Práctica morfología celular

Daniela Campo, Julián Esteban Cuéllar, María del Mar Zarta Sanclemente
Departamento de automática y electrónica, Universidad Autónoma de Occidente
Cali, Colombia
daniela.campo@uao.edu.co
julian.cuellar@uao.edu.co
marna.zarta@uao.edu.co

Abstract— A practice of microscopy was carried out in order to
know an optical microscope, its components and respective
functions, as well as its proper mode of use. To achieve this
objective different samples were used, identifying structures such
as cells, cell walls and nuclei, red blood cells, white blood cells,
platelets, among others, so it was necessary to change the
objective of the microscope to obtain a closer image of the studied
object. In addition to the above, an analysis was performed to
determine what happens with the image when the platen is
moved, what are the parameters of a normal blood count and
what is the importance of the reagents applied to the samples.
I. INTRODUCCIÓN
el revólver, donde se encuentran montados los objetivos,
teniendo en cuenta que este es el elemento que se debe girar
para seleccionar el objetivo deseado, unido a este se encuentra
un tubo que conecta los objetivos con el ocular. [1]
Este laboratorio se lleva a cabo con el fin de aplicar los
conceptos teóricos aprendidos previamente sobre microscopía,
logrando comprender el principio de funcionamiento de un
microscopio de luz junto con el reconocimiento de sus
componentes, para así identificar de diversas estructuras en las
muestras observadas a través de imágenes de buena calidad y
resolución.

El origen del microscopio se dio en la antigüedad cuando las

personas solían usar espejos curvos o esferas de cristal con
agua, las cuales permitían ver las cosas pequeñas con mayor
aumento y detalle. El microscopio óptico fue el que inauguró la
era de la microscopía en el siglo XVII, es el tipo más básico de
microscopio y su funcionamiento está basado en un juego de
lentes y el uso de luz visible para aumentar la imagen de una
muestra, dicho microscopio está compuesto de dos partes
esenciales: el sistema óptico y el sistema mecánico. [1]
II. OBJETIVOS
- Entender el principio de la microscopía de luz, conocer
las partes del microscopio y sus respectivas funciones.
- Utilizar correctamente el microscopio de luz para la
observación de estructuras con el detalle que permite su
correcto uso.

La microscopía está definida como un conjunto de métodos III. MATERIALES Y MÉTODOS

utilizados para observar objetos que el ojo humano no alcanza
Durante la práctica de laboratorio se hizo uso de los siguientes
a visualizar, dichos métodos usan instrumentos tales como la
materiales:
lupa, microscopio de luz y microscopio electrónico para hacer
efectiva su función. Realizando énfasis en el microscopio de ● Aceite de inmersión.
luz, el sistema óptico de este contiene todos aquellos ● Colorante de Wright.
elementos de manipulación de la luz para obtener la imagen ● Lugol.
aumentada; en dicho sistema se encuentra un foco, también ● Láminas portaobjetos.
conocido como fuente de luz, emitiendo rayos dirigidos a la ● Láminas cubreobjetos.
muestra, los cuales son previamente concentrados hacia ella al ● Láminas de colección.
pasar a través de un condensador; además, este condensador va ● Microscopio de luz.
acompañado de un diafragma, el cual regula la luz a emitir. ● Recorte de una letra de revista.
Para incrementar el tamaño de la imagen a observar se hace ● Recipiente para descartar las láminas.
uso de un conjunto de lentes con diferentes aumentos ● Mucosa bucal.
conocidos como objetivos, para finalmente por medio del ● Una cebolla pequeña.
ocular observar la imagen de la muestra ampliada por el
objetivo. La metodología aplicada se resume en el siguiente diagrama de
flujo:
El sistema mecánico suministra un soporte estructural a los
elementos del sistema óptico, este cuenta con una base que
permite la estabilidad del microscopio y un brazo, que es la
estructura más importante del dispositivo debido a que conecta
la base con el sistema óptico, adicionalmente se encuentra la
platina, una pieza horizontal donde se deposita la lámina con la
muestra; para regular la posición de la platina se hace uso de
dos componentes conocidos como tornillo macrométrico y
micrométrico. Por último en la parte superior del brazo se tiene
Diagrama 1. Metodología aplicada durante la práctica de laboratorio
 IV. PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS
La primera muestra a analizar fue con recorte de una letra dee
revista, esto con el fin de afianzar los conocimientos previamente
adquiridos y familiarizarse un poco más con el microscopio,
pues la calidad de la imagen obtenida depende mucho del uso
correcto del mismo. En la figura 1 se puede observar la imagen
obtenida de la letra de una revista.

