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DISEÑO Y CONTRUCCIÓN DE UN
PROTOTIPO DE TERMOCICLADOR
Walther Andres Estevez, Juan Fernando Herrera, Cristian Leonardo Sandoval

 en el termociclador, el cual es un aparato usado en biología


Abstract—These instructions give you guidelines for preparing molecular que permite realizar cambios de temperatura muy
papers for IEEE Transactions and Journals. Use this document as precisos. El termociclador calienta o enfría los tubos a tres
a template if you are using Microsoft Word 6.0 or later. Otherwise, temperaturas distintas que se repiten una y otra vez (lo que se
use this document as an instruction set. The electronic file of your
llama los ciclos de reacción), la primera es a 95ºC y a este paso
paper will be formatted further at IEEE. Paper titles should be
written in uppercase and lowercase letters, not all uppercase. se le llama desnaturalización; después el termociclador ajusta la
Avoid writing long formulas with subscripts in the title; short temperatura en un intervalo entre 40º y 60ºC a lo que se le llama
formulas that identify the elements are fine (e.g., "Nd–Fe–B"). Do de alineamiento. Luego, la temperatura sube a 72ºC paso que se
not write “(Invited)” in the title. Full names of authors are conoce como extensión, ya que 72ºC es la temperatura en la
preferred in the author field, but are not required. Put a space cual la polimerasa alcanza su máxima actividad. Cabe
between authors’ initials. Define all symbols used in the abstract.
mencionar que antes y después de estos ciclos se programan dos
Do not cite references in the abstract. Do not delete the blank line
immediately above the abstract; it sets the footnote at the bottom pasos, uno de 95ºC durante varios minutos para iniciar con
of this column. desnaturalización, y al final de los ciclos, un paso último de
extensión a 72ºC.
Index Terms—Enter key words or phrases in alphabetical En este proyecto se realizará el diseño utilizando el software
order, separated by commas. For a list of suggested keywords, SolidWorks y la construcción de un prototipo de termociclador,
send a blank e-mail to keywords@ieee.org or visit en donde se implemente un interfaz cómodo para el usuario y
http://www.ieee.org/organizations/pubs/ani_prod/keywrd98.txt
el cual mostrará los ciclos de temperatura mediante una
adquisición de datos entre arduino y Excel. Además, se
I. INTRODUCCIÓN realizará una ficha técnica de dicho prototipo. Para llevarlo a
cabo se aplicarán los conocimientos adquiridos en las diversas
disciplinas del área de mecánica, electrónica y termodinámica
E l desarrollo de la tecnología ha impactado notablemente en
la rama científica. En el campo de la biología,
específicamente el desarrollo disciplinar ha ido siempre de la
con el fin de implementar un aplicativo a la bioingeniería.

mano del desarrollo tecnológico (Educar.ar, 2006). En la II. METODOLOGÍA


biología los laboratorios cuentan con equipos de tecnología
avanzada. Debido a esto se han perfeccionado las técnicas de
laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta
En la realización de este proyecto se hizo una investigación
pureza, visualizarlo para ver su estado, amplificar una región en
enfocada en el control de temperatura para el desarrollo del
una enorme cantidad de moléculas (clonación de fragmentos en
prototipo de un termociclador. En este instrumento la principal
bacterias u otros vectores como virus y PCR) (Iglesias, 2015). característica es la utilización de temperatura durante tiempos
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en que pueden ser programables, normalmente con rangos de
inglés) es una de las herramientas tecnológicas más temperatura de 20°C a 98 °C, además de que nos permite
innovadoras para el estudio de los ácidos nucleicos. Se obtener gráficas para interpretación todo esto ayudado con un
caracteriza por ser una técnica de alta sensibilidad, software desarrollado para el mismo.
reproducibilidad y eficiencia, que genera resultados confiables En el transcurso y realización del presente proyecto se utilizó
en poco tiempo y fáciles de analizar (Tamay de Dios, Ibarra y un enfoque metodológico basado en métodos y técnicas
Velasquillo, 2003). Esta técnica tan ingeniosa tiene muchísimas cuantitativas. La técnica para el control de la temperatura
aplicaciones distintas y se ha convertido en una herramienta facilito en gran parte la obtención de datos veraces, puesto que
muy importante en la biología molecular; sus aplicaciones van el comportamiento de los datos gráficamente es similar a los
desde la genética de poblaciones, evolución molecular y termocicladores más avanzados. El prototipo incluyo un
genómica hasta la medicina forense. sistema de calentamiento, así como un sistema de enfriamiento
Para la realización de la PCR, las muestras a analizar se colocan adecuado al diseño estructural. Además, presento una variable
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de intervalo para medir rangos de temperatura, debido a que el Figura 2. Diagrama de bloques Sistema de calentamiento y
funcionamiento del termociclador está dividido en 6 etapas: enfriamiento.
Inicio, desnaturalización, alineamiento, extensión, elongación El diagrama de bloques de las conexiones que intervienen en el
final y conservación. proceso de control de temperatura se muestra en la figura 2.
En la segunda etapa se diseñó el software por medio de la
La construcción del termociclador se dividió en 3 etapas: diseño plataforma arduino, con el cual se permite hacer un control en
electrónico, diseño de software y diseño estructural. En el la temperatura respecto las diferentes fases que tiene el
diseño electrónico se establecieron unas restricciones las cuales termociclador. El desarrollo del programa cuenta con una
se muestran en la tabla 1. interfaz gráfica, en donde el usuario puede ingresar los valores
de temperatura y de tiempo.
Temperatura Mínima 20ºC La interfaz de usuario cuenta con una pantalla LCD (Figura 3)
Temperatura Máxima 100ºC en donde se visualiza los diferentes valores de temperatura con
Tabla 1. Restricciones de diseño electrónico. su respectivo tiempo en cada fase, un teclado para digitar los
valores y una secuencia de leds que permite identificar la fase
Inicialmente se plantío el sistema de calentamiento y en la que se encuentra la temperatura.
enfriamiento a través del efecto peltier, aprovechando que se
puede enfriar y calentar al mismo tiempo debido al paso de
corriente a través de la célula, añadiendo un puente H que
permitiría pasar de un estado a caliente a uno frio y viceversa,
pero en las pruebas realizadas la celda peltier se quemaba y esto
se producía al tener un ∆𝑇 alto.
Para solucionar este problema se dividió en 2 partes, primero se
optó por un sistema de calentamiento (Figura 1) con una
resistencia térmica, con la que se permite alcanzar niveles de
temperatura de hasta los 120ºC. El sistema de enfriamiento se
hizo a través de una acomodación de coolers en forma de
extractores permitiendo que el aire caliente de la recamara se
expulsará y una celda peltier. El control del sistema unificado Figura 3. Interfaz de usuario LCD y Teclado
se hace a través de ON/OFF por medio de módulos de relé.
El diseñó de la parte física del termociclador, fue realizado en
el software SolidWorks y se utilizo como material de
construcción PLA, para imprimirlo en la maquina 3D.
Además, se incorporó un aislante para separar las paredes del
termociclador y la recamara en donde se encuentra el sistema
de calentamiento y enfriamiento, ya que este material no
soporta altas temperaturas. La interpretación de los datos de
temperatura se realiza a través de graficas que serán
expuestas en una comunicación entre Excel y arduino por
puerto serial.
La ficha técnica del prototipo del termociclador se encuentra
como anexo 1.

