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Original Artículo

aloesina desde Aloe vera acelera la cicatrización de heridas mediante la modulación de la MAPK / Rho y Smad
señalización vías in vitro y en vivo

Hussain Mustatab Wahedi una , segundo , Minsun Jeong segundo , Jae Chae Kyoung segundo , Seon Do Gil do ,
Hyeokjun Yoon F , Sun Kim Yeou segundo , re , mi , *
una Departamento de Bioquímica, Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Quaid-i-Azam, Islamabad, Pakistán
segundo Universidad de Farmacia, Universidad Gachon, # 191, Hambakmoero, Yeonsu-gu, Incheon 21936, República de Corea
do Bienestar I + D Centro, Univera, Inc., Seúl, República de Corea
re Gachon Instituto de Ciencia Farmacéutica de la Universidad Gachon, # 191 Hambakmoe-ro, Yeonsu-gu, Incheon 21936, República de Corea
mi Gachon Médico Instituto de Investigación, Gil Medical Center, Inchon 21565, República de Corea
F biológica y Genetic Resource División de Evaluación, Instituto Nacional de Recursos Biológicos, Hwangyeong-ro 42, Seo-gu, Incheon 404-170, República de Corea

artículo info resumen

Artículo historia: Fondo: Cutánea la cicatrización de heridas es un proceso complejo que implica varios factores de regulación en el nivel molecular. Aloe vera es ampliamente utilizado para el
recibido el 6 de De noviembre de 2 016 Revisado
rejuvenecimiento celular, cicatrización de heridas, y la hidratación de la piel.
6 De febrero de 2017 Aceptado 22 de febrero de
Hipótesis / Propósito: Este estudio tuvo como objetivo investigar los efectos de aloesina de Aloe vera en la curación de heridas cutáneas y mecanismos implicados en la
2017
misma.

Diseño del estudio: Este estudio consistió en tanto in vitro como en experimentos in vivo que implican líneas de células de la piel y el modelo de ratón para demostrar los efectos de
palabras clave: aloesina de curación teniendo en cuenta varios parámetros que van desde la migración de células cultivadas para la curación de heridas en ratones herida.
Áloe piel vera regeneración
Migración Dermis
métodos: Las actividades de las moléculas de señalización Smad (Smad2 y Smad3), MAPKs (ERK y JNK), y las proteínas relacionadas con la migración (Cdc42, Rac1, y α- Pak)
Epidermis
se evaluaron después de aloesina tratamiento en células cultivadas (1, 5 y 10? M) y la piel del ratón (0,1% y 0,5%). También monitoreamos el reclutamiento de macrófagos,

la secreción de citocinas y factores de crecimiento, el desarrollo del tejido, y la angiogénesis después de aloesina tratamiento utilizando análisis y pruebas ELISA IHC.

resultados: Aloesina aumento de la migración celular a través de la fosforilación de Cdc42 y Rac1. Aloesina regulada positivamente la liberación de citoquinas y
factores de crecimiento (IL-1 β, IL-6, TGF β 1 y TNF α) a partir de macrófagos (RAW 264.7) y una mayor angiogénesis en células endoteliales (HUVEC). Aloesina de
tratamiento acelerado tasas de cierre de heridas en ratones sin pelo por la angiogénesis induciendo, la deposición de colágeno y la formación de tejido de granulación.
Más importante aún, aloesina tratamiento resultó en la activación de Smad y MAPK proteínas de señalización que son actores clave en la migración celular, la
angiogénesis y el desarrollo del tejido.

Conclusión: Aloesina aminora cada fase del proceso de cicatrización de la herida incluyendo la inflamación, proliferación y remodelación a través de MAPK /
Rho y Smad vías de señalización. Estos hallazgos indican que aloesina tiene el potencial terapéutico para el tratamiento de heridas cutáneas.

© 2017 Publicado por Elsevier GmbH.

