Prácticas Microbiología MEHU-UPAO

1. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

OBJETIVOS:

Explicar las definiciones que involucra el término bioseguridad, para así reconocer los riesgos y
la prevención que debemos aplicar en el laboratorio de microbiología.
Identificar riesgos potenciales asociados a agentes biológicos, químicos y físicos.
Describir las similitudes y diferencias entre los laboratorios con diferentes niveles de bioseguridad.

INTRODUCCIÓN:

La microbiología nos ayuda a comprender el mundo natural y por muchas razones, el estudio de los
microorganismos puede sernos útiles en procesos industriales y otros muchos.

Por otro lado, la microbiología médica nos ayuda a estudiar a las bacterias, virus, hongos y a otros
agentes infecciosos debido a que pueden causar enfermedades,

En referencia al párrafo anterior estos microorganismos son patógenos para los seres humanos,
pero también para animales u otros, su estudio, utilización y manipulación conlleva riesgos que
dependen de lo que hacemos con ellos, de cada agente y de su patogenicidad.

Todo microorganismo es considerado potencialmente peligroso por eso debe ser manipulado
teniendo en cuenta las precauciones adecuadas.

Los profesionales de la salud por la naturaleza de sus actividades se encuentran expuestos a riesgos
profesionales, ya que se encuentran interaccionando con personas y materiales que potencialmente
pueden poner en riesgo su salud.

Se conoce como peligro a todo lo que en un momento dado puede causar daño a la salud, como
ejemplo tenemos a algunos microorganismos, sustancias químicas, hábitos, accidentes, radiación,
etc., por otra parte, se conoce como riesgo a la probabilidad de que dicho peligro se presente en un
momento y circunstancias dadas con el consiguiente daño a la salud.

La bioseguridad, en si son normas en general que se han diseñado para disminuir, a niveles
adecuados, los riesgos inherentes a la utilización de materiales y agentes biológicos peligrosos. Son
normas estrictas para la manipulación de agentes peligrosos y menos estrictas para agentes que
producen problemas leves.

Las normas de bioseguridad son compromisos establecidos para permitir que el trabajo necesario
se realice con una exposición de mínimo riesgo, tanto para las personas que lo realizan como para
las demás y el medio ambiente.

“Sólo los microbiólogos seguían las Buenas Prácticas de Microbiología, en primer lugar, con el fin de
preservar sus cultivos y en segundo término preocupados por el operador. En la década de los 80,
con la aparición del virus de la inmunodeficiencia humana, surge el primer Manual de Bioseguridad
del Centro de Control de Enfermedades (CDC) de los EE.UU., el desarrollo de Normas de
Bioseguridad de aplicación más generalizada y el concepto de las Precauciones Universales, el cual
establece que se deben tratar todas las muestras por igual, se sepa o no si provienen de
individuos con alguna infección.” http://www.scielo.org.ar/pdf/medba/v70n3/v70n3a18.pdf
La Organización Mundial de la Salud (OMS) reconoce que la seguridad y, en particular, la seguridad
biológica es una importante cuestión de interés internacional. Por lo que publicó el Manual de
bioseguridad en el laboratorio en 1983. En él se alentaba a los países a aceptar y aplicar conceptos
básicos en materia de seguridad biológica y a elaborar códigos nacionales de prácticas para la
manipulación sin riesgo de microorganismos patógenos en los laboratorios que se encuentran dentro
de sus fronteras nacionales.

En la tercera edición del manual, se subraya la importancia de la responsabilidad personal

(http://www.who.int/topics/medical_waste/manual_bioseguridad_laboratorio.pdf). Se han incluido
nuevos capítulos que se ocupan de la evaluación de riesgos, el uso de las tecnologías del DNA
recombinante en condiciones de seguridad y el transporte de material infeccioso.

