Sei sulla pagina 1di 30

UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA

AMAZONÍA
FACULTAD DE INGENIERÍA Y CIENCIAS AMBIENTALES

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

PROYECTO DE TESIS.

“EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Y


DETERMINACIÓN DE COMPUESTO FENÓLICOS DE LA
HOJA DE DALEDALE (calathea alloua)”

Investigador:

MORENO RAMIREZ, Arnol.

YARINACOCHA - 2018
PERÚ – UCAYALI
I. PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN

1.1. Descripción de la situación problemática.


El Perú posee una variedad de plantas silvestres los cuales en estos
últimos años están siendo estudiados, por su composición antioxidante
y los beneficios en la salud humana. Uno de estas son las hojas de
daledale, el cual tiene como componente principal antioxidante fenólicos.
El daledale es una planta que se desarrolla en bosques lluviosos y
templados de terrenos bajos de Perú, especialmente en el departamento
de Amazonas, San Martin, Loreto y Ucayali, siendo común su aparición
en la parte occidental del Amazonas. Actualmente los pobladores usan
como consumo directo sin saber los benéficos de sus compuestos
antioxidativos, y como medicina tradicional le atribuye a la tintura de las
hojas propiedades para el tratamiento de la cistitis y como diurético.

El problema radica en el desconocimiento y falta de investigación de las


propiedades antioxidantes que nos ofrecen muchas plantas silvestres
que son conocidas y cultivadas desde hace ya muchos años atrás, pero
que no son aprovechadas adecuadamente.

La importancia del estudio se realiza con la finalidad de obtener una


evaluación estandarizados, saludable de buena calidad y accesible para
el consumidor sustituyendo parcialmente en bebidas, hasta en un
producto gastronómica, el cual dependerá de varios análisis para llegar a
nuestros objetivos propuestas, se basa en su gran aporte de polifenólicos
del estudio en determinación de la hoja de daledale, dentro de estas
propiedades, la actividad antioxidante es muy importante y garantizar al
consumidor como producto final en la medicina tradicional.

1.2. Enunciado de problema


¿Será posible evaluar la actividad de antioxidante y la determinación de
compuestos fenólicos de la hoja de daledale?
II. JUSTIFICACIÓN

El daledale (calathea alloua), es una de la especies representativas de la selva


Peruana, en los departamentos de Loreto, Amazonas, Madre de Dios, San
Martín, y Ucayali, en la época de siembra es en mayor precipitación pluvial, la
cosecha y conservación de producto la parte más aprovechada es en las hojas
y el bulbo de la raíz. La cosecha se realiza manualmente.

Científicamente, la solución del problema de investigación, generará


conocimiento científico en aplicación como base para futuras investigaciones.
Como son los componentes químicos en el género Maytenus presenta alcaloides
esper midínicos y sesquiterpénicos, auronas, calconas, cumarinas, ácidos fijos
y débiles catequinas, fenoles simples, saponinas, quinonas y triterpenos.

Tecnológicamente, la investigación impulsará las ideas de innovaciones en la


industria farmacéutica como suplemento en la medicinales naturales, tal es el
caso de antioxidante con la utilización de la hoja de daledale y a su vez, mostrará
la tendencia hacia nuevas presentaciones de productos medicinales en la región,
que generarán una base de nuevas tecnologías aplicadas hacia la industria
farmacéutica.

Socioeconómico, impulsará a desarrollar productos de innovación en la medicina


suplementarios, generando mayor inversión de especies productoras de
antioxidantes de la hoja de daledale, teniendo como resultado mayor ingresos,
tanto para los productores y consumidores, a través de la industrialización.
Popularmente, los eventos nosológicos en los que se emplean, son la
inflamación de vejiga, infección orinaría, dolores estomacales; los efectos
medicinales atribuibles son: antidisentérico, antihelmíntico, antiinflamatorio,
afrodisiaco).
III. OBJETIVOS

3.1 Objetivo General

- Evaluar la actividad de antioxidante y la determinación de compuestos


fenólicos de la hoja de daledale (calathea alloua)

3.2 Objetivo Especifico

- evaluar la actividad de antioxidante de las hojas de daledale mediante


análisis funcional.

- Determinar los compuesto fenólicos de la hoja de daledale mediante


HPLC.
IV. HIPÓTESIS

Es posible evaluar la actividad de antioxidante y la determinación de compuesto


de fenólicos de la hoja de daledale (calathea alloua).
V. REVISIÓN DE LITERATURA

5.1. Antecedentes de investigación

Según (1), En su tesis de grado para optar el título Químico


Farmacéutico, “EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Y
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE FENOLES TOTALES Y
FLAVONOIDES DE HOJAS DE DIFERENTES GENOTIPOS DE UGNI
MOLINAE TURCZ”. Las propiedades de la murtilla se deben, en parte, a
la presencia de diferentes compuestos fenólicos en sus hojas. Debido a
que estos compuestos pueden variar por diversos factores, como el
genotipo, en este estudio se realizó un análisis comparativo respecto a la
capacidad antioxidante (ensayo FRAP), el contenido fenólico total (CFT)
(ensayo de Folin-Ciocalteu) y el contenido de flavonoides (ensayo
colorimétrico con AlCl3) de extractos etanólicos seriados (EETs) de hojas
de 10 genotipos de murtilla (8-2, 14-4, 19-1, 19-1ha, 22-1, 23-2, 27-1, 31-
1 y ZF-18), los cuales fueron cultivados bajos las mismas condiciones.
De acuerdo a los resultados obtenidos, los EETs de los 10 genotipos
presentaron diferencias significativas entre sí (p<0,05), siendo el EET ZF-
18 el que obtuvo el mayor CFT, (260,6 ± 3,7 mg EAG/g ES) y el genotipo
31-1 el que obtuvo la mayor cantidad de flavonoides (53,5 ± 0,8 mg
quercetina/g ES). En relación a la actividad antioxidante, los EETs de los
genotipos ZF-18 y 27-1 fueron los que obtuvieron los mayores valores
FRAP en todos los distintos tiempos de medición, con un máximo de
5,40 ± 0,12 y 4,93 ± 0,05 mol Fe2+/g ES a los 60 minutos,
respectivamente.

