RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS, LÍPIDOS Y PROTEÍNAS

Bosa R. Y. B1, Herrera S. V1, Silgado G. D1, Varon P. J.M1

Barbosa Jaimes Luis Oveimar2
1. Estudiante programa de Biología, curso de Bioquímica III semestre. Facultad de ciencias. Universidad del Tolima.
2. Docente a cargo del curso de Bioquímica. Departamento de química. Facultad de ciencias. Universidad del Tolima.

RESUMEN
En este laboratorio se realizó el reconocimiento de carbohidratos, lípidos y proteínas, presentes en
muestras orgánicas como la albúmina, caseína, sacarosa, glucosa, y maltosa. Los cuales fueron
identificados mediante reacciones químicas que fueron empleadas en el laboratorio, en este caso se
utilizaron reactivos como Biuret, lugol, molisch, Benedict y Barfoed, los cuales arrojaron positivo o
negativo para cada ensayo llevado a cabo, en primer lugar, se utilizó el reactivo de Biuret para la
identificación de proteínas arrojando positivo para albúmina y cafeína, además de esto se realizó el
proceso de desnaturalización de estas, en segundo lugar, por último se calculó el índice de acidez
para el aceite obteniendo como resultado un índice de …
1.INTRODUCCIÓN contienen carbono, hidrógeno y oxígeno en
una proporción de 1:2:1. Los carbohidratos se
Las biomoléculas, son moléculas que
clasifican como monosacáridos (una sola
constituyen a todo ser vivo. Una célula viva
molécula de azúcar) disacáridos (dos
está formada básicamente por los cuatro
monosacáridos) o polisacáridos (dos o más
bioelementos más abundantes C, H, O y N,
disacáridos), dependiendo del tamaño y la
que, combinados entre ellos de diferentes
complejidad de la molécula (“Reconocimiento
formas, originan una gran cantidad de
de biomoléculas orgánicas”, s.f).
compuestos los cuales constituyen la mayor
cantidad de masa en una célula (Medina & Los lípidos son un grupo grande y heterogéneo
Lara, 2013). de biomoléculas orgánicas y, por tanto,
presentan estructuras diversas, pero en general
Según su naturaleza química, las biomoléculas
son solubles en solventes no polares o poco
se pueden clasificar en orgánicas e
polares. Las distintas clases de lípidos
inorgánicas. Las Biomoléculas inorgánicas no
reaccionan entre sí por esta propiedad física,
son formadas por los seres vivos, pero son de
pero sus relaciones químicas y estructurales,
vital importancia para ellos. Como por
así como sus funciones biológicas, son
ejemplo el agua, es la biomolécula inorgánica
diferentes. Debido a su alta diversidad
más abundante (Celín, 2012). Por otro lado, las
estructural, los lípidos pueden clasificarse
biomoléculas orgánicas, son aquellas que
como saponificables y no saponificables,
poseen una estructura a base de carbono y son
según que, por hidrólisis alcalina, generen o no
sintetizadas por los seres vivos, estas a su vez
sales de ácidos grasos (jabones) (página
se dividen en: carbohidratos, lípidos,
profesor).
proteínas, ácidos nucleicos y vitaminas
(Medina & Lara, 2013). Las proteínas son moléculas compuestas por
una o más cadenas de aminoácidos, Sus
Los carbohidratos son componentes
funciones son específicas en cada organismo
estructurales importantes de las células y son
vivo y varían de acuerdo al tipo de estructura
además una forma importante de almacenar
que posean, por lo cual existe un gran número
energía. Estas moléculas usualmente
de proteínas dentro de una célula. Las
biomoléculas orgánicas se pueden identificar a El reactivo de Biuret se compone de hidróxido
partir de una serie de reacciones químicas, las de sodio y sulfato de cobre. El grupo amino de
cuales pueden llevarse a cabo en el laboratorio las proteínas reacciona con los iones de cobre
(Medina & Lara, 2013). del reactivo de Biuret y el reactivo cambia de
azul a violeta. Este cambio de color se
Ensayo de Molisch; Este ensayo es un considera resultado positivo para proteínas
ensayo para reconocimiento general de (“Reconocimiento de biomoléculas
carbohidratos en el que los polisacáridos y orgánicas”, s.f).
disacáridos se hidrolizan con ácido sulfúrico
concentrado hasta monosacáridos y se METODOLOGIA.
convierten en derivados del furfural o 5- 1- MATERIALES Y METODOS
hidroximetil furfural los cuales reaccionan con
α-naftol formando un color púrpura violeta 2.1 Materiales
(Switzer & Garrity, 1999).
- Tubos de ensayo
- Pinzas para tubo de ensayo
La Prueba de Benedict se usa para detectar la
presencia de azúcares reductores porque el - Gradillas
reactivo de Benedict contiene cobre y éste se - Vasos de precipitados
reduce en presencia de azúcares reductores. - Mechero, trípode y malla
Durante esta reacción el azúcar se oxida. - Pipetas graduadas