Esta edición también contiene información sobre seguridad tomada de Safety in health-care
laboratories, que publicó la OMS en 1997.
(http://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/63993/WHO_LAB_97.1.pdf?sequence=1&isAllowed
=y)

El Manual de bioseguridad en el laboratorio de la OMS clasifica a los laboratorios como sigue:

 Laboratorio básico – nivel de bioseguridad 1 (NB1)

 Laboratorio básico – nivel de bioseguridad 2 (NB2)
 Laboratorio de contención – nivel de bioseguridad 3 (NB3)
 Laboratorio de contención máxima – nivel de bioseguridad 4. (NB4)

La designación del nivel de seguridad que un laboratorio tiene que seguir se basa en una
combinación de características de diseño, construcción (barreras de contención secundarias),
medios de contención (barreras de contención primarias), equipos, prácticas y procedimientos de
operación necesarios (Buenas prácticas de Laboratorio [BPL]) para trabajar con agentes patógenos
de los diferentes grupos de riesgo establecidos.

PRÁCTICA:

INFORMACIÓN BÁSICA DE BIOSEGURIDAD

Definición de Bioseguridad:

La OMS en su Manual de Bioseguridad para el Laboratorio define la bioseguridad como el término

utilizado para referirse a los principios, técnicas y prácticas aplicadas con el fin de evitar la exposición
no intencional a agentes de riesgo biológico y toxinas, o su liberación accidental.

Definición de Peligro Biológico

Incluimos aquí a los agentes infecciosos o etiológicos, los materiales potencialmente infecciosos,
ciertas toxinas y otros materiales biológicos peligrosos.

Peligro Biológico

Agentes Biológicos y materiales que son potencialmente peligrosos para los seres humanos,
animales y/o plantas, es decir, los que pueden causar daño si estamos en contacto con ellos o nos
causan alguna infección.
Entre los agentes biopeligrosos se encuentran: bacterias, hongos, virus, Rickettsias, Chlamydia sp.,
parásitos, productos recombinantes, alérgenos, cultivos de células humanas y animales y los
agentes potencialmente infecciosos que contengan estas células, viriones, priones y otros agentes
infecciosos que se contemplan en leyes, normativas y normas.

Clasificación de los agentes infecciosos en base a su peligrosidad (Grupos de

Riesgo)

Existen diversos sistemas para clasificar a los patógenos humanos y animales de acuerdo con los
peligros que representen para un individuo o una comunidad. La clasificación más utilizada es la que
se encuentra en las NIH Guidelines for Research Involving Recombinant or Synthetic Nucleic Acid
Molecules (https://osp.od.nih.gov/wp-content/uploads/2013/06/NIH_Guidelines.pdf). Los agentes
etiológicos humanos se clasifican en cuatro grupos de riesgo de los que el GR1 es el que presenta
un peligro bajo o nulo y el GR4 representa a los agentes altamente infecciosos.

Tabla 1. Clasificación de agentes biopeligrosos en Grupos de Riesgo (Bases)

Grupo de
Riesgo para el individuo y la comunidad
Riesgo
Agentes que no están asociados con enfermedades en humanos adultos sanos: Bacillus
1 (GR-1) subtilis, Hepatitis canina, E. coli, Saccharomyces cerevisae, virus varicela Zoster, así como
algunos cultivos celulares y bacterias no-infecciosas.
Agentes asociados a enfermedades humanas que son raramente graves y para los que se
2 (GR-2) dispone, con frecuencia, de intervenciones preventivas y/o terapéuticas: Virus de la hepatitis
B, virus de la hepatitis C, virus de la gripe, Borrelia burgdorferi, Salmonella, VIH.
Agentes asociados con enfermedades humanas graves o letales para los que se puede
disponer de intervenciones preventivas o terapéuticas (elevado riesgo individual, pero bajo
3 (GR-3) riesgo para la comunidad).
Bacillus anthracis, priones, virus del Nilo Occidental, virus SRAS, Mycobacterium
tuberculosis, Rickettsia prowazeki, virus de la fiebre amarilla, hantavirus, y virus del dengue.
Agentes que probablemente causan enfermedades humanas graves o letales para los que
normalmente no se dispone de acciones preventivas o terapéuticas (alto riesgo individual y
alto riesgo para la comunidad).
4 (GR-4)
Machupo virus Fiebre hemorrágica boliviana, virus de fiebre hemorrágica argentina,
Marburgvirus, virus Ébola, virus de Lassa y otras enfermedades hemorrágicas, sobre todo
las africanas.

Equivalencia entre Grupos de Riesgo y Niveles de Bioseguridad

La determinación del GR de un agente biológico está incluida en la determinación del riesgo de

biopeligro y ayuda a asignar el nivel de bioseguridad para la contención.