Según (2), para acceder al grado académico de Magister en Alimentos


(Mención en Ciencias), “ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LOS
COMPUESTOS FENÓLICOS CONTENIDOS EN LAS SEMILLAS DE LA
VID (Vitis vinifera l.)”. Para ello se compararon distintos solventes para la
extracción de fenoles de las semillas de la uva, de modo de obtener el
extracto más concentrado en compuestos activos con la mínima
degradación de su poder antioxidante durante el proceso de obtención.
La concentración de fenoles totales de los extractos se determinó por el
método Folin Ciocalteu. El poder reductor de los extractos se midió
empleando el método de Oyaizu. El extracto fue concentrado al vacío, y
se verificó la conservación del poder reductor en el extracto concentrado,
por el método de Oyaizu. El extracto de semillas concentradas y sin
concentrar se empleó en un sistema real sujeto a oxidación, tal como el
jugo de manzanas. El grado de oxidación del jugo se midió por el método
de Özoglu. Se evaluó la actividad antioxidante del extracto líquido
concentrado de semillas de vid, respecto de otros antioxidantes
comerciales como ácido ascórbico y dióxido de azufre. El sustrato
oxidable fue el jugo de manzanas, y el grado de oxidación se midió por
el método de Özoglu. El análisis estadístico de los datos se realizó
mediante el análisis de la varianza; cuando no fue posible emplear el
mencionado análisis, debido a que no se verificaban los supuestos
básicos para su aplicación, Para obtener un extracto antioxidante a partir
de semillas de vid se utilizó una extracción con agua a 90ºC, durante 4
horas. La relación sólido- líquido empleada fue de 1g de semillas enteras
por 10 ml de solvente. El extracto obtenido presentaba una concentración
de 12,587 mg de fenoles totales por gramo de semillas de uva
extractadas y un poder reductor de 1,290 unidades. Como consecuencia
del análisis de la cinética de extracción, el tiempo de tratamiento se
redujo de 4 horas a 3 horas. La concentración del extracto se realizó al
vacío a 60ºC, verificándose un aumento del poder reductor en el extracto
concentrado, comprobado sobre jugo de manzanas. Comparando el
extracto concentrado y el extracto sin concentrar se observa que la
concentración de fenoles totales aumentó 29,57 veces, mientras que el
poder reductor aumentó 37,39 veces.

Según ORTIZ, et al. (2009). examinó la CAPACIDAD ANTIOXIDANTE Y


ANTINITROSATIVA DE LOS EXTRACTOS Y FLAVONOIDES
AISLADOS DE HOJAS Y CORTEZA DE BAUHINIA KALBREYERI
HARMS (CASCO DE VACA. FABACEAE). Los antioxidantes de la planta
colectada en Ibagué, mostraron capacidad para estabilizar radicales
libres, poder reductor del ion Fe+3, habilidad para que lar el Fe+2,
descomponer el peróxido de hidrógeno, y aptitud para capturar especies
reactivas de nitrógeno, entre ellas el óxido nítrico (NO). Las pruebas de
comparación múltiple mostraron al extracto etanólico de corteza y al
acuoso de hojas como los tratamientos de mayor efectividad en las
pruebas aplicadas. Se encontraron diferencias significativas entre los
extractos, y entre ellos y los flavonoides aislados (p<0.05). La actividad
antioxidante de la planta parece fundamentarse en el conjunto de
derivados fenólicos. Los resultados obtenidos indican que el potencial
antioxidante de B. kalbreyeri es comparable con el del hidroxitolueno
butilado y el ácido ascórbico, utilizados como antioxidantes por la
industria alimentaria y farmacéutica.

Según Muñoz C, et al. (2015). DETERMINARON EL CONTENIDO DE


COMPUESTOS FENÓLICOS EN EXTRACTOS OBTENIDOS A PARTIR
DE LA EXTRACCIÓN SÓLIDO - LÍQUIDO DE PULPA LIOFILIZADA
(1:10), empleando como disolventes agua, etanol y mezcla etanol-agua
(7:3), a tres temperaturas 20, 50 y 70 °C. Los rendimientos de extracción
variaron entre el 26,85 % y el 50,07 %, observando rendimientos más
elevados en los extractos acuosos. Se observó que el contenido de
compuestos fenólicos fue directamente proporcional a la temperatura de
extracción y varió entre 1469,32 ± 152,14 y 5272,51 ± 424,89 μg de ácido
gálico/g de pulpa liofilizada, obteniendo valores más altos para la mezcla
etanol-agua (7:3). La actividad antioxidante encontrada varió entre 20,44
± 2,57 y 51,01 ± 1,93 mmol/L TEAC/g de pulpa liofilizada, observando
una menor actividad en los extractos etanólicos. Tanto en el rendimiento
de extracción, como en la determinación del contenido de fenólicos y la
actividad antioxidante se observó un efecto significativo de la
temperatura de extracción, asociado a cada disolvente. Los resultados
obtenidos, ratifican que la C. lineatifolia es un producto natural con alto
contenido de compuestos bioactivos, con potencial antioxidante.

Según ROSALES, M. et al. (2003). EVALUARON EL CONTENIDO DE


TANINOS CONDENSADOS Y FENOLES TOTALES, EXPRESADOS
COMO ÁCIDO TÁNICO, EN EXTRACTOS ETANÓLICOS Y ACUOSOS
DE LAS CORTEZAS DE OCHO ESPECIES DE PINO ABUNDANTES EN
EL ESTADO DE DURANGO. Los extractos etanólicos lo obtuvieron por
maceración durante 48 h con etanol acuoso al 50 % y los acuosos con
agua, a ebullición y reflujo. La evaluación de taninos condensados se
realizó mediante el número de Stiasny y los fenoles totales se evaluaron
por el método de Folín-Ciocalteu utilizando ácido tánico como estándar.
Los rendimientos en extracto o sólidos totales extraídos, Stiasny, taninos
condensados y fenoles fueron mayores en los extractos etanólicos que
en los acuosos, en todas las especies. Se encontraron diferencias
estadísticas en la concentración de compuestos fenólicos entre los
solventes de extracción utilizados y entre las especies. Los extractos
etanólicos de las cortezas de Pinus leiophylla, P. ayacahuite, P.
durangensis y P. teocote presentaron la mayor concentración de taninos
condensados y fenoles, mientras que las especies P. cooperi y P.
engelmannii presentaron la menor concentración.

