Introducción

las decisiones clínicas relativas a la gestión de las infecciones son con frecuencia basado en los
resultados de la tinción de Gram y la cultura. Por lo tanto, es importante que Estos estudios se
realizan y se interpretan correctamente. La calidad de la muestra clínica puede impactar el valor de
la tinción de Gram realizada. La elección de la muestra enviada para la tinción de Gram y la cultura
depende del lugar de la infección y los patógenos probables. La buena recolección del espécimen
debe evitar la contaminación con bacterias circundantes de colonización, proporcione un volumen
adecuado de material para la tinción de Gram y la cultura, se recoja antes de la iniciación del
tratamiento antimicrobiano y se etiquete cuidadosamente con información clínica relevante, y ser
transportada al laboratorio de manera oportuna [1]. Aquí se discuten las cuestiones relativas a la
interpretación de la tinción de Gram y los resultados de cultivo. Las cuestiones relativas a la gestión
de las infecciones específicas se discuten en detalle por separado.

Tinción de Gram: la tinción de Gram se usa para diferenciar entre diferentes tipos de bacterias
basado en las propiedades bioquímicas de sus paredes celulares. El método lleva el nombre de
danés científico gramo del cristiano de Hans (1853 a 1938), que desarrolló la técnica para
distinguir entre dos causas bacterianas diferentes de neumonía (Streptococcus
pneumoniae y Klebsiella pneumoniae).
Tinción de Gram de las muestras clínicas (incluidas las muestras de líquidos corporales
estériles y no estériles, las muestras de la biopsia, y las muestras positivas de la cultura) son
útiles para guiar clínico empírico manejo de infecciones bacterianas en espera de datos de
cultivo definitivos y/o datos moleculares.
La tinción de Gram también permite la visualización de la levadura.
● ¿Qué hay de nuevo?
Procedimiento: la ejecución de una tinción de Gram consiste en los siguientes pasos [2]:
Especímenes
Sitios estériles — sitios estériles se refieren a sitios anatómicos en los que los organismos
bacterianos no son presentes en ausencia de infección. El líquido y/o el tejido de estos sitios debe
ser recolectado en condiciones estériles (los ejemplos incluyen el líquido cerebroespinal, el líquido
pleural, el líquido pericárdico, líquido sinovial y líquido peritoneal).

Las bacterias colonizadoras raramente contaminan especímenes de sitios estériles en cantidades

suficientes que se detectarán en la tinción de Gram.

Cualquier bacteria detectada en la tinción de Gram de una muestra estéril del sitio debe ser
considerada significativo, aunque una mancha negativa del gramo no excluye la infección. Para el
cuerpo estéril los líquidos, la sensibilidad de la mancha del gramo se puede aumentar por
centrifugación del centrifugado antes de tinción (particularmente líquido cefalorraquídeo).