Fig 3 Epidermis de cebolla en microscopía de luz. Tomada por el equipo de

trabajo.

En la mayor parte de la imagen se visualiza una tonalidad

amarillenta, lo que corresponde al citoplasma; por otra parte la
Fig 1. Recorte de una letra por microscopía de luz. Tomada de referencia [2].
imagen obtenida se asemeja a una secuencia de ladrillos, pues
Como se puede observar la imagen obtenida está al revés, esto las diversas células, además de ser alargadas se encuentran
no significa que se haya manipulado mal el microscopio; pues el delimitadas por su respectiva pared celular, característica de las
objetivo muestra una imagen real, aumentada e invertida [3], células vegetales, esta puede ser diferenciada gracias a que
además cuando se mueve la lámina hacia adelante la imagen se adquiere una tonalidad mucho más oscura, adicionalmente se
moverá hacia atrás, todo lo anterior se debe principalmente a que visualizan círculos color ocre, correspondientes a los núcleos
los lentes de los objetivos son convexos, por lo que hacen de las células. En la figura 4 se puede apreciar esta muestra un
converger los rayos luminosos que lo atraviesan, proyectando poco más de cerca, enfocando uno de los núcleos observados.
una imagen invertida y afectando la percepción del movimiento
de la muestra; por otro lado dichos objetivos tienen un punto
focal muy pequeño, una vez la luz atraviesa la muestra, los lentes
y el punto focal del objetivo, su trayectoria se verá afectada,
posteriormente la imagen es observada por un segundo lente
llamado ocular, el cual actúa únicamente como lupa [4]. En la
figura 2 se muestra la transformación por la que atraviesa la
imagen antes de llegar al ojo.

Fig 4. Núcleo de una célula de epidermis de cebolla. Tomada por el equipo de

trabajo.

Al tener un acercamiento mayor de la muestra es posible

identificar lo que sería el ADN de la célula enrollado y
empaquetado al interior del núcleo.
Como tercera muestra se hizo uso de un raspado de mucosa
bucal, la cual se obtuvo tras frotar un hisopo sobre la parte
interna de la mejilla en la cavidad bucal, para posteriormente
realizar un extendido sobre la lámina, adicionalmente se agregó
una gota de colorante de Wright a la muestra, obteniendo los
siguientes resultados:
Fig 2. Transformación de los rayos de luz al atravesar la muestra y los diferentes
lentes del microscopio. Tomada de referencia [4].

Como segunda muestra se tomó una porción pequeña de

epidermis proveniente del bulbo de una cebolla, al cual se le
adicionó una gota de Lugol y se cubrió con una laminilla para
finalmente colocarla en la platina, la figura 3 muestra el
resultado obtenido.
 Para la última parte del laboratorio la muestra de sangre fue
presentada por la docente durante la clase, donde se utilizó el
objetivo de 100x para visualizar una imagen más clara y
detallada, por lo que fue necesario aplicar aceite de inmersión
sobre la muestra, la función principal de este es incrementar la
resolución de la imagen gracias a su alto índice de refracción,
reduciendo la dispersión de la luz, además evita el rozamiento
del lente del objetivo con la muestra. Posterior a esto se
recorrió la lámina para ubicar los diferentes tipos de glóbulos
blancos, se puede observar que la cantidad de glóbulos blancos
a comparación de los rojos es muy pequeña, si en algún
momento se llegase a tener la misma proporción de leucocitos
y eritrocitos puede indicar un caso de leucemia. En las
siguientes imágenes se visualizan los resultados obtenidos,
logrando identificar 3 tipos de glóbulos blancos:

Fig 5. Muestra de mucosa bucal. Tomada por el equipo de trabajo.

