Departamento de Química Analítica y Tecnología

de Alimentos

C U A D E RN O
DE
PRÁCTICAS
Experimentación en
Química Analítica
Área de Química Analítica
Facultad de Ciencias Químicas
Curso 2005/2006
Área de Química Analítica Experimentación en Química Analítica

ÍNDICE DE PRACTICAS
Práctica 1.- Determinación espectrofluorimétrica de quinina en agua
tónica.
Práctica 2.- Valoración potenciométrica de una mezcla de yoduro y
cloruro con ion plata.
Práctica 3.- Determinación conjunta de sulfaquinoxalina y
sulfametacina mediante espectrofotometría.
Práctica 4.- Determinación potenciométrica de fluoruros en enjuagues
bucales.
Práctica 5.- Utilización de la cromatografía líquida de alta resolución
(HPLC) para el análisis de colorantes en muestras
alimentarias.
Práctica 6.- Determinación extractoespectrofotométrica de amaranto
y eritrosina.
Práctica 7.- Determinación de Cu y Zn en vinagre mediante absorción
atómica.
Práctica 8.- Determinación de sodio y potasio en aguas naturales
mediante fotometría de emisión de llama.
PROFESORES
D. Pablo Fernández López : Prácticas 1 y 2
Dª Juana Rodríguez Flores: Practicas 3 y 4 (Grupo I)
D. Gregorio Castañeda Peñalvo : Practicas 3 y 4 (Grupo II)
Dª Ana María Contento Salcedo : Practicas 5 y 6
D. José María Lemus Gallego : Practicas 7 y 8
CALENDARIO
Grupo I : 19 a 28 de Octubre
Grupo II : 2 a 11 de Noviembre

Cuaderno de Prácticas 2005/2006 2

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PRÁCTICA Nº 1

DETERMINACIÓN ESPECTROFLUORIMÉTRICA DE QUININA EN

AGUA TÓNICA

PROCEDIMIENTO
Preparar disoluciones de 100, 200, 300, 400 y 500 ppb a partir de una
disolución de sulfato de quinina de 2.5 ppm y enrasar a 25 ml con H2SO4 0.1 N.
Registrar los espectros de excitación y emisión de una de las muestras y medir
la intensidad de fluorescencia a 350 nm de excitación y 450 nm de emisión de
todas ellas para construir la recta de calibrado.
Pasar el contenido de un agua tónica a un vaso de precipitado y agitar
vigorosamente a temperatura ambiente durante 10 minutos. Tomar 1.0 ml y
añadir la cantidad necesaria de H2SO4 concentrado (36 N) para que en un
volumen final de 250 ml sea 0.1 N. Registrar los espectros de excitación y
emisión, comprobando que en estas condiciones la fluorescencia del agua tónica
es debida únicamente a la quinina. Medir la fluorescencia a 350 nm de
excitación y 450 nm de emisión calculando la concentración de quinina en el
agua tónica a partir de la recta de calibrado.

MATERIALES PRODUCTOS
- Espectrofluorímetro - Agua tónica
- Matraces de 25 ml. - H2SO4
- Pipetas graduadas. - Bisulfato de quinina
- Vaso precipitado.
- Agitador magnético con núcleo.

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PRÁCTICA Nº 2
VALORACIÓN POTENCIOMÉTRICA DE UNA MEZCLA DE
YODURO Y CLORURO CON ION PLATA

PROCEDIMIENTO

1) Conectar el potenciómetro a la red y colocarlo en fase de

calentamiento de acuerdo con las instrucciones.

2) Preparar e instalar los electrodos de acuerdo con las instrucciones.

3) Pipetear 10 ml. de disolución problema a valorar e introducirlos en un

vaso de precipitados de 500 ml. diluyendo con agua hasta unos 300 ml.

4) Colocar en el interior del vaso un núcleo agitador e instalar todo el

sistema de agitación.

5) Llenar la bureta con la disolución de AgNO3 0.1 N e instalarla de

forma que su pico toque la disolución a valorar.

6) Conectar el agitador a la red y mantener una agitación suave pero

persistente durante toda la valoración, interrumpiéndola solamente para
la lectura del potencial.

7) Introducir los electrodos (Ag-calomelanos) en el vaso de forma que no

puedan ser rozados por el núcleo agitador.

8) Colocar el mando en mV y leer el valor de mV en este momento.

