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1. Utilizar técnicas sencillas para extraer el ADN de un tejido animal y vegetal, por el
aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.
RESULTADOS
ANÁLISIS DE RESULTADOS
EsFigura 1
Para extraer el ADN de las células, es necesario romper las membranas y paredes celulares,
acceder al núcleo y destruir su envoltorio nuclear sin causar daño al ADN. Esto se logra
gracias a la acción conjunta de dos soluciones hipertónicas, una de ellas compuesta por
cloruro de sodio y champú (primer tampón) y la segunda, usada para el ADN vegetal, está
compuesta por bicarbonato de sodio, cloruro de sodio y detergente líquido (segundo
tampón). Estas disoluciones rompen las paredes celulares y la bicapa de fosfolípidos de las
membranas plasmáticas, facilitando el estallido de la envoltura nuclear.
La función del segundo tampón es provocar el estallido de las paredes celulares, apoyados
en la solución hipertónica. Por acción del detergente se eliminan los fragmentos proteicos
asociados al ADN vegetal, quedando solamente las hebras de material genético en
suspensión.
El tejido hepático fue escogido debido a su gran densidad celular y porque carece de células
adiposas que puedan intervenir en el experimento. Además de ser la estructura funcional del
hígado, el hepatocito posee algunas funciones como la filtración sanguínea, la
desintoxicación de moléculas nocivas por medio de las enzimas Citocromo P450 y funciona
como la primera barrera de absorción de medicamentos. (Lewis R. 2011)
La cebolla cabezona (Allium Cepa) fue escogida debido a que sus células son de un tamaño
lo suficientemente grande como para obtener una cantidad considerable de ADN de sus
núcleos (Strachan y Read 2006). También, gran parte de sus células se encuentran en
interfase, lo que permite apreciar la cromatina en su máxima condensación.
Se midió el volumen del extracto de ADN animal, y este mismo se tomó para extraer
cloruro de sodio al 2M para crear una disolución 1/1. Al mezclar el cloruro de sodio con el
filtrado de hígado se produjo un cambio de tonicidad en la solución, quedando ésta
hipertónica y forzando a que las estructuras del núcleo aumenten de tamaño y se estallen,
liberando así el contenido de cromatina, dejándola suspendida en la disolución. 1
Cada ingrediente que se utilizó luego, tiene su propia función, la solución de sal y jabón
sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular, y el alcohol
etílico sirve para precipitar el ADN, como se evidencia en la siguiente gráfica:
Los lípidos de la membrana celular se destruyeron debido al detergente, que deshizo las
uniones que mantienen la membrana junta. Cuando el detergente se puso en contacto con
los lípidos, éstos se separaron de la membrana rompiéndola. La estructura de los lípidos es
similar a la del detergente y eso hace que se combinen, formando una burbuja de detergente
y lípidos llamada micela.
A diferencia del ADN vegetal, el ADN animal no requiere centrifugado debido a que los
grandes fragmentos se eliminaron mediante las filtraciones y las micelas de prótidos
formadas con el detergente, quedando el ADN listo para ser extraído y observado.
Al separar prótidos y lípidos del ADN, las fibras de cromatina quedaron libres para ser
extraídas y observadas, para ello se utilizó un método de separación donde se utilizó
alcohol al 96% buscando que, cuando el ADN se encuentre con el alcohol, se desenrolle y
precipite en la interfase entre el alcohol y el agua. El alcohol permite visualizar de mejor
manera el ADN y separarlo de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la
solución acuosa (Karp, 2007). El alcohol, al entrar en contacto con la cromatina, pasa de
una coloración rojiza a un amarillo pálido y, con ayuda de un agitador, se revuelve para
facilitar el contacto entre el alcohol y el ADN.
Luego de un reposo de 10 minutos, se observó que la interfase entre las capas se cubrió de
una espuma amarilla clara, esta espuma podía ser recolectada con el agitador formando un
copo donde estaba contenido el ADN.
El ADN es una molécula polar, pero la reacción con el etanol a muy baja temperatura hace
que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formándose un precipitado justo entre la capa
con etanol líquido y la capa con el extracto pues el ADN es el único componente de la
solución que no es soluble en el etanol (T.F. Lee, 2000).
La cromatina se hace visible porque las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al
precipitar debido a la acción de fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del
extracto y por eso flota sobre la capa del extracto (De Robertis, 2004).
Para facilitar el sedimento de los fragmentos celulares más grandes hacia el fondo, se
realizó el centrifugado de la disolución de ADN vegetal y el tampón a 1500g durante 5
minutos. El ADN, por su bajo peso molecular, quedó suspendido en el sobrenadante. Al
entrar en contacto lentamente con alcohol al 96% se observaron dos capas, el alcohol arriba
y el material que contiene ADN abajo. Al cabo de unos segundos se observó una banda
blanca en la interfase de los líquidos, esta banda de fibrillas blancas era la prueba de que se
extrajo material genético. La banda puede ser removida con un agitador y adquiere un color
blanco grisáceo.
Al final de la práctica se obtuvo ADN impuro, ya que, entremezclado con él, hay
fragmentos de ARN. Una extracción minuciosa se realiza añadiendo enzimas que
fragmentan las moléculas de ARN que impiden que la unión de estas al ADN.
CONCLUSIONES
En las fibras de ADN recolectadas se pueden observar sin ayuda de un microscopio las
hebras de cromatina dispuestas en hilos y, utilizando sencillos procedimientos para lograr
acceder al ADN que se encuentra condensado, ocupar la mayor longitud en el menor
espacio.
BIBLIOGRAFIA
JORDE, LYNN B., CAREY J.C., BAMSHAD M.J. (2011) Genética Médica.
Ed. Elsevier.