Sitios no estériles — sitios no estériles se refieren a sitios anatómicos en los que los organismos
colonizadores ( "flora normal ") puede estar presente. Los especímenes de estos sitios están
típicamente contaminados con bacterias colonizadoras ( "flora normal "). Los ejemplos incluyen
esputo, exudados de la garganta, herida hisopos y hisopos genitales (Fig. 1).
Estos especímenes también contienen generalmente las células humanas tales como células
epiteliales y blanco
Glóbulos. Las células humanas son teñidas por la contratinción del safrann (o de carbol) [6].
Las células humanas presentes en estos especímenes (tales como neutrófilos, linfocitos, y epitelial
células) se divulgan "semi-cuantitativo " (eg., 1 + a 4 + o raro-pocos-moderado-abundante). Este
la información se puede utilizar para evaluar la calidad de la muestra y si la inflamación es
Presente. Observe que las células blancas pueden estar ausentes en presencia de infección si el
paciente es
Neutropenic. Además, la presencia de bacilos gram-positivos en ausencia de células blancas
debería levantar sospechas de gangrena gaseosa.
Prepare un frotis termofijado de muestras clínicas procesadas o un cultivo bacteriano en un
tobogán de vidrio.
●
Aplicar la tinción primaria (violeta cristal) a la corredera; ● enjuague con agua.
● Sumerja el portaobjetos en un mordaz (yodo de Gram).
Realice una decoloración rápida (cuestión de segundos) con acetona o alcohol. Lla
el paso de la decoloración es crítico, y debe ser tiempo correcto; Si el agente decolorante es
la izquierda en demasiado largo, mancha violeta cristalina será quitada de las células Gram-positivas
así como
células Gram-negativas.
●
Contratinción con safrann, Fuchsia básica o rojo neutro. Fuchsia básica (presente en diluido
carbol Fuchsia) tiñe muchas bacterias Gram-negativas más intensamente que las otras dos
Manchas.
Especímenes
Sitios estériles — sitios estériles se refieren a sitios anatómicos en los que los organismos
bacterianos no son
presente en ausencia de infección. El líquido y/o el tejido de estos sitios debe ser recolectado
en condiciones estériles (los ejemplos incluyen el líquido cerebroespinal, el líquido pleural, el líquido
pericárdico,
líquido sinovial y líquido peritoneal). Las bacterias colonizadoras raramente contaminan
especímenes de
sitios estériles en cantidades suficientes que se detectarán en la tinción de Gram [3].
Cualquier bacteria detectada en la tinción de Gram de una muestra estéril del sitio debe ser
considerada
significativo, aunque una mancha negativa del gramo no excluye la infección [3]. Para el cuerpo
estéril
los líquidos, la sensibilidad de la mancha del gramo se puede aumentar por centrifugación del
centrifugado antes de
tinción (particularmente líquido cefalorraquídeo) [4,5].
Sitios no estériles — sitios no estériles se refieren a sitios anatómicos en los que los organismos
colonizadores
( "flora normal ") puede estar presente. Los especímenes de estos sitios están típicamente
contaminados
con bacterias colonizadoras ( "flora normal "). Los ejemplos incluyen esputo, exudados de la
garganta, herida
hisopos y hisopos genitales (Fig. 1).
Estos especímenes también contienen generalmente las células humanas tales como células
epiteliales y blanco
Glóbulos. Las células humanas son teñidas por la contratinción del safrann (o de carbol) [6].
Las células humanas presentes en estos especímenes (tales como neutrófilos, linfocitos, y epitelial
células) se divulgan "semi-cuantitativo " (eg., 1 + a 4 + o raro-pocos-moderado-abundante). Este
la información se puede utilizar para evaluar la calidad de la muestra y si la inflamación es
Presente. Observe que las células blancas pueden estar ausentes en presencia de infección si el
paciente es
Neutropenic. Además, la presencia de bacilos gram-positivos en ausencia de células blancas
debería levantar sospechas de gangrena gaseosa