Cuando se añade el reactivo de Benedict al - Baño María
azúcar reductor, y se aplica calor, el color de - Bureta
la mezcla cambia a naranja o ladrillo intenso - Soporte Universal
mientras mayor sea la abundancia de azúcares
reductores. Un cambio a color verde indica la 2.2 Reactivos
presencia de menos azúcares reductores. Las
- Lugol
azúcares que no reducen, como la sacarosa, no
producen cambios en color y la solución se - Reactivo de Molisch
mantiene azul (“Reconocimiento de - Reactivo de Benedict
biomoléculas orgánicas”, s.f). - Reactivo de Barfoed
- Reactivo de Seliwanoff
El reactivo de Lugol es una disolución de - Solución de glucosa 0,1 M
Yodo y Yoduro de Potasio es utilizado como - Solución de fructosa 0,1 M
indicador de prueba de yodo, que permite - Solución de sacarosa 0,1 M
identificar polisacáridos como los almidones, - Solución de almidón 0,1 M
glucógeno y algunas dextrinas, sin embargo, - Solución de Maltosa 0,1 M
este no reacciona con moléculas de azúcar - KOH 0,05 N
simple como la fructosa o lactosa. En el caso - Fenolftaleina
de la identificación de almidón con el Lugol,
- Aceite
al mezclase esta nueva solución toma un color
- Manteca
azul intenso, el que manifiesta la presencia de
almidón (Medina & Lara, 2013). - Ácido esteárico
- Ácido linoleíco
Ensayo de Barfoed; Esta prueba permite - Solución de Yodo en cloroformo
diferenciar entre monosacáridos y disacáridos (I2/CHCl3)
reductores, también contiene ion cúprico que - Colesterol
se reduce hasta óxido cuproso más - Cloroformo
rápidamente con los monosacáridos que con - Ácido sulfúrico
los disacáridos (Switzer & Garrity, 1999). - Anhídrido acético
- Reactivo de Biuret
- Gelatina
 - Albúmina de huevo
- Hidróxido de sodio 1,0 M Enseguida se llevaron los tubos de
- Etanol ensayo a baño maría a 50°𝐶.
- Nitrato de plomo  Prueba de Liebermann-Burchard.
- Cloruro de mercurio A 3 tubos de ensayo agregamos
respectivamente:
2.3 Métodos
2.3.1 Reconocimiento de carbohidratos Tubo1 10 gotas colesterol al
0.1% en cloroformo
 Ensayo de Molisch. En 2 tubos de Tubo2 5 gotas de aceite
ensayo se coloco 2.0mL de sacarosa y Tubo3 0.1g de manteca
glucosa, se agrego 0.5mL de reactivo
de Molisch y 1mL de 𝐻2 𝑆𝑂4. A los tubos 2 y 3 le adicionamos 20
 Ensayo de Lugol. En un tubo de gotas de cloroformo; enseguida a los 3
ensayo se coloco 2.0mL de almidón, a tubos agregamos 5 gotas de anhídrido
este se le agregó 0.2 mL de lugol y se acético seguidas por 2 gotas de ácido
mezcló. sulfúrico.
 Ensayo de Benedict. En 3 tubos de
2.3.3 Reconocimiento de Proteínas
ensayo se coloco 2.0mL de glucosa,
maltosa y sacarosa, se agrego a cada  Prueba de Biuret.
tubo 0.1mL del reactivo de Benedict Proteínas Reactivos
y posteriormente se calentó en baño Albúmina Reactivo Biuret
maría. Caseína Hidróxido de Sodio
 Ensayo de Barfoed. En 3 tubos de 1,0M
ensayo se coloco 2.0mL de glucosa, Gelatina
maltosa y sacarosa, a este le agrego
2mL del reactivo de Barfoed y se A 0,5 mL de la respectiva muestra
calento en baño maría a ebullición. agregamos 1mL de reactivo de Biuret
y mezclamos.
2.3.2 Reconocimiento de Lípidos
 Desnaturalización de proteínas. En
 Índice de acidez. En este este procedimiento hicimos uso de las
procedimiento se mezclo 1.0g de mismas proteínas utilizadas en la
aceite y éste fue disuelto en 10mL de prueba de Biuret y realizamos los
etanol, se adiciono 2 gotas de siguientes procedimientos:
fenolftaleína y enseguida se titulo con
una solución de KOH 0.05N. Acción del Calor Acción del Acción del
 Adición de Yodo a ácidos grasos. En alcohol pH
4 tubos de ensayo se agrego 20 gotas Calentamos la Agregamos Agregamos a
parte superior del 5mLde 5mL de
de cloroformo y a cada uno de ellos se
tubo de ensayo alcohola albúmina 4
le adicionó:
que contenía 5mL 5mL de gotas de HCl
de albumina hasta albúmina. concentrado.
Tubo1 0.1g C16H32O2 que hirvió.
Tubo2 5 gotas C18H34O2
Tubo3 5 gotas de aceite
Tubo4 0.1g de manteca
A todos los Se adiciono 5
tubos gotas 𝐼2 /𝐶𝐻𝐶𝑙3
RESULTADOS .
Tabla 5. Reconocimiento de carbohidratos
PRUEBA RESULTADO
Se observo precipitado morado en el fondo y
Sacarosa
aumento en la temperatura
Ensayo de Molish
Se observo precipitado color morado en el fondo y
Glucosa
aumento de temperatura
Ensayo de Lugol Almidon Se observo color azul-violeta
Glucosa Se observa formacion de precipitado amarillo
Ensayo de Benedetic Maltosa Negativo- No hubo preciptado amarillo
Sacarosa Negativo- No hubo preciptado amarillo
Se observa precipitado a los 6 minutos, positivo
Glucosa
para monosacarido reductor
Ensayo de Barfoed
Maltosa No se observa precipitado
Sacarosa No se observa precipitado