Es importante resaltar la función del colorante de Wright en este

punto de la práctica; en primer lugar, Se le llama tinción o
coloración a la técnica utilizada en microscopía cuya función es
mejorar el contraste de la imagen vista al microscopio, pues
todas las células son incoloras excepto de los glóbulos rojos, por
lo tanto el colorante permite resaltar las estructuras en los
diferentes tejidos. Es necesario aclarar que se debe usar un
colorante específico dependiendo de lo que se desee observar o
la muestra que se esté analizando, en esta práctica se usó Lugol y Fig 6. Muestra de sangre donde se visualiza un monocito .
colorante de Wright.
- Colorante de Wright: Se encuentra formado por Azul
de Metileno y sus derivados oxidados, el colorante
ácido Eosina y colorantes básicos, estos últimos unen a
los componentes ácidos de las células, ácidos nucleicos,
gránulos en neutrófilos y proteínas ácidas, las cuales se
tiñen de un color rojo púrpura, mientras que la eosina se
une a la hemoglobina, componentes básicos de las
estructuras celulares y los gránulos de los eosinófilos.
El balance entre el azul de metileno, sus derivados
oxidados y la Eosina, proporciona una tonalidad azul y
diversas intensidades en la coloración. [5]
- Lugol: Se utiliza esta disolución como indicador en la Fig 7. Muestra de sangre donde se visualizan linfocitos.
prueba del yodo, que sirve para identificar polisacáridos
como los almidones, glucógeno y ciertas dextrinas,
formando un complejo de inclusión termolábil que se
caracteriza por presentar distintos colores según las
ramificaciones que presente la molécula. El Lugol no
reacciona con azúcares simples como la glucosa o la
fructosa. [6]
Teniendo en cuenta lo anterior, gracias al colorante de Wright es
posible apreciar que en la figura 5 lo que se encuentra teñido de
un color azul claro son células, las cuales poseen una forma
irregular, además este colorante permite visualizar el núcleo de
las diversas celular gracias a que adquieren una coloración
mucho más oscura.
Fig 8. Muestra de sangre donde se observa un neutrófilo.
Si se realiza una comparación de los resultados obtenidos de la
segunda y tercera muestra, es posible notar que las células En las figuras anteriores es posible identificar que en su mayoría
eucariotas animales tienen un menor tamaño que las células las células observadas corresponden a glóbulos rojos, células sin
vegetales, además de encontrarse más dispersas gracias a la núcleo con una tonalidad púrpura, algunos parecen ser huecos
presencia de la matriz extracelular. debido a su biconcavidad, gracias a esto su membrana es mucho
más delgada en el centro de la célula, permitiéndole llevar a cabo
con éxito su función de transportar oxígeno. Por otro lado se
visualizan pequeños puntos con igual tonalidad, estas son las
plaquetas, es decir, restos de células de gran tamaño
(megacariocitos) que han sido destruidas al pasar por el torrente
sanguíneo y cuya función principal es ayudar a la coagulación.
Adicionalmente, en cada figura se puede observar un tipo de
glóbulo blanco; en el caso de la figura 6 resalta en el lado
izquierdo un elemento de gran tamaño con núcleo arriñonado y
gran cantidad de citoplasma, el cual se torna gris, esta
descripción corresponde a un agranulocito de tipo monocito, el
cual se encarga de fagocitar; en la figura 7 se identifican 2
linfocitos, caracterizados por ser mononucleares, con poco
citoplasma y tener la capacidad de crear anticuerpos para atacar
un virus específicos; por último, la figura 8 corresponde a un
glóbulo blanco polimorfonuclear de tipo neutrófilo, siendo lo
gris el citoplasma y los círculos morados el núcleo, que pueden
tener diferentes formas, estos son especializados en matar
bacterias mediante la expulsión de secreciones al romper sus
gránulos.
En un análisis de sangre, también conocido hemograma o conteo
sanguíneo completo (CSC), es posible evidenciar todos los
