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4 PRÁCTICAS DE LABORATORIO......................................................................... 5
La Guía presenta una secuencia donde es específica cada sesión de prácticas en laboratorio
con su respectivo proceso didáctico y formativo.
2 RESULTADOS DE APRENDIZAJE
3.4 VESTIMENTA
• Utilice mandil que cubra la mayor parte de su cuerpo y zapatos cerrados.
• En caso de trabajar con equipos, no lleve prendas sueltas o que cuelguen
(bufandas, corbatas, etc.), y/o bisutería que pueda engancharse.
• Recójase el cabello de ser el caso.
4 PRÁCTICAS DE LABORATORIO
4.1 Practica No. 001 – Normas básicas de trabajo e instrumental básico del
laboratorio de microbiología – No. Sesiones 03
4.1.1 Tema a desarrollar
La protección de la vida dentro y fuera del laboratorio se logra a través del cumplimiento de
normas y medidas que reducen los factores de riesgo. El riesgo biológico es el que se debe
controlar principalmente dentro del laboratorio de microbiología clínica. La infraestructura y
equipamiento estandarizado de cada uno de los niveles de bioseguridad están adecuados para
que el personal capacitado pueda tener un acercamiento y manejo de los microorganismos sin
provocar infecciones.
4.1.3 Alcance
5 BIBLIOGRAFÍA
Referencias Principales.
Actividad #1:
TAREA PARA EL AULA VIRTUAL: el estudiante deberá subir la tarea al aula virtual y
entregar el respaldo físico
Actividad # 3:
Lea el documento adjunto y realice un mapa conceptual o mapa mental que incluya las
ideas principales respecto a los niveles de bioseguridad:
Nelson, A. y FOCUS Workgroup. (2008). Niveles de bioseguridad en el Laboratorio.
Focus on Field Epidemiology en Español. 5(1), 1-6. Recuperado el 16 de febrero de
2016 de
https://nciph.sph.unc.edu/focus/vol5/issue1/5-1BiosafetyLevels_espanol.pdf
Actividad # 4: IDENTIFIQUE
Material de laboratorio
Probetas
Vaso de precipitación (o de
precipitados)
ErlenMeyer (o matraz)
Cajas Petri
Tubos de ensayo
Gradilla
Pinzas
Portaobjetos y
Cubreobjetos
Mechero de Bunsen
Piseta
Equipos de Laboratorio
Microscopio
Baño María
Centrífuga
Incubadora
Balanzas
Actividad # 5: INVESTIGUE
Trabajo Autónomo:
Sistema óptico
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador
Sistema mecánico
SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, etc
REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico (aproxima el enfoque) y micrométrico (consigue
el enfoque correcto)
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente
con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo
se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y
repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la
preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la
preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de
inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite
c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y
el de 40x
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toque
la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la
lente
j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente
con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En
cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha
llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-
acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,
secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol
La unidad básica de longitud que se utiliza con el microscopio de luz es el micrómetro, aunque
existen otras medidas que también pueden usarse:
1000 µm = 1mm
1000 nm = 1 µm
10000 Å = 1 µm
Ver referencia Practica N° 001 Normas básicas de trabajo e instrumental básico del laboratorio
de microbiología
9 BIBLIOGRAFÍA
Referencias Principales.
Lección sobre el tema: el estudiante deberá traer impresa la rúbrica para la evaluación
PRACTICA N°:
NOMBRE :
PARALELO:
poco
3 1 no
5 Excelente 4 MUY BUENO satisfactorio
CRITERIOS satisfactorio satisfactorio
2
9-10 8-7 6-5 4-3 3-1
Logra
Enfoque con Logra enfocar enfocar No logra
Logra enfocar con los No ubica
los objetivos solamente con tres solamente enfocar con
lentes objetivos: 4x, ningún lente
de 4x, 10x, y de los cuatro lentes con dos ningún lente
10x, 40x y 100x. objetivo
40x objetivos. lentes objetivo.
objetivos.
