UNIVERSIDAD CATÓLICA DE EL SALVADOR

FACULTAD:

CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA:

DOCTORADO EN MEDICINA

SECCIÓN: “B”

CICLO: II- 2018

CÁTEDRA:

BIOQUÍMICA

CATEDRÁTICO:

LIC. NÉSTOR JOUSÉ RAMÍREZ

TEMA:

PRÁCTICA DE LABORATORIO 1

PRESENTADO POR:

ARGUMEDO LÓPEZ, WILFREDO JOSÉ

BLANCO GUERRA, SARA BEATRIZ

MONROY CALDERON, LEONEL AGUSTÍN

GRUPO 1 DE LABORATORIO

LUNES, 11 DE FEBRERO DE 2019

Índice

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Objetivos

Experimento 1
1. Comprobar que el pH de una solución cambia cuando varia la
concentración de iones hidrogeno.
2. Comprobar la acción amortiguadora de los sistemas buffer.
3. Valorar la importancia de los sistemas buffer en el equilibrio acido-base del
organismo.

Experimento 2
1. Demostrar la actividad de la enzima anhidrasa carbónica presente en los
eritrocitos de humanos.
2. Valorar la importancia de las técnicas para detectar la actividad de las
enzimas.

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Marco teórico

Los líquidos biológicos de interés en clínica (suero, plasma, orina, liquido

cefalorraquídeo, etc.) son soluciones que contienen algunas sustancias en estado
casi completo de ionización.

El conocimiento de la concentración de esos iones y de la fisicoquímica que

describen sus interrelaciones es fundamental para entender muchos problemas
fisiológicos y patológicos en el humano. El PH de los líquidos corporales, que
depende de la concentración de iones H+, es mantenido casi constante por medio
de la operación de varios mecanismos fisiológicos y toda persona que trabaja en
áreas relacionadas con la salud debe conocer las formas por las cuales es
mantenido el balance acido-básico de los fluidos corporales, ya que una desviación
de este, conlleva a un desbalance que puede conducir a un estado patológico e
incluso causar la muerte.

La acción enzimática y las transformaciones químicas de las células se realizan

dentro de unos estrictos márgenes de pH. En humanos los valores extremos
compatibles con la vida y con el mantenimiento de funciones vitales oscilan entre
6,8 y 7,8; siendo el estrecho margen de 7,35 a 7,45 el de normalidad. También en
el trabajo de laboratorio, es imprescindible el mantenimiento de un pH para la
realización de muchas reacciones químico-biológicas. Los sistemas encargados de
evitar grandes variaciones del valor de pH son los denominados “amortiguadores,
buffer, o tampones”. Son por lo general soluciones de ácidos débiles y de sus bases
conjugadas o de bases débiles y sus ácidos conjugados. Los amortiguadores
resisten tanto a la adición de ácidos como de bases. (Isaac Túnez Fiñana, s.f)

Un aspecto fundamental en la fisiología de todos los organismos es la homeostasis

o capacidad para mantener una situación de equilibrio dinámico favorable. En este
fenómeno tiene gran importancia los sistemas amortiguadores que equilibran la
presencia de sustancias ácidas y básicas para mantener el pH dentro de los límites
fisiológicos.

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Las soluciones buffer, amortiguadores o tampón, son mezclas de un ácido débil y
una sal de ese acido. Este tipo de mezcla reacciona tanto con ácidos como con
bases, por lo que la adición de ácidos o bases fuertes a ellas casi no produce
variaciones en el valor de pH.

Un ejemplo de solución buffer es la solución acuosa de acido acético y acetato de

sodio. Esta solución contiene una gran cantidad de moléculas del acido débil (CH3-
COOH) y de su base conjugada (CH3-COO) que proviene de la disociación del
acetato de sodio.

Si se añaden pequeñas cantidades de un acido fuerte a esta solución buffer, los

iones H+ provenientes del acido reaccionan con la base conjugada del sistema
buffer como se indica:

𝐻 + + 𝐶𝐻3 – 𝐶𝑂𝑂− 𝐶𝐻3 – 𝐶𝑂𝑂𝐻

(𝐻2 𝑂+ ) (+𝐻2 𝑂)

Por lo tanto, la mayoría de protones agregados al medio no permanecen como tales,

sino que forman el ácido débil 𝐶𝐻3 – 𝐶𝑂𝑂𝐻 y el pH apenas varía. Si e agregan iones
hidroxilo (𝑂𝐻 − ) al sistema buffer, estos reaccionan con moléculas de ácido acético
para formar iones acetato y agua.

𝑂𝐻 − + 𝐶𝐻3 – 𝐶𝑂𝑂𝐻 𝐶𝐻3 - 𝐶𝑂𝑂+ + 𝐻2 O

El equilibrio estará desplazado a la derecha y en consecuencia la mayoría de iones

hidroxilos no se encuentran libres en la solución y el valor del ph casi no cambia. En
resumen, la adicion de pequeñas cantidades de acido fuerte o de base fuerte a una
solución buffer casi no ocasiona cambios en el valor de ph de la solución. Por el
contrario, las mismas adiciones hechas al agua producen una notable variación en
el ph, de modo que la adicion de pequeñas cantidades de un acido fuerte,, por
ejemplo, a soluciones no amortiguadas, producen alteraciones importantes en el
valor de ph de dichas soluciones.