Según MURILLO, et al. (2007). EVALUARON LA ACTIVIDAD


ANTIOXIDANTE DE LOS EXTRACTOS ACUOSO Y ORGÁNICOS DE
BAUHINIA KALBREYERI HARMS, REPORTADA POR LA MEDICINA
FOLCLÓRICA COLOMBIANA COMO ANTIDIABÉTICA. Se evaluaron
los extractos midiendo su capacidad de captación de radicales libres
utilizando el método del 1,1-difenil-2-picrilhidracil (DPPH). Los extractos
etanólicos y acuosos, alcanzaron una actividad secuestrante del radical
DPPH mayor a 90% en casi todas las concentraciones (5-120 mg/ml); las
concentraciones efectivas fueron bajas, confirmando el alto potencial
antioxidante. El poder reductor reveló depender del solvente extractor y
del uso de hoja o corteza, pero independiente de la concentración; el
extracto etanólico de corteza evidenció alto potencial reductor. Los
extractos etanólico y acuoso de corteza mostraron la mayor cantidad de
fenoles. La planta puede ser considerada una buena fuente de
antioxidantes naturales, que podrían contrarrestar el exceso de radicales
libres, y así ejercer las propiedades terapéuticas atribuidas, más que
actuar como hipoglucemiante.

Según ROSALES, et al. (2009). EVALUARON LA CONCENTRACIÓN


DE FENOLES TOTALES, FLAVONOLDES Y PROANTOCLANLDLNAS
EN EXTRACTOS DE ACETONA ACUOSA 70% (EXTRACTO CRUDO)
Y EXTRACTOS SEMIPURIFICADOS POR PARTICIÓN LÍQUIDO–
LÍQUIDO CON ACETATO DE ETILO (EXTRACTO ORGÁNICO), DE
CORTEZAS DE PINUS COOPERI, PINUS ENGELMANNII, PINUS
LEIOPHYLLA Y PINUS TEOCOTE. Asimismo se determinó la actividad
antioxidante de los extractos por las técnicas de radical ácido 2,2'–
azinobis–3–etilbenzotiazolin–6–sulfónico (ABTS.+), desoxi–d–ribosa
(atrapamiento de radical hidroxilo), y por la inhibición de la oxidación de
lipoproteínas de baja densidad (LDL). Se realizó una comparación
cromatográfica de los extractos por Cromatografía Líquida de Alta
Resolución (HPLC). La concentración de fenoles fue de 491 mg g–1a 604
mg g–1, los extractos orgánicos presentaron mayor concentración de
flavonoides (292 mg g–1a 385 mg g–1) que los extractos crudos (259 mg
g–1a 314 mg g–1), mientras que la concentración de proantocianidinas
fue mayor en el extracto crudo (186 mg–1 a 286 mg g–1) que en el
orgánico (70 mg g–1a 151 mg g–1). La capacidad de captura del radical
ABTS fue de 49,48% a 57,44%, similares al que presentó el estándar
catequina (57,92%). La capacidad de captura del radical hidroxilo varió
de 25,85% a 48,46% y fue mayor en el extracto orgánico en todas las
especies. La inhibición de oxidación de LDL fue de 64,41% a 89,39%,
con valores más altos en el extracto orgánico. Los cromatogramas de
HPLC muestran semejanza de los compuestos químicos en las cuatro
especies. Se identificó el flavanol catequina a baja concentración en
todas las especies. El compuesto principal en P. cooperi, P. engelmannii,
y P. teocote, es similar en las tres especies y por espectro de UV
corresponde a una flavanona.

Según ORDOÑEZ, et al. (2011). CUANTIFICARON EL CONTENIDO DE


POLIFENOLES TOTALES Y EVALUARON LA ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE MEDIDA POR LA CAPACIDAD DE INHIBIR
RADICALES DPPH EN HOJAS, FLORES, CORTEZA Y FRUTO DE DOS
VARIEDADES DE GUAYABA (PSIDIUM GUAJAVA L.). La hoja (tiernas,
maduras y yemas terminales), corteza, flores y frutos de las variedades
rosada y blanca fueron recolectados, blanqueados en agua a ebullición
por 30 seg., oreado temperatura ambiente (25ºC)/ 2-3 h, secado 65ºC/
14- 16 h molido y envasado. En las muestras se realizó la determinación
de polifenoles totales y la capacidad de inhibir el radical del radical 2,2-
diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Según los resultados el mayor
contenido de polifenoles totales correspondió a las hojas tiernas de
guayaba rosada 16,466 ± 0,46 EAG (g/100g) y blanca 15,388 ± 0,24 EAG
(g/100g) y el menor contenido se encontró en el fruto variedad rosado
1,435 ± 0,01 EAG (g/100g) y blanco 0,363 ± 0,01 EAG (g/100g). La mejor
capacidad de inhibición el radical DPPH lo presentó las hojas tiernas de
ambas variedades rosada IC50 14,086 ± 0,09 µg/mL y blanca
IC5015,463 ± 0,25 µg/mL y la menor capacidad lo presento el fruto. En
conclusión, la guayaba tienen un potencial para ser usado como
neutraceutico a las hojas (tiernas, maduras y yemas terminales), corteza
y flores y como bebida funcional a la fruta procesada.
Según RENE, et al. (2014). APLICARON UN DISEÑO FACTORIAL
FRACCIONADO, PARA SELECCIONAR LAS VARIABLES CON
MAYOR EFECTO SOBRE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE, EL
CONTENIDO DE FENOLES Y EL RENDIMIENTO DE LA EXTRACCIÓN
UTILIZANDO CO2 SUPERCRÍTICO COMO SOLVENTE SOBRE HOJAS
Y TALLOS DE SALVIA OFFICINALIS L. El tiempo de extracción, el flujo
de CO2, la presión de la cámara de extracción y la temperatura de
separación se modificaron según el procedimiento simplex para hallar
empíricamente las condiciones que produjeran extractos de salvia con el
valor más alto de la combinación lineal de rendimiento de extracción,
capacidad antioxidante y contenido total de fenoles.

