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Resumen
Palabras clave
Introducción
En los últimos años, ha habido una tendencia creciente hacia una utilización más
eficiente de los subproductos agroindustriales para la conversión a una gama de
productos biológicos de valor agregado. Además, el bioprocesamiento de estos
residuos puede ayudar a resolver los problemas ambientales asociados con su
eliminación. Por lo tanto, la exploración de bioprocesos nuevos y eficientes para
biomasas infrautilizadas está a la vanguardia de la investigación en biotecnología y la
aplicación industrial [1] , [2]. El desarrollo de procesos eficientes, con potencial para
agregar valor a estos residuos agroindustriales se convirtió en uno de los mayores
desafíos en la biotecnología actual. Por lo tanto, el desarrollo de bioprocesos para
convertir materias primas biológicas en productos intermedios industriales y productos
finales es un punto clave para un futuro sostenible. El concepto de biorrefinería
implica una planta de procesamiento donde las materias primas de biomasa
renovables se convierten en un espectro de productos comercializables y energía, de
manera análoga a una refinería petroquímica. La glucosa es un producto químico clave
para los procesos microbianos, y se puede derivar de ella una amplia variedad de
productos biotecnológicos o químicos, como el ácido láctico, el etanol, el ácido acético,
el ácido succínico, el butanol, el sorbitol, el ácido levulínico y otros [3] .
.1 . Materias primas
Una harina de maíz amarilla comercial (Yoki Alimentos, Brasil) utilizada presentó un
12,6% de humedad y su composición, según el proveedor, fue de 82% de almidón y
7,4% de proteína, en seco.
•Estrategia III: esta estrategia fue idéntica a la estrategia I, excepto que no se realizó
pre-SSF de 4 h de longitud, es decir, los experimentos se realizaron durante todo el
tiempo a 32 ° C. Esta estrategia se realizó solo para HEE y harina de babassu.
3 . Resultados y discusión
Componentes Contenido (% m / m)
Humedad (base húmeda) 11.06 ± 0.68
Almidón (base seca) 60.05 ± 1.37
Proteína (base seca) 2.98 ± 0.08
Hemicelulosa (base seca) 7.94 ± 0.27
Celulosa (base seca) 13.53 ± 0.31
Lignina (base seca) 15.79 ± 0.32
3.2 . Hidrólisis en frío de almidón crudo utilizando HEE producido por fermentación en
estado sólido
Estudios previos de nuestro grupo habían demostrado que el complejo HEE producido
por la fermentación en estado sólido de la torta de babassu mostraba una actividad
amilolítica óptima en un rango de pH entre 4.0 y 5.0 y una temperatura cercana a 50 °
C [17] . En el presente trabajo, se evaluaron algunas condiciones experimentales para
el desarrollo de la estrategia de hidrólisis de almidón granular. Los experimentos a
diferentes temperaturas constantes (30 ° C, 32 ° C, 40 ° C, 50 ° C y 60 ° C) se
realizaron durante 24 h para evaluar el efecto de esta variable sobre la hidrólisis
enzimática de la harina de babassu ( Fig. 1 ) . Una carga de enzima de 20 U / mL de
actividad amilasa (base de exoamilasa) y 190 Se usaron g / l de harina de babasú. El pH
se mantuvo durante toda la reacción a 4,8, sin necesidad de ajuste.
Con el fin de evaluar el proceso de hidrólisis para un período más largo (72 h), una
carga enzimática de 20 U / ml a pH = 4,8 y una concentración inicial de harina de
babasú de 190 g / L se investigó a 50 ° C durante 4 h seguido de 68 ha 32ºC . Estos
experimentos se llevaron a cabo no solo con el HEE, sino también con un producto
enzimático comercial (CEP) para buscar esta comparación ( Fig. 2 ). La misma carga de
enzimas (20 U / mL) se usó para HEE y CEP para facilitar la comparación, aunque este
es un valor mayor que la carga sugerida por el proveedor de CEP, (5.4 g / kg de
materia prima utilizada, en comparación con 1.2 g / kg materia primasugirió).
También es importante mencionar que la temperatura de 50–32 ° C está en el rango
recomendado por el proveedor de CEP. La producción de nitrógeno amino libre (FAN)
durante la hidrólisis de babasú se controló durante la hidrólisis con HEE y también se
muestra en la Fig. 2 .
Fig. 2 . Perfiles cinéticos de la hidrólisis del almidón a partir de harina de babasú
durante 72 h. La línea de puntos indica el cambio de temperatura de 50 ° C a 32 ° C.
La producción de glucosa con HEE fue superior a la obtenida con CEP. Al final de las 72
h, la HEE producida in situ por la fermentación en estado sólido promovió la liberación
de 110.9 ± 6.6 g / L de glucosa en comparación con 74.5 ± 1.8 g / L de glucosa
obtenida al utilizar la preparación de enzimas comerciales. La eficiencia de hidrólisis
con HEE fue de 87.0%. Sin la presencia de los biocatalizadores (control negativo), la
hidrólisis del almidón fue insignificante.
Estos resultados indican que la HEE producida por A. awamori muestra un excelente
potencial para la hidrólisis granular del almidón. Pickens y Niekamp [22] evaluaron la
hidrólisis enzimática del almidón granular a 55 ° C durante 96 h y observaron una
eficiencia de hidrólisis del 88%. Li et al. [21] investigaron durante 96 h la hidrólisis del
almidón granular a 30 ° C mediante enzimas comerciales, utilizando maíz y triticale,
obteniendo 60% y 64% de eficiencia de hidrólisis, respectivamente. Božid et al
evaluaron la digestión de almidón crudo de triticale, trigo, papa, rábano picante y maíz,
a una concentración de 10 g / L de la materia prima. [23]y la eficiencia alcanzó el 63%,
60%, 59%, 52% y 37%, respectivamente, en un período de 4 horas a 65 ° C. Por lo
tanto, los datos de este trabajo presente, en comparación con la literatura, muestran
que el proceso propuesto basado en babassu es prometedor.