Un espécimen de esputo de alta calidad tiene un alto número de glóbulos blancos y pocas células
epiteliales; Un
el espécimen de baja calidad tiene un alto número de células epiteliales y un número bajo de
glóbulos blancos.
Los especímenes de baja calidad pueden ser rechazados por el laboratorio como aptos para la
cultura; criterios para
el rechazo de especímenes difiere entre laboratorios [7, 8].
La interpretación de las manchas de Gram de sitios no estériles requiere experiencia y conocimiento
de
la flora normal esperada. UNA muestra de esputo con un gran número de bacterias de diferentes
las morfologías pueden ser consistentes con las bacterias colonizadoras orales normales. Por otro
lado, un
muestra de esputo de alta calidad con gran número de bacterias presentes en la tinción de Gram
demostrar la morfología típica de un posible patógeno del tracto respiratorio puede ser un
pista útil en cuanto a la etiología de la infección [9].
Interpretación de los resultados de la tinción de Gram — en general, la tinción de Gram permite la
categorización
de microorganismos observados en dos grandes grupos: gram positivo y Gram negativo.
Las bacterias Gram-positivas conservan la violeta cristalina y aparecen púrpuras con la coloración
del gramo; Gramnegative
las bacterias no retienen violeta cristalino pero toman la contratinción del Safran y así
parecen rosas. Algunos organismos gram-negativos tienden a mancharse débilmente con Safran
(como
Especies de Campylobacter), y por lo tanto una contratinción alternativa como la de carbol Fuchsia
puede
ser preferido [10]
Algunos organismos son variables Gram (es decir, pueden mancharse tanto negativos como
positivos). Común
los organismos Gram-variables observados en especímenes clínicos incluyen Gardnerella vaginalis y
Especies de Mobiluncus. Estos organismos están asociados con vaginosis bacteriana y son
técnicamente clasificado como "Gram positive. " Además, algunos organismos gram-negativos tales
como las especies de Acinetobacter tienden a retener el violeta cristalino y pueden aparecer a veces
gramo
Variable.
Algunas especies bacterianas no pueden ser visualizadas por tinción de Gram porque o bien carecen
de una célula
pared (eg., especie del micoplasma) o porque su estructura de la pared de célula no conserva el
gramo
reactivos de tinción (por ejemplo, clamidia y especies de Mycobacterium; este último puede tener
un "cuentas "
aspecto gram positivo) [10, 11]. Algunas especies no bacterianas también manchan púrpura con el
gramo
manchas (como las especies de Candida) (imagen 2).
Las bacterias Gram-manchadas se describen según la morfología de bacterias individuales (eg.,
esférico "cocos, " en forma de bastoncillo "bacilos, " "cocobacilos, " y las bacterias curvas), su
arreglo
(por ejemplo, "Chains " o "clusters "), y su tamaño. La morfología de las bacterias individuales
puede
ocasionalmente ser atípico si el paciente ha recibido antibióticos antes de la recolección de la
muestra.
Por ejemplo, algunas bacterias Gram-negativas pueden llegar a ser más largas y más filamentosas
[12].
Para los especímenes clínicos recolectados de sitios estériles, la semi-cuantificación del número de
los organismos presentes en la tinción de Gram pueden ser útiles. Los resultados pueden ser
reportados como ocasionales,
un número pequeño, moderado o grande de bacterias presentes o usando un sistema de
clasificación de 1 + a
3 +. La presencia de cualquier bacteria en estos especímenes debe considerarse significativa. Lla
la ausencia de bacterias también es importante reportar. Este enfoque es menos útil cuando se
las muestras se recolectan de sitios no estériles, ya que las bacterias comensales pueden no ser
fácilmente
distinguible de bacterias patógenas.

Organismos gram-positivos
Cocos gram-Positive — un acercamiento a la cocos gram-positiva se resume en el
algoritmo (algoritmo 1).
Clusters — cocos gram-positivas en racimos suelen indicar especies de Staphylococcus,
Aunque la tinción de Gram no puede diferenciar el Staphylococcus aureus de otros
especies de estafilococos. Otras especies que se manifiestan como cocos gram-positivas en racimos
y
aparecen ocasionalmente en especímenes clínicos incluyen Micrococcus, Stomatococcus,
Especies de peptostreptococcus, Pediococcus y urinae (imagen 3 y Foto 4 y
cuadro 5) [13]. La prueba de la coagulasa se puede utilizar para diferenciar S. aureus de otros
especies de estafilococos. Las formas de la levadura también manchan el gramo positivo y no deben
ser confundidos
para bacterias Gram-positivas (imagen 2). Las células de la levadura son más grandes de tamaño
que las bacterias, son solas
células, y puede tener brotes o pseudohyphae presente.
Cadenas — cocos gram-positivas en cadenas usualmente indican Streptococcus o
Especie Enterococcus (foto 6). La tinción de Gram no puede distinguir entre viridans
estreptococos, estreptococos hemolíticos, o enterococos; en algunos casos, el patrón de
la hemólisis se puede utilizar para distinguir estos organismos (algoritmo 1). (Véase ' tipos de
hemólisis ' abajo.)