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Materiales y equipo

Experimento 1
Materiales Reactivos
Agitador
Beaker de 100mL
Solución de HCl 0.1M
Balón volumétrico de 250mL
Solución de NaOH 0.1M
Pipeta graduada de 5mL
Cloruro de Amonio
Propipeta
Hidróxido de Amonio Concentrado
Frasco Lavador
Agua destilada
Balanza
pH-Metro

Experimento 2

Materiales Materiales para la punción Reactivos

1 capsula de
porcelana 1 lanceta 2mL de azul de bromotimol al
2 beaker de 400mL 1 par de guantes de latex 0.02%
2 Erlenmeyer de 1 curita 2mL de bicarbonato de sodio al
125mL Algodón con alcohol 5%
2 pipetas de 1mL 1 pajilla 2mL de alcohol etílico
1 probeta de 25mL 1 palillo de dientes 25mL de agua destilada
1 gotero 1 baño de hielo Sangre desfibrinada
1 termómetro

Procedimiento
Experimento 1
En un beaker con agua destilada agregar 1.34g de cloruro de amonio para
disolverlo, luego de esto con una pipeta medir 1.8mL de hidróxido de amonio
concentrado para luego agregárselo a un balón volumétrico que contenga
100mL de agua destilada. La solución de cloruro de amonio se agrega al balón
y se agita bien. En dos beaker de 100mL agregamos a cada uno 50mL del buffer
que se acaba de preparar y luego medir el pH de este buffer con el pH-metro.
Para verificar que en realidad si funciona nuestro buffer a un beaker se le agrega
10 gotas de HCl 0.1M y al otro beaker 10 gotas de NaOH 0.1M luego se mide el
pH.
Solución pH inicial pH (10 pH (10
gotas HCl gotas NaOH
0.1 M) 0.1 M)
Agua 7.05 2.93 9
destilada

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 Buffer 7.55 7.45 7.55
NH3/NH4Cl

Experimento 2
Primero masajear uno de los dedos de la mano con un algodón que contenga
alcohol para eliminar gérmenes y ayudar al flujo de sangre, luego con una
lanceta pincharse el dedo y masajear para colocar las gotas de sangre en un
vidrio de reloj, aproximadamente 10 gotas de sangre, inmediatamente con un
palillo de dientes desfibrilar la sangre, agitándola suavemente. En los
Erlenmeyer agregar 25mL de agua destilada y luego a cada uno agregar dos
gotas de sangre desfibrinada y seguido de esto agregar 1mL de azul de
bromotimol al 0.02% y colocar los Erlenmeyer en un baño de hielo preparado
previamente. A los diez minutos agregar 1mL de bicarbonato de sodio al 5% y
esperar 3 minutos, sin sacar del hielo los frascos a uno hay que introducir una
pajilla para soplar y aplicarle CO2, al iniciar ambos Erlenmeyer estarán de un tono
azul, pero al que se le aplica CO2 se tornara a un color amarillo verdoso.

Experimentos Análisis de resultados Discusión de

resultados
Es posible apreciar Los resultados
como en el agua obtenidos en la práctica
Experimento 1: destilada los cambios concordaron con los
Sistema Buffer del pH son extremos, datos preestablecidos
mientras que en el por la teoría. No se
buffer el pH es bastante encontró ninguna
más estable. dificultad.

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 La presencia carbónica Los resultados
Experimento 2: acelera la formación de obtenidos en la práctica
Anhidrasa Carbónica H+ + HCO3- y causa una concordaron con los
Hemoglobina caída rápida del pH, lo datos preestablecidos
que puede notarse por por la teoría. Pocos
el cambio de color. practicantes habían
extraído sangre.

Cuestionario
1. ¿Cuál es la composición de un sistema buffer y su función en el organismo
humano?
Su composición es de una mezcla en concentraciones relativamente elevadas de
un ácido y su base conjugada, es decir, sales hidrolíticamente activas su función en
el cuerpo es de mantener la cantidad de ácidos y de bases en equilibrio en un
determinado pH en el cual la actividad biológica de
las proteínas, hormonas, enzimas, bombas de iones... sea óptima. En humanos, los
valores compatibles con el mantenimiento de funciones vitales son de pH entre 6,8
y 7,8; siendo el intervalo de 7,35 a 7,45 el de normalidad.

2. Explique el mecanismo de acción de un sistema amortiguador de pH

La utilidad de los amortiguadores, tanto en la regulación del equilibrio ácido-base en
los seres vivos como al trabajar en el laboratorio, estriba precisamente en la
posibilidad de mantener la [H+] dentro de límites tan estrechos que puede
considerarse como invariable.

3. Investigue cuáles son los sistemas buffer (orgánicos e inorgánicos) más

importantes en los líquidos extracelular e intracelular
Bicarbonato, proteínas y fosfatos.

4. Describa los efectos que produce la hiperventilación y la hipoventilación y su

relación con la [H+] y [OH-] La hipoventilación es una disminución en la frecuencia
de las respiraciones, provoca una concentración creciente del dióxido de carbono
en el plasma sanguíneo y la consecuente disminución del pH de la sangre, se
denomina alcalosis respiratoria.
La hiperventilación es una mayor frecuencia de respiración, eleva el pH del plasma
sanguíneo, se le denomina acidosis respiratoria.

5. Qué especies de iónicas del ácido fosfórico predominan al pH sanguíneo si

los valores del pKa del ácido fosfórico para la disociación de sus protones
son:
pKa1= 2.12 pKa2= 6.80 pKa3= 12.66

H3PO4  H+ + H2PO4  H+ + HPO4  H+ + PO4

pKa1= 2.12 pKa2= 6.80 pKa3= 12.66

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 Referencias bibliográficas

 Isaac Túnez Fiñana, A. G. (s.f). Universidad de Cordova . Obtenido de Universidad de

Cordova : https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/06%20pH%20AMORTIGUADORES.pdf