Introducción la inflamación, (2) la proliferación, y (3) la remodelación ( Kondo e Ishida, 2010; Li et al., 2007 ). lesión
cutánea desmantela las capas dérmicas y epidérmicas de la piel y hace que los queratinocitos para
liberar pre-almacenada IL-1
Cutáneo herida La cicatrización es un proceso complejo compuesto de varios y pasos molecular mecanismos. β en el sitio de la lesión, que recluta otros factores de crecimiento y
El proceso de cicatrización de la herida puede ser dividido en tres fases principales, la superposición de: citoquinas ( Murphy et al., 20 0 0 ). Simultáneamente, IL-1 β publicado por queratinocitos atrae
(1) neutrófilos y macrófagos al sitio de la lesión, que son actores clave en las etapas posteriores del
proceso de curación ( Gloria et al., 2005 ). Una vez en el sitio de la lesión, los macrófagos liberan
varias citoquinas reguladoras y factores de crecimiento, a saber, PDGF, TGF β 1, β- FGF, TNF α, IL-1 β, e
abreviaturas: MAPK, proteína quinasa activada por mitógeno; IL-1 β, La interleucina-1 beta; IL-6, La interleucina-6; TGF β 1, IL-6, que ayudan en la fagocitosis y desempeñan papeles importantes en la fase de proliferación de la
Factor de crecimiento transformante beta1; TNF α, Necrosis tumoral Factor alfa; ELISA, Enzyme Linked Ensayos de curación ( Diegelmann y Evans, 2004 ). Entonces,
inmunoabsorción; HUVEC, Human Vena umbilical Células endoteliales.

* Autor correspondiente.

Email dirección: sgildo@univera.com (SY Kim).

http://dx.doi.org/10.1016/j.phymed.2017.02.005
0944-7113 / © 2017 Publicado por Elsevier GmbH.
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la proliferación fase se produce, que es caracterizado por la polarización y la migración de queratinocitos, la (Invitrogen, MA, EE.UU.). Los cultivos se mantuvieron en una atmósfera fi ed humidi a 37 ° C / 5% de CO 2 a menos
proliferación endotelial y la angiogénesis ( Raja et al., 2007 ). los fase de proliferación implica la la que se diga lo contrario.

migración de fi fibroblastos a la zona de la herida, que está mediada por crecimiento factores publicado
por macrófagos, que más tarde se empiezan a incorporar estructural proteínas como el colágeno a
través de TGF β 1 liberado por los macrófagos ( Duncan et al., 1999; Gloria et al., 2005 ). En la última
fase, es decir remodelación, el número de factor de crecimiento y cytokinereleasing Células (Macrófagos
y neutrófilos) y fibroblastos comienzan a fi disminución; sin embargo, fibroblastos continúan para formar
el colágeno, que es el sello de la fase de remodelación ( Barrientos et al., 2008 ).
El tratamiento con compuesto
80% de células confluentes se lavaron dos veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS)
(PAA Laboratories, Pasching, Austria). Para el tratamiento con aloesina, se utilizó un volumen apropiado
de medio libre de suero fresco para diluir la solución madre preparada en sulfóxido de dimetilo (DMSO;
Thermo científico, MA, EE.UU.) para 1, 5, o 10 m. cultivos tratados se incubaron hasta su uso posterior.

Los miembros de la familia Rho GTPasas juegan un papel importante en esencial citoesqueleto los
Western Blot
cambios relacionados con la curación de las heridas ( Abreu-Blanco et al, 2014.; Benink y Bement, 2005;
Wood et Alabama., 2002 ). Rho, Rac1, Cdc42 y, GTPasas de la familia Rho fundamentales, regular distinto funciones
Las células tratadas se recogieron después de 24 h, mientras que las muestras de piel que contiene la
del citoesqueleto de actina durante la célula migración ( Nobes y Hall, 1995 ). proteínas Rho utilizar varios
parte central de la herida se recogieron después de 7 días de tratamiento (una vez cada día) y se lisaron con
aguas abajo señalización de objetivos para regular la organización del citoesqueleto y una Bucle de
tampón de lisis (NaCl 150 mM, 1% NP-40, desoxicolato de sodio al 0,5%, 0,1% de dodecilsulfato de sodio [SDS],
retroalimentación. P-21 quinasas activadas (Paks) son una familia de aguas abajo objetivos de Rac1 y
y 50 mM Tris-Cl). El análisis de transferencia Western se realizó sobre muestras de proteínas extraídas como se
Cdc42. La unión de Rac1 o Cdc42 GTPasas a la p21-dominio de unión (PBD) de grupo I Paks induce autofosforilación
describe en Wahedi et al., 2016 ( Wahedi et al., 2016 )
y la activación de sus funciones como serina / treonina (quinasas Baskaran et al., 2012 ). PAK1 en induce
a su vez Cdc42 activación mediante la formación de un complejo con G βγ y la guanina-nucleótido factor
de intercambio (GEF) PIX α para promover la polimerización de actina y regular PTEN de distribución de
e fi ciente direccional detección ( Li et al., 2003 ). Posteriormente, como MAPK ERK y JNK son activada
Los ensayos de MTT
para jugar papel como reguladores clave de la migración celular durante herida curación ( Zhang et al.,
2014 ). Del mismo modo, la señalización de la Smad vía es crítico para varios aspectos de la cicatrización
Para medir la viabilidad celular, 1 × 10 5 células HaCaT se sembraron en placas de 6 pocillos o placas
de heridas, como el colágeno desarrollo y angiogénesis ( Lin et al., 2016 ).
de cultivo de 40 mm para 24 h. Entonces, DMEM fue reemplazado con 2 ml de 1, 5, o 10? M aloesina en
medios libres de suero. Después de otro 24 h, se aspiró el medio y se añadió 2 ml de solución / ml MTT
500 g a las células. Los cultivos se incubaron a 37 ° C durante 1 h, entonces la solución de MTT se
eliminó y se añadió 1 ml de DMSO. Las placas se agitaron en un agitador orbital durante 30 min y la
absorbancia a 570 nm se midió utilizando un lector de microplacas (Molecular Devices, CA, EE.UU.).