En general, los agentes del GR-2 se manipulan con un nivel de Bioseguridad NB-2, y los agentes del
GR-3, con un NB-3. Sin embargo, la manipulación en grandes cantidades o cultivo de agentes del
GR-2 podría requerir unas condiciones de NB-3, mientras que algunos agentes del GR-3 podrían
manipularse de forma segura a un NB-2 bajo ciertas condiciones.

Seguridad Biológica y Niveles de Bioseguridad

La bioseguridad es la aplicación del conocimiento, las técnicas y el equipamiento para prevenir la

exposición del personal, el laboratorio y el medio ambiente a agentes potencialmente bio-infecciosos.
La bioseguridad define las condiciones de contención bajo las cuales los agentes infecciosos se
pueden manipular con seguridad. El objetivo de la contención es confinar los peligros biológicos y
reducir la exposición, de las personas que hacen prácticas de laboratorio microbiológico.

La contención se puede llevar a cabo mediante los siguientes medios:

Contención Primaria: Protección del personal y del ambiente del laboratorio mediante la utilización
de buenas técnicas microbiológicas (BPL) y el uso de equipos de seguridad apropiados (EPIs o
EPPs: Equipos de protección individual o personal).

Figura 1.1. Equipos de protección personal

Contención Secundaria: Protección del ambiente exterior al laboratorio de la exposición a

materiales infecciosos mediante la combinación del diseño de las instalaciones y los hábitos de
trabajo seguros.

Figura 1.2. Instalaciones de un laboratorio de microbiología

Los cuatro Niveles de Bioseguridad definen la contención necesaria para proteger a los analistas y
al ambiente externo (medio ambiente).
 Nivel de Bioseguridad 1 (NB-1) - es el menos restrictivo.
 Nivel de Bioseguridad 4 (NB-4) - requiere un laboratorio o instalaciones con contención
especial.
 Tabla 2. Relación de los grupos de riesgo con los niveles de bioseguridad, las prácticas
y el equipo de seguridad
Grupo de Nivel de Tipo de Prácticas de Equipo de
riesgo bioseguridad laboratorio laboratorio seguridad
Ninguno, trabajo en
Enseñanza básica
1 Básico Nivel 1 BPL mesa de laboratorio
Investigación
al descubierto
Servicios de Trabajo en mesa al
BPL y ropa
atención primaria, descubierto y CSB
2 Básico Nivel 2 protectora, señal de
diagnóstico, para posibles
riesgo biológico
investigación aerosoles
Prácticas de nivel 2, CSB además de
más ropa especial, otros medios de
Diagnóstico especial
3 Contención Nivel 3 acceso controlado y contención primaria
Investigación
flujo direccional del para todas las
aire actividades
Prácticas de Nivel 3 CBS de clase III o
más cámara de trajes presurizados
Unidades de entrada con cierre junto con CSB de
Contención máxima
4 patógenos hermético, salida clase II, autoclave
Nivel 4
peligrosos con ducha y de doble puerta (a
eliminación especial través de la pared),
de residuos aire filtrado
BPL: Buenas prácticas de Laboratorio; CSB: Cabina de Seguridad Biológica

Figura 1.3. Laboratorio típico del nivel de bioseguridad 1 (Manual OMS)

Figura 1.4 Laboratorio típico del nivel de bioseguridad 2 (Manual OMS)

Figura 1.5. Laboratorio típico de nivel de bioseguridad 3 (Manual OMS)

 Figura 1.6. Laboratorio típico de nivel de bioseguridad 4

Figura 1.7. Ubicación de Laboratorios de nivel de bioseguridad 4 en el mundo (2013)

Hábitos de trabajo seguros

Se busca con estos hábitos:

 Proteger al alumno frente a la exposición de agentes infecciosos.
 Prevenir la contaminación ambiental.
 Proporcionar un lugar de trabajo seguro.
Las actitudes y las acciones de los alumnos que trabajan en el laboratorio determinan su propia
seguridad, la de sus compañeros y la de la Escuela. El diseño y equipamiento del laboratorio
únicamente contribuirán a la seguridad si se utilizan de forma adecuada.