Los mejores resultados obtenidos con HEE en comparación con CEP se deben
probablemente a las enzimas accesorias que están presentes en HEE [17] , ya que el
producto comercial se compone básicamente de enzimas amilolíticas. Otras enzimas,
como las proteasas y las xilanasas, contribuyen a una mejor degradación de los
gránulos de almidón, lo que conduce a una mejor accesibilidad del almidón por las
amilasas. Wang et al. [24] demostró que el uso de proteasas aumentó la producción de
etanol a partir de maíz en un 8% y redujo la carga del producto enzimático comercial
utilizado (Stargen ™).
Para la estrategia I, la harina de maíz también se examinó como materia prima para la
hidrólisis y producción de etanol ( Fig. 5 ), tanto para la comparación con la harina de
babasú como para buscar la evaluación del potencial HEE para actuar sobre una
materia prima generalizada. Se usó una harina de maíz amarilla comercial en las
mismas condiciones adoptadas para la harina de babasú (190 g / L de harina de maíz y
20 U / ml de actividad de amilasa HEE), con el objetivo de tener condiciones similares
a los experimentos anteriores con babasú. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que el
contenido de almidón en la harina de maíz es más alto que en la harina de babasú,
82% y 60% en base seca, respectivamente.
Fig. 5 . Los perfiles cinéticos de la producción de etanol a partir de la harina de maíz se
llevaron a cabo de acuerdo con la estrategia I (pre-SSF durante 4 horas a 50 ° C,
seguidos de la inoculación de levadura y el proceso SSF durante otras 68 h) utilizando
extracto de enzima hidrolítica en el sitio (HEE).
Sobre la base de los mejores resultados que se obtuvieron con HEE, se evaluó en
estudios adicionales que variaron las condiciones de hidrólisis / fermentación según las
estrategias II y III descritas anteriormente. La Tabla 5 resume los resultados obtenidos
en todos los experimentos de SSF y SHF, permitiendo una comparación de CEP y HEE
como biocatalizadores, de babassu y harina de maíz como materia prima, así como de
las diferentes condiciones de hidrólisis / fermentación.
Tabla 5 . Resumen de los procesos de SSF realizados con diferentes materias primas
(harina de babasú y harina de maíz), diferentes preparaciones de enzimas (HEE y CEP)
bajo diferentes estrategias (I, II, III y IV) y también la estrategia V (SHF). Los datos se
calcularon considerando un tiempo de fermentación de 48 h, excepción para la
estrategia I con harina de maíz y la estrategia II considerando 24 h.
En base a los resultados presentados en la Tabla 5 , se puede observar que bajo las
mismas condiciones de la estrategia I, es decir, cuando se realizó pre-SSF durante 4
horas a 50 ° C, el proceso de fermentación con HEE mostró una ventaja considerable
frente al CEP. Además, la necesidad de suministrar una fuente externa de nitrógeno y
ajustar el pH en el caso del proceso basado en CEP son desventajas para el producto
comercial, ya que para el HEE solo se utilizaron extracto de enzimas, agua, harina de
babasú y levadura.
Los mejores resultados del presente trabajo se obtuvieron bajo la estrategia I con HEE
y harina de babasú o harina de maíz. Estos resultados se comparan bien con los
obtenidos por otros autores para otras materias primas. Pranamuda et al. [28]
obtuvieron una eficiencia de conversión de etanol de 70.5% a partir de gránulos de
almidón de sagú, mientras que Rattanachomsri et al. [2] reportaron una productividad
de 0.48 g / (L h) y una eficiencia de 85.4% con el uso de pulpa de tapioca no
gelatinizada. Bialas et al. [29] , utilizando harina de maíz, obtuvo una productividad de
1.32 g / (L h) y 84.6% de eficiencia en 72 h usando amilasas y proteasas comerciales.
Wang et al. [7]informó una eficiencia del 86.4% con el maíz, bajo la adición de una
fuente externa de nitrógeno (sulfato de amonio). Baruque Filho et al. [30] informaron
un rendimiento de 0,6 l de etanol por kg de almidón de harina de babasú con el
proceso convencional (licuefacción y gelatinización), que corresponde a una
conversión del 82,4% de almidón en etanol, utilizando enzimas comerciales. Por lo
tanto, el presente proceso con una hidrólisis granular de almidón a temperatura de
sub-gelatinización fue igualmente eficiente en comparación con el proceso
convencional para la misma materia prima.
Una comparación entre las estrategias I y III muestra que el paso corto pre-SSF de 4
horas a 50 ° C incluido en la estrategia I mejoró el rendimiento del proceso. La
estrategia III, donde no se incluyó pre-SSF, condujo a una menor producción de etanol
(45.68 g / L) y menor eficiencia (70.7%). El proceso bajo la estrategia III mostró una
cinética más lenta, probablemente debido al hecho de que al comenzar la
fermentación no había una fuente de carbono disponible, mientras que en el proceso
llevado a cabo bajo la estrategia I, la glucosa estaba presente desde el inicio de la
fermentación.
Por lo tanto, se puede concluir que el proceso propuesto en este trabajo, utilizando
enzimas producidas internamente por la fermentación en estado sólido de un
subproducto agroindustrial para la hidrólisis del almidón granular, muestra un
rendimiento comparable al del etanol convencional a escala industrial. Proceso de
producción a partir del maíz.
4 . Conclusiones