UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

LABORATORIO Nº 1:
“DISTRIBUCIÓN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS”

CURSO:
MICROBIOLOGÍA SANITARIA I

PROFESOR:
ING. JORGE GILBERTO TELLO CEBREROS

ALUMNO:
MENDOZA NEIRA OSCAR-20160752E

Lima, Perú
2018

1
 I. INDICE

Contenido
I. INDICE ............................................................................................................................. 2

II. RESUMEN ....................................................................................................................... 3

III. INTRODUCCION............................................................................................................ 3

IV. OBJETIVOS .................................................................................................................... 4

V. MARCO TEÓRICO......................................................................................................... 4

VI. RESULTADOS:............................................................................................................. 14

VII. DISCUSION DE RESULTADOS ................................................................................ 20

VIII. CONCLUSIONES: ........................................................................................................ 22

IX. RECOMENDACIONES: .............................................................................................. 23

X. CUESTIONARIO .......................................................................................................... 24

XI. CUESTIONARIO .......................................................................................................... 26

XII. RECOMENDACIONES: .............................................................................................. 27

XIII. APENDICE .................................................................................................................... 28

2
 II. RESUMEN
El propósito primordial de esta práctica, es exponer dos medios de cultivo: agar
saboraud y caldo nutritivo a diferentes condiciones del ambiente (lugares o
espacios) en la Facultad de Ingeniería Ambiental (UNI);para luego observar el
desarrollo de los microorganismos, sus características que lo identifican y el conteo de
colonias producidas.Para alcanzar nuestro objetivo primordial, primeramente se
efectúa los cálculos correspondientes para encontrar en que cantidades se usa el
agua destilada o agua desionizada, con los medios de cultivo. Luego de obtener las
cantidades necesarias se utilizan pipetas, tubos de ensayo, así como otros equipos
debidamente esterilizados o no, dependiendo las indicaciones de la guía,
proporcionada por el docente. Se usa el autoclave para dar como resultado las
esterilizaciones requeridas. Posteriormente se obtienen tubos fundidos con cultivos.
Acto seguido, se coloca dicho contenido de los tubos en los 5 petris, con su
marcación respectiva, esto para evitar confusiones futuras. La solución que está
encerrada en el Petri debe solidificarse. En seguida los petris son sometidos a 5
condiciones distintas, todas expuestas en el diagrama de flujo. Exponemos los petris a
las diversas condiciones y esperamos por 15 minutos y midiendo la temperatura del
lugar. Por último, incubamos, dos días o 48 horas, a 37°C. En el caso de nuestra
experiencia fue de más de 72 horas aproximadamente. Se puedo observar que el
laboratorio de Microbiología propicia el crecimiento de hongos .Se observaron cinco
tipos de hongos:Penicillium, aspergillus, candida spp,| levadura y Aspergillus-niger.

III. INTRODUCCION
Uno de los métodos más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado
más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias y hongos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión
de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en

composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos

3
medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que
se añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificarte muy empleado para la preparación de medios de

cultivo. El desarrollo de colonias sobre superficies del agar, permite identificar los
microorganismos (bacterias y hongos); debido a que forman colonias con una forma y
aspecto característico. Po ello, este principio es importante por dos motivos: uno es el
de conocer las características de los ya mencionados microorganismos, por ejemplo:
color, elevación, caracteres ópticos, etc. El segundo motivo es determinar cuál de los
ambientes es de mayor contaminación, a través del conteo de colonias, este punto se
realiza de modo fácil.

Además, con esta práctica se pretende conocer las técnicas de preparación de

diferentes medios de cultivo, su esterilización y su almacenaje, así como la
importancia de los diferentes medios de cultivo y su uso.

IV. OBJETIVOS
 Saber usar los equipos y materiales del laboratorio de microbiología,
necesarios para la preparación de medios de cultivo y conteo.
 Observar el desarrollo de microorganismos en medios de cultivo, tales
como: agar nutritivo, caldo de cultivo y agar sabouraud.
 Investigar los factores principales que influyen en el crecimiento de los
microorganismos.
 Determinar el grado de contaminación y el tipo de contaminante en los
diferentes sectores de la facultad (FIA).
 Identificar los tipos de microorganismos; así como sus características,
tales como: color, elevación, caracteres ópticos, etc.
 Hacer un conteo de bacterias heterotróficas mediante la unidad
formadora de colonias(U.F.C)

V. MARCO TEÓRICO
CULTIVO DE BACTERIAS

Para estudiar debidamente los microorganismos se necesita como requisito preciso el

cultivarlos en condiciones de laboratorio. Para lograr esto es preciso conocer cuáles
son los nutrientes y las condiciones físicas que se requieren. Mediante investigaciones
extensas se han determinado las necesidades nutricionales de las bacterias, y esta

4
información ha sido la causa del desarrollo de numerosos medios de cultivo. Ya que
las necesidades nutricionales de las bacterias varían de manera muy amplia, existen
diferencias muy importantes en cuanto a la composición de los medios empleados.
Las bacterias también tienen diferencias notables en lo que respecta a las condiciones
del ambiente que favorece su proliferación. Por ejemplo, algunas prosperan bajo 0°C,
otras necesitan temperaturas superiores a los 45°C y pueden reproducirse aun a 70°C.
Algunas necesitan atmosfera de oxígeno, en cambio, otras se inhiben con el oxígeno o
bien este elemento les es indiferente.