Según CORONADO, M. y SILVA, M. (2008). UTILIZARON UN DISEÑO


COMPUESTO CENTRAL (DCC) PARA INVESTIGAR EL EFECTO DE
LAS VARIABLES INDEPENDIENTES DENOMINADAS CONTENIDO DE
ETANOL EN EL DISOLVENTE HIDROALCOHÓLICO (%, V/V),
TEMPERATURA (ºC), TIEMPO (MIN) Y RELACIÓN
DISOLVENTE/MATERIA PRIMA (ML/G) SOBRE LAS RESPUESTAS
DENOMINADAS RENDIMIENTO DE EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS
FENÓLICOS (Y1) Y ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE (Y2). El DCC consistió
de 16 puntos factoriales, 8 puntos axiales y 7 repeticiones en el punto
central. Los datos fueron analizados utilizando el software Design Expert
y para predecir cada respuesta se utilizó modelos polinomiales de
segundo orden. El análisis de regresión, mostró que los modelos
obtenidos para las respuestas Y1 e Y2 explicaron más del 92,48 y
96,81% de la variación obtenida, respectivamente. Mediante la aplicación
de la metodología de Deseabilidad Global sobre los modelos
polinomiales estimados se determinó que los niveles óptimos de las
variables en estudio son 45,48% (v/v), 55,04 ºC, 26,79 min and 7,5 ml/g.
Los valores de rendimiento de extracción y actividad antioxidante
estimados por los modelos bajo los niveles óptimos de las variables son
91,55 % (p/p) y 5409,39 (μg eq. Trolox/g), respectivamente, y los
obtenidos experimentalmente son 90,52 % (p/p) y 5354,27 (μg eq.
Trolox/g). Se observaron una concordancia entre ambos resultados, por
lo que afirma que los modelos empíricos obtenidos por la Metodología de
Superficie de Respuesta pueden ser usados exitosamente para describir
adecuadamente la relación
Según MUÑOZ C, et al. (2015). DETERMINARON EL CONTENIDO DE
COMPUESTOS FENÓLICOS EN EXTRACTOS OBTENIDOS A PARTIR
DE LA EXTRACCIÓN SÓLIDO-LÍQUIDO DE PULPA LIOFILIZADA
(1:10), EMPLEANDO COMO DISOLVENTES AGUA, ETANOL Y
MEZCLA ETANOL-AGUA (7:3), A TRES TEMPERATURAS 20, 50 Y 70
°C. Los rendimientos de extracción variaron entre el 26,85 % y el 50,07
%, observando rendimientos más elevados en los extractos acuosos. Se
observó que el contenido de compuestos fenólicos fue directamente
proporcional a la temperatura de extracción y varió entre 1469,32 ±
152,14 y 5272,51 ± 424,89 μg de ácido gálico/g de pulpa liofilizada,
obteniendo valores más altos para la mezcla etanol-agua (7:3). La
actividad antioxidante encontrada varió entre 20,44 ± 2,57 y 51,01 ± 1,93
mmol/L TEAC/g de pulpa liofilizada, observando una menor actividad en
los extractos etanólicos. Tanto en el rendimiento de extracción, como en
la determinación del contenido de fenólicos y la actividad antioxidante se
observó un efecto significativo de la temperatura de extracción, asociado
a cada disolvente. Los resultados obtenidos, ratifican que la C. lineatifolia
es un producto natural con alto contenido de compuestos bioactivos, con
potencial antioxidante que puede ser utilizado en la industria agrícola,
farmacéutica, cosmética y de alimentos.

5.2. Daledale (Calathea alloua)

5.2.1. Descripción Botánica

Según (3) El daledale es una planta de la familia de las


Marantáceas, perenne y silvestre de la amazonia, nativa del
norte de américa del sur y el caribe, tiene como forma macollas
(brotes originados en la base de un mismo pie) de
aproximadamente 1 m. de altura. Presenta raíces tuberosas
ovoides o cilíndricas, de 2 a 8 cm de largo, y 2 a 4 cm de
diámetro. Las hojas tienen base envolvente que forma
pseudotallo cortos, peciolos largos y acanalados, son simples,
alternas, con ápice acuminado, láminas elípticas, parecidas de
las hojas de plátano.
5.2.2. Clasificación Taxonómica

Reino : Plantea
División : Magnoliophyta
Clase : Liliopsida
Subclase : Commelinidae
Orden : Zingiberales
Familia : Marantáceas
Género : Calathea
Especie : Calathea alloua

5.2.3. Forma de usos


Según (3). Menciona las formas de uso del daledale.

- Alimento: las raíces tuberosas se consume cosida y frescas


en ensaladas, que se, mantiene una textura crujiente.

- Medicinal: en américa del sur, la medicina tradicional le


atribuye a la tintura de las hojas como tónica y
antiescrofulosa, que tiene las propiedades para el
tratamiento contra la cistitis y como diurético.

Las hojas frescas eran empleadas por los pueblos indígenas


para la confección de ropas para bebes, por ser resistentes
y durables.

5.2.4. Zona de cultivo.

Es de clima tropical lluviosos, que rinde más a pleno sol. Soporta


sombra, y la producción es menos. Crecen en suelo en textura
media, buen drenaje y abundante agua. Los suelos arcillosos
limitan el crecimiento de las raíces tuberosas (3). Los suelos
arenosos son buenos, siempre y cuando tenga agua suficiente.
La prolongación es por rizomas y plántulas de la base del tallo.
Se cosecha a los 8 a 12 meses, cavando alrededor de la planta
para sacar los tubérculos (1). Se puede almacenar el producto
durante unas 10 semanas.
5.2.5. Potencial.
Según (3) consiste, que el daledale parece haberse originado el
norte de Suramérica, aunque se desconoce su área precisa. La
especie fue usada por varios grupos de amerindios y
poblaciones modernas de la Amazonia, quienes consumen las
raíces tuberosas o preparan extractos de hoja para utilizarlos
como remedio casero para la cistitis o como diurético. Las
variedades cultivadas se proponga en forma vegetativa a partir
de tallos del tipo de rizoma, los rendimientos son muy variables
(100g a 2.2 kg por planta) y los estimados de rendimiento van 2
a 40 t/ha.