Áloe vera es ampliamente utilizado para celular rejuvenecimiento y la hidratación de la piel. Más Los
estudios son requerida para aclarar los componentes biológicamente activos en A. vera que están
implicados en la renovación celular. Eso tiene sido previamente reportó que A. vera contiene polisacáridos, ácidos
ensayos de migración celular
hidroxicinámicos, varios antronas y cromonas característica, el dímero fenólico feralolide y flavonoides fl.
De ellos, el 5-methylchromones aloesina, aloe-emodina, aloenin, aloerresina A, aloesone, y aloína son el
Monocapas de células HaCaT en cultivo fueron sometidos a heridas de rascar con una máquina de
activo metabolitos secundarios que tienen significativos beneficioso efectos en los seres humanos. En
Herida TM herramienta (Essen Bioscience, Michigan, EE.UU.), y se incubaron durante 24 h en presencia o
particular, aloesina es un aromático C-glucosilada 5-methylchromone encuentra en Aloe vera es decir conocido
ausencia de aloesina en medios libres de suero. IncuCyte ZOOM® (Essen Bioscience, MI, EE.UU.) se utilizó
por poseer actividad antioxidante ( Loots du et al., 2007 ). Además, ha sido reportado para mediar
para capturar imágenes de las células de cada 4 h.
blanquear la piel a través de una reducción de melanina síntesis mediante la inhibición de la actividad
tynosinase, especialmente en Irradiada con UVB de piel ( Choi et al., 2002 ). Ha sido se muestra a disminuir
la glucosa en sangre en un modelo de ratón diabético ( Yimam et al., 2014 ). Sin embargo, en este
ensayo de formación de tubo celular endotelial
estudio tuvo como objetivo dilucidar el efectos de aloesina específicamente en la cicatrización de heridas
cutáneas ( en vivo ) y células de la piel la regeneración y la migración ( in vitro ), y la señalización mecanismos
involucrado en el mismo. Las células endoteliales de vena umbilical humana (HUVECs) se cultivaron en medio M200
(Invitrogen, MA, EE.UU.) y la formación de tubos de ensayo se realizó como se describe en Wahedi et
al., 2016 ( Wahedi et al., 2016 ).

heridas de espesor total y la cuantificación de la curación

SKH-1 ratones sin pelo (5 semanas de edad) fueron adquiridos de Shizuoka Laboratory Animal

Material y métodos Center (Hamamatsu, Japón). la toma de la herida y los experimentos de curación se realizaron como se
describe en Wahedi et al., 2016 ( Wahedi et al., 2016 ).

