PRUEBA FUNDAMENTO
CATALASA Detecta la presencia de la enzima
catalasa.
COAGULASA Detecta un factor de agregación
“clumping factor” en la superficie de la
bacteriana.
PYR detecta la enzima pirrolidonil
arilamidasa se utiliza como sustrato el
reactivo L-pirrolidonil- beta-naftilamida
(PYR), para la identificación rápida de
enterococos.
DNASA S. aureus produce una DNAasa
termoestable que hidroliza DNA. La
producción de DNAsa puede
determinarse incorporando ácido
desoxirribonucleico (DNA) en agar
nutritivo .
MANITOL SALADO el medio contiene manitol (1%), cloruro
de sodio (7,5 %), rojo de fenol y
peptonas.
BILIS ESCULINA Se basa en la capacidad de ciertas
bacterias (Estreptococos del grupo D)
para hidrolizar la esculina en presencia
de 1-4% de sales biliares.
PROCEDIMIENTO
En portaobjetos colocar sobre una
colonia unas gotas de H202 3 %.
se coloca una colonia sospechosa de
pertenecer a una especie de
Staphylococcus y se emulsifica en una
gota de plasma de conejo.
Realizar un alto inóculo (2 MacFarland)
e introducir un disco de PYR.
Tiempo y Tº de incubación: 30 minutos
a 35º C.
Tiempo de lectura: 5 minutos.
Se inocula el microorganismo en
manchas densas sobre agar DNA y
después de 18 a 24 hs de incubación.
Revelar con HCl al 1N, que precipita el
DNA nativo del medio.
Sembrar la cepa e incubar 18 a 24 hs a
35ºC.
Se inocula el microorganismo en la
superficie de un pico de flauta. Incubar
24 hs.
RESULTADO
Liberación de burbujas rápida y
sostenida indica la producción de
oxígeno molecular = prueba (+)
“arracimamiento” bacteriano en un
minuto = prueba (+).
Si el resultado es negativo ensayar la
producción de coagulasa en tubo.
Disco rosado o rojo (+)
Disco y/o solución amarillo a incoloro (-
).
Positivo: halo claro, transparente
alrededor del crecimiento bacteriano.
Negativo: el medio se observa opaco.
Crecimiento y viraje
S. aureus
Crecimiento sin viraje.
S. epidermidis
Positivo: se observa un oscurecimiento
o ennegrecimiento del medio de
cultivo.
Negativo: ausencia de oscurecimiento
del medio de cultivo.
 PRUEBA FUNDAMENTO
CAMP Los Estreptococos grupo B secretan el
factor CAMP que interactúa con la ß-
hemolisina secretada por una cepa ß-
hemolítica de S. aureus (ATCC 25923) lo
que causa un acrecentamiento o
sinergismo de la hemólisis.
HIPURATO DE SODIO Ciertas cepas son capaces de hidrolizar
el hipurato de sodio. La producción de
hipuricasa resulta en la hidrólisis del
hipurato de sodio con la formación de
benzoato de sodio y glicina.
PRUEBA DE LA SUSCEPTIBILIDAD A LA Se basa en que ciertas bacterias son
NOVOBIOCINA sensibles a la novobiocina.
BACITRACINA Se basa en que ciertas bacterias son
sensibles a la bacitracina.
PRUEBAS PARA IDENTIFICACION
COCOS GRAM + :
PRUEBAS DE IDENTIFICACION
RAPIDA: 1. Dnasa
2. Manitol salado
1. Catalasa 3. Bilis esculina
2. Oxidasa 4. Camp
3. Coagulasa
5. Hidrolisis del
hipiruvato
6. Voges-proskauer
PROCEDIMIENTO RESULTADO
En placa de agar sangre sembrar una El sinergismo se observa como un área
estría de la cepa de S. aureus y de ß-Hemólisis en forma de “punta de
perpendicularmente a ésta (lo más flecha” en la zona de desarrollo más
cerca posible, sin llegar a tocarla) cercana a ambas estrías.
sembrar la cepa de Estreptococo en
estudio.
Tiempo y temperatura de incubación:
Incubar 24 hs a 35ºC en aerobiosis (en
CO2 aumentan los falsos positivos).
Inocular un tubo con medio hipurato de La formación de un precipitado denso y
sodio con el microorganismo. Incubar persistente por 10 minutos = prueba (+)
24 hs a 35ºC. Centrifugar. Pipetear 0.8 Benzoato de sodio
ml el sobrenadante. Agregar 0.2 ml de La aparición de un color púrpura
cloruro férrico 7%. profundo = prueba (+) glicina.
Inocular un tubo con 0.4 ml de medio
hipurato de sodio con el
microorganismo. Incubar 2 hs a 35ºC.
Agregar 0.2 ml de Ninhidrina.
Se inocula el microorganismo en agar Sensible: inhibición del desarrollo con
Mueller Hinton según técnica de Kirby- un diámetro mayor o igual a 16 mm
Bauer, utilizando discos de Novobiocina Staphylococcus R
(5 µg). Micrococcus S
Se inocula el microorganismo en AS Sensible: Cualquier zona de inhibición
según técnica de Kirby-Bauer utilizando del desarrollo.
discos de Bacitracina (0.04 U).
PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A ATB:
1.disco de optoquina
2. disco de novobiocina
3. disco de bacitracina