Tabla 6. Reconocimiento de lípidos

PRUEBA RESULTADO
Indice de acidez 0.56*23ml= 12.88
T1 Se muestra un color rosado, luego e solidifica
Adicion de yodo a acidos T2 Se observa de color ambar claro
grasos T3 Se observo decoloracion total
T4 Se observa de color rojo claro
Se observo amarillo, luego cambio a un tono mas
T1
claro, despues se observo un tono verde
Prueba de Liebermann- Se observo un precipitado café, finalmente se
T2
Burchard muestra la solucion completamente café
Se observo color ambar claro y finalmente se
T3
oscurecio tomando un tono amarillo verdoso

Tabla 7. Reconocimiento de proteínas

PRUEBA RESULTADO
Albumina Se observa coloracion morada
Prueba de Biuret Caseina Se observa coloracion morada
Gelatina Se observa coloracion morada
En la superficie hubo efervecencia, en el fondo se
Calor
mantuvo normal
Desnaturalizacion de proteinas Alcohol Se observo coagulacion
Se observo produccion de burbujas baja en las
pH
paredes del tubo

ANALISIS DE RESULTADOS
 Reconocimiento de carbohidratos
Ensayo de Molisch
Este ensayo permite confirmar que la sacarosa
y la glucosa presentan carbohidratos en su
estructura al observar precipitado de color
morado, esto se debe a que los acidos
concentrados originan una deshidratación de
los azucares para rendir furfurales, que son
derivados aldehicos del furano,
posteriormente los furfurales se condensan
con los fenoles dando la coloración
característica.
Ensayo de lugol
En este ensayo se observa una coloración azul-
violeta. Esto se debe a que el almidón está
compuesto por amilosa y amilopectina, la
primera se colorea de azul en presencia de
yodo debido a la adsorción o fijación de yodo
a la superficie de la molécula, formándose un
complejo de coordinación entre las micelas de
almidón y yodo. Estas micelas están formadas
por cadenas polisacáridas enrolladas en
hélices.
hasta ebullición durante un tiempo
aproximado de 30 minutos.
Ensayo de Barfoed
Este ensayo se utiliza para detectar
monosacáridos reductores. Se basa en la
reducción de cobre (II) (En forma de acetato)
a cobre (I) (En forma de oxido), el cual forma
un precipitado color rojo ladrillo.
Los disacáridos también pueden reaccionar,
pero en forma mas lenta. El grupo aldehído del
monosacárido que se encuentra en forma de
hemiacetal se oxida a su acido carboxílico
correspondiente.
 Reconocimiento de lípidos
Índice de acidez
En este ensayo se midio el numero de
miligramos de hidróxido potásico necesarios
para neutralizar 1gr de aceite o grasa, en este
caso se requieren 12.88 miligramos de
hidróxido potásico.

Ensayo de Benedetic

En este ensayo se observó precipitado amarillo

en la glucosa, en la maltosa y sacarosa no se
observó ningún cambio. Esto es debido a que
la glucosa y sacarosa son azucares reductores.
El reactivo de Benedic contiene ion Cu2
(otorgado por el sulfato cúprico) el cual se
reduce a ion Cu1+ en medio alcalino caliente,
esto por efecto del grupo aldehído del azúcar.
El ion Cu1+ se oxida y precipita en forma de
Cu2O , lo que proporciona la coloración de
positiva de la reacción generalmente rojo-
naranja o rojo ladrillo. La coloración
dependerá de la concentración de oxido de
cobre y esta a su vez de la reducción de cobre;
va desde verde, amarillo anaranjado o rojizo.
En este caso la prueba de maltosa dio negativa
ya que según literatura para que suceda la
reacción de precipitación se debe calentar