Otras especies que se manifiestan como cocos gram-positivas en cadenas que aparecen muy
ocasionalmente en
los especímenes clínicos incluyen Leuconostoc, Abiotrophia, Granulicatella, Pediococcus, y
Gemella especies distintas de G. haemolysans. Anaerobios como peptostreptococcus,
Finegoldia, y peptococcus spp también tienen este aspecto [13].
El encontrar de diplococos Gram-Positive (esferas en pares) es patognomónico para el S.
pneumoniae Este organismo también se puede organizar en cadenas cortas. Bacterias individuales
clásicamente aparecen ligeramente alargadas y dispuestas de extremo a extremo (imagen 7 y
imagen 8 y
cuadro 9) [10, 14].
Bacilos gram-positivos (Roces) — un acercamiento a bacilos gram-positivos se resume en el
algoritmo (algoritmo 2).
Las varillas Gram-positivas grandes y cuadradas usualmente indican anaerobios
Especies de Clostridium o bacilos aeróbicos o Lactobacillus. Estos bacilos son típicamente
grande y tiene una forma "Box-Car " con extremos cuadrados y lados paralelos (imagen 10 y
foto 11) [10, 14, 15]. La presencia de bacilos gram-positivos o Gram-variables en tejidos blandos
las muestras sin glóbulos blancos visibles deben levantar la suspicacia para la gangrena del gas.
Medio: las varillas Gram-positivas de longitud media incluyen especies de Corynebacterium
[10, 15]; Cutibacterium (anteriormente Propionibacterium) y las especies de Listeria también
pueden tener este
aspecto (Figura 12) [14]. Otros incluyen Lactobacillus, Bifidobacterium, y
Eubacterium. Las especies del corynebacterium en medios flúidos exhiben un club-shaped típico
morfología con el agrupar de células, el supuesto "letras chinas " aspecto (cuadro 13).
Pequeño-las barras Gram-positivas pequeñas, palisading incluyen Corynebacterium, Cutibacterium,
Listeria, Gardnerella (Gram variable) y rhodococcus. Estos pueden ser pleomórficos o "Club
formado "y arreglado en paralelo (palisading) formaciones y/o en arreglos
el asemejarse "letras chinas " (cuadro 13) [10, 15]. Este aspecto es típico de
Especies de Corynebacterium; Las especies de Cutibacterium y Listeria también pueden tener esta
apariencia
[14]. el cocobacilos gram-positivo pequeño clásico indica especies de la Listeria (cuadro 14 y
película 1), aunque el aspecto de la tinción de Gram de este organismo puede ser variable [10, 15].
Ramificación — la ramificación de bacilos gram-positivos usualmente indican o bien el
Especies de nocardia o especies Actinomyces anaerobias (foto 15 y cuadro 16).
El streptomyces y el Cutibacterium pueden también tener esta apariencia [10, 15].
Organismos gram-negativos — un acercamiento a los organismos gram-negativos se resume en
el algoritmo (algoritmo 3).
La cocos gram-negativa — cocos gram-negativa generalmente indica Neisseria meningitidis o
Neisseria gonorrhoeae. Típicamente, estas especies se arreglan como pares ( "diplococos ") (imagen
17). otros cocos gram-negativos incluyen moraxella catarrhalis, otras especies de Neisseria, y
la especie Veillonella anaerobia (Foto 18) [10, 15]. Las especies de Acinetobacter también pueden
tener
este aspecto, aunque puede también conservar el violeta cristalino y así aparecer gramo-positivo
[14].
Bacilos Gram-negativos (Roces)-la mancha del gramo no puede distinguir confiablemente entre la
mayoría
especies aeróbicas y anaerobias de bacilos Gram-negativos [10, 15]. Sin embargo, algunos informes
describir bacilos Gram-negativos como cocobacilos fusiformes, curvados o pequeños Gram-
negativos
(Foto 19 y cuadro 20 y Foto 21).
Medio a largo, regordete-medio-a-largo, las barras Gram-negativas regordetas incluyen
Enterobacteriaceae (Escherichia, Klebsiella, enterobacteria, etc), bacteroides, Prevotella,
Fusobacterium, y otros organismos (foto 22).
Medio a largo, fino-medio-a-largo, las barras Gram-negativas finas incluyen
Pseudomonas, Enterobacteriaceae (Escherichia, Klebsiella, enterobacteria, etc), bacteroides,
Capnocytophaga, Prevotella, Fusobacterium, y otros organismos (cuadro 23). Gramnegative
los bacilos con puntas cónicas (a "fusiforme " o apariencia filamentosa) incluyen
Fusobacterium nucleatum, un anaerobio, y especie de capnocytophaga (cuadro 24) [10, 15].
Algunas bacterias Gram-negativas pueden llegar a ser más largas y más filamentosas en el ajuste de
terapia antibiótica [12].
Corto a largo, pleomórfico-pleomórfico, corto-a-largo, a veces vacuolated
las barras Gram-negativas incluyen Bacteroides, Fusobacterium, Enterobacteriaceae (Escherichia,
Klebsiella, enterobacterias, etc), Pseudomonas y otros organismos (Figura 25).
Pequeñas barras Gram-negativas (0,2 a 3 micras), a menudo apareciendo coccobacillary,
corresponden a un número de organismos que incluyen Haemophilus, Acinetobacter, moraxella,
Prevotella, y Porphyromonas [10, 15]. Las especies de Haemophilus también pueden aparecer como
largas
filamentos (cuadro 26 y cuadro 27) [14].

Barras curvadas-Gram-negativas curvas (0,2 a 0,8 micras de ancho por 0,5 a 5 micras
largo) son un aspecto típico de la especie Vibrio. Especies de Campylobacter y Helicobacter
también pueden aparecer curvas o "S en forma " (imagen 28) [10, 15].
Candida — Candida es una especie no bacteriana que tiñe de púrpura con tinción de Gram. Largo
"pseudohyphae " (estructuras alargadas) pueden estar presentes, así como células de levadura hija
"brotación " de células madre de levadura más grandes (foto 29) [10, 15].
Cultura
Enfoque: las técnicas tradicionales de Microbiología diagnóstica dependen del crecimiento de
organismos sobre los medios de cultivo apropiados. En general, los especímenes de sitios estériles
pueden ser
inoculados en medios enriquecidos para todo uso como sangre o agar chocolate; más ordinario
los patógenos bacterianos crecen fácilmente en estos medios sólidos no seleccionados.
Especímenes de
los sitios no estériles que contienen flora microbiana mixta también deben ser inoculados en otros
placas como MacConkey u otros medios selectivos. Los medios selectivos se utilizan para inhibir
crecimiento de bacterias colonizadoras comensales.
Después de que las bacterias se han aislado en medios sólidos del agar (para la mayoría de los
organismos, esto ocurre
dentro de 24 a 48 horas), la morfología de colonias, los requisitos de crecimiento y los exámenes de
banco rápidos pueden
facilitar la identificación preliminar o presunta. Confirmación de identificación de especies, si
en la cultura pura, por lo general se puede hacer después de 24 a 48 horas de incubación de las
culturas directamente
de colonias en los medios de comunicación mediante la desorción por láser asistida por matriz de
ionización-tiempo de vuelo
(MALDI-TOF). Colonias de interés seleccionadas de culturas mixtas (como las típicamente
recuperado de especímenes de sitio no estériles) debe ser "subcultivo " antes de la identificación
en
para obtener una cultura pura (foto 30). (Véase ' MALDI-TOF ' abajo.)

Las bacterias cultivadas inicialmente en medio del caldo (eg., culturas de la sangre) son evaluadas
por la mancha del gramo,
seguida de la inoculación del caldo de cultivo sanguíneo en medios sólidos. Identificación directa de
los aislantes de los cultivos de caldo pueden ser intentados por MALDI-TOF [16-18].
Condiciones de crecimiento: las condiciones de crecimiento importantes incluyen temperatura y
atmósfera
Condiciones. La mayoría de las culturas bacterianas se incuban en 35 a 37 ° c. Condiciones
atmosféricas
en el laboratorio de Microbiología se utilizan aeróbicos, anaerobios y 5% Co. Muchos
los organismos anaerobios facultativos como los estreptococos crecen bien bajo anaerobio
Condiciones. En general, sin embargo, los organismos anaerobios no crecen fácilmente bajo
aeróbicos
Condiciones. Las especies de capnocytophaga requieren un 5 por ciento de CO para un crecimiento
óptimo ( "capnofílicos
organismos ") [10, 15]. Otros microorganismos también pueden requerir una atmósfera
especializada
Condiciones. Por ejemplo, las especies de Campylobacter crecen más fácilmente bajo
"microaerofílicos
conditions "[10, 14, 15].