5.2.6. Antioxidantes

Se considera como antioxidante a toda sustancia que hallándose


presente a bajas concentraciones con respecto a las de un
sustrato oxidable, que inhiben o retrasan la oxidación de otras
moléculas mediante la inhibición de la propagación de la
reacción de oxidación (4).

Un antioxidante es cualquier molécula capaz de prevenir o


retardar la oxidación de otras moléculas, generalmente sustratos
biológicos como lípidos, proteínas o ácidos nucleicos. Asimismo
todo antioxidante prolonga la vida útil de los alimentos
protegiéndolo contra el deterioro causado por la oxidación (5).

5.2.6.1. Clasificación de los antioxidantes


- Antioxidantes endógenos
Los antioxidantes endógenos o antioxidantes
enzimáticos actúan a nivel intracelular. Existen tres
sistemas principales de enzimas antioxidantes:
superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CTL) y
glutatión peroxidasa (GPX).

- Antioxidantes exógenos
Los extractos naturales están constituidos por
diversos compuestos de naturaleza química
diferente como polifenoles, isoprenoides,
compuestos tiólicos, ácido ascórbico y
polisacáridos que en conjunto contribuyen, bajo
diferentes mecanismos ejercer la actividad
antioxidante (GORMAZ, 2005).

Algunos de los antioxidantes no enzimáticos son: el


glutatión en su forma reducida (GSH), algunos
minerales como selenio, cinc, o vitaminas como
riboflavina, ácido ascórbico (vitamina C) y α-
tocoferol (vitamina E), éstos son esenciales para la
defensa contra el daño oxidante debido a que
actúan como cofactores de las enzimas
antioxidantes (KRINSKI, 2000).

5.2.7. Compuesto fenólicos

Los polifenoles se encuentran distribuidos ampliamente en


alimentos de origen vegetal: frutas, cereales, hortalizas y
bebidas, que intervienen como antioxidantes en alimentos de
origen vegetal, para la obtención y preparación de alimentos con
un alto contenido en estos compuestos, presenta una reducción
en la oxidación de los alimentos; a la vez que se obtienen
alimentos más saludables por conservar el valor nutricional (4).

Los polifenoles son conocidos principalmente como ácidos


fenólicos y flavonoides, los ácidos fenólicos han sido
repetidamente implicados como antioxidantes naturales en
frutas, hortalizas y otras plantas, especialmente los flavonoides
y los antocianos muestran una gran capacidad para captar
radicales libres causantes del estrés oxidativo, atribuyéndoseles
a su vez un efecto beneficioso en la prevención de
enfermedades (6).

A los compuestos fenólicos se les atribuyen actividades


biológicas beneficiosas para la salud. Entre éstas destacan sus
efectos vasodilatadores, antiinflamatorios, antialérgicos,
antivirales, bactericidas, estimuladores de la respuesta inmune y
antioxidantes (6)

5.3. Definición de términos básicos.

5.3.1. Antioxidante

Es una molécula capaz de retardar o prevenir la oxidación de


otras moléculas. La oxidación es una reacción química de
transferencia de electrones de una sustancia a un agente
oxidante. Las reacciones de oxidación pueden producir radicales
libres que comienzan reacciones en cadena que dañan las
células. Los antioxidantes terminan estas reacciones quitando
intermedios del radical libre e inhiben otras reacciones de
oxidación oxidándose ellos mismos.

5.3.2. Radicales libre

Los radicales libres son sustancias químicas muy reactivas que


introducen oxígeno en las células, produciendo la oxidación de
sus partes, alteraciones en el ADN, y que provocan cambios que
aceleran el envejecimiento del cuerpo. Esto es debido a que el
oxígeno, aunque imprescindible para la vida, es también un
elemento químico muy reactivo.

5.3.3. Compuestos fenólicos


En la naturaleza existe una amplia variedad de compuestos que
presentan una estructura molecular caracterizada por la
presencia de uno o varios anillos fenólicos. Estos compuestos
podemos denominarlos polifenoles (7).

VI. METODOS

6.1. Ubicación y descripción del área de estudio


La investigación se realizara en las instalaciones de la universidad
nacional intercultural de la amazonia, ubicado en la Carretera a San José
km 0.5, Puerto Callao, cuya materia prima es recolectada en la restinga,
de un fundo; cuyas Coordenadas: 8°50′123″N 74°35′17″E (mapa), se
empleara los ambientes del laboratorio de bioquímica, laboratorio control
de calidad de agua. El proyecto de investigación tiene un periodo de seis
meses para su respectiva ejecución, contando con la disponibilidad de
materiales y equipos necesarios para su ejecución.

6.2. Identificación y descripción de materiales de investigación

6.2.1. Materia Prima e Insumo

La hoja del daledale, (calathea alloua) fue cosechada en el distrito


de Yarinacocha en la provincia de Pucallpa, departamento de
Ucayali. Las hojas del daledale serán cortadas de tamaño de 35
cm del ápice superior (cortadas en cuatro partes}, lavadas con
agua potable y deshidratadas a 60 °C por 5 horas, luego se
molieron y tamizaron en malla de 0,5 mm de luz. Las muestras
secas y molidas de daledale, se empacaron en bolsas de
polietileno y se almacena en refrigeración para su análisis
posterior

6.2.2. Materiales de Laboratorio

- Microcubetas de poliestireno (1 x 1 x 4,5 cm).


