PRACTICA Nº 02

DEMOSTRACIÓN DE LA ACTIVIDAD CATALÍTICA DE LA

PEROXIDASA
Introducción:
Los peroxisomas y glioxisomas contienen enzimas que degradan ácidos grasos y
aminoácidos. El producto de estas reacciones es el Peróxido (H2O2); que es una sustancia
corrosiva.
Los peróxidos también contienen grandes cantidades de enzima Catalasa, la cual degrada
al peróxido de Hidrógeno:

2H2O2 CATALASA 2H2O2 + O2

La catalasa utiliza el H2O2 generado por otras enzimas en el organelo para oxidar a
una variedad de sustratos, tal como formaldehido, fenol, alcohol, por la reacción
peroxidativa:

H2O2 + R'H2 R' + H2O2

Este tipo de reacción oxidativa es particularmente importante en las células
hepáticas y renales; para detoxificar varias sustancias que entran al torrente sanguíneo.
La peroxidasa del rábano es una Oxido - reductasa (Ec 1,11,1,7). Es una hemoproteina
que transfiere hidrógeno desde donadores de hidrógeno a H202. la peroxidasa del rábano
puede ser usada en una amplia gama de aplicaciones analíticas industriales y clínicas por
su estabilidad y disponibilidad.

Objetivos:

1. Diferenciar un catalizador de un biocatalizador por el desprendimiento de

oxigeno molecular.
2. Demostrar cómo se evalúa la actividad catalítica de la peroxidasa.
3. Demostrar la presencia de Peroxidasas en los diferentes tipos de Células.
4. Demostrar el efecto oxidante del 02 sobre el alcohol etílico mediante el reactivo
de schiff.

Material y Reactivos:

- Agua Oxigenada 10Vol. - Gradillas

- Limaduras de Hierro - Tubos de ensayo
- Buffer Fosfato pH 7.2 - Reactivos de Schiff
- Papa, rabano, carne o higado - Alcohol etílico

Procedimiento Experimental:

Armar el siguiente sistema:

 SISTEMAS
COMPONENTES: 1 II III IV V VI
Buffer Fosfato pH: 7.2 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
Agua destilada 4 ml 1ml
Limaduras de Fierro 0,5 g
Trozos de papa o rábano 0,5g
Trozos de carne o hígado 0,5g
Levadura de panificación 0,5g
Agua oxigenada 3 volúmenes 3 ml 3 ml 3 ml 3ml 3 ml
Observar x 15 minutos
Alcohol Etílico 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
Reactivo de Schiff 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
A.- Anotar el desprendimiento del O2 y la actividad catalítica en los diferentes sistemas.
B.- Anotar la coloración que produce con el reactivo de SCHIFF.

RESULTADOS DESPUÉS DE LOS 15 MIN.

Al……………………………………………. Bl.…………………………………
A2……………………………………………. B2. ………………………………..
A3……………………………………………. B3. . ………………………………..
A4……………………………………………. B4. . ………………………………..
A5……………………………………………. B5. . ………………………………..
A6……………………………………………. B6. . ………………………………..

Cuestionario

1. ¿Mencione Ud. en que organelos se encuentran las peroxidasas?

2. ¿Cuál es la función de la peroxidasa en la célula?
3. ¿Qué diferencias hay entre peroxidasa y catalasa?
4. ¿Explique Ud. como en la célula se forman los peróxidos (H2O2) y que acción tienen
5. ¿Cómo interviene la catalasa en la oxidación del alcohol etílico?

Evaluación de Resultados: