Enzimas. Clasificación.

Cofactores Enzimáticos

Mg. Gisela Oliveira Bardales

1
 El término de
enzima:

• Fue propuesto por Friedrich Wilhelm

Kühne en 1867.
• Deriva de la frase griega en zymé,
que significa «en fermento».

2
 Enzimas

 Son catalizadores orgánicos,

principalmente de naturaleza proteica.

 Son estructuralmente complejas.

 Coloidales.

 Hidrosolubles.

 No se consumen durante la reacción.

3
 Enzimas

 Son específicas para un sustrato

particular (estereoespecificidad).

 Aceleran las reacciones químicas

(103-1020).

 Actúan en disolución acuosa a pH y

temperatura óptimos.

4
 Enzimas

 Son las unidades funcionales del

metabolismo celular.

 Participan en reacciones acopladas

(catabolismo - anabolismo).

 Regulan rutas metabólicas

(oligoméricas).

5
 Enzimas

ENZIMA
en = en
zymos = levadura

6
 Enzimas.
Definición

 Macromoléculas.
 Biocatalizadores de
reacciones químicas en
seres vivos.
7
 Enzimas.
Características

• Poder catalítico (disolución).

8
 Enzimas.
Características

• Especificidad. Es la principal característica

de las enzimas. Está determinada por:

• Grupos funcionales de las enzimas.

• Grupos funcionales del sustrato.

• Cofactores para las enzimas que lo

requieran.

• Proximidad física de estos grupos

funcionales
9
 Enzimas.
Características

• Especificidad.
• Cada enzima posee en su superficie una
zona activa: centro activo o centro
catalítico, a la que se une la molécula de
sustrato.

10
 Enzimas.
Características

• Especificidad. Pueden catalizar

la transformación de un
sustrato o una familia de
sustratos relacionados
estructuralmente.

11
 Enzimas.
Características

• Aumentan la velocidad de la
reacción.

12
 Enzimas.
Características

• No se consumen en una reacción.

13
 ¿Por qué son necesarias las
enzimas en sistemas
biológicos?
 A la temperatura y pH de los seres vivos,
las reacciones químicas se realizan muy
lentamente.
 La energía es insuficiente para llevar a
cabo las actividades musculares, la
generación de impulsos nerviosos y otras
actividades que ayuden a soportar la vida.

Hay que acelerar la velocidad de las

reacciones!!!
14
Enzimas

15
 Enzimas. Forma
de acción

 Las enzimas son altamente específicas:

- En la reacción que catalizan.

- En la selección de las sustancias

reaccionantes, llamadas SUSTRATOS.

16
 Enzimas. Forma
de acción

 La especificidad de una enzima se debe a

la interacción precisa del sustrato con la
enzima.

 Esta precisión es el resultado de la

compleja estructura tridimensional de la
proteína enzimática.

17
 Muchas enzimas necesitan
cofactores para su actividad

 La actividad catalítica de muchas enzimas

depende de la presencia de pequeñas
moléculas llamadas cofactores.

 La actividad de la enzima varía con el

cofactor y la enzima misma.

18
Enzimas Simples y Complejas

 Simples:
Formadas solamente por proteínas.

 Compuestas:
Parte proteica + Parte no proteica
(Cofactor o Coenzima)

19
Enzimas Simples y Complejas

 Simples:
Parte proteica = Apoenzima

 Compuestas:
Parte proteica + Parte no proteica
(Apoenzima) (Cofactor o Coenzima)
--------------------------------------------------------
HOLOENZIMA

20
21
22
23
Algunas enzimas necesitan de una o más
sustancias de naturaleza no proteica para
llevar a cabo su actividad catalítica

24
 Iones metálicos que actúan como
cofactores enzimáticos

Son generalmente cationes monovalentes o

divalentes: Mg+2, Ca+2, K+…

1) En algunas enzimas el ion

metálico constituye el
verdadero centro catalítico. El
ion suele presentar por sí solo
una cierta actividad catalítica,
que se ve incrementada
cuando forma parte de la
enzima.
2) A veces el ion metálico no
forma parte del sitio activo
sino que se encuentra en un
lugar de la enzima, muy
alejado de la misma, actuando
como agente estabilizador de
la conformación nativa de la
enzima.
25
Sitio catalítico de
enzima
carboxipeptidasa

3) En otras enzimas el
ion metálico constituye
un grupo puente para
unir el sustrato al sitio
activo.

26
 COENZIMAS

Actúan generalmente
como transportadores
intermediarios de grupos
funcionales, de
determinados átomos o
de electrones, los cuales
son transferidos de una A veces las coenzimas se hallan
sustancia a otra en la íntimamente unidas a la molécula
reacción enzimática proteica constituyendo un
global. verdadero grupo prostético.
En otros casos la unión es débil y
la coenzima actúa en realidad
como un sustrato más de la
enzima.

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 COENZIMA
VITAMINA DERIVADA FUNCIÓN
Pirofosfato de Descarboxilación y
Tiamina (B1) tiamina TPP transferencia de grupos acilo.
Flavina
mononucleótido FMN Portadores de hidrógeno y
Riboflavina (B2) Flavina y adenina electrones en oxido-
dinucleótido FAD reducciones

Nicotinamida y
adenina dinucleótido NAD+ Portadores de hidrógeno y
Ácido Nicotínico Nicotinamida y electrones en oxido-
adenina dinucleótido NADP+ reducciones
fosfato
Piridoxina, piridoxal Transferencia de grupo amino
y piridoxamina (B6) y decarboxilación
Ácido Pantoténico Coenzima A CoASH Transferencia de acilos
Enlazada
Biotina covalentemente a Carboxilación
carboxilasas
Ácido Fólico Tetrahidrofolato TH4 Transferencia de un carbono
Coenzima de Reordenamientos,
Cobalamina (B12) cobamida transferencia de metilos
28
 Las enzimas interconvierten
diferentes formas de energía

 En muchas reacciones químicas, la

energía de las sustancias reaccionantes,
se convierte en una forma de energía
diferente con una eficiencia muy elevada.

29
 Las enzimas interconvierten
diferentes formas de energía
 En la fotosíntesis:
 Energía lumínica en energía química de
enlace a través de una gradiente de iones.

 En la mitocondria:
 Energía libre de los alimentos --- > energía
libre de un gradiente de iones --- > energía
libre de ATP, “moneda de cambio
energético”
30
 Enzimas. Clasificación

 La mayoría tienen nombres comunes

(tripsina, secretada por el páncreas).
 Se denominan a partir del nombre del
sustrato sobre el cual actúan y el tipo de
reacción que catalizan, con el sufijo “asa”.

 ATPasa - descompone el ATP.

 ATP sintasa - sintetiza ATP

31
 Enzimas. Clasificación
 1964 - IUB (International Union of Biochemestry),
estableció una Comisión de Enzimas para
establecer una nomenclatura para su
clasificación.

 Las reacciones dividieron en seis clase

principales, del 1 al 6.

 Estas clases se subdividen mediante un código

de cuatro dígitos precedidos por las letras EC
(de Enzyme Comision), para poder identificarlas
con mayor precisión.
32
 Enzima: tripéptido aminopeptidasa
Código EC 3.4.11.4

 3 por hidrolasa, enzima que usa el agua para

catalizar algunas reacciones.
 3.4 por hidrolasa que actúa sobre los enlaces
peptídicos.
 3.4.11 por hidrolasa que actúa sobre el
terminal amino de aminoácido de un
polipéptido.
 3.4.11.4 por hidrolasa que actúa sobre el
terminal amino final de un tripéptido.
33
 Enzimas. Clasificación
Clase 1. Oxido-reductasas
Procesos de óxido-reducción.
– Ej: Deshidrogenasas, peroxidasas

34
Clase 1. Oxido-reductasas

2e

LACTATO PIRUVATO

35
 Clase 2. Transferasas

Transferencia de
un grupo funcional
de una sustancia a
otra: amino, acilo,
fosfato, glucosilo,
grupos
monocarbonados.
Ej: transaminasa,
quinasas.

Glucosa + ATP Glucosa-6P + ADP

Hexoquinasa

36
 Clase 3. Hidrolasas
Catalizan la ruptura de enlaces químicos
(hidrólisis) con la participación de las moléculas
de agua (Ej,: glucosidasas, fosfatasas).

Lactasa
Lactosa + H2O glucosa + galactosa

37
 • Clase 4. Liasas
Catalizan reacciones en las cuales se adicionan o
eliminan grupos de los sustratos, para formar o eliminar
doble enlace, respectivamente (Ej.: aldolasas,
descarboxilasas).

Fumarasa
H2O

38
 Clase 5. Isomerasas

Catalizan isomerizaciones de diversos tipos: óptica,

geométrica, funcional, de posición, etc. (cis-trans,
ceto-enol, aldosa-cetosa).

39
 Clase 6. Ligasas

Unen dos moléculas por síntesis de nuevos

enlaces, para ello utilizan energía o liberan
energía.

Propionil-CoA
D-metilmalonil-CoA

40
Enzimas. Forma
de acción

41
 Enzimas. Forma
de acción

 Las enzimas aceleran las reacciones

mediante la facilitación de la formación del
ESTADO DE TRANSICIÓN.

 La primera etapa de la catálisis enzimática

es la formación de un complejo enzima-
sustrato.
 Los centros activos de las enzimas tienen
algunas características comunes.
42
 Estado de Transición
(E-S)
E-S

 Estado intermedio
en el que los
enlaces del E+S

sustrato (S) están E+P

lo suficientemente
distorsionados
para su conversión
en producto (P).
E+S E-S E+P

43
 Enzimas. Forma
de acción

 Centro activo, región de la enzima que se

une al sustrato.
 Contiene los residuos (grupos catalíticos)
que participan directamente en la
producción y ruptura de enlaces.
 La interacción de la enzima y el sustrato en
el centro activo, hace posible la formación
del estado de transición.