Limpia el
Limpia el
lente de
lente de
100x con el
100x con el
papel
Limpia el lente de Limpia el lente de papel
correcto,
100x con el papel 100x con el papel incorrecto,
Limpieza del baja la
correcto, baja la correcto, baja la pero no baja
microscopio intensidad No realiza la
intensidad de luz y la intensidad de luz y la la intensidad
al terminar de luz pero limpieza del
platina, y deja el platina, pero no deja de luz ni la
la no baja la microscopio
microscopio en el el microscopio en el platina, ni
observación platina ni
lente de menor lente de menor deja el
deja el
aumento. aumento. microscopio
microscopio
en el lente
en el lente
de menor
de menor
aumento.
aumento.
Ubica Ubica
Ubica partes del No ubica
Ubica todas las algunas las algunas
microscopio y partes del
partes del partes del partes del
Partes del funciones de todas microscopio,
microscopio, conoce microscopio, microscopio,
microscopio sus partes, pero no y no conoce
su función y maneja y conoce y no conoce
maneja la función de
correctamente algunas la función de
correctamente todas
funciones todas.
TAREA PARA EL AULA VIRTUAL: el estudiante deberá subir la tarea al aula virtual y
entregar el respaldo físico
Los materiales a utilizarse son por cada sesión de práctica del laboratorio
El estudiante ingresa con el mandil al laboratorio, se iniciará con el docente que realizará una
explicación práctica introductoria sobre técnicas de observación y como realizar las diferentes
técnicas de tinción, así como la explicación práctica indicando algunos de los principales
errores, posteriormente, se encenderá el mechero de bunsen y cada estudiante se colocará
las barreras de protección con las normas de bioseguridad aprendidas anteriormente y
empieza a realizar la práctica.
Cada estudiante colocará un campo estéril sobre la mesa de trabajo y sobre él un palillo de
dientes, dos portaobjetos estériles, en uno de ellos por su parte posterior y con ayuda de un
marcador se realizará un circulo que nos indicará cual es nuestra área de trabajo, luego se
pondrá sobre el porta objetos una gota de agua destilada.
Se hará la toma de muestras con la ayuda de un palillo, para ello trabajaran en parejas,
colocamos la muestra de placa dental sobre el portaobjetos que previamente hemos
preparado y se la homogenizará con la gota de agua destilada estéril. Dejamos secar y fijamos
con el calor del mechero.
Se incinerara la punta contaminada del palillo de dientes y se desechara el resto.
Una vez que la preparación está totalmente seca, se procederá a su observación. Poner una
gota muy pequeña de aceite de cedro (inmersión) y observar al microscopio con el objetivo de
inmersión.
Se identificaran microorganismos Grampositivos y Gramnegativos de las placas obtenidas y de
las preparadas. Una vez finalizada la observación se retirará las placas y dejara correctamente
al microscopio sobre las mesas de trabajo.
Los estudiantes realizaran los pasos previamente mencionados y mediante forma aleatoria se
observarán falencias en la realización de la práctica corrigiendo cada una de estas, así como
también se despejarán cualquier tipo de dudas.
SESION 02: toma de muestra de agar EMB –E.coli y agar sangre S. aureus
Se hará la toma de muestras con la ayuda de una asa microbiológica esterilizada, proveniente
del agar con el microorganismo correspondiente proporcionada por el laboratorio, para ello
trabajaran en parejas, colocamos la muestra sobre el portaobjetos que previamente hemos
preparado y se la homogenizará con la gota de agua destilada estéril. Dejamos secar y fijamos
con el calor del mechero.
Se realizará la tinción Gram previamente descrita en la sesión anterior.
Una vez que la preparación está totalmente seca, se procederá a su observación. Poner una
gota muy pequeña de aceite de cedro (inmersión) y observar al microscopio con el objetivo de
inmersión.
Se hará la toma de muestras con la ayuda de una asa microbiológica esterilizada, proveniente
del agar con el microorganismo correspondiente proporcionada por el laboratorio, para ello
trabajaran en parejas, colocamos la muestra sobre el portaobjetos que previamente hemos
preparado y se la homogenizará con la gota de agua destilada estéril. Dejamos secar y fijamos
con el calor del mechero.