9) Añadir, desde la bureta, sucesivas porciones conocidas de AgNO3 0.1 N

y tras un breve tiempo de agitación leer lo que marca el aparato.

10) Representar gráficamente sobre papel milimetrado:

a) Variación del potencial (E) en función del volumen (V) de AgNO3
añadido.
b) Primera derivada.
c) Segunda derivada.

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11) Deducir de las gráficas el volumen de equivalencia y realizar los

cálculos oportunos para expresar la concentración de Cl - y I- de la
mezcla.

MATERIALES PRODUCTOS
- Potenciómetro - Disolución problema
- Electrodo de Ag. - AgNO3 0.1 N
- Electrodo de calomelanos
- Vaso 500 ml.
- Bureta
- Agitador y núcleo
- Pipeta aforada de 10 ml.
- Frasco lavador

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PRÁCTICA Nº 3
DETERMINACIÓN CONJUNTA DE SULFAQUINOXALINA Y
SULFAMETACINA MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRÍA

OBJETO

Demostrar el uso de la espectrofotometría UV en el análisis de mezclas

de dos componentes, utilizando sus respectivos máximos de absorción.

PROCEDIMIENTO

1.- Preparar dos disoluciones madres de 100 mg/L una de Sulfaquinoxalina

(SQX, 50% etanol) y otra de Sulfametacina (SMT, 50% etanol),
disolviendo aproximadamente 10 mg de cada una de las drogas en 100
mL de volumen final.

2.- A partir de las disoluciones madres, por dilución, preparar en matraces de

25 mL disoluciones de 4, 8, 12 y 16 mg/L de cada una de las sulfamidas,
añadiendo en todos los casos 5 mL de disolución tampón NH4Cl/NH3 0.5
M de pH = 10 y mantener el porcentaje de etanol constante, teniendo en
cuenta el contenido de etanol de la muestra más concentrada.

3.- Preparar un blanco en las mismas condiciones que el resto de las muestras
(% de etanol y tampón).

4.- Registrar los espectros de absorción de cada una de las disoluciones

preparadas anteriormente frente al blanco y en el rango de longitudes de
onda comprendido entre 200 y 315 nm a una velocidad de barrido de 600
nm/min. nm.

5.- Una vez obtenidos los espectros de absorción, buscar las dos longitudes
de onda de interés, para el establecimiento del sistema de ecuaciones
posterior (aquellas en que los espectros de las dos sulfamidas presenten
una absorbancia elevada).

6.- Comprobar que para las longitudes de onda seleccionadas y en el rango

de concentración estudiado la respuesta es de tipo lineal. Si esto es así,
obtener el valor medio de la absortividad de cada una de las sulfamidas a

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las longitudes de onda seleccionadas y comparar con los valores

obtenidos a partir de las ecuaciones de las rectas de calibrado.

7.- Registrar el espectro de absorción de una mezcla problema de SQX y

SMT y calcular la concentración de cada una de las drogas usando un
sistema de ecuaciones.

MATERIAL REACTIVOS

* 10 matraces de 25 mL * Sulfaquinoxalina
* 2 pipetas de 2 mL * Sulfametacina
* 2 pipetas de 5 mL * Tampón NH4Cl/NH3 pH = 10
* 1 frasco lavador * Etanol.
* 1 gotero de agua

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PRÁCTICA Nº 4
DETERMINACIÓN POTENCIOMÉTRICA DE FLUORUROS EN
ENJUAGUES BUCALES

FUNDAMENTO

El electrodo selectivo de fluoruros se emplea ampliamente en la determinación

de fluoruros en una gran diversidad de materiales. Un requisito necesario para
su correcta utilización es la necesaria utilización de una disolución
amortiguadora de la fuerza iónica total (TISAB) para ajustar todos los
estándares y las muestras problemas a prácticamente la misma fuerza iónica;
cuando este reactivo se usa, se mide más la concentración de fluoruro que su
actividad. El pH del amortiguador es alrededor de 5, un nivel al cual el ión F es
la especie predominante en las especies que contienen flúor. El amortiguador
también contiene ácido ciclohexilamino-dinitrilotetraacético. El cual forma
quelatos estables con Fe (III) y Al (III), liberando el ión fluoruro de sus
complejos con estos cationes.