Célula cultura

HaCaT Células fueron adquirido de la línea celular de Corea del Banco (Seúl Nacional Universidad,
Seúl, Corea). HUVEC y las primas 264.7 fueron comprado en el American Type Culture Collection (Mucho
# 60319874, ATCC, VA, EE.UU.). HaCaT y Raw 264.7 fueron cultivaron en alta glucosa de Dulbecco
modificado ed medio de Eagle (DMEM; Thermo Científica, Massachusetts, EE.UU.) con 10% fetal bovino
suero (FBS) y 1% penicilina-estreptomicina (PS). HUVECs fueron cultivaron en medio M200 (Invitrogen,
MA, EE.UU.) suplementado con 20% de FBS y 1% de suplemento de crecimiento bajo suero
Histología e inmunohistoquímica
Las muestras de piel que contienen la parte central de las heridas se recogieron en diferentes días
después de la formación de la herida y se analizaron como se describe en Wahedi et al., 2016 ( Wahedi
et al., 2016 ) ( tabla 1 ). Para controlar los macrófagos y neutrófilos en filtración, 3 micras de espesor
secciones se inmunorreaccionar con anti-integrina α anticuerpo M (dilución 1: 200, CBL1512Z, Millipore,
Darmstadt, Alemania) y anticuerpo mieloperoxidasa (dilución 1: 200, SC-390109, Santa Cruz
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tabla 1
Criterios para evaluar la puntuación histológica de la cicatrización de heridas.

Puntuación Epidérmicas y dérmicas regeneración el espesor del tejido de granulación

±1 Poco epidérmica y dérmica organización capa de granulación fina

±2 epidérmico moderada y organización dérmica capa de granulación Moderado
±3 la remodelación completa de dermis y epidermis capa de granulación gruesa

±4 capa de granulación Muy grueso

Biotecnología, TX, EE.UU.), respectivamente. Los portaobjetos se incubaron entonces con biotinilado IgG heridas en cultivos monocapa HaCaT y los trataron con aloesina. Las células cultivadas en presencia de

anti-conejo (1: 200) anticuerpo secundario (NCI1460KR, Thermo, Massachusetts, EE.UU.) durante 1 h a aloesina exhiben tasas de migración más rápidos que las cultivadas en ausencia de aloesina ( Figura 2 UNA).

temperatura ambiente. Las láminas fueron entonces visualizadas y las imágenes fueron capturadas con una microscopio
células tratadas con Aloesina mostraron un aumento significativo en la tasa de migración en comparación con

(Olympus, Tokio, Japón). las células no tratadas de una manera dependiente de la dosis en cada punto de tiempo ( Figura 2 SEGUNDO).

También se analizaron los niveles de expresión de ciertas proteínas marcadoras la migración celular (Rac1,

Cdc42, actina, y α- Pak) en grupos aloesina tratados y tratados con vehículo ( Figura 2 DO). La expresión de las
ELISA formas activas unido a GTP de Rac1 y Cdc42 se upregulated por tratamiento aloesina ( Figura 2 RE). Se

observó un aumento similar en la expresión para α- Pak.

Crudo 264.7 murino células de macrófagos (1 × 10 6 ) se sembraron y se adhirieron a una placa de
cultivo de 96 pocillos. Las células fueron tratadas con aloesina (1, 5, y 10! M) o vehículo para 16 h, a
continuación, los sobrenadantes se recogidos para IL-l β, IL-6, TGF β y TNF α análisis usando ELISA kits (I
+ D sistemas MN, EE.UU.). ELISA se realizó de acuerdo con el fabricante instrucciones. Además de proteínas de la ruta de Smad, se analizó la expresión de MAPKs en muestras de piel
de ratón porque MAPKs se sabe que están implicados en la liberación de factores de crecimiento tales
como TGF β 1. El análisis de transferencia Western mostró un aumento general de las formas
fosforiladas de proteínas de la vía MAPK en las muestras de piel aloesina-tratado ( Figura 2 MI). ERK y
Estadístico análisis
JNK fosforilación se aumentó en los grupos de aloesina-tratado ( Figura 2 F), indicando que las dos
proteínas se activan por aloesina tratamiento. Sin embargo, aloesina tratamiento no cambió la
diferencias entre los grupos se determinó usando un análisis unidireccional de diferencia (ANOVA). PAG
expresión de P38, ya sea en fosforilada o en forma no fosforilada ( Figura 2 F). Se observaron patrones
- valores de < 0,05 se consideraron estadísticamente signi fi cativa. Los resultados se presentan como la
similares de expresión de las proteínas MAPK en RAW 264.7 (complementario Fig. 2). Aloesina casi no
media ± estándar error de la media (SEM).
mostró toxicidad después de 24 h de tratamiento, tal como se evaluó mediante un ensayo MTT (Fig
complementario. 3).

