BIOL130 | Biología Celular 2019 | Sesión 3

MECANISMOS
GENÉTICOS BÁSICOS
Parte 2

Mario Sánchez, PhD

 Mecanismos genéticos básicos

Capitulo 5 Capitulo 9-10

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4

https://books.google.es/books/about/Biolog%C3%ADa_celular_y_molecular.html?id=YdyMSxY2LjMC
Dogma central de la genética y biología
molecular

Reparación
¿Qué veremos hoy?

1.- Replicación del ADN

2.- Reparación del ADN

1.- Carácter semiconservativo de la replicación

1.- Semiconservativa (propuesto por Watson y Crick).

2.- Síntesis desde 5´a 3´
3.- Comienza en un punto y es bidireccional.
4.- Es semi-discontínua
1.- Carácter semiconservativo de la replicación

Experimento de Matthew Meselson y

Franklin Stahl (Meselson-Stahl 1957)

1.- Bacterias crecidas en medio con 15N

2.- Se dejan dividir en medio con 14N

durante 1 o 2 generaciones
1.- Carácter semiconservativo de la replicación

Experimento de Matthew Meselson y

Franklin Stahl (Meselson-Stahl 1957)

1.- Bacterias crecidas en medio con 15N

2.- Se dejan dividir en medio con 14N

durante 1 o 2 generaciones
2.- Síntesis desde 5´a 3´

La síntesis del ADN, requiere, leer la hebra templado para incorporar un nuevo nucleótido
al extremo 3´ de la hebra que se está polimerizando.
 3.- La replicación comienza en un punto de origen y normalmente
transcurre en forma bidireccional

¿Dónde comienza?
¿En cuantos lugares comienza?
¿Siempre comienza en el mismo lugar?

4 etapas principales en la replicación del DNA: Inicio -> Elongación -> Ligación -> Término
3.1.- El punto de inicio de la replicación en el cromosoma de E. coli
es la secuencia oriC (Replication origin)

Origen de replicación: OriC

245 pb; dos series de repeticiones cortas
3.2.- El punto de inicio de la replicación en el cromosoma de E. coli
es la secuencia oriC (Replication origin)

~ 20 moleculas de DnaA (ATP ligado)

se fijan a las repeticiones de 9 pares
de bases
Las tres repeticiones de 13 pb se
desnaturalizan de forma secuencial
abriendo las hebras
DnaB se fija al complejo abierto (con
ayuda de DnaC) y la actividad
helicasa de la DnaB desenrolla el
DNA como preparación para el
cebado y síntesis de DNA
Inicio de la síntesis del DNA en E. coli
Inicio de la síntesis del DNA: DNA helicasa (DnaB protein)
 Inicio de la síntesis del DNA: DNA girasa (Topoisomerasa II)

El superenrollamiento producido por la separación de las hebras de DNA es liberado por

las enzimas topoisomerasas. (tipo II)
Inicio de la síntesis del DNA: Proteínas de unión a hebra
sencilla (single strand binding, SSB)
Inicio de la síntesis del DNA: DNA primasa

La DNA primasa es una

enzima que puede iniciar la
copia de una hebra de DNA a
través de la síntesis de un
pequeño partidor o primer de
RNA.

Utiliza DNA de hebra sencilla

como molde y
ribonucleósidos trifosfato.

Esto ocurre una vez en la

hebra continua y muchas
veces en la hebra discontinua
(primers de RNA de 10 nt
cada 100-200 nt)
 4.- Modelo de replicación de la doble hebra

Hebra nueva de DNA (rojo) se sintetiza siempre en dirección 5’→ 3’ (templado 3’→ 5’)
Hebra conductora (leading): se sintetiza en la dirección dejada por la horquilla de
replicación en forma continua

Hebra rezagada (lagging): se sintetiza de manera discontinua en piezas cortas:

Fragmentos de Okazaki (1000-2000 nt en bacterias; 150-200 pb en eucariontes).
 Fragmentos de Okazaki