componentes de la sangre, la cantidad y proporción en el
organismo y si hay alguna alteración; los componentes
analizados en dicha prueba son:
- Hematíes o glóbulos rojos: Son una de las células más
importantes en el organismo, su función es transportar
oxígeno a través del organismo. Los niveles
considerados normales es de 4,5 a 6 millones por
microlitro (µl) en hombres, 4,0 a 5,5 millones por
microlitro (µl) en mujeres y 3,9 a 5,0 millones por
microlitro en niños. Si se presentan niveles bajos de
glóbulos rojos se debe a la presencia de hemorragias,
por lo que el oxígeno necesario a las demás células no
llega a las demás células, lo que en últimas produce a
anemia;, por otro lado? si los niveles de hematíes es alto
se le conoce como poliglobulia, por lo general se
incrementa la producción de glóbulos rojos cuando hay
una disminución de oxígeno en la sangre, un ejemplo
son las personas que fuman cigarrillo, el tabaco
disminuye el oxígeno en la sangre por lo cual
producirán más glóbulos rojos, es importante aclarar
que si los niveles de glóbulos rojos está elevado no está
relacionado directamente a una enfermedad.
- Hemoglobina (Hb): La hemoglobina se encuentra en el
interior de los glóbulos rojos, es una proteína formada
de hierro responsable de que la coloración de la sangre
sea roja, se encarga que el oxígeno y los nutrientes
lleguen a todos los tejidos del cuerpo humano y en
adición transporta el dióxido de carbono a los pulmones
para que sea expulsado; es normal encontrar entre 200 a
300 moléculas de hemoglobina en un glóbulo rojo. Los
niveles normales de hemoglobina es de 13,5 a 17,5 g/dl
en hombres, 12 a 16 g/dl en mujeres y 10,3 a 15 g/dl en
niños. Si se presentan niveles bajos de esta proteína,
quiere decir que hay una deficiencia en el
funcionamiento de los glóbulos rojos, también conocido
como anemia, pero si se presentan niveles altos la
persona puede presentar poliglobulia, problemas
pulmonares, cardiopatías o simplemente vive en una
zona de mucha altitud.
- Hematocrito (Hto): Hace referencia al volumen de
glóbulos rojos en sangre sobre el volumen sanguíneo
total, es expresado como un porcentaje, por lo tanto en
hombres es normal encontrar un porcentaje entre el 41 a
53%, en mujeres de 35 a 45% y en niños de 30 a 40%.
La causa principal que se presenten niveles bajos de
hematocritos es la anemia, aunque también existen otros
factores tales como: embarazos, hemorragias, leucemia,
problemas en la médula ósea, hipertiroidismo, entre
otras. Si por el contrario se presentan niveles altos
puede estar dado por: problemas de hidratación,
enfermedades pulmonares crónicas o problemas
cardiacos.
- Volumen corpuscular medio (VCM): Con este se
determina el tamaño medio de los glóbulos rojos, es
muy útil ya que ayuda a clasificar el tipo de anemia en
macrocítica o microcítica dependiendo de si los
glóbulos rojos son más grandes o pequeños de lo
normal. Lo que se considera normal está entre 88 a 100
fl (femtolitros por glóbulos rojos), los valores por
debajo de lo normal puede indicar una pérdida
exagerada de sangre, déficit de hierro, una talasemia, o
alguna anomalía congénita de la hemoglobina; valores
por encima están directamente relacionados con el
déficit de la vitamina B12 y ácido fólico, entre las
causas se encuentran trastornos con el hígado, o la
ingesta de alcohol.
- Hemoglobina corpuscular media (HCM): Este índice
indica la cantidad de hemoglobina que contiene cada
glóbulo rojo, el valor estándar está entre 32 a 36 g/dl,
los niveles bajos indican que podría existir una anemia
por falta de hemoglobina, al ser una proteína formada
por hierro se presentaría un déficit de este, pero si los
niveles están más altos del valor estándar podría estar
indicando un déficit de la vitamina B12 o ácido fólico,
aunque es muy raro encontrar casos de anemias
hipercrómicas.
- Leucocitos: Conocidos también como glóbulos blancos,
su función principal es la defensa frente a agresiones