resultados

Efectos de aloesina en macrófagos y el reclutamiento de neutrófilos, vía Smad y citoquinas secreción

Efectos de aloesina en la cicatrización de heridas por escisión

A supervisar el reclutamiento de macrófagos y neutrófilos tras aloesina en el tratamiento piel herida, nos secciones
Se investigó el potencial de curación aloesina en un modelo de ratón utilizando ratones sin pelo herida.
inmunoteñidas piel obtenido después de 3 y 7 días de la lesión con alphaM integrina y mieloperoxidasa
ratones sin pelo tratados con vehículo mostraron una tasa más lenta de cierre de heridas y la regeneración
(MPO) anticuerpos ( Figura 1 ). IHC datos mostraron una mayor número de macrófagos en las muestras de
dérmica que los ratones tratados con diferentes concentraciones de solución aloesina durante un período de 10
piel de aloesintreated ratones, especialmente el día 3, que en los controles tratados con vehículo ( Figura 1 A
días ( Fig. 3 UNA). Había significantes diferencias fi cativos en tamaño de la herida entre los grupos de tratamiento
y SEGUNDO). Del mismo modo, cuando inmunotinción con anticuerpos para Mieloperoxidasa (MPO) para
a partir del día 4 después de la lesión en adelante ( Fig. 3 SEGUNDO). Las heridas fueron casi completamente
controlar la actividad de los neutrófilos, la piel aloesina tratados muestras mostraron mayor positividad
cerrados por día 8 en ratones aloesina tratados, mientras que las heridas en los ratones tratados sólo con
MPO que hizo tratado con vehículo muestras particularmente en el día 3 ( Figura 1 C y RE). Nosotros RAW
vehículo no se curaron completamente hasta el día 8. H & E tinción de muestras de tejidos de la piel en diferentes
tratadas 264.7 células de macrófagos con aloesina y monitoreado IL-1β y TNF α niveles usando ELISA.
puntos temporales después de la creación de la herida también mostró más rápido y mejor formación de tejido
Como se muestra en Figura 1 G y H, aloesina tratamiento disminución de la IL-1 β y TNF α los niveles en una
neoepithelium y granulación en grupos aloesina tratados en comparación con los grupos tratados con vehículo ( Fig.
dosis dependiente manera. células tratadas con Aloesina habían aumentado significativamente niveles de
3 DO). Aloesina tratamiento resultó en la generación de la dermis y la epidermis y la reorganización, así como la
IL-6 y TGF β 1 en comparación con células no tratadas.
formación de tejido de granulación significativamente más rápido que lo hizo el tratamiento con vehículo ( Fig. 3 D y MI).

Como es evidente en Figura 1 , Aloesina tratamiento resultó en un aumento de la fosforilación de

Smad2 y Smad3 tanto ( Figura 1 MI). densitometría de (bandas Figura 1 F) mostró que aloesina no alteró
la expresión de Smad2, pero aumentado su fosforilación. Del mismo modo, la expresión de la forma
fosforilada de Smad3 se incrementó significativamente por aloesina tratamiento, mientras expresión de Efectos de aloesina en el desarrollo del tejido de la piel y la angiogénesis

la forma no fosforilada no estaba alterado, lo que indica que aloesina condujo a la activación de estos
dos proteínas. El tratamiento con aloesina, sin embargo, no tuvo alguna efecto sobre la expresión de Se evaluaron los tejidos de la piel de ratones tratados con aloesina o vehículo utilizando tinción

Smad7. El mismo experimento realizado en RAW 264.7 revelaron efectos similares de Aloesina en Smad tricrómica de Masson ( Fig. 4 ). La tinción mostró que el colágeno se ha desarrollado y bien organizado en los

camino proteínas (Fig complementario. 1). grupos aloesina en comparación con el grupo de vehículo, en la que era menos desarrollada y casual, tanto

en el día 5 y el día 10 después de la lesión ( Fig. 4 UNA). La cantidad de deposición de colágeno también fue

significativamente mayor en los ratones aloesina tratados que en los ratones tratados con vehículo en

ambos puntos temporales ( Fig 4 B y DO). Para evaluar el efecto de aloesina en el proceso de angiogénesis,

células humanas umbilicales Vain endoteliales (HUVEC) se cultivaron con o sin diferentes concentraciones