NECESIDADES NUTRICIONALES

Desde los hombres hasta los microorganismos, todas las formas de vida, tienen en
común determinadas necesidades nutricionales en términos de necesidad químicas
para llevar a cabo su crecimiento y sus funciones normales. Las siguientes
observaciones confirman lo anterior:

1. Todo organismo vivo necesita una fuente de energía. Algunas formas de

vida, como las plantas verdes, pueden consumir la energía radiante y se las
denomina fototrofas. Las formas de vida incapaces de asimilar la energía
radiante, por ejemplo, la vida animal, se valen de la oxidación de
compuestos químicos para obtener su energía. A estas se las denomina
quimiotrofas.

2. Todo organismo vivo necesita obtener carbono de alguna manera, todos

requieren al menos pequeñas cantidades de dióxido de carbono, pero la
mayoría de ellos necesita de algún compuesto que tenga carbono orgánico,
como azúcar y otros carbohidratos.

3. Todo organismo vivo necesita obtener nitrógeno de alguna manera. Las

bacteria son muy versátiles a este respecto; algunos tipos de ellas
absorben nitrógeno atmosférico, otras lo obtienen en compuestos de
nitrógeno inorgánico, y otras más lo toman de las proteínas.

4. Todo organismo vivo necesita azufre y fosforo.

5. Todos los organismos vivos necesitan de varios metales como sodio,

potasio, calcio, hierro, entre otros; para que puedan crecer normalmente.
Las bacterias no son la excepción.

5
 6. Todos los organismos necesitan agua para su crecimiento. En el caso de
las bacterias, todos los nutrientes deben estar en solución antes de que
puedan ser incorporadas a estos organismos

7. Todo organismo vivo tiene vitaminas y compuestos vitaminados. Aunque

todas las bacterias necesitan de vitaminas en su proceso metabólico
normal, algunas son capaces de elaborar (sintetizar) todas las vitaminas
que necesitan a partir de otros compuestos que se encuentran en el medio.
Estudios sobre metabolismo efectuados con bacterias han posibilitado
comprender como se sintetizan y funcionas las vitaminas. En la siguiente
tabla se ha referencia a las vitaminas de uso más común para el
crecimiento bacteriano, asimismo ejemplo de especies.

TIPOS DE NUTRICION DE LAS BACTERIAS

De acuerdo con las características generales ya mencionadas en los párrafos

anteriores, es posible dividir las bacterias en muchos grupos tomando como base sus
requerimientos nutricionales. Estos son los llamados fototrofos y quimiotrofos, estos a
su vez se subdividen en base a la fuente principal de energía que consumen para su
crecimiento, por ejemplo, la luz o la oxidación de compuestos químicos. Estos tipos de
nutrición se consignan en la siguiente tabla.

6
AUTOTROFOS Y HETEROTROFOS

En términos sencillos, los autótrofos tienen las necesidades más simples. Por ejemplo,
un medio de cultivo como que se muestra en la siguiente tabla permite el crecimiento
de bacterias autotróficas que oxidan azufre. El hecho de que un organismo que puede
crecer y reproducirse en tal mezcla de compuestos químicos simples, es indicativo de
que poseen una capacidad muy compleja para llevar a cabo la síntesis. Es decir, el
organismo puede transformar estos compuestos en carbohidratos, grasa, proteínas,
ácidos nucleico, vitaminas y otras sustancias complejas que constituyen la célula viva

Las bacterias heterótrofas se han estudiado más ampliamente que las autótrofas ya
que, en esencia, las heterótrofas están más relacionadas con el hombre. En este
grupo de bacterias se pueden encontrar todas las que producen enfermedades al
hombre, animales y plantas. Aunque las bacterias heterotróficas constituyen uno de
los grupos nutritivos más importantes, estos microrganismo varían considerablemente
en cuando a sus necesidades de nutrientes específicos para el desarrollo. Como se
indica en la siguiente tabla, las bacterias heterotróficas pueden tener necesidades
nutricionales relativamente simples o muy complicadas, dependiendo de la especie
que se trate.

7
COONDICIONES FISICAS NECESARIAS PARA EL CULTIVO DE
MICROORGANISMOS

Además de conocer los nutrientes apropiados necesarios para el cultivo de bacterias,

también conviene conocer las condiciones físicas del medio en donde el
microorganismo puede desarrollarse mejor. Así como las bacterias varían ampliamente
en relación a sus necesidades nutricionales, también muestran respuestas diversas a
las condiciones físicas del medio. Dicho de otra manera, para un buen cultivo de las
bacterias se necesita combinar apropiadamente los nutrientes necesarios y las
condiciones físicas adecuadas.

TEMPERATURA

Ya que el proceso de desarrollo de las bacterias depende de reacciones químicas y la

velocidad con que se efectúan estas reacciones es influida por la temperatura, el
patrón de desarrollo bacteriano puede ser influido profundamente por esta condición.
La temperatura puede, en parte, determinar la velocidad de crecimiento y el grado total
de desarrollo de los microorganismos. Las variaciones en la temperatura también
pueden influir en los procesos metabólicos en la morfología celular. Cada especie de
bacterias crece a temperatura que está dentro de ciertos límites como se muestra en la
siguiente tabla.

