PREPACTICA LABORATORIO MICROBIOLOGÍA #1

NOMBRE: NICOLAS OROZCO MONSALVE

CÓDIGO: 1107521990

1. - El acceso al laboratorio será limitado o restringido por el director o jefe del mismo
cuando se encuentren en curso tareas que involucren manejo de agentes infecciosos. En
líneas generales, las personas que se hallen en alto riesgo de adquirir una infección no
deberán ser admitidas en estas áreas; por ejemplo, los sujetos inmunocomprometidos o
inmunosuprimidos se encuentran en alto riesgo de adquirir infecciones por este tipo de
microorganismos; en estos casos, el jefe del laboratorio tendrá la última palabra y la
responsabilidad de permitir quién puede entrar y trabajar en ese tipo de dependencia.

- El jefe o director de este tipo de laboratorios deberá establecer políticas y

procedimientos que aseguren que solamente personal consciente del potencial riesgo,
dotado de requerimientos específicos.

- Todo el personal que trabaje en este tipo de dependencias deberá recibir las
respectivas inmunizaciones y evaluaciones para los agentes que manipule o que
pudieran estar potencialmente presentes en el área (ej.: vacuna de la hepatitis B, prueba
de la tuberculina, etc,).

- Cada laboratorio deberá preparar y adoptar un manual de bioseguridad, obligando al

personal que labora en el mismo a leerlo con sumo cuidado y a seguir todas las
instrucciones indicadas para las diferentes prácticas y procedimientos empleados.

- El personal de este tipo de laboratorios deberá recibir previamente un adecuado

adiestramiento en el manejo de los potenciales riesgos asociados con las tareas que
realiza, así como en las precauciones a tomarse para prevenir exposiciones o en los
procedimientos para evaluar situaciones en caso de accidentes. También deberá recibir
actualizaciones anuales o adiestramiento adicional, de ser necesarios, o en casos de
cambios en la política del laboratorio.

- Con la manipulación de objetos cortantes, incluyendo agujas, jeringas, pipetas

capilares de vidrio, laminas porta y cubre objetos, escalpelos, bisturíes, etc., deberán
adoptarse estrictas precauciones. Los mismos deberán utilizarse solamente cuando no
existan otras alternativas disponibles. Igualmente, en lo referente a material de vidrio,
en lo posible debe ser reemplazado por utensilios plásticos.

- Materiales de vidrio rotos nunca serán manipulados con las manos; deberán ser
utilizados para ello instrumentos mecánicos, tales como pinzas, cepillos, etc. Todo este
material cortante ya utilizado, así como vidrios rotos, deberán ser descontaminados
antes de proceder a su desecho, de acuerdo a la legislación vigente en cada país

- Todo cultivo, tejidos, especímenes o fluidos biológicos, deberán ser colocados en

contenedores resistentes, que no permitan derrames, durante su recolección, manejo,
procesamiento, almacenamiento, transporte o envío a otras dependencias.

- Tanto el equipo de laboratorio como la superficie de trabajo deberán ser

descontaminados con un desinfectante adecuado para este tipo de microorganismo
después de cada procedimiento con muestras que se presumen infecciosas, de manera
especial cuando se sospecha de salpicaduras, o después de un accidente por derrame.
Equipos contaminados que se hayan dañado, antes de ser enviados a mantenimiento o
reparación, deberán ser descontaminados, de acuerdo a las normas establecidas para
cada país.

- Las salpicaduras u otros accidentes que se traduzcan en exposición directa al material

contaminado, de parte del operador, deberán ser inmediatamente reportados al
Director o jefe del laboratorio. Dicha persona deberá ser sometida a evaluación médica,
seguimiento y tratamiento, llevándose un registro minucioso de cada paso.