externas. Existen varios tipos de leucocitos:
● linfocitos: Se caracterizan por la carencia de
gránulos, los linfocitos son los encargados de
combatir agentes extraños específicos que hay
en el organismo, además poseen memoria
inmunológica. Los niveles normales en el
cuerpo humano están entre el 15 al 45%.
Cuando hay una elevación en los linfocitos se
conoce como linfocitosis, aparece cuando hay
infecciones agudas, crónicas, alergias
farmacológicas o en la leucemia, por el
contrario, si hay niveles bajos de este tipo de
glóbulos blancos se le conoce como linfopenia,
se presenta en personas que han pasado por
quimioterapia o existe alguna falla en su
sistema inmune.
● Neutrófilos: Tiene gránulos y su función
principal es destruir bacterias, sólidos y restos
celulares, rompiendo sus gránulos y
 expulsando secreciones al exterior. El nivel
estándar está entre el 45 al 75%, cuando hay
una elevación se conoce como neutrofilia y
está relacionado con las infecciones,
quemaduras, hemorragias agudas, procesos
inflamatorios, consumo de tabaco entre otros;
la neutropenia se da cuando los niveles son
bajos, haciendo que la persona sea muy
vulnerable a tener cualquier tipo de infección
fácilmente.
● Eosinófilos: Presenta gran número de gránulos
en su interior, no está presente en el cuerpo en
grandes cantidades, pues los niveles normales
están entre el 0 y 3%, es muy raro encontrar
niveles por debajo del estándar pero cuando
están por encima podría indicar la presencia de
una infección, asma, alergias o parásitos, se
puede asociar a enfermedades intestinales y
pulmonares.
● Plaquetas: Son esenciales para la coagulación
sanguínea, aunque sean los elementos más
pequeños de la sangre, lo que hacen es cerrar
los vasos sanguíneos permitiendo que la sangre
se coagule para tapar las lesiones cuando se
produce alguna herida, los niveles normales
están entre los 150,000 y los 400,000 por
microlitro (µl), una trombocitopenia ocurre
cuando las plaquetas están por debajo del valor
normal, y esto puede deberse a un mal
funcionamiento de la médula ósea, impidiendo
una buena coagulación y provocando
hemorragias en diferentes partes del cuerpo
como la nariz, encías, hematomas en la piel
entre otros. La púrpura trombocitopénica
idiopática se caracteriza por la formación de
anticuerpos que destruyen las plaquetas al no
reconocerlas como propias del organismo. La
trombocitosis aparece cuando el número de
plaquetas es elevado y puede formar trombos
dentro de las arterias, ésta elevación puede
darse sin justificación o puede darse por un
mal funcionamiento de la médula, así como
reacción a hemorragias agudas o ciertas
enfermedades.
- Velocidad de segmentación globular (VSG): Este
parámetro mide la velocidad a la que se sedimentan los
glóbulos rojos de la sangre en un tiempo determinado
(1-2 horas aproximadamente). Los niveles normales
están entre 0 y 10 mm/hora en hombres y entre 0 y 20
mm/h en mujeres. No suelen presentarse niveles muy
bajos, sólo cuando se proporciona un tratamiento y es
con el fin de confirmar que está funcionando, pero
cuando los niveles son altos se puede asociar al
mieloma, los linfomas, las leucemias, y algunos
procesos inflamatorios como lo son el lupus y la artritis
reumatoide; adicionalmente se puede elevar por
procesos fisiológicos como el embarazo o la
menstruación, también se puede presentar en algunos
ancianos. [7]
V. CONCLUSIONES
El laboratorio se llevó a cabo de forma satisfactoria logrando
dar cumplimiento a los objetivos propuestos, pues se
comprendió el principio de funcionamiento de la microscopía
óptica a través de la visualización de diferentes muestras, por
lo que era de suma importancia la adecuada manipulación del
instrumento. Para esto primero se coloca la muestra
previamente manipulada en la platina, se debe girar el
revólver hasta que se encuentre en el objetivo con el menor
aumento, para posteriormente con el anillo macrométrico