Efectos de aleosin en migración de HaCaT células y MAPKs señalización de aloesina. Las imágenes tomadas

A prueba ya sea aloesina afecta positivamente a la migración de queratinocitos, el cual es un paso crítico

durante la reparación de la herida, se indujo

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Higo. 1. Efecto de aloesina en macrófagos y el reclutamiento de neutrófilos, vía Smad y la secreción de citoquinas. (UNA) la piel del ratón secciones inmunotinción para integrina alfa-M para comprobar el reclutamiento de macrófagos en el día 3 y día 7 después de la herida.
(B) Número de células positivas alfa-M integrina presentado en forma de gráfico en el día 3 y día 7. muestras de piel (C) de ratón inmunoteñidas para mieloperoxidasa (MPO) anticuerpo para monitorear neutrófilos en filtración en el día 3 y el día 7 después de la herida. (D)
número de células positivas alfa-M integrina presentados en forma de gráfico en el día 3 y día 7. (E) Análisis de transferencia Western que muestra el efecto de aloesina en Smad2 y Smad3 la fosforilación y la expresión de Smad7 en muestras de piel. (F) la activación
relativa de Smad2, Smad3 y la expresión de Smad7 por aloesina presentado en forma de gráfico. (G) IL-1 β secreción disminuyó pero IL-6 secreción en RAW 264.7. (H) TNF- α niveles se redujeron mientras que TGF β 1 los niveles aumentaron en la línea celular de
macrófagos murinos RAW 264,7 tras el tratamiento con aloesina. Los valores son medias ± SEM. * p < 0.05, ** p < 0,01 y *** p < grupo de control / 0.001 vehículo VS.

con un microscopio después de 16 h de tratamiento mostró que las células cultivadas en la presencia de aloesina cicatrización de la herida. Por otra parte, una disminución en los niveles de macrófagos y neutrófilos en las
se sometieron angiogénesis más que aquellos tratado con solamente medio libre de suero ( Fig. 4 RE). Este muestras de piel (en el 0,1% aloesina grupo) recogidas en el día 7 promete una mejor, una recuperación
efecto de aloesina estaba dependiente de la dosis, y el grado de angiogénesis fue significativamente mayor más rápida ya que la presencia prolongada de los macrófagos y neutrófilos en el sitio de la herida está
en las células tratadas aloesina que en con vehıculo los controles en todos concentraciones de aloesina ( Fig. relacionado con heridas mal curadas o crónicas ( Simpson y Ross, 1972 ). Los niveles de expresión de
4 MI). Smad2, Smad3, y Smad7, componentes aguas abajo clave de TGF β 1 de señalización también se midieron.
Aloesina proteínas efectoras fuertemente activados de TGF β 1 de señalización ( Figura 1 MI, Figura 2 MI). Es
significativamente aumentó la fosforilación de Smad2 y Smad3 en muestras de piel de ratón, mientras que
no tener mucho efecto sobre la expresión de Smad7 ( Figura 1 F). No se encontraron cambios similares en la
Discusión
familia de proteínas Smad cuando RAW 264.7 macrófagos fueron tratados con aloesina (Fig. S1). Aloesina
tratamiento disminuyó la secreción de IL-1 β y el aumento de la secreción de IL-6 ( Figura 1 MI). También
En la corriente estudio, se demostrado el potencial de curación de la herida aloesina, la natural compuesto
disminuyó la secreción de TNF α y el aumento de la secreción y TGF β 1 en macrófagos murinos ( Figura 1 F).
de A. vera . Aunque aloesina tiene ya sido informado a desempeñar un papel protector en la
Este aumento de TGF β 1 demuestra los efectos positivos de aloesina porque TGF
hiperpigmentación de la piel, la piel la inflamación, la diabetes y las complicaciones cardiacas ( Rendon
y Horwitz, 2012; Yagi y Takeo, 2003; Yimam et al., 2015 ) Pero poco se sabe acerca de sus efectos
específicamente en cutáneo herida curación.

