LABORATORIO DE BIOLOGÍA

ESCUELA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR

LABORATORIO No. 2
MACROMOLÉCULAS ORGÁNICAS
CARBOHIDRATOS, LÍPIDOS, PROTEÍNAS Y ÁCIDOS NUCLEICOS

OBJETIVOS
1. Identificar diversos tipos de moléculas orgánicas: carbohidratos, lípidos y proteínas.
2. Determinar la presencia de estos compuestos en algunos sistemas vivos.
3. Comprender la estructura de los ácidos nucleicos.

INTRODUCCIÓN
La materia viva consiste fundamentalmente de Carbono, Oxígeno e Hidrógeno, además de Nitrógeno
y oros elementos organizados de tal manera que constituyen cuatro grupos grandes de
macromoléculas orgánicas: Carbohidratos, Lípidos, Proteínas y Ácidos Nucleicos.

Cada uno de estos grupos difiere en estructura y función pero se asemejan entre si porque están
constituidos por “unidades estructurales”. Dentro de cada grupo particular, las unidades estructurales
se asocian entre si mediante reacciones de condensación para formar estas grandes moléculas o
polímeros.

Los Carbohidratos son las principales moléculas de almacenaje de energía de la célula, también
pueden tener una función estructural. Están constituidos por Carbono, Hidrógeno y Oxígeno. Los
átomos de Hidrógeno y los de Oxígeno están siempre presentes en la proporción 2:1. Su fórmula
empírica es (CH2O)n . Su rango abarca desde moléculas relativamente simples llamadas azúcares,
hasta moléculas complejas como celulosa y almidón.

Los Lípidos, son moléculas que cumplen un papel fundamental como fuente de energía y como
componentes importantes de las membranas celulares. Están formados básicamente de Carbono,
Hidrógeno y Oxígeno. Las unidades estructurales en este caso son: glicerol y ácidos grasos.

Las Proteínas son moléculas orgánicas grandes y muy versátiles como componentes funcionales y
estructurales de la célula. Están compuestas de Carbono, Hidrógeno, Oxígeno, Nitrógeno y Azufre.
Sus unidades estructurales son los aminoácidos, los cuales se asocian entre si mediante enlaces
peptídicos para formar largas cadenas polipeptídicas. Estas largas cadenaspolipeptídicas pueden a
su vez replegarse, asociarse entre si o asociarse con otras cadenas polipeptídicas para generar
grandes moléculas que poseen una estructura tridimensional definida. La forma tridimensional
determina la funcionalidad o actividad biológica de una molécula. Esta estructura tridimensional se
basa en la presencia de enlaces débiles que, al ser rotos o alterados por ciertos factores
ambientales, provocan la pérdida de la actividad biológica de la molécula.

Los Ácidos Nucleicos son moléculas complejas que codifican la información que determina la
estructura de la enorme variedad de proteínas que existen en los seres vivos. Los hay de dos tipos:
Ácido Ribonucleico (ARN) y Ácido Desoxirribonucleico (ADN). El ADN forma parte de los genes, que
son el material hereditario de las células y contiene instrucciones para la síntesis de todas las
proteínas que necesita el organismo. El ARN interviene fundamentalmente en la síntesis de
proteínas. Los ácidos nucleicos están formados por subunidades llamadas nucleótidos, que se unen
formando una larga cadena. Cada nucleótido está formado por:
 1. un azúcar de cinco carbonos
2. un grupo fosfato
3. una base nitrogenada, que es un compuesto en forma de anillo y que puede ser de dos tipos:
Pirimidina, que está formada por un anillo único.
Purina, que está formada por dos anillos
El ADN contiene las purinas Adenina (A) y Guanina (G), las pirimidinas
Citosina (C) y Timina (T), el azúcar Desoxirribosa y el grupo fosfato.
El ARN contiene las purinas Adenina (A) y Guanina (G), las pirimidinas
Citosina (C) y Uracilo (U), el azúcar Ribosa y el grupo fosfato.
En una cadena simple de ácido nucleico, el grupo fosfato de un nucleótido se une al azúcar del
otro.
En el año 1953 James Watson y Francis Crick publicaron su modelo de la Doble Hélice, para la
estructura del ADN, modelo que cambió toda la genética y prácticamente toda la biología en unos
cuantos años. Según éste, la molécula de DNA consta de dos cadenas enroscadas formando una
doble hélice. Los esqueletos de azúcar y fosfato de las dos cadenas constituyen la parte
externade la hélice y las bases se asocian en pares (A-T y G-C) en el centro.