Se realizará la tinción Gram de acuerdo a las sesiones de prácticas anteriores. Una vez que la
preparación está totalmente seca, se procederá a su observación. Poner una gota muy
pequeña de aceite de cedro (inmersión) y observar al microscopio con el objetivo de
inmersión.
FRESCO EN MOHOS
Ver referencia Practica N° 001 Normas básicas de trabajo e instrumental básico del laboratorio
de microbiología.
Ver referencia Practica No. 002 – Microscopía y Métodos de Observación de los
microorganismos
13 BIBLIOGRAFÍA
Referencias Principales.
100x
Actividad 2: cuestionario
1. Describa con sus propias palabras el procedimiento de las técnicas realizadas
en esta práctica, los materiales y equipos utilizados.
Rubrica para la práctica: el estudiante deberá traer impresa la rúbrica para la evaluación
POCO
EXCELENTE (5) MUY BUENO (4) SATISFACTORIO SATISFACTORIO NO
(3) (2) SATISFACTORIO (1)
GRAFICO Realiza el gráfico, Realiza el gráfico, Realiza el gráfico, Realiza el gráfico, No realiza el
utiliza los colores utiliza los colores utiliza los colores no utiliza los gráfico.
adecuados, ejecuta adecuados, no adecuados, no colores
apropiadamente la ejecuta la forma, ejecuta adecuados, no
forma y tamaño de pero si el tamaño apropiadamente la ejecuta
las bacterias. de las bacterias. forma, ni el apropiadamente la
tamaño de las forma, ni el
bacterias. tamaño de las
bacterias.
TAREA PARA EL AULA VIRTUAL: el estudiante deberá subir la tarea al aula virtual y
entregar el respaldo físico
15 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
En todos los casos, el estudiante deberá incluir las conclusiones y recomendaciones en los
métodos de presentación de los resultados establecidos para cada práctica. Estas deberán
estar relacionadas con los hallazgos o resultados de cada práctica con base en fundamentos
técnico – científicos.
Siembras y cultivos
El estudiante debe conocer:
Sembrar es colocar una muestra de inóculo, en un medio de cultivo para obtener el
crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de
Petri, que contiene un gel (Agar) al que se han añadido las substancias que necesitan los
microorganismos para crecer. A esto lo llamamos medio de cultivo. A veces se añaden otras
clases de sustancias; por ejemplo, para impedir el crecimiento de otras bacterias que podrían
contaminar el cultivo. La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como
tubos de vidrio con gel, frascos con líquidos nutritivos para los microorganismos.
A continuación se procede a la "incubación" del medio ya sembrado. En cada caso se hace en
condiciones particulares de presión de oxígeno, temperatura, agitación, duración, etc. Muchas
de las bacterias patógenas crecen bien a temperaturas cercanas a los 37ºC habituales de
nuestro organismo.
Muestra faringea
El estudiante ingresa con el mandil al laboratorio, se iniciará con el docente que realizará una
explicación práctica introductoria sobre siembras y medios de cultivos, así como la explicación
práctica indicando algunos de los principales errores.
Verificar que los elementos por usar estén listos y que el paciente se sienta
cómodo
Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la flexión
del codo o a 10 cm del codo y sujetar con un medio nudo.
Tomar una muestra de faringe con un hisopo estéril y la ayuda de un baja lenguas
también estéril. Sembrar la muestra en dos placas (nº1 y nº2) de agar sangre y en
una de agar salino manitol:
Placa nº 1 de Agar Sangre: se descarga el hisopo en una zona próxima al borde
(zona densa) y se siembra el resto de la placa por estrías continuas. Incubar 48
horas a 37ºC.
Ver referencia Practica N° 001 Normas básicas de trabajo e instrumental básico del laboratorio
de microbiología.
Ver referencia Practica No. 002 – Microscopía y Métodos de Observación de los
microorganismos
19 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
En todos los casos, el estudiante deberá incluir las conclusiones y recomendaciones en los
métodos de presentación de los resultados establecidos para cada práctica. Estas deberán
estar relacionadas con los hallazgos o resultados de cada práctica con base en fundamentos
técnico – científicos.