Vías de Infección

Durante las prácticas con materiales infecciosos, en un laboratorio microbiológico, se pueden

producir infecciones con más frecuencia que en otros laboratorios de la escuela.
Se produce una infección cuando un microorganismo patógeno se introduce en el cuerpo humano
en suficiente número y a través de una vía particular y sobrepasa el sistema de defensa del cuerpo.

Las vías de infecciones más frecuentes adquiridas en el laboratorio son:

La boca
o Comer, beber y fumar en el laboratorio
o Pipetear con la boca.
o Transferencia de microorganismos a la boca mediante los dedos o utensilios contaminados
(bolígrafos, lápices).

La piel
o Inoculación accidental con una aguja hipodérmica, otros instrumentos punzantes o vidrios.
o Cortes, rasguños.

Los ojos
o Salpicaduras de materiales infecciosos en los ojos.
o Transferencia de microorganismos a los ojos mediante dedos contaminados.

Los pulmones
o Inhalación de microorganismos transportados por el aire.

Normas para una utilización adecuada y segura del laboratorio:

La clave es la actitud hacia la seguridad, la información y las prácticas que permitan explicar y evitar
los riesgos presentes en el laboratorio. Es prioritaria la observación, conocimiento y aplicación
adecuada de cada técnica, pues ninguna medida, ni siquiera un equipo excelente puede sustituir el
orden y el cuidado con que se trabaja.

1. Todos los alumnos que ingresen al laboratorio deben conocer e identificar los riesgos biológicos
y otros riesgos que pueden hallar durante su trabajo normal en el laboratorio y estar capacitados
en las precauciones de seguridad y procedimientos apropiados en casos de emergencia.
2. El laboratorio debe estar ordenado y limpio, y se debe minimizar el almacenamiento de materiales
innecesarios para el trabajo.
3. No se deben obstaculizar los pisos de las mesas o pasillos con mochilas, u otros elementos que
eviten la correcta circulación, recordemos que al ingreso hay casilleros donde deben guardar sus
mochilas u otros elementos no necesarios en el laboratorio.
4. Se deberá evitar el uso de accesorios colgantes que interfieran con los diversos materiales y
equipos con los que se trabaja.
5. Profesores y alumnos debe llevar perfectamente abrochada la bata, mandil o guardapolvo que
debe ser de manga larga y llegar hasta debajo de las rodillas.
6. La ropa protectora del laboratorio no debe llevarse en otras áreas fuera del laboratorio. Al retirarse
del laboratorio debe envolverse el mandil de tal manera que la parte exterior de esta quede hacia
adentro y meterla inmediatamente a una bolsa. El mandil deberá lavarse por separado metiéndola
antes del lavado en una solución desinfectante (ej. Agua con lejía).
7. Debe llevarse calzado apropiado, y cerrado no deberán entrar en sandalias o zapatos de tacón
pues estos pueden condicionar a accidentes en el laboratorio.
8. Se debe utilizar guantes de látex desechables para realizar cualquier procedimiento en el que la
piel pueda entrar en contacto con colorantes, sangre, o materiales biológicos infecciosos (cepas
y materiales con los que se obtengan las muestras).
9. No deberá tocar con los guantes puestos, objetos, ni superficies, tales como: teléfono, lápices,
cuadernos, bolsas de mano, o puertas, etc.
10. Los guantes deben quitarse cuidadosamente y descontaminarse junto con el resto de residuos
del laboratorio antes de desecharlos.
11. Se deben lavar las manos después de quitarse los guantes, antes de salir del laboratorio y
siempre después de manejar materiales que se sabe o se sospecha que son contaminantes.
12. Se debe llevar gafas protectoras cuando sea necesario proteger la cara y los ojos de salpicaduras,
impacto de objetos, o sustancias nocivas.
13. No se permite comer, beber, fumar, almacenar comida, efectos personales o utensilios, aplicar
cosméticos ni poner o quitar lentes de contacto, en ningún área del laboratorio.
14. No se debe correr en el laboratorio.
15. El cabello largo debe llevarse sujeto y de ser necesario usar gorro preferentemente de algodón.
16. Las superficies de trabajo deben estar limpias y deben descontaminarse con un desinfectante
adecuado al final de la sesión y siempre que se haya producido un derrame de materiales
potencialmente peligrosos.
17. Cualquier procedimiento técnico debe realizarse de tal forma que se minimice la formación de
aerosoles.
18. Todos los materiales, líquidos o sólidos, contaminados o infecciosos, deben descontaminarse
antes de reutilizarlos o desecharlos.
19. Se deben extremar las precauciones cuando se utilizan agujas y jeringas para evitar la
autoinoculación y la generación de aerosoles durante su utilización y desechado. Los
procedimientos se deben realizar en cabinas de seguridad biológica.
20. Verificar las etiquetas de los reactivos, medios o colorantes que se usen.
21. Uso de respiradores cuando sea necesario: protege de eventuales contaminaciones con saliva.
Con esta medida se previene la exposición de mucosas de boca y nariz.
22. Al hacer frotis, exámenes directos, siembras en medios de cultivo y toma de muestras deberán
estar prendidos los mecheros.
23. Está prohibido desechar líquidos o materiales biológicos por los desagües.
24. No tocar con las manos y menos con la boca los medios y reactivos.
25. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como los microscopios y otros equipos,
deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos.
26. Los cubreobjetos y portaobjetos deben tomarse por los bordes para evitar contaminarse y así
mismo evitar alterar el frotis.

