente por ser cocos gram
positivos que en comparación a lo
obtenido en el morfotipo 1. (Tabla 1) se
reconocen bacilo cocos grampositivos, de
igual manera este autor indica que son
bacterias no móviles que concuerda con lo
obtenido en las pruebas SIM de morfotipo
1. (Tabla 5), a aparte relaciona el
metabolismos de este género bacteriano
como anaerobias facultativas de manera
que en relación a lo obtenido en el
laboratorio en la prueba de obtencion de
acidos a partir de carbohidratos en este
caso glucosa un viraje de color al amarillo
lo cual indica positivo para la respiración
aeróbica en relación a la degradación de
glucosa. Por otro lado también se compara
los resultados obtenidos en la prueba de
catalasa (+) que en relación al género
Staphylococcus es aprobada pues estos
microorganismos que poseen catalasa la
cual es una enzima que puede degradar el
peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno
libre observando asi la formación de
burbujas. Por lo general el crecimiento de
bacterias en medios de cultivos de
ADNasa van a generarse, sin embargo esto
no implica precisamente presencia de la
enzima, para determinar dicha acción se
utilizó ácido clorhídrico el cual permitió
observar la ausencia de halos en los medio
de cultivo y por lo tanto descartar la
presencia de desoxirribonucleasa siendo
así prueba negativa para ambos casos.
Con respecto al medio selectivo que
permite la identificación presuntiva de el
microorganismo se especula que el
organismos estudiado (Morfotipo 1.) puede
tratarse de S. aureus. Lo anterior se
sustenta en lo dicho por Seija (2006) que
caracteriza a esta especie como bacterias
Gram negativas lisas, elevadas, brillantes
y de bordes enteros, presentan consistencia
cremosa y pigmentación que va del
amarillo a dorado que en relación a lo
obtenido existe una proximidad elevada en
los resultados. Observando el resultado en
la prueba de mossel se establece que esta
especie es fermentadora de manitol
comprobando así en la demostración
gráfica (Anexo 1).
Sin embargo en comparación a la literatura
observada existen pruebas en las cuales no
se obtuvieron resultados similares a la
predicción del organismo estudiado
ejemplo claro es el resultado en la prueba
de agar ADNasa que se muestra negativo
(Tabla 5.) y en la literatura este resultado
es positivo para S. aureus que muestra una
identificación rápida en la adición del HCL
con relación a la presencia de enzimas
ADNasas en la bacteria estudiada.
Por otro lado en la identificación del
morfotipo Nº2 obtenemos que en relación
a la literatura inferimos que este morfotipo
pertenece a la familia de la
enterobacteriales (Enterobacteriaceae)
pues son bacterias gram negativas que en
relación a lo obtenido (Bacilos gram
negativos) hay una especificidad próxima
en la morfología. En cuanto a las
características fenotípicas esta familia se
relaciona con el morfotipo pues la
descripción obtenida del mismo infiere que
existe formación de colonias planas,
blancas difusibles, degradadoras de
glucosa y lactosa en medio anaeróbico,
bacteria móvil de acuerdo al
desplazamiento que se presenta hacia la
superficie, productoras de sulfuro de
hierro, presentan una reducción de nitrato a
nitrito y en relación a la literatura las
enterobacterias son bacterias gram
negativas, la mayoría bacilos o cocobacilos
son oxidasa negativo,son capaces de
reducir nitrato a nitrito, son anaerobios
facultativos y fermentadores de
carbohidratos en condiciones anaeróbicas
(Puerta et al,2010).
De acuerdo a las características
anteriormente mencionadas es válido
estimar que se está hablando de Klebsiella
pneumoniae ya que esta bacteria presenta
dichas características morfológicas y por
otro lado estudios en donde se realizan
pruebas bioquímicas de la misma arrojan
resultados similares a los obtenidos en la
práctica. Estas bacterias presentan una
resistencia a múltiples antibióticos. La
evidencia actual implica un plásmido como
fuente de los genes que le permiten a la
bacteria ser resistente. Debido a la
producción de enzimas beta lactamasas,
hacen que sean resistentes a agentes beta-
lactámicos. (Gonzales, 2008).
Conclusiones
A partir del aislamiento, identificación y
análisis de la muestra extraída de suelo en
la Universidad Militar Nueva Granada se
logró reconocer los diferentes tipos de
medios de cultivo en relación a la
selectividad de los morfotipos
identificados. Además a partir de la
realización de la pruebas bioquimica se
puede inferir que reconocer el principio
metabólico que distinguieron dos
morfotipos encontrados en muestra de
suelo especulando así la identificación de
S. aureus y Klebsiella pneumoniae.
Entonces el análisis de interpretación de
las pruebas bioquímicas en morfotipos
microbianos es importante pues conforma
la mayoría de sistemas de identificación
que actualmente se usa.
5. Referencias
● González S., Mahecha R., Luján
R(2008) Pruebas Bioquímicas para
enterobacterias.
● Olmos A.,Fuente C., Sáez J.,Ramos
S.(2010) Métodos de identificación
bacteriana en el laboratorio de
microbiología. Procedimientos en
Microbiología Clínica.España.
● Vizcarrondo M., Gutiérrez S.,
(2002) Identificación microbiana.
Cap 12 Identificación microbiana
mediante métodos basados en
sistema de utilización de sustratos,
inmunoensayos y detección
molecular.
● López J.,Castillo F & Salavert M
(2003)Técnicas de identificación.
Cap 3 Microbiología aplicada al
paciente crítico.
● López T., Torres L. (2006) Medios
de cultivo. Facultad de
agroindustrias, Universidad
Nacional del Nordeste.
Microbiología general.
● Cervantes E., Garcia R.,Salazar
P.(2014) Características generales
del Staphylococcus
aureus.Patología clínica y medicina
de laboratorio.México.
● Seija V (2006) Género
Staphylococcus.Etiopatogenia
microbiológica.pp 257-263.
● Puerta A.,Rodríguez F (2010)
Enterobacterias. Medicine.pp
3427-3428
ANEXOS

Se expone la representación gráfica de las pruebas realizadas a morfotipo 1. y morfotipo 2.

extraídas de muestra de suelo diluido 10​-6

Morfotipo 1

Prueba de EMB (-)

Prueba de MRS (-)

Prueba de AC (-)
 Prueba de VJ (-)

Prueba de ADNasa (-)

Prueba mossel (+)

Prueba para lactosa (-)

Prueba para glucosa

medio anaeróbico: (-)
medio aeróbico: (+)
 Prueba gelatinasa (-)

Prueba para nitratos (-)

Morfotipo 2

Prueba de agar Mossel (-).

 Prueba de agar ADNasa.(+)

Prueba de EMB (-)

Prueba de Agar Cetrimide (-)

Prueba en agar MRS (-)

 Prueba de Vogel Johnson.

Pruebas de producción de ácidos a partir de

CHO.
1.(-) Glucosa en medio aeróbico
2. (-) Lactosa en medio aeróbico
3. (+)Glucosa en medio anaeróbico
4.(+)Lactosa en medio anaeróbico

Prueba gelatina (-)

1. Prueba de SIM (+) Motilidad
positiva y Indol positiva.
2. Prueba nitratos (+)