Medios de cultivo
Agar sangre — agar sangre apoya el crecimiento de muchas bacterias humanas comunes
patógenos (a excepción de Haemophilus influenzae). Las placas de cultivo de agar sangre son
también es útil para observar la hemólisis (la capacidad de las colonias bacterianas de descomponer
el rojo
células sanguíneas).
Tipos de hemólisis: la presencia y el tipo de hemólisis es útil para clasificar
especies estreptocócicas [10] (algoritmo 1).
Los estreptococos hemolíticos son categorizados más a futuro por agrupar Lancefield. (Véase '
Lancefield
agrupando ' abajo.)
Agar chocolate — Agar chocolate se llama así por su color marrón. Contiene lisis rojo
células sanguíneas que han liberado los factores de crecimiento hemina (factor X) y NAD (factor V).
Estos
los factores de crecimiento son necesarios para el crecimiento in vitro de H. influenzae (cuadro 34
y cuadro
35) [10, 14, 15].
2
2
La hemólisis alfa (hemólisis incompleta o parcial) es causada por la producción bacteriana de
peróxido de hidrógeno, que a su vez oxida la hemoglobina (roja) a metahemoglobina (verde)
(foto 31). Los estreptococos de S. pneumoniae y de viridans exhiben hemólisis alfa.
●
La hemólisis beta (lisis completa de glóbulos rojos) da como resultado la transparencia en el agar
normalmente rojo
Medios. Esta transparencia está típicamente presente alrededor y debajo de las colonias (cuadro 32
y la imagen 33). Streptococcus pyogenes y Listeria típicamente muestran hemólisis beta.
Algunas especies débilmente beta-hemolíticas (por ejemplo, S. agalactiae y C. perfringens) pueden
inducir
hemólisis beta intensa cuando está crecida concurrentemente con S. aureus.
●
La hemólisis gamma (sin hemólisis) no produce ningún cambio en el color del agar alrededor y
bajo la Colonia. Enterococcus fecalis (anteriormente Grupo D Streptococcus) muestra
hemólisis gamma.
Los estreptococos hemolíticos son categorizados más a futuro por agrupar Lancefield. (Véase '
Lancefield
agrupando ' abajo.)
Agar chocolate — Agar chocolate se llama así por su color marrón. Contiene lisis rojo
células sanguíneas que han liberado los factores de crecimiento hemina (factor X) y NAD (factor V).
Estos
los factores de crecimiento son necesarios para el crecimiento in vitro de H. influenzae (cuadro 34
y cuadro
35) [10, 14, 15].

Agar MacConkey — Agar MacConkey es un medio selectivo diseñado para detectar gramnegative
Bacterias. Las sales biliares en agar MacConkey inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas.
Los organismos que fermentan la lactosa producen colonias rosas cuando se cultivan en este medio;
los organismos no lactosa-que fermentan producen las colonias descoloridas (cuadro 36).
Lactosefermenting
los organismos incluyen Escherichia coli, enterobacteria y Klebsiella. Nonlactosefermenting
los organismos incluyen Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Shigella y Citrobacter.
Ciertas especies Gram-negativas no crecen en el agar MacConkey (llamado "fastidioso" gramo
negativos). Estos incluyen Bordetella, Brucella, Campylobacter, Haemophilus, Legionella,
Pasteurella, Acinetobacter, y eikenella.
Medios selectivos: los medios selectivos se utilizan principalmente para cultivos de especímenes
recolectados de sitios no estériles. Estos medios selectivos pueden ayudar a detectar patógenos
organismos que crecen concurrentemente con bacterias colonizadoras normales. Estos medios
selectivos
típicamente contienen antibióticos. Los patógenos que pueden ser identificados con medios
selectivos incluyen
Bordetella pertussis, especies de Salmonella, Shigella, N. gonorrhoeae y Legionella
pneumophila (foto 37).
Morfología de la colonia — la morfología de la Colonia para un organismo dado puede variar según
el
medio de agar usado y las condiciones de crecimiento. Las colonias se describen basándose en su
textura, tamaño, forma y color [10, 14, 15]:
Varios patógenos comunes tienen olores distintivos (aunque "oler " las culturas son generalmente
no se recomienda):
K. las colonias de pneumoniae aparecen con frecuencia "mucoide " ● en agar sangre.
● M. catarrhalis produce "Dry " colonias que pueden ser empujadas a través del agar.
● La Yersinia enterocolitica se manifiesta como colonias de "localización" en el agar MacConkey.
● Las especies de Proteus producen grandes colonias de "enjambre" en el agar MacConkey.
S. pneumoniae produce colonias con una depresión central de tal manera que se asemejan
piezas utilizadas para el juego de borradores ( "diseñadores " apariencia).
●
Algunas cepas de Serratia marcescens producen pigmento rojo no difundido, Prodigiosin,
o 2-methyl-3-amilo-6-methoxyprodigiosene.
●
● Los organismos anaerobios suelen oler mal.
● La pseudomonas aeruginosa tiene un olor de "uva-like " o "afrutado".
● H. influenzae se dice que tiene un olor "ratonil".