- Micropipetas (1 O- 200 11L y 200- 1000 11L).
- Tips (1.00 y 1000 ul).
- Fiolas (25, 50 y 1 00 ml).
- Vasos de precipitación (50, 100 y 500 ml).
- Frascos de vidrio color ámbar (1 ,5 cm de diámetro).
- Embudo de vidrio.
- Vasos de precipitación (50, 100, 500 ml).
- Tubos de vidrio con tapa (0,5 de diámetro).
- Gradilla.
- Papel craf
- Tubos de plástico de poliestireno (14 ml).
- Mechero Bunsen.
- Termómetro (O- 100°C).
6.2.3. Reactivos

- 2.2 - azinobis -3- etilbenzotiazolina -6- ácido sulfónico (ABTSo+;


Sigma Chemical Ca. USA).
- 1.1 diphenyl -2- picrylhidrazyl (DPPH; Sigma Chemical Ca.
USA).
- Folin ciocalteau (Sigma Chemical Ca. USA).
- Carbonato de sodio (Sigma Chemical Ca. USA).
- Ácido gálico (Sigma Chemical Ca. USA).
- Ácido ascórbico (Sigma Chemical Co. USA).
- Etanol (95 %).

6.2.4. Equipos de Laboratorio

- Balanza analítica plus (Ohaus Ca. Suiza).


- Espectrofotómetro (UV-1201 Genesys 8
- Estufa (Precisión Scientific, USA).
- Potenciómetro (lnolab Ca. Alemania).
- Refractómetro (Labor Min Hungría).
- Refrigeradora (Admira! USA).
- Cámara de secado.
- Baño María (Precisión Scientific, USA) con temperatura
regulable.
- HPLC

6.3. Procesamiento
La actividad antioxidante de los extractos se midió empleando el método
ABTS (6-sulfonato-3-etilbenzotiazolina) Y DPPH radical 1,1' diphenyl -2-
picrylhidrazyl , las mediciones de absorbancia se realizaron a 740 nm Y
515 nm empleando un espectrofotómetro (Génesis 20). El radical ABTS
se generó por la reacción de oxidación del ABTS (2,2’-azino-bis-(3-
etilbenzotiazolin-6-sulfonato de amonio)) (3,5 mM) con persulfato de
potasio (1,25 mM). Después de 24 h de reacción, se diluyó el reactivo
ABTS concentrado con solución tampón fosfato a pH 7,4 hasta
absorbancia 0,70, a una longitud de onda de 740 nm. Para la evaluación
se emplearon 10 μL del extracto diluido en DMSO (Dimetilsufoxido) y 990
μL de la solución del radical ABTS+. Luego de 30 min de reacción a
temperatura ambiente y en la oscuridad, se leyó el cambio en la
absorbancia respecto a la referencia del reactivo. Se midió también el
blanco y la referencia del solvente y la muestra en iguales condiciones.
Los resultados se expresaron como IC50 (Porcentaje de inhibición de la
muestra) y como valores TEAC mediante la construcción de una curva
patrón usando diferentes concentraciones de TROLOX® (ácido 6-hidroxi-
2, 5, 7,8-tetrametil-2-cromanocarboxílico).

6.4. Variables

6.3.1. Variables independientes

X1 = hoja de daledale

6.3.2. Variables dependientes

Y1 = actividades de antioxidantes

Y2 = Compuesto fenólicos
.
6.5. Población y muestra

6.4.1. Población

La cantidad de plantas del daledale que se empleará para


el experimento, serán todos las que se encuentre entre las
zonas específicas; de la restinga – Distrito de Yarinacocha.
6.4.2. Muestra
Como muestra se tomó tres ejemplares de la siembra de
daledale, de cada sector de los fundos provenientes como
el Trapiche, Fundo Pablo y el fundo Charapita, las cuales se
encontraban a una distancia de 20 a 50 m de fundo a fundo.

6.6. Tratamientos

6.5.1. Evaluación de la actividad antioxidante

Según (7), sostiene los siguientes métodos en la evaluación de la


actividad antioxidantes y en la determinación de compuestos
fenólicos, en desarrollo de las pruebas experimentales y análisis
estadísticos.

a) Radical 2,2 azinobis -3-ethylbenzotiazolina-6-ácido


sulfónico (ABTSo+).

Se realizó por el método del radical catión 2,2'- azinobis -3


etilbenzotiazolina -6- ácido sulfónico (ABTS0+). La
preparación del reactivo ABTSo+ (7mM) fue en extracto
acuosos - hoja de daledale (EAHD), extracto hidroalcoholico
– Hoja de daledale (EHHD) y en el extracto de etanol de 95
% - Hoja daledale (EEHD) en una solución a 140 M.
En las concentraciones se establecieron cuatro muestras de
secado de diferentes temperaturas (50°C, 60°C, 70°C y T.A.),
en diferentes concentración, de ésta solución stock se
preparara soluciones de trabajo a partir de estas soluciones
de trabajo se tomó 10 L que fueron reaccionadas con el
ABTS0+.

La reacción in vitro se generó en una microcubeta de


polietileno (1 x 1 x 4 cm) muestra (10 L) y ABTS0 + (990 L)
luego inmediatamente se procedió a la lectura
correspondiente usándose un espectrofotómetro Genesys 8.
Las absorbancias se registraron a 740 nm de longitud de onda
cada 60 segundos por 30 minutos.
La inhibición de secuestro del ABTSo + fue determinado por
la siguiente expresión:
% de inhibición del ABTSo = [(Ac Am)/Ac] x 100
Donde:
Ác = Absorbancia de la reacción del blanco del ABTSo+
Am = Absorbancia de la reacción de la muestra a los 30
minutos.

Materia Prima
(Hoja de daledale – seca)

Extracto
Extracto Acuoso Extracto etanol 95°
Hidroalcoholico
EAHD EEHD
EHHD

M1 M2 M3 M4 M1 M2 M3 M4 M1 M2 M3 M4
50°C 60°C 70°C T.A. 50°C 60°C 70°C T.A. 50°C 60°C 70°C T.A.

Reacción con ABTS0+ y


monitoreando la absorbancia de
740 nm

Determinación del % de inhibición,


EVC, (equivalente en vitamina C),
IC50

Donde:

EAHD: Extracto Acuoso de la Hoja de Daledale.


EHHD: Extracto Hidroalcoholico de la Hoja de Daledale
EEHD: Extracto Etanol de la Hoja de Daledale
M (1, 2, 3, 4): Muestras de repeticiones de diferentes temperaturas

Figura 1. Diseño experimental para la evaluación de la actividad antioxidante en el con


ABTSo+
b) Método del radical 1,1' diphenyl -2- picrylhidrazyl
(DPPHo)
El procedimiento para la preparación del reactivo: el DPPHo
se disolvió a través del extracto acuoso hoja de daledale
(EAHD), extracto hidro - alcohólico hoja daledale (EHHD) y el
extracto en etanol al 95 % hoja daledale (EEHD),
preparándose una solución stock de 1 mM.

En las concentraciones se establecieron cuatro muestras de


secado de diferentes temperaturas (50°C, 60°C, 70°C y T.A.),
en diferentes concentración, a partir de estas soluciones de
trabajo se reaccionaron con el DPPH° (100 M). La reacción
in vitro, se generó en una microcubeta de poliestireno (1 x 1
x 4 cm) DPPH° (950 L), luego se procedió a su lectura
usándose un espectrofotómetro Génesis. Las absorbancias
se registraron a 515 nm cada 60 segundos por 30 minutos.

La inhibición de secuestro del DPPH° fue determinado por la


siguiente expresión:

% de inhibición DPPH° = [(Ac-Am) 1 Ac] x 100

Donde:
Ac = Absorbancia de reacción con DPPH0 •
Am = Absorbancia de la reacción de la muestra a los 30
minutos

Los resultados son sometidos a un análisis estadístico


comparando las concentraciones, utilizándose un la variable
independiente es el % de inhibición del DPPHo+ y la variable
dependiente es la concentración de los extractos, donde
existió diferencia significativa aplicamos la prueba de
Duncan (p < 0,05).

El más alto % de inhibición del DPPHo fue expresado en


equivalente de vitamina C, a los 30 minutos, construida de la
curva estándar de 1 - 6 mg/100 ml.
El % de inhibición del DPPH0 (p < 0,05) obtenido con cada
uno de las 4concentraciones; fue utilizada para determinar ~1
coeficiente de inhibición (IC50) del DPPHo • Este coeficiente
de inhibición nos indica la cantidad de la hoja de daledale
requerido para inhibir el 50 % del radical libre DPPHo

Materia Prima
(Hoja de daledale – seca)

Extracto
Extracto Acuoso Extracto etanol 95°
Hidroalcoholico
EAHD EEHD
EHHD

M1 M2 M3 M4 M1 M2 M3 M4 M1 M2 M3 M4
50°C 60°C 70°C T.A. 50°C 60°C 70°C T.A. 50°C 60°C 70°C T.A.

Reacciones con DPPH y


monitoreado a una absorbancia de
515 nm

Determinación del % de
inhibición, EVC, IC50.

Donde:
EAHD: Extracto Acuoso de la Hoja de Daledale.;
EH HD: Extracto Hidro-alcoholico de la Hoja de Daledale
EEHD: Extracto Etanol de la Hoja de Daledale
M (1, 2, 3, 4): Muestras de repeticiones de diferentes temperaturas

Figura 2. Diseño experimental para la evaluación de la actividad antioxidante con


DPPHo
6.5.2. Correlación entre el contenido de compuestos fenólicos y la
actividad antioxidante.

La evaluación de la correlación entre el contenido de compuestos


fenólicos y la actividad antioxidante se realizó del siguiente modo:

a) Evaluación de compuestos fenólicos


Para la evaluación de polifenoles totales se utilizó el
siguiente método:

- Método de Folin ciocalteau


La preparación del reactivo de Folin ciocalteau en
solución acuosa, Seguidamente se preparó una solución
stock del extracto acuoso de la hoja de daledale, de ésta
solución stock se prepararon soluciones de trabajo para
las reacciones in vitro. A partir de éstas soluciones de
trabajo se tomó 100 L en las soluciones que fueron
reaccionadas con: 100 L de Folin ciocalteau y 2 mL de
bicarbonato de sodio, para completar la reacción se dejó
reposar por 30 minutos.

La reacción se generó en una microcubeta de


poliestireno (1 x 1 x 4,5 cm) luego inmediatamente se
procedió a su lectura correspondiente usándose un
espectrofotómetro Genesys 8.
Las absorban das se registraron a 740 nm de longitud de
onda.

b) Determinación de compuesto fenólicos


Después de la evaluación con el método de Folin ciocalteau,
luego se determinó los compuesto fenólicos con el equipo
de laboratorio de HPLC, en demostrar que tipo de
compuesto existen en la hoja de daledale, para el uso
medicinal y agroindustrial.
Materia Prima
(Hoja de daledale – seca)

Extracto
Extracto Acuoso Extracto etanol 95°
Hidroalcoholico
EAHD EEHD
EHHD

M1 M2 M3 M4 M1 M2 M3 M4 M1 M2 M3 M4
50°C 60°C 70°C T.A. 50°C 60°C 70°C T.A. 50°C 60°C 70°C T.A.

Reacción con el Folin ciocalteau


por 3 minutos

Reacción con el Bicarbonato de


sodio por 30 minutos

Monitoreo de la absorbancia a 740


nm

Determinación de tipos de
compuesto fenólicos - HPLC

Figura 3. Diseño experimental para la evaluación y Determinación de Compuesto


Fenólicos.

6.7. Recolección de los datos


Los datos se obtendrán mediante observación directa que emitirán los
de equipos de medición, estos previamente calibrados

6.7.1. Fuentes de Información

Fuente primaria
Para la recolección de información en el proyecto, se usará la
técnica de observación, la cual nos permitirá reconocer de
manera clara el problema planteado en la presente investigación
para dar una solución óptima en la evaluación de la actividad de
antioxidantes y la determinación de compuesto fenólicos de la
hoja de Daledale.

Fuentes secundarias
Se obtendrá información a partir de fuentes secundarias externas
a través de artículos encontrados en bases de datos (Universia,
Science direct, Dialnet, Scielo, entre otras), y tesis publicadas en
diferentes bibliotecas virtuales del país o el extranjero, que
contienen información relacionada con el tema de interés y nos
dará un amplio conocimiento de cómo podrían comportarse las
variables dependientes al tener una manipulación controlada de
las variables independientes.

6.7.2. Unidad experimental y unidad de medición


Se tomará como unidades experimentales, 50 gramos de materia
prima, para cada una de los ensayos de extracción del principio
activo, así como sus respectivas repeticiones.