Ejercicio No. 1
Carbohidratos

A. prueba de Lugol

El lugol es una solución de yoduro de potasio en yodo que se utiliza para diferenciar el almidón de los
monosacáridos, disacáridos y otros polisacáridos. El almidón es un polímero de glucosa que en
presencia de lugol toma un color negro azulado. La solución de lugol (color amarillo-café) reacciona
químicamente con las espirales que se forman en la molécula de almidón, cambiando a un color azul-
negro.

1. Sobre una superficie de vidrio coloque un trozo de cebolla y un trozo de papa.

2. Añada dos gotas de lugol sobre la cebolla y dos sobre la papa.
3. Observe el cambio de coloración. Un color amarillo o café es negativo, el color azul o negro
es positivo.
4. Dibuje sus observaciones.

B. Prueba de lugol en tubo de ensayo

1. Obtenga 5 tubos de ensayo y rotúlelos del 1 al 5.

2. Llénelos siguiendo la Tabla que se muestra a continuación
3. Es importante agitar la solución de almidón antes de tomar la muestra Tabla 1. Prueba de
almidón
4. Escriba sus resultados en la Tabla:
C. Prueba de Benedict

La prueba de Benedict es una prueba para azúcares reductores y permite probar la presencia o
ausencia de los mismos. Se basa en que los monosacáridos y algunos disacáridos tienen un grupo
aldehído libre y reducen fácilmente los agentes oxidantes. En esta reacción el grupo aldehído del
azúcar se oxida en solución salina y el agente oxidante se reduce.

H O
Benedict + C=O --------- Benedict + R—C—OH
Forma Azúcar Forma Azúcar
oxidada reductor reducida ácido

El reactivo de Benedict cambia de color después de calentarlo en la presencia de azúcares. El cambio

de azul claro a rojo naranja o marrón indica abundancia de azúcares reductores. Un cambio a verde
indica la presencia de una pequeña cantidad de azúcar reductor.

Este ejercicio probará la presencia o ausencia de azúcares reductores en la cebolla y en la papa.

1. Marque tres tubos de ensayo con una línea a 1cm y otra a 3 cm desde la base. Identifíquelos
como A, B y C.
2. Ponga en el tubo A jugo de cebolla hasta la marca de 1cm.
3. Ponga en el tubo B jugo de papa hasta la marca de 1 cm.
4. Ponga en el tubo C agua destilada hasta la marca de 1cm.
5. Agregue el reactivo de Benedict hasta completar los 3 cm a los tres tubos de ensayo. Mezcle
bien.
6. Coloque los 3 tubos en un baño de agua hirviendo durante tres minutos.
7. Saque los tubos del agua y observe los cambios de color.
8. Registre sus resultados
9. Lave bien los tubos después de terminar.

Ejercicio No. 2
Lípidos

A. Prueba de Nile Blue

Las pruebas para los lípidos están basadas en la habilidad de absorber pigmentos en forma
selectiva. El Nile Blue es un colorante soluble en grasas que genera un cambio de color en la
solución de lípidos (de azul a violeta claro).

1. Tome 4 tubos de ensayo y rotúlelos del 1 al 4

2. Llénelos de acuerdo con la tabla 2
3. Deje en reposo 3 minutos
4. Escriba sus resultados en la Tabla 2

Tabla 2. Prueba de lípidos

B. Prueba de Tinción

El Sudán III es un tinte que detecta los grupos hidrocarbonados libres de un lípido. El tinte y los
grupos hidrocarbonados son no polares y se pegan fuertemente en un ambiente polar llevándose a
cabo una interacción hidrofóbica.