Los equipos de protección personal son un complemento indispensable de los métodos de control de
riesgos para proteger al alumno y para evitar la transmisión de infecciones.

Principios de la Bioseguridad:

1- Universalidad: Toda persona que trabaje en los laboratorios de microbiología debe seguir
las precauciones estándares rutinariamente a fin de evitar su exposición con materiales
infecciosos.

2- Uso de barreras: Nos explica la forma de evitar la exposición directa a materiales

potencialmente infecciosos, mediante la utilización de materiales adecuados que se
interpongan al contacto de los mismos. La utilización de barreras (ej. guantes) no evitan los
accidentes de exposición a estos fluidos, pero disminuyen las probabilidades de una
infección.
 3- Medios de eliminación de material contaminado: Comprende el conjunto de dispositivos
y procedimientos meticulosos a través de los cuales los materiales utilizados en la atención
de pacientes, son depositados y eliminados sin riesgo.

Elementos básicos de la bioseguridad

Los elementos básicos de los que se sirve la Seguridad Biológica para la contención del riesgo
provocado por los agentes infecciosos son tres:

Buenas Prácticas de Laboratorio (Prácticas de trabajo).

Equipo de seguridad (o barreras primarias).
Diseño y construcción de la instalación (o barreras secundarias).

Buenas Prácticas de Laboratorio – BPL-:

Prácticas de trabajo normalizadas son el elemento básico y a la vez el más importante para la
protección de cualquier tipo de trabajador. Las personas que están en contacto, más o menos directo,
con materiales infectados o agentes infecciosos, deben ser conscientes de los riesgos potenciales
que su trabajo encierra y además han de recibir la formación adecuada en las técnicas requeridas
para que el manejo de esos materiales biológicos les resulte seguro.

Equipos de seguridad:

Se incluyen entre las barreras primarias tanto los dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad
de un proceso (como, por ejemplo, las cabinas de seguridad biológica) como los denominados
equipos de protección personal (guantes, calzado, pantallas faciales, mascarillas, etc.).

Figura 1.8. Cabina de seguridad biológica clase II-A

Diseño y construcción de la instalación:

La magnitud de las barreras secundarias dependerá del agente o agentes infecciosos que se
investiguen y de las manipulaciones que con él se realicen. Vendrá determinada por la evaluación
de riesgos.

BSL: BioSafety Level

Referencias bibliográficas:

Organización Mundial de la Salud (OMS). Manual de bioseguridad en el laboratorio [Internet]. 3ª ed.

Organización Mundial de la Salud: Ginebra; 2005. Disponible en:
http://www.who.int/topics/medical_waste/manual_bioseguridad_laboratorio.pdf

NIH Guidelines for Research Involving Recombinant or Synthetic Nucleic Acid Molecules. 2016.
https://osp.od.nih.gov/wp-content/uploads/2013/06/NIH_Guidelines.pdf

OMS. Safety in health-care laboratories. 1997.

http://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/63993/WHO_LAB_97.1.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Fink S. Bioseguridad: una responsabilidad del investigador [Internet]. MEDICINA (Buenos Aires)
2010; 70:299-302. Disponible en: http://www.scielo.org.ar/pdf/medba/v70n3/v70n3a18.pdf