NECESIDAD O AUSENCIA DE GASES

Los gases principales que afectan el desarrollo bacteriano, son el oxígeno y el dióxido
de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxigeno libre,
y sobre esta base se dividen en cuatro grupos:

1. Aerobias, bacterias que se desarrollan en presencia de oxigeno libre

2. Anaerobias, bacterias que se desarrollan en ausencia de oxigeno libre

8
 3. Anaerobias facultativas, bacterias que se desarrollan tanto en presencia
como en ausencia de oxigeno libre.

4. Microaerófilas, bacterias que crecen en presencia de pequeñísimas

cantidades de oxigeno libre.

ACIDEZ O ALCALINIDAD (pH)

En la mayor parte de las bacterias el pH óptimo de crecimiento está entre 6.5 y 7.5,
aunque algunas bacterias pueden desarrollarse a pH extremos, en la mayor parte de
las especies los límites mínimos y máximos corresponden a cualquier punto entre pH 4
y pH 9 como se puede apreciar en la siguiente tabla.

ACTIVIDAD DEL AGUA

Como los microorganismos dependen del agua para la síntesis de sus componentes
celulares, es necesario que ésta se encuentre disponible en el medio de cultivo para
que los microorganismos la puedan utilizar para su crecimiento. La actividad del agua
(aW) es una expresión para la cantidad de agua disponible en un sustrato dado y se
define como “la centésima parte de la humedad relativa del aire que está en equilibrio
con ese sustrato”. Este valor nos indica la cantidad de agua disponible para ser
utilizada por los microorganismos.

En la siguiente tabla se presentan como ejemplo algunos microorganismos y el valor

de aw en el que se produce su crecimiento.

9
LUZ AMBIENTAL

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos

ESTERILIDAD DEL MEDIO

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios.
El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presión como agente esterilizante)

MEDIOS BACTERIOLOGICOS

Se necesita un gran número de sustancias químicamente puras para cultivar bacterias

que tengan necesidades nutricionales como los lactobacilos. Aunque para el cultivo de
bacterias heterotróficas en laboratorios, tanto si son similares a las especies
Escherichia o de Lactobacillus, generalmente se basan en medios de cultivo sintéticos.
En lugar de esto, se usan ciertos materiales crudos como peptonas, extracto de carne
y extracto de levadura y así el medio de cultivo que se obtiene hace posible el
desarrollo de gran variedad de bacterias y otros microorganismos. Cuando se desea
un medio solido se tomo el agar como agente solidificante.

Tenemos en la siguiente tabla la descripción de algunos materiales crudos, de los

cuales es posible la preparación de un capaz de permitir el crecimiento de muchas
bacteria heterotróficas.

10
PREPARACION DE LOS MEDIOS

Para el cultivo de las bacterias se recurre a algunas sutancias naturales comunes, En

relacion con esto, se usa la leche denatada y no entera. Los materiales, en su forma
natural, no presentan ningun tipo de porblema para tomarlos como medios de cultivo
ya que simplemente se depositan dentro de los ensvases adecuados tales como tu
bos de ensayo, o matraces, los cuales deberan ser esterelizados antes de utilizarlos.
Los medios que se preparan del tipo agar o caldo nutritivo, se hacen mezvlando los
infredientes individuales necesarios, o de manera mas practica agregando agua o
productos deshidratados que contienen todos los ingredientes. En el comercio
podemos encontrar practicamente todos los medios de cultivo en forma deshidratada.
En la prepracion de cultivo, se debe segior os guientes pasos:

1. Cada ingrediente, o el medio deshidratado completo, se debe disolver en

un volumen adecuado de agua destilada.

2. Se determinara el pH del medio y si es necesario se ajustara.

3. El medio se pondra en recipientes adeciados, como tubos, matraces,

botellas, cuyas bocas se cierran con tapones de algodón, pasltico o
cubiertas de metal.

4. Los medios se esterilizan generalmente en el autoclave.

MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS

Agar nutritivo:

El agar Nutritivo garantiza el crecimiento de todos los microorganismos de importancia

clínica tanto grampositivos como gramnegativos, hongos y levaduras, además de
proporcionar una herramienta para el mantenimiento y confirmación de aislamientos
primarios El agar Nutritivo se prepara a partir del medio de cultivo deshidratado,
materia prima producida por la casa BBL y tiene la siguiente composición:g/l

11
Agar Nutritivo (Concentración: 23 g en 1 litro)Se utilizó 2.76 g de agar en 120ml de
agua.

Caldo Nutritivo :

Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el desarrollo de

microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Está descripto en muchos
procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia
sanitaria. Contiene pluripeptona (una mezcla de partes iguales de peptona de carne y
de caseína) y extracto de carne que constituyen la fuente de carbono y nitrógeno
necesarias para el adecuado desarrollo bacteriano. Puede ser utilizado además, como
preenriquecimiento en la búsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos, ya que
permite recuperar células dañadas, diluir metabolitos tóxicos y sustancias inhibitorias.
Composición ( gr /litro)

Agar Sabouraud :

Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de hongos patógenos

y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras. Recomendado para el
aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones
cutáneas (piel, pelo). En el medio de cultivo, la peptona, la tripteína y la glucosa son
los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la
presencia de cloranfenicoly el pH ácido, inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el
crecimiento de hongos y levaduras. El agar es el agente solidificante. Puede ser
suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento. Glucosado Composición
(en gramos por litro)

MORFOLOGIA DE LAS COLONIAS EN LA SUPERFICIE DE UN MEDIO SOLIDO

12
 Fuente: internet

SUPERFICIE DE LA COLONIA

o Lisa

o Rugosa

o Plegado

LUZ REFLEJADA (observar a través de la colonia)

o Opaca

o Brillante

CROMOGÉNESIS O PIGMENTACION

o Crema

o Amarilla

o Anaranjado

o Blanca

CARACTERISTICAS OPTICAS

o Opaca : no permite el paso de la luz

o Traslucida: Deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad

13
 o Transparente: Deja pasar la luz permitiendo ver claramente los objetos a traves
de la colonia

VI. RESULTADOS:

PROCEDIMIENTO A: (grupos: 2y 4) colonias de bacterias desarrolladas en placas en

medio agar nutritivo

Grupo 2: Agar nutritivo

Placa
Placa N°1 Placa N°2 Placa N°4
Grupo N°3
Estéril Estéril NO Estéril
Estéril

Sector C Sector D
Ambiente: biblioteca Sector A Sector B
2 primer piso I. Estéril I. NO NO abrir NO abrir
Pelo Huella
estéril

N° de
23 20 13 1 3 4 42
Colonias

X1=2mm X1=3mm X1=0.5mm

X2=3mm X2=1mm X2=0.5mm X22=1mm
X3=3mm X3=0.5mm X3=0.5mm X23=1mm
X4=1mm X4=4mm X1=3mm X4=1mm X24=1mm
X5=2mm X5=Irregu. X2=2.5mm X5=1mm X25=1mm
X6=3mm X6=4mm X3=Irregular X6=1mm X26=1mm
X7=4mm X7=2mm X4=2mm X7=1mm X27=1mm
X8=4mm X8=1mm X5=1mm X8=1mm X28=1mm
X1=3mm
X9=2mm X9=1mm X6=2mm X1=3mm X9=1mm X29=1mm
X2=1mm X30=1mm
Tamaño X10=3mm X10=1mm X7=1mm X2=4mm X10=1mm
(mm) X11=5mm X11=1mm X8=4mm
X1=3mm
X3=4mm
X3=1mm
X11=1mm
X31=1mm
X12=1mm X12=1mm X9=1mm
X4=2mm
X12=1mm
X32=1.5mm
X13=7mm X13=1mm X10=1mm X13=1mm
X33=1.5mm
X14=2mm X14=1mm X11=1mm X14=1mm
X34=1.5mm
X15=2mm X15=1mm X12=1mm X15=1mm
X35=1.5mm
X36=2mm
X16=8mm X16=1mm X13=2.5mm X16=1mm
X37=2mm
X17=3mm X17=1mm X17=1mm
X38=2mm
X18=2mm X18=1mm X18=1mm
X39=2mm
X19=1mm X19=1mm X19=1mm
X40=3mm
X20=4mm X20=1mm
X41=3mm
X42=4mm
14
 X21=2mm X21=1mm
X22=3mm
X23=4mm

Lisos: x1, x2, Lisos: x1, x2, x3, x4, x9,

Lisos: x1, x3, x11, x20, x3, x8, x9, x10, Liso: x1, x8 x10, x11, x12, x13, x14, x15,
x23, x22, x21, x19 x11, x12, x13, x16, x17, x18, x19, x20, x30,
Liso: x2, x3
Margen o lobular:x7, x2, x5, x6, x14, x15, x16, Lisos: x1, x31, x32, x33, x34, x35, x36,
x17, x18, x19, Ondulantes: Liso:x1 x37, x38, x39, x40, x41, x42.
borde x10, x12, x15, x16 Ondulantes: x2, x3, x4
x20 x2, x4, x5, x6,
ondulante:x8, x13, x4, x1
x7, x9, x10, Ondulantes: x5, x6, x7, x8,
x9, x14, x17, x18 Ondulantes: x11, x12, x3 x21, x22, x23, x24, x25, x26,
x4, x6, x7 x27, x28, x29.

Plano: x1, x2, x3, x4, x9,

Plano: x1, x2, x10, x11, x12, x13, x14, x15,
Plano: x7, x1, x2, x3, x3, x4, x8 Plano: x1, x2, x16, x17, x18, x19, x20, x5,
Plano: x3
x4, x5, x6, x9, x10, x14, x4, x5, x6, x7, x6, x7, x8, x21, x22, x23, x24,
x15, x17, x18, x19, x22 Cóncavo: x6, x8, x9, x10, Plano: x1, x25, x30, x31, x32, x33, x34,
Elevación Plano:x1 Cóncavo
x7, x9, x10, x11, x11, x12, x13 x2, x3 x35, x36, x37, x38, x39, x40,
: x1, x2,
Cóncavo: x8, x23, x20, x12, x13, x14, x41, x42.
x4
x8, x13, x12, x16, x21 x15, x16, x17,
x18, x19, x20 Cóncavo: x26, x27, x28,
x29.

Crema: x1,
Crema: x1, x3, x4, x5, x5, x6, x7, x11, Crema: x1, x2, x3, x4, x9,
x10, x14, x15, x17, x18, x12, x13, x14 x10, x11, x12, x13, x14, x15,
x19, x20, x21, x22, x23. x15. x16, x17, x16, x17, x18, x19, x20, x5,
x18, x19, x20. Todas x6, x7, x8, x21, x22, x23, x24,
Todas son Crema: Todas son
Pigmentación Anaranjado: x6, x7, son x25, x28, x29, x30, x31, x32,
cremas x1 cremas
x8, x9. Anaranjado: crema x33, x34, x35, x36, x37, x38,
x2, x3, x4. x39, x40, x41, x42.
Amarillo: x2, x11, x12,
x13, x16. Amarillo: x8, Amarillo: x26, x27.
x9, x10.

Todas Todas
Todas son Todas son Todas son
C. Óptico Todas son opacas son son Todas son opacas
opacas opacas opacas
opacas opacas

Nota: Los resultados se vieron 7 días después de la preparación.

Grupo 4: Agar nutritivo

Placa
Placa N°1 Placa N°2 Placa N°4
Grupo N°3
Estéril Estéril NO Estéril
Estéril

Laboratorio de Sector A Sector B Sector C Sector D

4 Físico Química
NO abrir NO abrir
Pelo Huella I. Estéril I. NO

15
 estéril

N° de
35 3 5 1 1 3
Colonias

X1=6.5 X19=6
X2=9 X20=3
X3 =6 X21=13
X4=1 X22=1.4
X5=8 X23=1.2
X6=3 X24=1.9
X7=2 X25=4 X1=4.5
X8=4.5 X26=1 X1=3 X2=2.5 X1=3
Tamaño X9=2.3 X27=2,2 X2=3.5 X3=2 X1=6 X1=6.5 X2=3.5
(mm) X10=5 X28=25 X3=3 X4=3 X3=2.5
X11=2 X29=2 X5=2.7
X12=3 X30=4.2
X13=1.8 X31=2
X14=3 X32=7
X15=1 X33=1.1
X16=2.3 X34=3
X17=2.9 X35=1
X18=4.5

Liso
x1,x3,x4,x6,x10,
x13,x14,x15,x17
, x20,x23,x24,
x25,
X1=lis
x29, x30, x31, X1=liso o
x33, x34
X1=liso X2=liso X1=lis X2=lis
Margen o
Lobular X1=liso
X2=liso X3=liso o o
borde
x2, x8, x19, x21,
X3=liso X4=liso X3=lis
x27, x32
o
Ondular X5=liso

x5, x7, x9, x11,

x12, x16, x18,
x22, x26, x28,
x35

16
 X1=pla Todas
Todas son Todas son Todas son X1=plano
Elevación no son
planas planas planas
planas

Crema
x1, x8, x9, x16, x18,
x19, x22, x24, x26, X1=Amarill
x28, x32, x33, x35 o
X1=Ana
Amarillo X2=Amarill ranjad
X1=Amarill o o
x2, x6, x10, x11, o
x12, x14, x17, x20, X3=Amarill X1=am X1=amari X2=Ana
Pigmentación
x25, x29, x31, x34 X2=Crema o arillo llo ranjad
o
Anaranjado X3=Crema X4=
Anaranja X3=Cre
x5, x13, x21, x27, do ma
x30
X5=Crema
Blanco
x3, x4, x7, x15, x23

Todas son
opacas excepto Todas son Todas son Es Es Son
C. Óptico
x22 y x28 opacas opacas opaca opaca opacas

PROCEDIMIENTO B: (grupos: 1,3 y 5) crecimiento de bacterias en caldo nutritivo

Grupo N°1 Pipeta estéril Pipeta estéril Pipeta no estéril

Tubo estéril Tubo no estéril Tubo estéril

Cantidad de crecimiento Ninguno Moderado Abundante

Distribución de Trasparente Turbidez Película

crecimiento

olor Imperceptible Imperceptible Pútrido

N° 1 N° 2 N° 3
Grupo N°3 Tubo estéril Tubo no estéril Tubo estéril
Pipeta estéril Pipeta estéril Pipeta no estéril

Cantidad de Moderado Escaso Abundante

crecimiento

17
Distribución de Sedimento Turbidez Película
crecimiento

Olor Pútrido Imperceptible Imperceptible

Grupo N°5 Pipeta estéril Pipeta estéril Pipeta no estéril

Tubo estéril Tubo no estéril Tubo estéril

Cantidad de crecimiento escaso abundante moderado

Distribución de sedimento película Turbidez fina

crecimiento uniforme

olor aromático pútrido Ligeramente pútrido

PROCEDIMIENTO C: cultivos de hongos con agar sabourand

 Grupo N° 1

ambiente Baño de varones 2° piso

N° de hongo 4

Tipo de hongo - penicillium (3)

- aspergillus (4)
- candida spp (1)
- levadura (2)

Algunas características - penicillium: forma circular oscura con

bordes bancos.
- aspergillus: de un color verde oscuro.
- candida spp: de un color blanco circular.
- levadura: de color rojizo y blanco.