6.7.3. Tipo de muestreo


Se comprenderá un muestreo a lazar o intencional, del sector de
los fundos provenientes como el Trapiche, Fundo Pablo y el fundo
Charapita; donde se obtendrá muestras representativas mediante
la inclusión en la muestra de ejemplares de daledale de fácil
accesibilidad y que presenten un mayor largo y diámetro de las
hojas frescas, a fin de evitar generar daños drásticos cuando las
hojas se extraen.
6.7.4. Técnicas de recolección de datos
Los datos se obtendrán mediante observación directa que emitirá
el equipo de Espectrofotómetro (UV-1201), HPLC, esto
previamente calibrado. Para la recolección de datos se utilizaran
alavés instrumentos como tablas, revistas científicas que
contenga estudios previos relacionados a la planta y su uso en la
salud.

Además se empleara un diario de campo, en el que se consignará


la información obtenida de las diferentes observaciones que se
llevaran a cabo. De la mano se utilizara las entrevistas semi
estructuradas, por ser un valiosos instrumento que nos aportara
información adicional a la obtenida atreves de los equipos
empleados, en las entrevistas se trataran aspectos como, modo
de preparación y parámetros de selección de las plantas.

6.8. Procesamiento de los datos.

Los resultados de la investigación se trasladaran a través de


programas estadísticos los cuales mostraran el porcentaje o
cantidad de antioxidantes y compuestos fenólicos por parte
fisiológica de la planta, que presenten las muestras evaluadas.

Entre los programas a considerar; Excel gráficos y cálculos, SPSS para


el análisis estadístico y STATGRAPHICS.

VII. CRONOGRAMA
ACTIVIDAD MESES

1 2 3 4 5 6 7 8

Presentación y aprobación proyecto tesis X

Revisión de literatura X X X X X X X X

Adquisición insumos (Hojas) X X X

Preparación de la muestra. X X X X X

Inmersión de la partes fisiológicas ( Hoja X X X X X


Daledale), aplicaciones de los métodos ABTSo ,
DPPHo, Folin Ciocalteau, HPLC, Tres extractos
(EAHD, EHHD Y EEHD)

Proceso de extracción. X X

Análisis del Antioxidante y compuesto fenólicos. X X

Recolección de datos X X X X X X

Procesamiento de datos X X X X X

Redacción X X

Presentación y aprobación X X X

Sustentación X

Publicación X
VIII. PRESUPUESTO

Costos (s/.)
ITEM Unidad Cantidad
PRECIO
Monto total
unitario (s/.)
1.Material biológico
1.1 Hoja Daledale - - - -
2. Materiales de Escritorio
2.1 Internet Hora 150 1.50 225.00
2.2 Cuaderno de apunte A Unidad 3 2.00 6.00
2.3 Papel Bond A4 Millar 0.5 28 14.00
2.4 Impresiones Hoja A4 200 0.3 60.00
2.5 Lapicero Unidad 3.00 0.50 1.50
2.6 folder Unidad 2 5.00 10.00
3.Equipo
3.1.alquiler de cámara fotográfica Unidad 1 100,00 100.00
4. Análisis de laboratorio
4.1. Estufa Unidad 1 0.00 0.00
4.2. Espectrofotómetro Unidad 10 44.00 440.00
4.3. Balanza analítica digital (*) Unidad 2 0.00 0.00
4.8. Potenciómetro (pH) Unidad 1 360.00 360.00
4.9. Refractómetro Unidad 2 20.00 40.00
4.10. Baño María Unidad 1 0.00 0.00
4.11. HPLC Unidad 1 500.00 500.00
5. Reactivos
5.1. 2.2 - azinobis -3-
etilbenzotiazolina -6- ácido sulfónico Lt 200 ml 4800.00 960.00
(ABTSo)
5.2. 1.1 diphenyl -2- picrylhidrazyl
Lt 200 ml 5600.00 1120.00
(DPPH)
5.3. Folin ciocalteau Lt 200 ml 1000.00 200.00
6.Elaboración de Informe Final
6.1 Impresiones Hojas A4 500 0.30 150.00
6.2 Empastado Unidad 6 40.00 240.00
TOTAL 4426.50
IX. BIBLIOGRAFÍA

1. BUSTAMANTE, PAULA DENISSE VALENZUELA. EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD


ANTIOXIDANTE Y DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Y FLAVONOIDES DE HOJAS DE DIFERENTES GENOTIPOS DE UGNI MOLINAE
TURCZ. . Santiago - CHILE : s.n., 2015 .

2. PALADINO, SILVIA CRISTINA. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LOS


COMPUESTOS FENÓLICOS CONTENIDOS EN LAS SEMILLAS DE LA VID (Vitis
vinifera l.). Universidades Nacionales de Cuyo : s.n., 2010.

3. BRACK EGG, ANTONIO. Peru: Diez mil años de domesticacion. Lima - Peru : Bruño,
2003.

4. VALVERDE., MARTÍNEZ -, PERIAGO, M. y RUS, G. significado nutricional de los


compuestos fenólicos en la dieta. . s.l. : ALAN, 2000.

5. CADENAS, E. Y L. PARKER. Hadbook of antioxidants. New York. USA : Madison,


2002.

6. MARTÍNEZ FLÓREZ S., GONZÁLES GALLEGO J., CULEBRAS J.M., TUÑÓN M.J.
Los Flavonoides: propiedades y acciones antioxidantes. Universidad de la Habana :
s.n., 2002.

7. RUIZ, IRIS OLIVIA YANCE. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE, POLIFENOLES TOTALES


EN EL EXTRACTO ACUOSO DE HIERBA LUISA (Cymbopogon citratus Staph), Y
SU ESTABILIDAD EN MODELOS DE BEBIDA. TINGO MARIA- PERÚ : s.n., 2004.

8. GONZÁLEZ - TORRES, M. C. y BETANCOURT-RULE, M. Y. ORTÍZ. Daño oxidativo


y antioxidantes. Bioquímica. 2000.

9. LEÓN, J. Botánica de los cultivos tropicales. Instituto Americano de . San José-Costa


Rica : s.n., 1968.