Estreptococo grupo intermedio (también conocido como el estreptococo grupo milleri o

Streptococcus Anginosus grupo) tiene un distintivo "caramelo " o "caramelo" olor
[10, 14, 15].

Eikenella tiene un ● "Bleach-like " olor.

Pruebas de banco — las siguientes pruebas bioquímicas se utilizan comúnmente para determinar el
género
y/o la especie de un patógeno cultivado en cultivo.
Prueba de la coagulasa: la prueba de la coagulasa se utiliza para diferenciar S. aureus de otros
estafilococos (cuadro 38). La prueba típicamente toma ≤ 4 horas pero puede tomar hasta 24 horas.
En
muchos laboratorios, la prueba de la coagulasa se ha substituido por rápido disponible
comercialmente
pruebas de aglutinación del látex, que toman varios minutos y se pueden utilizar para presunto
identificación de S. aureus [10].
Prueba de la catalasa-la prueba de la catalasa se utiliza para distinguir estafilococos de
estreptococos
y enterococos. La producción de la catalasa es indicada por la presencia de burbujas del oxígeno
cuando
las colonias bacterianas se exponen al peróxido de hidrógeno (cuadro 39) [10]. Este examen puede
tener
resultados falsos positivos si se evalúan colonias cultivadas en agar sangre.
Prueba de oxidasa — la prueba de oxidasa se usa para diferenciar los bacilos Gram negativos
basados en
su producción de ciertas oxidasas del citocromo c. Las colonias bacterianas se inoculan en
tiras impregnadas con reactivo oxidasa. Este reactivo aparece púrpura cuando se oxida y
descolorido cuando está reducido; un resultado positivo se indica por un cambio de color púrpura
que es
detectable en pocos segundos.
Los organismos oxidasa-positivos incluyen P. aeruginosa, Pasteurella multocida, Vibrio, y
Especies de Aeromonas. Los organismos oxidasa-negativos incluyen Enterobacteriaceae (tal como
E.
coli, K. pneumoniae, enterobacteria cloacas, Serratia spp) y especies Acinetobacter [10].
Agrupación de Lancefield: se basa la agrupación Lancefield de grupos hemolíticos
en carbohidratos específicos en la pared celular bacteriana que permiten la aglutinación con
particular
Antisueros. No todos los estreptococos pueden agruparse; algunas especies como S. pneumoniae
no
antígenos Lancefield expresos.
La agrupación de Lancefield se utiliza generalmente para identificar estreptococos beta-hemolíticos
pero puede también ser
se utiliza para ayudar a identificar otros estreptococos y enterococos. Por ejemplo, Enterococcus
las especies suelen ser del grupo D; S. anginosus grupo son con frecuencia Grupo F, pero pueden ser
los grupos A,
C, o G [10, 15].
Solubilidad de la bilis — la prueba de solubilidad de la bilis es útil para la diferenciación rápida de S.
pneumoniae
(que son solubles en bilis) de otros estreptococos alfa-hemolíticos [10, 15].
Estreptococo grupo intermedio (también conocido como el estreptococo grupo milleri o
Streptococcus Anginosus grupo) tiene un distintivo "caramelo " o "caramelo" olor
[10, 14, 15].
●
Eikenella tiene un ● "Bleach-like " olor.
Hidrólisis Pyr — pirrolidonil arilamidasa (Pyr) la hidrólisis se utiliza principalmente para
identificación de cocos gram-positivas en cadenas. UNA prueba positiva sugiere S. pyogenes,
Enterococcus, o Abiotrophia/Granulicatella [10, 15].
MALDI-TOF — desorción por láser asistida por matriz de ionización-tiempo de vuelo es una masa
herramienta de espectrometría que permite la identificación rápida y precisa de género y especies
para un
una amplia gama de bacterias Gram-negativas y gram-positivas tan pronto como un organismo es
disponible en una cultura pura en medios sólidos [16-18]. MALDI-TOF detecta una característica
espectro para cada especie que se puede emparejar con una base de datos grande de espectros
dentro
el instrumento [19]. Para los organismos menos comunes, el resultado MALDI-TOF puede no ser
se pueden requerir pruebas concluyentes y adicionales de banco o pruebas moleculares.
Correlacionar resultados: los hallazgos de tinción de Gram deben correlacionarse con los resultados
de cultivo. Un
Tinción de Gram que demuestra varias especies bacterianas junto con sólo uno o dos aeróbicos
especies aisladas en la cultura, por ejemplo, puede ser una clave importante para la presencia de
Anaerobios. Si la tinción de Gram es positiva y los cultivos son negativos, las posibilidades incluyen
la presencia de anaerobios, resultados falsos negativos que reflejan la terapia antibiótica previa, o
un
organismo exigente que no puede crecer en los medios de comunicación habituales.
Resumen
La tinción de Gram es una técnica de laboratorio utilizada para diferenciar entre diferentes tipos
de bacterias basadas en las propiedades bioquímicas de sus paredes celulares. (Véase '
procedimiento '
arriba.)
●
La presencia de bacterias en las manchas de Gram de especímenes recolectados de sitios estériles
casi siempre se debe considerar un hallazgo significativo. Sin embargo, las manchas de Gram de
los especímenes de sitios no estériles deben ser interpretados con cuidado. Para estos especímenes,
el número y tipos de células humanas presentes proporciona información sobre la calidad de
la muestra y la presencia de inflamación. (Véase ' sitios estériles ' arriba y
' Sitios no estériles ' arriba.)

