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Prueba Oxidación- fermentación (OF)

Las bacterias ocupan diferentes vías metabólicas para obtener sus nutrientes y la
energía, casi todas las bacterias consumen algún tipo de carbohidrato generalmente
el mas utilizado por las bacterias es la glucosa, usan la vía oxídativa, fermentativa
o ambas.

La vía oxidativa utiliza oxígeno, un sinónimo es vía aerobia. El metabolismo


fermentativo no utiliza oxigeno, sinónimo metabolismo anaerobio.

Ph debe ser 7.1, que dara un color verde en la preparación.

Fundamento: Las bacterias pueden utilizar los carbohidratos por la vía fermentativa
o por la vía oxidativa. Las bacterias anaerobias los fermentan; las facultativas
pueden fermentarlos o degradarlos oxidativamente; las aerobias estrictas sólo
pueden oxidarlos.

Para detectar si las bacterias utilizan los carbohidratos por la vía oxidativa o
fermentativa se utiliza el agar OF, que contiene agar, peptona y azul de bromotimol
como indicador de pH. Inicialmente el medio es de color verde (pH 7,1) y vira a
amarillo cuando el medio se acidifica (pH de 6 a 7,6) producto de la fermentación u
oxidación del carbohidrato.

En el tubo sin aceite: La producción de ácidos débiles reduciría el ph del medio


esto será evidenciado gracias al indicador produciéndose una coloración amarilla
en todo el tubo, aunque puede variar su intensidad.

En el tubo con aceite: La fermentación de la glucosa produce ácidos fuertes


respecto a los que produce la vía oxidativa, ejemplo de estos ácidos son el ácido
láctico, ácido fórmico, ácido acético, entre otros. El medio se acidifica y el vire del
indicador da como resultado una coloración amarilla intensa en la totalidad del tubo.

Un tubo se cerrara su tapa de tal forma que quede floja con la intención de que entre algo
de oxigeno, al segundo tubo se le agregara 1.5-2ml de aceite mineral estéril y la tapa se
cerrara completamente, se incubarán durante 24h.
Procedimiento: para esta prueba se inoculan 2 tubos, ejemplo: si se quiere hacer la
prueba de OF glucosa, se inoculan dos tubos de OF glucosa; después de inocular los
tubos, a uno se le coloca un tapón de parafina con 1.5-2ml de aceite mineral esteril y se
rotula con la letra F y al otro no se le añade parafina y se le coloca la letra O. El tubo que
tiene la letra F mide la fermentación (en anaerobiosis porque tiene parafina) y el tubo con
la letra O mide la oxidación, no se coloca parafina, hay contacto con el oxígeno.

Interpretación de resultados:
Si el tubo de oxidación "O" se torna amarillo, pero el de fermentación "F" queda verde la
bacteria es una oxidadora, no fermenta ese carbohidrato
Si el tubo "O" permanece verde y el tubo "F" se torna amarillo: la bacteria fermenta pero
no oxida, es una fermentadora, una anaerobia estricta, no oxida.
Si ambos tubos quedan amarillos: bacteria anaerobia facultativa, oxida y fermenta el
carbohidrato
Si ambos tubos quedan verdes: bacteria inerte, no utiliza el carbohidrato por ninguna vía
metabólica

Ambos tubos verdes se interpreta como: negativo o no sacarolitico debido a que no


consume glucosa.
Interpreatción de tubos amarillo, amarillo: Fermentador facultativo y se reporta como: F

Cuando el tubo abierto es amarillo y el tubo con aceite es verde se interpreta como
reacción oxidativa y se reporta como: O

Control positivo oxidativo: Pseudomonas aeruginosa


Control positvo fermentador: Escherichia coli
Control sin cambios, no consume glucosa: Moraxella sp

–MacFadin, Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia


clínica, 3ed, Panarmericana, Argentina, 2003.
Gelatina nutritiva
La gelatina nutritiva se utiliza para la diferenciación de microorganismos sobre la base de
la producción de gelatinasa en un entorno de laboratorio. La gelatina nutritiva no está
destinada a ser utilizada en el diagnóstico de enfermedades u otras condiciones en
humanos.
La identificación de bacilos Gram-negativos fermentativos y no fermentativos incluye la
prueba de licuefacción de gelatina. Si la enzima proteolítica gelatinasa está presente, la
gelatina se hidroliza y pierde su característica de gelificación.

Procedimiento

Incubar un caldo con 12%de gelatina. Enfriar para comprobar la formación del gel.
Si se hidroliza la gelatina, el tubo permanece líquido cuando se refrigera.

Sustrato: Gelatina (proteina).


Enzima: Gelatinasa (Proteasa, exoenzima).
Producto: Aminoacidos.
Revelador: No requiere o puede emplearse el carbon activado en polvo.

La produccion de gelatinasa se usa como una ayuda taxonomica para la identificación y la clasificacion de
bacterias fermentadoras (ej. Enterobacterias) y no fermentadoras principalmente para identificar cultivos
puros.