La inmunotinción para integrina alfa-M y mieloperoxidasa mostró ese aloesina tratamiento aumenta
β 1 promueve neoangionesis y re-epitelización durante la cicatrización de heridas ( Kane et al., 1991 ).
el reclutamiento de macrófagos y ambos neutrófilos al sitio de la lesión en la piel del ratón ( Figura 1 ANUNCIO).
Al mismo tiempo, aloesina disminuyó los niveles de TNF- α, que puede promover la cicatrización de
debido a que estos leucocitos son conocidos para desencadenar inflamatoria respuestas de la
heridas; en altas concentraciones, TNF α es perjudicial para el proceso de curación y está asociado
liberación de citoquinas y factores de crecimiento, aloesina parece tener un efecto positivo en la fase
con heridas crónicas ( Wallace y Stacey, 1998 ).
temprana de
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Higo. 2. Efecto de aleosin sobre la migración celular y MAPKs de señalización en las células HaCaT. (UNA) Las células HaCaT tratados con diferentes concentraciones de aloesina. (B) La migración celular HaCaT después aloesina tratamiento durante un período de 8 h. (C)
Expresión y la fosforilación de migración relacionado proteínas (Cdc42, Rac1 y α- Pak) en muestras de tejido de piel de ratón controladas por análisis de transferencia Western. (D) Análisis de la densitometría de Cdc42, Rac1 y α- Pak expresión. (MI) Western blot para
mostrar activación fosforilada de ERK y JNK en muestras de tejido de piel de ratón. (F) la activación relativa de ERK, JNK, y p38 por aloesina representada en forma de gráfico. Los valores son medias ± SEM. * p < 0.05, ** p < 0,01 y *** p < 0,001 vs grupo vehículo.
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Higo. 3. Efecto de aloesina en la cicatrización de heridas por escisión en vivo modelo. (UNA) Representante imágenes de las heridas de vehículo y Aloesina grupos tratados período de más de 10 días después de la herida. (B) Representación gráfica de superficie media de la herida en diferente grupos

de diferentes días después de la lesión. secciones de tejido (C) H & E manchado de la piel en el día 5 y el día 10 después de la curación para comparar generación neoepithelium. (D) de la puntuación histológica epidérmica y dérmica regeneración en días 5 y 10 después de la curación. (E)

puntuación histológica de espesor de granulación en el día 5 y 10 después de la curación. Los valores son medias ± SEM ( n = 10 / grupo). ** p < 0.01, *** p < 0.001 vehículo VS en diferentes puntos temporales.
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Higo. 4. Efecto de aloesina en tejido de la piel el desarrollo y la angiogénesis. (UNA) Masson tricrómico secciones teñidas para mostrar la deposición de colágeno en la piel de ratones tratados con aloesina en días 5 y 10 después de la curación. (B y C) Representación gráfica de colágeno la

deposición en la piel del ratón en el día 5 y el día 10 después de la lesión. (D) Imágenes microscópicas de la formación de tubos en las células endoteliales humanas (HUVEC) para investigar la angiogénesis después de aloesina tratamiento. (E) Número de ramas producidas por las células

HUVEC 16 horas después de aloesina tratamiento trazado en forma de gráfico. Los valores son medias ± SEM. * p < 0,05 y

*** p < 0,001 VS grupo de vehículo.

La migración de queratinocitos es un paso vital durante la proliferación fase de cicatrización de la herida regiones en los bordes delanteros de las heridas. Además, Rac deficiencia puede dar lugar a una cinética de

( Raja et al., 2007 ). Aloesina, bien conocido por su efectos protectores sobre células de la piel, la piel reparación más lentas ( Baek et al, 2012.; Funasaka et al., 2010 ). Los niveles más altos de Rac1 y Cdc42

promovido la migración celular cuando probado en queratinocitos ( Figura 2 A y SEGUNDO). Los fosforilación junto con la regulación positiva de α- Pak en los grupos tratados con aloesina validaron los
queratinocitos mostró una aumento dependiente de la dosis en la migración celular en aloesina tratamiento. hallazgos del ensayo de migración ( Figura 2 DO). grupos tratados con Aloesina mostraron estadísticamente