Día de exposición 28/08/18

Tiempo de exposición / días de 15 minutos / 6 días

reproducción

Hora / temperatura 1:49 pm – 2:04 pm / 18°C

Condiciones Poca luz solar

 Grupo N° 2

18
 Ambiente Laboratorio de Fisicoquímica

Observación: estuvo expuesto al Ambiente: Laboratorio de

Microbiología
Ambiente durante: 15min

Tiempo de cultivo: 168 horas

Tiempo de exposición: 15 minutos

Fecha de exposición 28/08/18

Numero de hondos observados 8 hongos

Tipos de hongos Penicillium spp (3), levaduras (5)

 Levaduras: Son de forma circular, de

color blancos y de tamaño pequeño a
mediano.
Características  Penicillium spp: Forma circular, de
contextura algodonosa, con bordes
blancos y centro gris verdoso

Ambiente Laboratorio de Fisicoquímica

Características La placa se colocó al medio. El
lugar estaba ventilado y sin polvo.
Día de exposición 28 de agosto 2018
Hora 13:30-13:45 pm
Tiempo de exposición/Días 15minutos
expuestos
Tiempo del crecimiento micro 7 días
bacteriano
Tipo de Agar Agar Sabouraud
Cantidad de personas 1 (el encargado de la muestra)
Temperatura 21°C (Temperatura de ambiente)

 Grupo N° 3

 Grupo N° 4

19
Hora de exposición : 2:04 pm--2:19pm

Temperatura 20°C

Fecha de exposición 27/08/18

Numero de hondos observados 14

Tipos de hongos penicillium spp(5), penicillium cándida

(2) levadura(7)

Características 5 hongos de color negro

2 hongos de color blanco
6 levaduras de color crema
1 levadura de color naranja

Ambiente Aula vacía 2 piso

Número de hongos 2

Tipos de hongos Aspergillus (1), Candida (1)

Características Aspergillus: Tiene forma concéntrica, núcleo

verde oscuro.
Cándida: Colonia pequeña de color blanco
sin forma definida.

 Grupo N° 5
Ambiente Sala de tesis

N° de hongo 1
Tipo de hongo Aspergillus-niger
Algunas caracteristicas Forma: filamentosa
Superficie: umbilicada
Levaduras: verde opaco
Colonias blancas con micelio aéreo de
color negro

VII. DISCUSION DE RESULTADOS

Procedimiento A

Grupo 2

20
El mayor número de colonias desarrollas está en la placa 4, no estéril y sin abrir, con
un tamaño promedio de 1 mm, bordes lisos-ondulantes, elevación lana, color crema y
características ópticas opacas.

En la placa 2 el sector A se muestra 20 colonias demostrándose que el pelo es el

factor que más propicia el crecimiento de bacterias.

En la placa 3 se encontró 4 colonias, esto pudo deber a causas de manipulación de la

placa, ya que por sus condiciones de esterilidad no se esperaba dichos resultados

Grupo 4

El mayor desarrollo de bacterias se dio en la placa 1, expuesta en el labora torio de

físico química; demostrándose así que es un ambiente contaminado

En la placa 3 hay crecimiento de bacteria s lo cual contradice la teoría en condiciones

de esterilidad.

En la placa 4, no hay crecimiento de bacterias; lo cual no cumple los resultados

esperados

En general en las 4 placas Petri se observó el crecimiento de bacterias con diferentes

características

Procedimiento B

Para el grupo 1, cumple con los resultados teóricos esperados, esto demuestra la
correcta manera de manipulación de los materiales al momento de hacer los
experimentos.

En el grupo 3, para el tubo 1 no cumple con lo esperado; ya que no debería

observarse sedimento, por ende tampoco el desarrollo de microorganismos

En el grupo 5 también hubo contaminación de los tubos debido a que se desarrolló

crecimiento en el tubo y pipeta estériles.

Procedimiento C

El ambiente más contaminado se demuestra que es el laboratorio de microbiología,

debido al propicio de 24 tipos de hongos diferentes.

En el baño de barones 2°piso; se observa el crecimiento de 4 tipos de hongos con

características y formas diferentes, esto demuestra ser un ambiente contaminado.

En el laboratorio de fisicoquímica y aula vacía, solo se observó el desarrollo de 2 tipos

de hongos en cada lugar. Pero el lugar menos contaminado es sala de tesis; ya que se
observó el crecimiento de un solo tipo de hongo.

21
 Se observaron cinco tipos de hongos:Penicillium, aspergillus, candida spp,| levadura y
Aspergillus-niger.

VIII. CONCLUSIONES:
 Se puedo observar que el laboratorio de Microbiología propicia el crecimiento
de hongos (24 tipos de hongo), que en todos los demás ambientes, esto
significa que hay más contaminación en el laboratorio, y esto se debe a la
cantidad de personas dentro del laboratorio, así como también por factores
como la temperatura, polvo, la humedad, etc.
 Se observaron cinco tipos de hongos:Penicillium, aspergillus, candida spp,|
levadura y Aspergillus-niger
 Las condiciones del medio influyen en el crecimiento de diversos tipos de
microorganismos, es importante preservar la higiene del ambiente.
 El conocimiento sobre el tipo de cultivo ayuda a la identificación de
microorganismos, lo cual para cada tipo se requieren nutrientes específicos.
 La buena utilización de los elementos y equipos de laboratorio permiten la
efectividad en la práctica de laboratorio y en la identificación de
microorganismos.
 Es evidente según los resultados de laboratorio el grado de contaminación al
que estamos expuestos en la FIA debido al número de bacterias encontradas
en las muestras.
 Se observó que predominan los microorganismos de elevación convexa y de
carácter ópticos opaco.
 Es posible identificar microorganismos mediante diversos medios de cultivo.
Para este caso se utilizó el caldo nutritivo.
 Observamos que este experimento depende de la esterilización de los
materiales a usar en cada caso.
 Los microorganismos como los hongos se desarrollan en ambientes húmedos,
por lo cual cada ambiente de la facultad presenta esta característica por lo cual
se han podido desarrollar.
 Para cada ambiente de la facultad existe una diferencia entre el número de
hongos y su clasificación, depende mucho del medio. Por ejemplo, uno de los
ambientes más contaminados es el Baño de Caballeros FIA, donde se puede

22
 apreciar hongos y levaduras en mayor cantidad.