Los fragmentos de Okazaki quedan separados

por pequeños segmentos de RNA. Estos son
removidos y la separación entre fragmentos
de Okazaki adyacentes es sellada por otra
enzima: la DNA ligasa

Reacción de la DNAligasa
Sliding clamp (abrazadera deslizante)

El sliding clamp es ensamblado en el DNA gracias a un complejo llamado clamp loader

(cargador de la abrazadera). Este proceso requiere ATP. La hidrólisis del ATP presente
en el clamp loader lo libera del sliding clamp. Luego, la DNA polimerasa interactúa con
el sliding clamp, copiando DNA a gran velocidad.
DNA polimerasa holoenzima
Término de la replicación Período refractario
La replicación en EUCARIONTES?
Múltiples orígenes de replicación y “replicones”

En E. coli (un cromosoma circular), tiene un sólo origen de replicación (oriC). En una
célula humana existen unos 100.000 sitios ori en total.
La replicación en EUCARIONTES?
Múltiples orígenes de replicación y
“replicones”
La replicación en eucariontes
Período refractario
Ensamblaje de nucleosomas durante la replicación
 ¿Qué tan precisa es la maquinaria de la replicación?

mutación

mutación

Genoma humano 3,2 x 109

¿Qué tan precisa es la maquinaria de la replicación?
Estructura de la telomerase

Los cromosomas
bacterianos no tienen fin
(son circulares), pero los
eucariontes si.

Cómo se las arregla la

hebra retrasada para
replicar la punta si no hay
espacio para hacer el
primer de RNA?

Los eucariontes poseen

una enzima llamada
telomerasa (en algunos
tipos celulares), que replica
los telómeros, los cuales
tienen cientos de
repeticiones de la
secuencia GGGTTA (ca.
10000 nt).
Replicación de los telómeros

Los cromosomas
bacterianos no tienen fin
(son circulares), pero los
eucariontes sí.

Cómo se las arregla la

hebra retrasada para
replicar la punta si no hay
espacio para hacer el
primer de RNA?

Los eucariontes poseen

una enzima llamada
telomerasa (en algunos
tipos celulares), que replica
los telómeros, los cuales
tienen cientos de
repeticiones de la
secuencia GGGTTA (10.000
nt).
t-loop en los extremos de los cromosomas de mamíferos
Según el tipo celular los telómeros se alargan o se acortan
El DNA está siendo permanentemente dañado

Radiación UV

Agentes alquilantes Radioactividad

Reparación del DNA
 Alteraciones espontáneas más comunes que requieren reparación en el
DNA

Daño oxidativo (rojo), hidrólisis (azul), y metilaciones (verde). Estos cambios ocurren de manera
espontánea, miles de veces al día, en todas las células
El DNA está siendo permanentemente dañado: depurinación y
deaminación
El DNA está siendo permanentemente dañado: dímeros de Timina

Los dímeros de timina se producen

en una reacción catalizada por
radiación UV.

Se produce un apretamiento en la
doble hélice y estas dos bases
pueden ser leídas como una sola.
 El DNA está siendo permanentemente dañado: depurinación y
deaminación

Y si no son reparados, la mutación se fija en su genoma... y da origen a proteínas alteradas.

El DNA es reparado en forma constante

Reparación por escisión de la base

En este caso la base nitrogenada es

removida inicialmente y luego el
azúcar con el fosfato. El espacio es
llenado por la DNA polimerasa.
El DNA es reparado en forma constante

Reparación por escisión de

nucleótido

En este caso se elimina un

segmento de la hebra que contiene
la mutación. En general, este
sistema funciona con lesiones de
más de 1 nucleótido (p.e. dímeros
de bases).
El DNA es reparado en forma constante
Mismatch repair (corrección de desapareo)

La célula posee mecanismos

que le permiten “saber” cuál
es la hebra parental (correcta)
y la nueva (mutada)

Este daño es causado por

errores en la maquinaria. Sin
embargo, la principal fuente
de mutaciones viene de
nuestro entorno.