PROCEDIMIENTO

En matraces de plástico de 25.0 mL, preparar disoluciones conteniendo

concentraciones conocidas de F, variables entre 1 y 5 mg/L, adicionando 10 mL
de la disolución TISAB y enrasando con agua desionizada. Se determina el
potencial de cada una de ellas y se construye la recta de calibrado representado
el valor del potencial frente al logaritmo de la concentración de fluoruros.
A continuación y sobre un matraz de plástico de 25.0 mL se añade 0,2
mL de la disolución problema (enjuague bucal), 10 mL de TISAB y enrasando
con agua desionizada, agitar bien y medir el potencial, calculando a
continuación los mg/L de la disolución comercial analizada.

MATERIAL Y REACTIVOS

- Potenciómetro con electrodo selectivo de fluoruros y electrodo de referencia.

- Matraces aforados de 25 mL de plástico.
- Solución patrón de fluoruros de 25 mg/L, preparada a partir de NaF
(PRECAUCION: MUY TOXICO).
- Solución TISAB
- Pipetas de plástico.

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PRÁCTICA Nº 5

UTILIZACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA

RESOLUCIÓN (HPLC) PARA EL ANÁLISIS DE COLORANTES EN
MUESTRAS ALIMENTARIAS

OBJETO

El objeto de esta práctica es la separación y posterior determinación de

Ponceau 4R (E-124) y Carmoisina (E-122) en muestras alimentarías de distinta
naturaleza mediante HPLC. La modalidad utilizada es cromatografía líquida de
partición con fases ligadas y en fase inversa. La elución de los analitos depende
de su naturaleza química y las condiciones cromatográficas utilizadas. En esta
práctica hemos seleccionado como fase estacionaria una columna de fases
ligadas apolar, de 3 µm de tamaño de partícula y de 15 cm de longitud. La señal
analítica de los componentes analizados es obtenida con un detector de diodos
en fila (diode array) a una longitud de onda a la cual los compuestos estudiados
presentan una absorbancia considerable.

Las condiciones de trabajo son las siguientes:

FASE MÓVIL: Metanol: 0.1 M tampón fosfato pH= 7.0

COLUMNA: C18
FLUJO: 1 mL/min.
DETECCIÓN: 520 nm

PROCEDIMIENTO

Preparación de disoluciones patrón:

En matraces de 10 mL se preparan dos disoluciones que contenga 4 y 10

mg/L de cada uno de los compuestos analizados, a partir de disoluciones
madres de 200 mg/L de cada colorante en agua desionizada.

En las condiciones instrumentales y químicas seleccionadas se procede a

la obtención de los cromatogramas correspondientes a las disoluciones patrón.

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Preparación de las muestras

A) Bebidas. Transferir 5 mL de muestra a un matraz de 25 mL y enrasar

con agua desionizada.

B) Gelatinas y jarabes. Pesar 1 g de producto y agitar con 10 mL de

agua desionizada en un vaso de precipitado hasta completa disolución.
La solución obtenida se transvasa a un matraz de 25 mL y se enrasa
con agua desionizada.

Teniendo en cuanta las condiciones instrumentales y químicas

anteriormente expuestas registrar los correspondientes cromatogramas de las
muestras preparadas.

RESULTADOS

1. A partir de uno de los cromatogramas obtenidos calcular los siguientes

parámetros cromatográficos:
a) Eficiencia para cada compuesto. (N)
b) Factor de capacidad (K).
c) Factor de separación (α).
d) Resolución cromatográfica entre dos picos consecutivos.

2. Deducir la concentración en mg/L de los colorantes estudiados en cada una

de las muestras analizadas.

MATERIALES PRODUCTOS

- Cromatógrafo - Disolución de Ponceau 4R (200 mg/L)

- Matraces de 25 mL - Disolución de Carmoisina (200 mg/L)
- Pipetas - Muestras objeto de análisis
- Jeringuillas

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PRÁCTICA Nº 6

DETERMINACION EXTRACTOESPECTROFOTOMÉTRICA DE
AMARANTO Y ERITROSINA

El objeto de esta práctica es la determinación simultánea de dos

colorantes: Amaranto y Eritrosina en una bebida. En primer lugar se realiza una
separación previa de estos compuestos mediante extracción líquido-liquido
utilizando metil-isobutilcetona para extraer Eritrosina permaneciendo el
Amaranto en fase acuosa. Posteriormente se determina cada colorante mediante
medidas espectrofotométricas en el máximo de absorción.