 Es importante la identificación de los hongos después de realizado el

experimento, ya que previene, advierte y controla acerca del cuidado e higiene
en los diversos sectores de la FIA

IX. RECOMENDACIONES:
 Antes de realizar la práctica, revisar los materiales de cultivo que no estén
vencidos.
 En el momento de la preparación del medio de cultivo, realizar bien los cálculos
ya que podría faltar algún medio de cultivo para la realización del trabajo.
 Lavar bien los materiales que se usaran en el trabajo ya que estás podrían
contaminarse y así hacer variar un resultado esperado.
 Siempre trabajar cerca del mechero para evitar la contaminación de los
materiales estériles.
 Por ningún motivo abrir por completo las placas Petri que están estériles, solo
se levanta un poco y se ingresa el Agar.
 Esterilizar todo los materiales que se usaran para los medios de cultivo. Para
realizar una buena desinfección del inoculador se le debe calentar con el
mechero hasta que esté cerca al rojo vivo, de manera que los microorganismos
mueran al no soportar tan altas temperaturas
 Tener el conocimiento necesario del autoclave y del horno para su utilización,
ya que esto podría provocar accidentes si es que no tenemos los instrumentos
preventivos como los guantes.
 Al transferir el caldo nutritivo con la pipeta, evitar tocar la pipeta estéril con la
mano, ya que se contaminara.
 Al colocar las placas Petri en la incubadora, se deben colocar invertidas.
 Se recomienda poner todas las placas al mismo tiempo que contienen el Agar
Sabouraud encima de la incubadora.
 Después de sacar los tubos de la incubadora, no se deben agitar.
 Se debe asegurar la correcta ubicación de las placas Petri en el ambiente a
tomar las muestras, a fin de obtener resultados óptimos en condiciones
identificadas previamente.
 Una vez concluido el laboratorio, lavarse bien las manos y descontaminarlas
con alcohol.

23
 X. CUESTIONARIO

1. . ¿Qué factores influyen en la flora microbiana del aire?

El aire no posee una microflora propia, ya que no constituye un hábitat microbiano; es
un medio desfavorable para los microorganismos. Sin embargo el aire es portador de
materias especiales como polvo, humo, hollín y de gotitas que pueden ir cargadas de
microbio. Los factores que influyen en los microorganismos del aire son:

 Materia orgánica: La materia orgánica que se encuentra sobre el suelo influye

en la riqueza microbiana del mismo, por lo que así será la riqueza del aire, en
dependencia de la fertilidad del suelo.
 Humedad y precipitaciones atmosféricas: La atmósfera húmeda contiene
menos microbios que la seca, debido a que las gotas de humedad los hacen
bajar al suelo. Igualmente, después de las precipitaciones atmosféricas, lluvias
y nevadas, el aire en gran medida se purifica de microbios. A su estancia
contribuye un tiempo seco prolongado.
 Corrientes de aire: Un ambiente activo contiene más bacterias que otro seco
más sosegado, por otra parte, las bacterias permanecen en el aire durante
lapsos variables, según la velocidad de las corrientes. La importancia
epizoótica de la transmisión por el aire contaminado aumenta durante la
ubicación conjunta de un gran número de animales en un área pequeña y con
poco espacio, sobre todo cuando hay ventilación deficiente, la estabulación de
los animales con las cabezas situadas unas frente a las otras y con comederos
centrales facilita esta vía de transmisión.
 Tamaño de las partículas: La permanencia de los microorganismos en el aire
depende del tamaño de las partículas donde se fijan, depositándose con más
rapidez las adheridas a las partículas mayores.
 Luz solar, temperatura y desecación: El destino de los microorganismos del
aire depende entre otros factores atmosféricos, de la luz solar, pues la acción
directa de los rayos solares tiene efectos perjudiciales en los microorganismos;
igualmente la temperatura y la desecación directamente relacionadas con la luz
solar (con los rayos infrarrojos), actúan como agentes antimicrobianos
importantes.
2. ¿Qué grupos de agentes causa la mayor incidencia de enfermedades
respiratorias?

Hongos (algunos de ellos), virus y bacterias.

24
 3. Explicar cuatro enfermedades que son transmitidas por el aire

Enfermedades bacterianas transmitidas por vía aérea:

• Tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis)

• Faringitis causada por (Streptococcus pyogenes)

• Neumonía causada por (Streptococcus pneumoniae)

• Difteria (Corynebacterium diphteriae)

• Legionelosis causada por (Legionella pneumophila)

• Tosferina causada por Bordetella pertusis.