44
 Enzimas. Forma
de acción
 Centro activo:

 Es una hendidura tridimensional formada

por grupos que provienen de diferentes
partes de la secuencia lineal de
aminoácidos.

 Es una porción relativamente pequeña del

volumen total de la enzima.
45
 Enzimas. Forma
de acción

 Centro activo:

 Los sustratos se unen a las enzimas por

numerosas fuerzas débiles.

 La especificidad del enlace depende de la

disposición exactamente definida de los
átomos del centro activo.

46
47
 ¿Cómo se aumenta la
velocidad de reacción?

◦ Elevando temperatura.
◦ Disminuyendo la energía de
activación.

Enzimas aceleran la velocidad de

reacción por medio de la disminución
de la energía de activación.

48
 E-S

Energía de
Activación
(Ea)

 Cantidad de
energía mínima
para que el Reacción catalizada por una enzima
E-S
sustrato (S) alcance
el estado de
transición (E-S) y
luego se
transforme en
producto (P).
49
 La velocidad de una enzima
se mide según:

 Desaparición de sustrato.
 Aparición de producto.

 La función principal de las

enzimas es aumentar la velocidad
de las reacciones para que éstas
sean compatibles con las
necesidades del organismo.
50
 Determinación de constantes:

 Para determinar la velocidad máxima de una

reacción enzimática, se aumenta la
concentración de sustrato, ([S]) hasta alcanzar
una velocidad constante de formación de
producto.

 Éstaes la velocidad máxima (Vmax) de la

enzima.

 Esdecir, los sitios activos de la enzima, están

saturados con sustrato.
51
Determinación de constantes:

52
 Velocidad de
reacción

 La velocidad de catálisis (Vo), varía con la

concentración del sustrato [S].

 Vo = número de moléculas de sustrato que se

convierten en producto por segundo.

 La velocidad de la catálisis aumenta de forma

lineal al incrementar la concentración de sustrato
y, luego a mayores concentraciones de sustrato, se
aproxima a un máximo.
53
 Velocidad de
reacción

 No hay un valor de concentración del

sustrato [S] determinado para la Vmax.

 Sin embargo, se puede determinar un

parámetro característico de la enzima,
empleando la concentración de sustrato a
la cual se alcanza la mitad de la velocidad
máxima (Vmax/2).

54
 Constante de
Michaelis-Menten
 Es imposible medir exactamente la
concentración de sustrato que da Vmax.

 Las enzimas se pueden caracterizar mediante

la concentración de sustrato a la cual la
velocidad de reacción es la mitad de la
velocidad máxima.

 Esta concentración de sustrato se denomina

como la constante de Michaelis-Menten (Km).
55
 Constante de
Michaelis-Menten

 Corresponde a la concentración de
sustrato con la cual la velocidad de
reacción enzimática alcanza un valor igual
a la mitad de la velocidad máxima.

56
 En la práctica......
Gráfica de Michaelis-Menten

Vmax
----------------------------------------------------------

57
 ¿Bajo qué condiciones
aplica la ecuación de
Michaelis-Menten?
 Velocidad inicial.
 No añadir producto al medio de ensayo.
 Concentraciones de sustrato muy
superior a la concentración de la
enzima.
La concentración de sustrato debe
permanecer “casi” constante durante el
período de tiempo en que se mide la
reacción. 58
 Factores que afectan la
velocidad

 Concentración de sustrato o sustratos

(cofactores)
 Concentración de enzima
 Inhibidores
 Activadores
 Temperatura

59
 ¿Por qué determinar
K m?

 Establece el valor aproximado de la

concentración de sustrato en la célula.
 Identificación de isoenzimas.
 Mide afinidad de la enzima por
determinado sustrato.

A mayor valor de Km, la afinidad de

la enzima por el sustrato es baja.
60
 Glucosa

Hexoquinasa ATP

Glucoquinasa ADP
Km hexoquinasa = 0.1 mM
Glucosa-6-P Km glucoquinasa = 10 mM

[glucosa] sangre = 4 - 5 mM
Después de ingerir dieta rica en carbohidrato,
[glucosa] sangre, se eleva. Glucosa es transportada
al hígado para ser convertida en Glu-6-P.

61
 Km y Vmax

 Los valores de Km de las enzimas

varían ampliamente (10-1 y 10-7).

 El valor de Km para una enzima

depende de cada sustrato y también del
pH, temperatura y fuerza iónica.

62
 Km y Vmax

 Km es la concentración de sustrato a la
cual la mitad de los centros activos
están ocupados.

 Km proporciona una medida de la

concentración de sustrato necesaria
para que ocurra una catálisis
significativa.
63
 Km y Vmax

 En conclusión:

 Km es igual a la constante de
disociación del complejo ES.

64
 Km y Vmax

 La velocidad máxima Vmax indica el

número de recambio de una enzima, que
se refiere al número de moléculas de
sustrato que se convierten en producto
por unidad de tiempo por una molécula
de enzima, cuando ésta se encuentra
totalmente saturada por el sustrato/
65