2. Los residuos anatomopatológicos, de animales, biosanitarios y cortopunzantes serán

empacados en bolsas rojas desechables y/o de material que permita su desactivación o
tratamiento, asegurando que en su constitución no contenga P.V.C u otro material que
posea átomos de cloro en su estructura química. Colocación del guardián • El guardián
debe quedar fijo dentro del aro, soporte o base para poder descartar fácilmente las
agujas en sus ranuras. • No utilizar cinta o esparadrapo para fijarlo. Uso del guardián
de seguridad Deposite en el guardián: Ampollas de medicamentos. Todo material
cortopunzante: Agujas, hojas de bisturí, pericraneales, lancetas, limas de endodoncia,
jeringas con aguja fija (ejemplo Enoxaparina), almas de catéteres, agujas trucut, aguja
de carpul, hojas de bisturí, aguja de vacutainer etc.

Recomendaciones

- Solo deposite elementos cortopunzantes y restos de ampollas de vidrio.

- Solo llene el guardián hasta las 3/4 partes de su capacidad y luego reemplácelo.

- Deposite el elemento con el extremo (punta) hacia abajo.

- Preste toda su atención cuando esté descartando agujas.

- Utilice siempre el guardián como parte del equipo y no deposite las agujas en otros
recipientes (riñoneras, bandejas etc.)

- Evitar dejar material cortopunzante sobre superficies de trabajo, en la basura, en el

piso, conectadas al equipo de venoclisis, sobre colchones, etc}

3. Tinción de Gram Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos
colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y
bacterias Gram positivas. Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian
Gram en 1884; hoy en día, sigue siendo una de las tinciones más utilizadas
universalmente debido a lo económico, sencillo y eficaz que resulta.

Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared

celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada
microorganismo.
- Bacterias Gram + Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa
constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa. Las
bacterias G+ retienen el cristal-violeta después de la decoloración y aparecen de color
azul intenso (purpura).

- Bacterias Gram - La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida
por una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa, cuyo componente
estructural único son los lipopolisacáridos. Las bacterias G- no son capaces de retener
el cristal-violeta después de la decoloración y son teñidas de rojo con safranina.

4. Cómo hacer una tinción de Gram y su fundamento

Tras recoger la muestra de bacterias que queremos teñir con un isopo procederemos a
extenderla en un portaobjetos y a secarla o bien dejándola secar a temperatura
ambiente o con un mechero, con cuidado de no quemar las bacterias. El siguiente paso
es fijar la muestra en el portaobjetos mediante la aplicación de metanoldurante un
minuto.
Posteriormente se aplica el tinte de violeta de genciana, también conocido como cristal
violeta, al portaobjetos y se deja reposar un minuto. Este colorante puede atravesar
cualquier tipo de pared bacteriana por lo que tiñe tanto bacterias gram positivas como
gram negativas.
Luego se enjuaga la muestra con agua y se aplica lugol, de forma que cubra toda la
muestra y se espera durante un minuto. El lugol es un compuesto formado
principalmente por yodo que en este caso lo que hace es fijar el colorante violeta de
genciana aún más a la muestra. El yodo del lugol y el violeta de genciana forman un
complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
Posteriormente el portaobjetos debe lavarse con una mezcla de alcohol y acetona
durante 30 segundos, en este momento, es cuando finaliza realmente la tinción de
Gram, ya que esta mezcla de alcohol y acetona lo que hace es disolver los complejos de
lugol y violeta de genciana.

De forma opcional, puede realizarse un último paso que consiste en someter a las
bacterias a una última tinción para teñir aquellas que son gram negativas de color rosa
o rojo. Se hace de forma fácil aplicando durante un minuto un colorante como
la safranina o fucsina y luego lavamos con agua.

5. Se hace con suspensiones en agua sin teñir (preparaciones "en fresco"). Puede
hacerse en suspensiones “entre portaobjetos y cubreobjetos”(los vidrios de las placas) o
en “gota pendiente” (una gota con los microorganismos que se van a estudiar)

6. Su forma puede variar entre cocos (esféricas u ovaladas), bacilos (cilíndrica o de

bastones; rectos o curvos) y espirilos (espiral)

7. Cilios y Flagelos