4. Mencionar las principales características de: Rhizopus nigricans, Alternaria,

Sacharomyces cerevisae

Rhizopus nigricans: Es un tipo de moho inofensivo, hallable en crecimiento en pan,

conocido por "moho del pan". Es un miembro del género Rhizopus, que se compone
de hongos con esporangios columnares hemiséricos aéreos, anclados al sustrato por
rizoides. Puede causar infecciones si no se tiene cuidado. Puede causar reacciones
concretas alérgicas. Rhizopus nigricans posee esporas que flotan alrededor en el aire.
Presentan el aspecto de una suave pelusa grisácea o verdosa que se desarrolla en la
superficie de la materia orgánica en descomposición sobre la que viven.

Alternarias: Es un hongo ascomiceto .Las diferentes especies de este género son uno
de los mayores patógenos de plantas. Son conocidas comúnmente como alérgenos en
los humanos, y, dentro de casa, pueden causar rinitis alérgica o reacciones de
hipersensibilidad que, en ocasiones, pueden producir ataques de asma.

Sacharomyces cerevisae: Es un hongo unicelular, un tipo de levadura utilizado

industrialmente en la fabricación de pan, cerveza y vino. En su ciclo de vida alternan
dos formas, una haploide y otra diploide. Ambas formas se reproducen de forma
asexual por gemación. En condiciones muy determinadas la forma diploide es capaz
de reproducirse sexualmente. En estos casos se produce la meiosis en la célula
formándose un asca que contiene cuatro ascosporas haploides.

5. ¿Cuáles son los ingredientes del caldo nutritivo y agar nutritivo? ¿Qué
clase de nutrientes proporciona cada uno de los ingredientes?

Agar Nutritivo

Agar Nutritivo Cantidad Nutrientes

25
 Extracto de carne 3g Glúcidos, lípidos

Peptona 5g Glúcidos

Agar 15g Glúcidos

Agua 1000ml Agua

Agar Saboraud

Agar Nutritivo Cantidad Nutrientes

Dextrosa 10g Glúcidos

Peptona 10g Glúcidos

Agar 15g Glúcidos

Agua 1000ml Agua

Caldo nutritivo

Caldo Nutritivo Cantidad Nutrientes

Extracto de carne 3g Glúcidos, lípidos

Peptona 5g Glúcidos

Agua 1000ml Agua

XI. CUESTIONARIO

 Collis, C.H., y P.M. Lyne (1970). Microbiological Methods, (3ª. Ed)., University
Park Press, Baltimore

26
  Doestsch, R.N., y T.T.( 1973) Introduction to Bacteria and their Ecobiology,
University Park Press, Baltimore.
 Koser, Stewart, A.( 1968) Vitamin Requirements of Bacteria and Yeasts,
Charles C. Thomas, Springfield, I11
 Lamanna, C., M.F. Mallette, y L.N. Zimmerman.(1973).Basic Bacteriology. Its
Biological and Chemical Background, (4ª Ed.).
 acterias. (2007). En Manual de la Microbiología de los Alimentos (págs. 19-30).
 French, E., & Heber, T. (1980). Métodos de Investigación Fitopatológica.
Managua.
 Olivas, E. (2012). Manual de Prácticas: Laboratorio de Microbiología.
 Pérez Porto, J., & Merino, M. (2009). Obtenido de http://definicion.de/bacteria/
 Solano Goñi, C. (2005). Microbiología General: (Guion de Prácticas).

XII. RECOMENDACIONES:

27
XIII. APENDICE
EQUIPO
- Balanza Calibrada
- Papel Kraft
- Espátula
- Probeta
- Vaso
- Vagueta
- Mechero Bunsen
- Tripode
- Rejilla
- 2 guantes de asbesto
- Algodón
 diagrama de flujo

CALDO NUTRITIVO AGAR NUTRITIVO

Mezclar grms de peptona y extracto Mezclar grms de peptona, extracto

de carne ( 5 y 3 grms de carne y agar
respectivamente)

28 Diluir con 1 lt de agua ionizada. Si es

Diluir con 1 lt de agua destilada. Si es
posible se calienta hasta diluir.
posible se calienta hasta diluir.
 PROCEDIMIENTO C

Ubicar el contenido del tubo de ensayo

5(agar saboraud) en el Petri.

Exponemos 15 minutos en un
determinado ambiente de la facultad

Invertir los petris e incubarlos a 37°C,

durante 48 horas.

PROCEDIMIENTO A

AGAR SABOURAUD

Tomar 4 tubos de ensayo de agar

fundido.
Mezclar grms de peptona, dextrosa y
agar ( 10, 40 y 15grms
respectivamente)
Vaciar el tubo de ensayo en cada uno
de los tres petris esterilizados y 1 no
esterilizado.

Diluir con 1 lt de agua ionizada. Si es

posible se calienta hasta diluir.

1
Distribuir y esterilizar al Autoclave a 4
118-121 °C, durante 15 minutos.

29
Exponer el No se debe
agar en abrir.
cualquier
ambiente de la
  datos originales y observaciones
procedimiento cálculo

En este caso, sólo realizamos una simple regla de tres simple, para calcular que
cantidad (en grs) de agar nutritivo o agar saboraud vamos a usar en el experimento.

- Caldo Nutritivo:
8g-----------1000ml
X ----------20ml
X=0,16g

- Agar nutritivo:
28g-----------1000ml
X ----------100ml
X=0,28g

 datos calculados

30
Usaremos 0.28gramos de agar nutritivo y 0.16gramos de caldo nutritivo.

31