graduar la altura de la platina hasta encontrar el punto de
enfoque, es importante tener en cuenta que cuando se pase a
un aumento mayor se debe usar el anillo micrométrico para
enfocar la imagen, además entre mayor sea el aumento menor
es la cantidad de luz que pasa por el objetivo, por lo que es
necesario incrementar la potencia de la fuente de luz; cuando
se requiera usar el objetivo de aumento más alto (x100) el
revólver se debe ajustar en un punto medio entre los objetivos
para así facilitar la aplicación del aceite de inmersión, esto
ayudará a proteger el objetivo de diferentes daños y mejorar
la resolución de la imagen obtenida.
Adicionalmente, gracias al buen manejo del microscopio se
observaron a detalle las muestras, logrando identificar
diversas estructuras las cuales fueron descritas a lo largo del
informe.
Sin embargo durante el laboratorio pueden presentarse
ciertos percances que alteran los resultados o la velocidad de
su obtención, entre estos se encuentra una mala manipulación
de alguna de las partes del microscopio, en especial el anillo
macrométrico y micrométrico, al cambiar de un objetivo a
otro por accidente se mueve el anillo macrométrico tratando
de enfocar mejor la muestra o de mover el micrométrico,
pues estos se encuentran unidos, por lo que la muestra se
desenfoca y es necesario repetir el proceso de ajuste,
generando un gasto de tiempo innecesario; la solución a esta
problemática está ligada a la concentración y atención del
estudiante que está realizando la prueba, sin embargo sería de
gran ayuda separar los dos anillos para que funcionen de
forma independiente.
Por otra parte, Es muy común notar que las personas olvidan
ajustar la intensidad de la fuente de luz al usar objetivos de
mayor aumento generando una pérdida considerable de la
visibilidad de la muestra, esto podría solucionarse moviendo
la resistencia variable de un anillo independiente, a el
revólver, para que funcionen de forma conjunta.
Otra posible causa de error se encuentra en la obtención de
las muestras, pues si no se realiza adecuadamente el raspado
bucal o se retira únicamente la epidermis del bulbo de la
cebolla, no se podrán observar de forma clara, impidiendo la
identificación de las diversas estructuras que lo componen,
nuevamente gran parte de la responsabilidad del éxito de la
práctica recae sobre el estudiante y la forma en la que obtiene
la muestra, pero resultaría de gran ayuda contar con
herramientas más especializadas para la obtención de las
mismas, pues al realizar el extendido del raspado bucal se
podían apreciar restos de hisopo que perjudicaban la
visualización de la muestra.
 REFERENCIAS
[1] S.N. S.F. El microscopio óptico. Mundo microscopio. Recuperado de:
https://www.mundomicroscopio.com/
[2] Gil, Jheysonn. (12 de junio de 2012). Biología 1: Laboratorio N° 2
microscopía. Blogspot. Recuperado de:
http://jheysonngilromero.blogspot.com.co/2012/06/laboratorio-n-2-
microscopia.html
[3] Caña, Jhoan.S.F. Por qué la letra en el microscopio se vio al revés.
México. Scribd. Recuperado de:
https://es.scribd.com/doc/272032012/Por-Que-La-Letra-en-El-
Microscopio-Se-Vio-Al-Reves
[4] McDoogleburger, Amelia. (Julio 27 de 2017). Why do compound
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https://healthfully.com/do-compound-microscopes-invert-images-
5208588.html
[5] QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.. (Julio de 2011).
COLORANTE WRIGHT Para diagnóstico “in vitro”. Recuperado de:
http://www.cromakit.es/pdfs/inserts/997939.pdf
[6] Juan Diego. (27 de agosto 2016). reactivo de lugol. recuperado
de:https://www.coursehero.com/file/p39041h/REACTIVO-DE-
LUGOL-El-lugol-o-soluci%C3%B3n-de-Lugol-es-una-
disoluci%C3%B3n-de-yodo/
[7] Tuñón, Maria Dolores. (19 de enero de 2018). Análisis de sangre.
Webconsultas. Recuperado de:
https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/resultados-y-valores-
de-un-hemograma-12159