La tinción de Gram permite categorizar en dos grandes grupos: gram positivo y Gram
Negativo. Se resumen los enfoques de los organismos gram-positivos y gram-negativos
en los algoritmos (algoritmo 1 y algoritmo 3 y algoritmo 2). Bacterias Gram positivas
retener violeta cristalino y aparecer púrpura con la coloración del gramo, mientras que gramo-
negativo
las bacterias no conservan la violeta cristalina pero toman la contratinción del Safran y aparecen así
Rosa. Las bacterias Gram-manchadas se describen según la morfología del individuo
bacterias (por ejemplo, esférica "cocos " o en forma de barra "Bacillus "), su disposición (por
ejemplo, "cadenas " o
"clusters ") y tamaño. (Consulte "interpretación de los resultados de la tinción de Gram".)
●
Los especímenes de sitios estériles deben ser inoculados en medios enriquecidos para todo uso
como la sangre o el agar chocolate; la mayoría de los patógenos bacterianos comunes crecen
fácilmente en
estos medios sólidos no seleccionados. Especímenes de sitios no estériles que podrían contener
la flora microbiana mixta también debe ser inoculada en medios selectivos como
Agar MacConkey u otros medios selectivos. (Véase "enfoque" y "medios de cultivo"
arriba.)
Un número de organismos comunes tienen morfologías características; el colonial
morfología de un organismo determinado puede variar según el medio de agar utilizado y el
condiciones de crecimiento. Las colonias se describen basándose en su textura, tamaño, forma y
Color. Varios patógenos comunes tienen olores distintivos (aunque oler las culturas es
generalmente no se animan). (Véase ' morfología de colonias ' arriba.)
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Las pruebas de Banco son herramientas bioquímicas utilizadas para determinar la especie de un
patógeno
crecido en la cultura. Las pruebas comunes del Banco incluyen la coagulasa, la catalasa, y la oxidasa
Pruebas. (Véase ' pruebas de banco ' arriba.)