RECTAS DE CALIBRADO
En matraces de 25 mL se adicionan volúmenes variables de la disolución
patrón de Eritrosina y Amaranto de manera que la concentración de cada uno de
ellos sea 2, 4, 6, 8 y 10 mg/L, etanol hasta que el contenido total sea de 25%
del volumen final, 2.5 mL de tampón Hac/Ac de pH = 4.8 y agua destilada hasta
enrase.
Transferir 10 mL de cada una de las disoluciones a embudos de
decantación de 100 mL y adicionar sobre estos 10 mL de metil-isobutilcetona.
Agitar los embudos durante 2 minutos depositar los embudos en sus soportes,
separar las fases y centrifugar la fase orgánica.
Realizar los espectros de absorción de cada una de las fases para uno de
los calibrados y seleccionar las longitudes de onda correspondientes a los
máximos de absorción. Para las demás disoluciones medir la absorbencia de la
fase acuosa y orgánica a las longitudes de onda seleccionadas.
Obtener la ecuación de la recta de calibrado para cada uno de los
compuestos y representarla gráficamente.

ANALISIS DE LA MUESTRA.
Se toman 10 mL de la muestra problema y se introducen en un matraz de
25 mL, se añade etanol para que el contenido final sea del 25%, 2.5 mL de
disolución reguladora y se enrasa con agua desionizada. Se transfiere 10 mL de
esta disolución a un embudo de decantación de 100 mL y se adicionan sobre
estos 10 mL de MIBC. Se agita dicho embudo durante 2 minutos, se separan las
fases, se centrifuga la orgánica y se mide la absorbencia tanto de la fase
orgánica como de la acuosa a las longitudes de onda seleccionadas.
Se calcula el contenido de cada compuesto en mg/L en la muestra
problema mediante las rectas de calibrado.

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PRÁCTICA Nº 7

DETERMINACIÓN DE Cu y Zn EN VINAGRE MEDIANTE

ABSORCIÓN ATÓMICA

PRINCIPIO

Determinación directa por espectrofotometría de absorción atómica

PROCEDIMIENTO

Preparación de las muestras: - No se necesita preparación especial. En caso de

elevada concentración realizar una o varias diluciones hasta quedar dentro del
rango de medida.

Determinación: Diluir partes alicotas de las diluciones de Cu o Zn con ácido

acético al 5% para obtener soluciones de Cu de 0.25; 0.5; 2.0 y 5.0 mg/L y de
Zn de 0.25; 0.5; 1.0 y 2.0 mg/L.

Aspirar las soluciones patrón y construir las correspondientes rectas de

calibrado. Las longitudes de onda de medida serán 213,8 nm para el Zn y 324,8
nm para el Cu.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Partiendo de los valores de absorbancia obtenidos, hallar las

concentraciones de Zn y Cu en las muestras de los distintos vinagres.

MATERIAL Y APARATOS REACTIVOS

* Espectrofotómetro de absorción
atómica, con llama aire-acetileno.
* Lámpara de cátodo hueco de Zn.
* Lámpara de cátodo hueco de Cu.
* Acido acético glacial.
* Cinc nitrato R.A.
* Cobre nitrato R.A.
* Disolución 250 mg/L de Cu.
* Disolución 250 mg/L de Zn.

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PRÁCTICA Nº 8
DETERMINACIÓN DE SODIO Y POTASIO EN AGUAS NATURALES
MEDIANTE FOTOMETRÍA DE EMISIÓN EN LLAMA

PRINCIPIO
Se pueden determinar cantidades traza de sodio y potasio por fotometría de
emisión de llama a las longitudes de onda de 589.0 y 766.5 nm,
respectivamente. Se pulveriza la muestra en una llama aire-acetileno y la
excitación se realiza en condiciones controladas y reproducibles.

PROCEDIMIENTO
* Preparar una curva de calibración en matraces de 25 mL de 1, 3, 7 y 19
mg/L de Na y K respectivamente.
* Medir la intensidad de radiación emitida por los patrones de sodio y las
muestras a 589.0 nm.
* Por referencia directa a la curva de calibración calcular la concentración
de sodio expresada en mg/L de las muestras.
* Para la determinación de potasio, proceder igual que en la determinación
de sodio, midiendo la emisión a 766.5 nm.

MATERIALES-EQUIPO PRODUCTOS

Espectrofotómetro de absorción- Solución madre de 500 mg/L de

emisión atómica con llama aire- sodio y 500 mg/L de potasio.
acetileno Varian 300.

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