En acuerdo con los datos anteriores, era aloesina no tóxico para las células en biológicamente activa concentraciones
signi fi diferencias signifi en la expresión y la activación de las GTPasas de la familia Rho y Pak1 ( α- PAK) en
(complementario Fig. 3). Estos hallazgos sugieren que promueve aloesina celular la supervivencia y la comparación con el grupo no tratado ( Figura 2 RE). Además de la señalización Smad, la señalización de MAPK

migración en queratinocitos y no causa ningún citotoxicidad. la reparación del epitelio de la piel se inicia a es también crucial para la cicatrización de heridas, ya que regula la producción y liberación de TGF β 1 a partir
través dinámico citoesqueleto movimientos. la familia Rho GTPasas pequeñas (Rho, Rac, y Cdc42) son representante
de células de la piel y media las señales de la migración celular ( Muthusamy y Piva, 2010 ). El análisis de

reguladores del citoesqueleto que el control herida reparar mecanismos. proteínas Rac se acumulan en transferencia Western mostró que aloesina tratamiento de la piel de ratón resultó en la activación de la

específica
26 HM Wahedi et al. / Phytomedicine 28 (2017) 19-26
MAPK señalización por vía creciente la fosforilación de ERK y JNK ( Figura 2 MI). Esta aumento de la
actividad de ERK y JNK era casi dependiente de la concentración ( Figura 2 F). Sin embargo, la
expresión de p38 no estaba alterado mucho ( Figura 2 F). La expresión de los per fi les de éstos proteínas
eran similar en macrófagos siguientes aloesina tratamiento (Fig. S2). Estas hallazgos sugieren una clara
implicación de Smad y MAPK liberación y la regulación de TGF-señalización mediada
Herida las tasas de cierre de ratones tratados aloesina-eran también significativamente mayor que en ratones
tratados con vehículo en todos los puntos de tiempo de día 4 en adelante durante un período de 10 días ( Fig.
3 A y SEGUNDO). Además de Más rápido herida cierre, promovido aloesina formación neoepithelium en la piel muestras
Diegelmann, RF , Evans, MC , 2004. cicatrización de heridas: una visión general de agudos, fibrótica fi
recogido de aloesina tratados con animales ( Fig. 3 DO). Las tasas más altas de epidérmico y regeneración
dérmica, junto con granulación tejido formación ( Fig. 3 D y E), sugieren un efecto positivo impacto de aloesina en
tejido de la piel tanto en la proliferación y remodelación fases de cicatrización de la herida.
Microscópico análisis mostraron que la grupos tratados aloesina-desarrollaron mayor cantidades de
colágeno con una mejor disposición celular que hizo el grupo tratado con vehículo, en el que menos
colágeno estaba presente y era azar y sin orden ni concierto dispuesto ( Fig. 4 UNA). Esta aumentado colágeno
Kane, CJ , Hebda, Pensilvania , Mansbridge, JN , Hanawalt, ordenador personal , 1991. La evidencia directa de spa-
desarrollo ( Fig. 4 B y C) puede ser atribuible a TGF β proteínas de la vía 1-Smad, ya que son cruciales para
tejidos y colágeno desarrollo ( Park et al., 2016 ). aloesina promovido la formación del tubo endotelial en
cultivaron umbilical humana Vena Células endoteliales (HUVEC), lo que sugiere que acelera angiogénesis
y la recuperación de este modo la herida ( Fig. 4 D y E) a través de la Smad vía ( Lin et al., 2016 ).
Conclusión
En conclusión, nuestros datos muestran que a partir aloesina A. vera promueve la herida sanación a
través participación en varios procesos, incluyendo la migración celular, tejido desarrollo, angiogénesis, y la
liberación de citoquinas. Esta efecto parece ser debido a la activación de la señalización de MAPK y Smad las
vertientes en vivo y in vitro . Nuestro modelo propuesto sugiere ese aloesina tiene un papel curativo de la
curación de heridas. Ser un natural producto con inmensas propiedades de cicatrización de heridas mostraron
en nuestro estudiar, hace aloesina un fuerte candidato a fármaco. Estudios futuros mayo Conducir a aloesina y
sus derivados sintéticos que se utilizan como agentes terapéuticos en el campo de la clínica dermatología.
Los conflictos de interesar
los autores declarar ningún conflicto de intereses.
Reconocimiento
Esta investigación fue apoyados principalmente por el La próxima generación de BioGreen 21 Programa
(No. PJ01118803), rural Administración para el Desarrollo, República de Corea y en parte por la
Compañía Univera (GCU-2015 a 5.040), República de Corea y una subvención de la Instituto Nacional
de Biológico recursos (NIBR), financiado por el Ministerio de Medio Ambiente de la República de Corea ( NIBR201627201
).
Suplementario materiales
Suplementario material asociado con este artículo se puede encontrar, en el en línea versión, por
lo doi: 10.1016 / j.phymed.2017.02.005 .
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