1. Tome un círculo de papel filtro con una pinza y evite todo contacto directo del papel con la
grasa de sus dedos.
2. Numere el disco de papel filtro alrededor de manera que queden distribuidos equitativamente
los números del 1 al 7. Dibuje un círculo pequeño al lado de cada número.
3. Con la pipeta Pasteur correspondiente coloque una gota de cada muestra dentro del círculo,
tratando de que no se difunda hacia fuera del mismo, de acuerdo con el siguiente orden:
aceite de coco, 2. aceite, 3. aguacate, 4. leche, 5 albúmina, 6. agua y 7. etanol.
4. Deje secar completamente.
5. Una vez seco, ubique el disco de papel dentro de una caja Petri y vierta la solución de Sudán
III hasta cubrir todos los círculos. Espere 3 minutos.
6. Con una pinza retire el disco de papel y enjuague bajo la llave de agua suavemente por un
minuto.
7. Evalúe la intensidad de la tinción naranja en cada círculo de acuerdo a la siguiente escala:
0=no hay color; 1=naranja pálido; 2=naranja definido
8. Anote sus observaciones

Ejercicio No. 3
Proteínas

A. Prueba de Biuret
Esta prueba se fundamenta en la interacción entre los iones de cobre del reactivo de Biuret y los
grupos amino de los enlaces peptídicos de los aminoácidos que forman las proteínas. Junto con la
reacción hay un cambio de coloración de azul a violeta.
1. Marque tres tubos de ensayo A, B y C.
2. Añada 3 ml del reactivo de Biuret a cada tubo.
3. Al tubo A añada igual cantidad de agua, al tubo B igual cantidad de albúmina de huevo y al
tubo C igual cantidad de solución de almidón.
4. Registre sus observaciones.

B. Prueba de Ninhidrina
La ninhidrina es un reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por
cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de
aminoácidos. Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando
una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de
Ruhemann) es independiente de la coloración original del aminoácido. Esta prueba es positiva tanto
para proteínas como para aminoácidos. En aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret
y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteinas, pero si hay aminoacidos libres.
 1. Tome 4 tubos de ensayo y rotúlelos del 1 al 4.
2. En el tubo 1 añada 15 gotas de glicina al 2%
En el tubo 2 añada 15 gotas de almidón al 10%.
En el tubo 3 añada 15 gotas de albúmina al 2%.
En el tubo 4 añada 15 gotas de agua destilada
3. A cada uno de los tubos añada 5 gotas de ninhidrina y caliente en un baño de agua hirviendo
por unos 5 minutos.
4. Registre sus resultados.

Ejercicio No. 4
Estructura de los Ácidos Nucleicos

1. Reciba de su instructor un sobre con el rompecabezas de ácidos

2. nucleicos, que debe contener:
- 8 desoxirribosas
- 4 ribosas
- 12 grupos fosfato
- 3 adeninas
- 3 guaninas
- 3 citosinas
- 2 timinas
- 1 uracilo
3. Arme un desoxirribonucleótido de la siguiente manera: ensamble una desoxirribosa, un grupo
fosfato y una base (Adenina), únalos como en la Figura

4. Ensamble los otros tres desoxirribonucleótidos que corresponden a las bases timina, guanina
y citosina y únalos como se muestra en la Figura 2. de esta manera usted tiene una cadena
simple de ADN.

5. Ahora arme la cadena complementaria, es decir, ensamble otros cuatro

desoxirribonucleótidos y note cuál es la única forma en la que las bases pueden unirse al
centro de la cadena. De esta manera usted tiene la doble cadena de ADN. Observe la
dirección de cada fibra o cadena.
6. Ensamble ahora los cuatro ribonucleótidos y únalos para formar la cadena de ARN.
Preguntas
1. ¿En qué forma se almacena el exceso de carbohidratos en una planta?; ¿En un animal?;
¿En qué se parecen y en que se diferencian estos dos compuestos?
2. Consulte la composición del Reactivo de Biuret
3. ¿Por qué los lípidos engordan más que los carbohidratos y las proteínas?
4. ¿Qué sucede con las proteínas cuando son expuestas a altas temperaturas?
5. Haga un cuadro indicando las diferencias entre ADN y ARN
6. ¿Qué significa que las cadenas del ADN son complementarias?
7. ¿Qué diferencia hay entre purinas y pirimidinas?
8. Escriba la secuencia complementaria de la siguiente cadena de DNA: AATGCCGATT
9. Si la secuencia anterior (AATGCCGATT) es transcrita a RNA, ¿cuál será el orden de las
bases en el RNA formado?
10. ¿Qué tipo de unión se da entre las bases complementarias en el DNA?