III. RESULTADOS

El diseño de la parte estructural del termociclador con el


software SolidWorks, se observa en la Figura 4, como anexo 2
se encuentras las medidas del diseño.
Figura 1. Sistema de Calentamiento y enfriamiento
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Figura 4. Diseño en SolidWorks La tabla 2 muestra los valores de temperatura y tiempo de cada
de unas fases con los cuales se harán las pruebas del
El diseño del prototipo de termociclador es un poco más termociclador. Simultáneamente el desarrollo de esta prueba se
pequeño que los normales, con el fin de que fuera más fácil de realizó con un termociclador Swift MaxPro bajo las mismas
transportarlo. En la figura 5 se observa la máquina de impresión condiciones (Figura 8.) con el fin de hacer una comparación de
3D en donde se elaboro la estructura final de la parte física los datos obtenidos y observar el comportamiento de la gráfica
(Figura 6). de temperatura en sus diferentes fases.

Fases Temperaturas Tiempo


Fase de Inicio 98ºC 4 minuto
Fase de desnaturalización 95ºC 30 segundos
Fase de alineamiento 52ºC 30 segundos
Fase de extensión 70ºC 30 segundos
Fase elongación Final 75ºC 5 minutos
Conservación - -
Tabla 2. Condiciones de trabajo para prueba con el
termociclador.

8 (A).
Figura 5. Maquina 3D

Figura 6. Diseño final impreso en la maquina 3D. 8(B).


En la figura 7 se observa el acople de todos los elementos del
termociclador. Se aprecia la parte mecánica, electrónica,
termodinámica y de estructura que permitieron el desarrollo del
equipo.

Figura 8. (A) Termociclador Swift MaxPro. Este quipo será la


referencia para hacer las comparaciones con el prototipo
Figura 7. Diseño final con todos los sistemas electrónicos.
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realizado en este proyecto. (B) Condiciones de temperatura y


tiempo en las cuales se llevó a cabo la PCR.

Grafica 1. Ciclos de temperatura vs tiempo. Se observan cada una de las fases de la reacción de la PCR y la subdivisión de los
ciclos.
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Portal.educ.ar. (2006). El aporte de la tecnologia a la biologia


[en linea] Disponible en:

http://portal.educ.ar/debates/educacionytic/formacion-
docente/el-aporte-de-la-tecnologia-a-la-biologia.php [Acceso
12 Nov. 2017].

Iglesias, G. (2015). Tecnicas de biologia molecular. [en linea]


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https://genmolecular.com/tecnicas-de-biologia-molecular/
[Acceso 12 Nov. 2017].

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calificacion-de-pcrs/ [Acceso 12 Nov. 2017].

Tamay de Dios, L., Ibarra, C. and Velasquillo, C. (2003).


Fundamentos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
y de la PCR en tiempo real. Investigacion en discapacidad,
2(2).
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Anexo

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